Вільно-радикальні процеси при експериментальній ішемії головного мозку

При зниженні рівня кровотоку менш 55-50 мл на 100 г в 1 хв виникає перший критичний рівень у вигляді гальмування білкового синтезу. Подальше зниження кровотоку, до 35 мл на 100 г в 1 хв - другий критичний рівень - призводить до активації анаеробного гліколізу і збільшення концентрації лактату, розвитку лактат-ацидозу і тканинного цитотоксичного набряку. ⁺ и Са ²⁺ в клетку), дестабилизации клеточных мембран и избыточному выбросу возбуждающих нейромедиаторов – глутамата и аспартата (возникает так называемая "глутаматная эксайтотоксичность"). Триваюче зниження кровотоку до 20 мл на 100 г в 1 хв - третій критичний рівень - призводить до зниження синтезу АТФ, формуванню енергетичної недостатності, до дисфункції каналів активного іонного транспорту (виходу К ⁺ з клітини і переміщенню Na ⁺ і Са ^{2 +} в клітину) , дестабілізації клітинних мембран і до надлишкового викиду збуджуючих нейромедіаторів - глутамату і аспартату (виникає так звана "глутаматного ексайтотоксічность"). -метил-Д-аспартат) приводит к раскрытию новых кальциевых каналов, вследствие чего обеспечивается дополнительный приток Са ²⁺ в нейроны. Перезбудження НМДА-рецепторів (N-метил-Д-аспартат) призводить до розкриття нових кальцієвих каналів, внаслідок чого забезпечується додатковий приплив Са ^{2 +} в нейрони. Коли мозковий кровотік досягає 20% від нормальної величини (10-15 мл на 100 г в 1 хв), розвивається аноксійних деполяризація мембран, яка вважається головним критерієм необоротного ураження клітин [20, 51].

У розвитку каскаду патобіохімічних і патофізіологічних
процесів виділяють три основні етапи: індукції (запуск), ампліфікації (посилення пошкоджуючого потенціалу) і експресії (кінцеві реакції каскаду) [20].

Етап індукції. Дефіцит макроергічних субстратів в мозку призводить до «знеструмлення» Na ⁺ - K ⁺ - АТФ-азной ферментної системи, яка управляє енергозалежною іонним транспортом. Порушення активного іонного транспорту обумовлює пасивний відтік К ⁺ з клітин, приплив Са ^{2 +,} що призводить до деполяризації клітинних мембран. Внутрішньоклітинне накопичення іонів Са ^{2 +} при мозковій ішемії викликає перевантаження мітохондрій з роз'єднанням окисного фосфорилювання і посиленням катаболічних процесів; воно супроводжується переходом Са ^{2 +} в активну форму у вигляді сполуки з внутрішньоклітинним рецептором кальмодуліном, що веде до активації кальмодулінзавісімих протеїнкіназ, ліпаз і ендонуклеаз, фрагментації дезоксирибонуклеїнові кислот (ДНК), загибелі клітини [21].

Таким чином, вже на самих початкових етапах патобіохімічних каскаду, запущеного дефіцитом макроергів, починається процес внутрішньоклітинного накопичення кальцію, який є одним з ключових механізмів запуску як некротичної, так і програмованої смерті нейрона [21].

Важливим шляхом надходження кальцію в клітину є агоністзавісімие кальцієві канали, особливо ті, які контролюються рецепторів, що активують збудливими аміноацідергіческімі медіаторами - глутамат і аспартат. Підвищення їх включає компенсаторні механізми: зворотне захоплення нейронами і астроцитами надлишків з міжклітинного простору, пресинаптичне гальмування викиду медіаторів, метаболічну утилізацію та ін Однак в умовах ішемії порушується високоселективним система транспорту глутамата і аспартату з синаптичної щілини в астроглії за рахунок дисфункції каналів активного іонного транспорту та астроцітоза, змінюється система шляхів перетворення медіаторів; це призводить до того, що абсолютна концентрація та час перебування глутамата і аспартату в синаптичної щілини перевищують допустимі межі, і процес деполяризації мембран нейронів набуває незворотного характеру [21].

Етап ампліфікації пов'язаний з триваючим збільшенням внутрішньоклітинної концентрації іонів кальцію. Наростання внутрішньоклітинної концентрації кальцію в поєднанні з підвищенням вмісту диацилглицерол (DAG) змінює активність ферментів, що модифікують мембранні білки, в тому числі і глутаматного рецептори. В результаті збільшується чутливість нейронів до збудливих сигналам. Замикається «порочне коло»: підвищена збудливість може сприяти подальшому накопиченню кальцію і посилення виділення глутамату з нервових закінчень. Згідно з експериментальними даними, в областях мозку з щільно прилеглими нейронами, що містять глутаматного рецептори, одна масивно деполяризованої клітина індукує таке вивільнення глутамату, що збуджує сусідні нейрони. У результаті набуває чинності «механізм доміно» - послідовне поширення метаболічних порушень від нейрона до нейрона. Таким чином, події, що відбуваються на етапі ампліфікації, не тільки збільшують накопичення кальцію, але й посилюють токсичну збудження навколишніх нейронів [21].

Етап ампліфікації створює умови для третього етапу - експресії, на якому відбуваються незворотні зміни, що призводять до клітинної смерті. Механізми, безпосередньо пошкоджують нейрони і глію, вивчені найбільш повно [21].

Надмірне внутрішньоклітинне накопичення іонів Са ^{2 +} активує внутрішньоклітинні ензими: ліпази, протеази, ендонуклеази і запускає каскадний механізм ферментативних реакцій, що призводять до катаболической пошкодження нейрона. Особливо руйнівний розпад фосфоліпідів у зовнішній клітинній мембрані і в мембранах внутрішньоклітинних органел [21].

Таким чином, схема послідовних етапів «ішемічного каскаду» на основі причинно-наслідкових зв'язків може мати вигляд:

1. зниження мозкового кровотоку;

2. глутаматного «ексайтотоксічность»;

3. внутрішньоклітинне накопичення іонів кальцію;

4. активація внутрішньоклітинних ферментів;

5. підвищення синтезу оксиду азоту та розвиток оксидантного стресу;

6. експресія генів раннього реагування;

7. віддалені наслідки ішемії (реакції місцевого запалення,
   мікросудинних порушення, пошкодження гематоенцефалічного
   бар'єру);

8. апоптоз [45].

Провідним патогенетичним механізмом ішемічної смерті нейронів є надлишкова активація глутаматних рецепторів. При цьому відбуваються в мозку ексайтотоксіческіе процеси нерозривно пов'язані з паралельно протікають реакціями утворення оксиду азоту, вільнорадикального окислення, запалення.

1.2. Вільнорадикальне окислення і антиоксидантний захист

при патології головного мозку

Вільнорадикальне окислення (СРО) - важливий і багатогранний
біохімічний процес перетворень кисню, ліпідів, нуклеїнових
кислот, білків та інших сполук під дією вільних радикалів (СР), а перекисне окислення ліпідів (ПОЛ) - один із його наслідків [16].

1. Вільнорадикальне окислення: загальні відомості

Вільні радикали являють собою сполуки, що мають неспарений електрон на зовнішній орбіталі і володіють високою реакційною здатністю. До числа первинних вільних радикалів належать супероксидний аніон-радикал, окис азоту, а вторинними вільними радикалами є гідроксильний радикал, сінклетний кисень, перекис водню, пероксинітрит. Утворення вільних радикалів тісно пов'язане, з одного боку, з появою вільних електронів при порушеннях процесів окислення в дихальному ланцюзі, перетворенні ксантину, синтезі лейкотрієнів і простагландинів. Ці реакції залежать від активності ксантиноксидази, дегідротатдегідрогенази, алдегідоксидази, холестеріноксідази, ферментів цитохрому Р-450. , который образуется из ангиотензина I под действием ангиотензинпревращающего фермента [16]. Синтез супероксид-аніону ініціюється ангиотензином II, який утворюється з ангіотензину I під дією ангіотензинперетворюючого ферменту [16].

³⁺ в Fe ²⁺ , при взаимодействии которого с перекисью водорода, перекисями липидов и гипохлоритом образуются высокотоксичные вторичные радикалы. Супероксид-аніон може відновлювати Fe ^{3 +} у Fe ^{2 +,} при взаємодії якого з перекисом водню, перекису ліпідів і гіпохлоритом утворюються високотоксичні вторинні радикали. З усіх вільних радикалів найбільшою активністю володіють гідроксильний радикал і пероксинітрит.

Активність вільних радикалів обмежується антиоксидантами, які розривають ланцюги молекул при реакціях СРО, руйнують молекули перекисів.

До числа ферментних антиоксидантів відносяться супероксиддисмутаза (СОД), глютатіонпероксидази, каталаза, що знаходяться в клітинних структурах. Неферментний антиоксиданти - вітаміни Е, К, С, убіхінон, триптофан, фенілаланін, церулоплазмін, трансферин, гаптоглобін, глюкоза, каротиноїди - блокують активність вільних радикалів у крові. Зміни структури і функції субстратів, на які діють вільні радикали, залежить, в кінцевому рахунку, від співвідношення активності СР і антиоксидантів.

Вільнорадикальне окислення необхідно для нормального функціонування організму. Про це свідчить, зокрема, споживання більше 5% кисню на утворення супероксидного аніон-радикала. СРО сприяє знищенню віджилих клітин, елімінації ксенобіотиків, попереджає злоякісну трансформацію клітин, моделює енергетичні процеси за рахунок активності дихального ланцюга в мітохондріях, проліферацію і диференціацію клітин, транспорт іонів, бере участь у регуляції проникності клітинних мембран, у руйнуванні пошкоджених хромосом, у забезпеченні дії інсуліну. СРО генерує внутрішньоклітинні бактерицидні та вірусоцідное фактори, особливо в клітинному ядрі [1, 22, 49].

Зниження надходження в нейрони молекулярного кисню і підвищення рівня восстановленности компонентів дихального ланцюга стимулюють відновлення кисню по одноелектронного шляху з утворенням вільних радикалів (супероксид-аніону, пероксильними і гідроксильного радикалів), а також оксидантів нерадикальної природи (пероксиду водню і аніону гіпохлориту), оскільки (Про ₂₎ ^- легко реагує з проміжними компонентами дихального ланцюга у відновленому стані. Високореакціонноспособние радикали кисню викликають окислення біомакромолекул, а також ініціюють ланцюгові процеси перекисного окислення мембранних ліпідах (ПОЛ), пряме окисне пошкодження нуклеїнових кислот (НК) і білків.

Образующееся процесі ПОЛ гідропероксиду нестійкі, їх розпад призводить до появи різноманітних вторинних і кінцевих продуктів ПОЛ, що представляють собою високотоксичні сполуки (дієнові кон'югати, шіффови підстави та ін), які пошкоджують дію на мембрани та клітинні структури. Як наслідок утворюються зшивки біополімерів, визначаються набуханням мітохондрій і роз'єднання окисного фосфорилювання, інактивація тіолових ферментів, які беруть участь у диханні і гліколізі, подальше руйнування ліпідної основи мембран [21].

1.2.2. Продукти перекисного окислення ліпідів

До первинних продуктів ПОЛ відносяться циклічні ендоперекісі і аліфатичні моно-і гідропероксиду, так звані ліпопероксіди і дієнові кон'югати [30].

Дієнові кон'югати (ДК) є первинними продуктами ПОЛ. При вільнорадикальне окиснення арахідонової кислоти відбувається відрив водню в α-положенні по відношенню до подвійного зв'язку, що призводить до переміщення цієї подвійної зв'язку з утворенням ДК [64]. Дієнові кон'югати, які є первинними продуктами ПОЛ, відносяться до токсичних метаболітів, які пошкоджують дію на ліпопротеїди, білки, ферменти і нуклеїнові кислоти [54].

Ліпопероксіди є досить нестійкими і піддаються подальшій окисної дегенерації. При цьому накопичуються вторинні продукти окислення, найбільш важливими з яких є ненасичені альдегіди (малоновий діальдегід). Продуктами взаємодії малонового діальдегіду з аміносодержащімі сполуками є шіффови підстави [30].

Шіффови підстави, органічні сполуки загальної формули RR ¢ C = NR ¢ ¢ де R і R ¢ - водень, алкіл або арил, R ¢ ¢ - алкіл або арил (в останньому випадку Ш. о. Називають також Аніл). Шіффови підстави - ​​кристалічні або Маслянисті речовини, нерозчинні у воді, розчинні в органічних розчинниках. Слабкі підстави, в безводній середовищі утворюють солі з кислотами, у водних розчинах кислот гідролізуються до аміну і альдегіду, в лужних розчинах більшість Ш. о. стійко. Гидрируются до вторинних амінів (RR ¢ CH - NHR ¢ ¢), приєднують багато сполук, що містять рухливий водень, наприклад b-дикарбонільних з'єднання, кетони, імін. Утворюються шіффови заснування в результаті оборотної реакції між карбонільної групою альдегіду або кетону з вільною аміногрупою [67]. Безперервне накопичення основ Шиффа дестабілізує мембрани і сприяє деструкції клітин [54].

ТБК-реактанти (МДА) - вторинні продукти ПОЛ. Як відомо, малоновий діальдегід (МДА) утворюється тільки з жирних кислот з трьома і більше подвійними зв'язками. МДА належить важлива роль у синтезі простагландинів, прогестерону та інших стероїдів [54]. Негативна роль малонового діальдегіду полягає в тому, що він зшиває молекули ліпідів і знижує плинність мембрани. Внаслідок цього мембрана стає більш крихкою. Порушуються процеси пов'язані зі зміною поверхні мембрани: фагоцитоз, пиноцитоз, клітинна міграція і ін [54].

Гідропероксиду, ненасичені альдегіди, є мутагенами і володіють вираженою цитотоксичності. Вони пригнічують активність гліколізу і окисного фосфорилювання, інгібують синтез білка і нуклеїнових кислот, порушують секрецію тригліцеридів гепатоцитами, інгібують різні мембранозв ферменти [30].

Накопичення в організмі продуктів ПОЛ (дієнових кон'югатів, ТБК-реактантов, шіффових підстав) [6] і розвиток ендотоксикозу призводить до стимуляції монооксигеназної системи, змін реакції ліпідного, гормонального, імунного, мікроелементного, нейромедиаторного статусів, числа місць зв'язування і спорідненості рецепторів до лигандам, виснаження антиоксидантної системи [71].

3. Процеси вільно-радикального окислення ліпідів у розвитку і перебігу гострих порушень мозкового кровообігу

У розвитку та перебігу гострих порушень мозкового кровообігу е особливе значення надається посиленню процесів вільнорадикального окислення ліпідів. Перш за все, через підвищеної чутливості головного мозку до дії вільних радикалів (50% сухої речовини мозку складають ненасичені жирні кислоти - основний субстрат вільно-радикального окислення.) Хоча чималу роль відіграє і антиоксидантна система, наділена функціями контролю за процесами перекисного окислення ліпідів, при недостатності антиоксидантної системи процеси пероксидації посилюються, відбувається надмірне утворення первинних (вільних перекисних радикалів і гідроперекисів ліпідів) та кінцевих (альдегідів і кетонів) продуктів вільнорадикального окислення. І ті, і інші, діючи на зовнішні і внутрішні клітинні мембрани, викликають виникнення мембранної патології та енергетичного дефіциту. Однак більш небезпечними вважаються вільні перекисні радикали і гидроперекиси ліпідів, які надають не тільки мембраноповреждающее дію, але й забезпечують аутокаталітіческій характер перекисного окислення ліпідів [35].

Згідно існуючій думці, різке збільшення продукції вільних радикалів припадає на постішеміческій період, на стадію відновлення мозкового кровообігу. Разом з тим деякі дослідники не виключають можливість утворення вільних радикалів навіть при зниженні парціального тиску кисню в тканинах з порушеним кровопостачанням, оскільки підвищення ступеня восстановленности мітохондріальної дихальної ланцюга дозволяє кисню в період гострої ішемії взаємодіяти з проміжними компонентами цього ланцюга - убихинона - з утворенням супероксиданіон [35 ].

При гострій мозкової ішемії на тлі дисбалансу оксидантно-антиоксидантної системи відбувається активація процесів перекисного окислення ліпідів, що «в сукупності викликає розвиток дистрофічних і деструктивних змін нейрональних мембран і формування неврологічного дефіциту» [35].

1.2.3.1. Малоновий діальдегід як інтегральний показник

процесів вільнорадикального окислення

Як правило процеси перекисного окислення ліпідів (ПОЛ) оцінюються за швидкістю і кількістю освіти одного з кінцевих продуктів окислення - малонового діальдегіду (МДА).

Малоновий діальдегід (β-діальдегід):

Н - С - СН ₂ - С - Н

║ ║

О О

Активність малонового діальдегіду підтримується на певному рівні за участю ферментів антиоксидантного захисту (АОЗ), що дозволяє говорити про перекисном гомеостазі. Нормальна концентрація в крові - 2,5-6,0 мкМ / л. Збільшення концентрації - свідоцтво посиленого ПОЛ і зриву антиоксидантного захисту [2].

Визначення кількості утворюється малонового діальдегіду за допомогою тіобарбітурової кислоти (ТБ-К) може бути одним з методів оцінки інтенсивності процесів перекисного окислення ліпідів [48, 57]. В основі методу лежить реакція між малонового діальдегіду (МДА) і тіобарбітурової кислотою, яка при високій температурі і кислому значенні рН протікає з утворенням забарвленого тріметінового комплексу, що містить одну молекулу МДА і дві молекули тіобарбітурової кислоти. Максимум поглинання комплексу припадає на 532 нм [41].

При ішемії мозку в більшій мірі підвищуються вторинні продукти ПОЛ (МДА), а при реперфузії - первинні [4, 36].

Дослідження вторинних продуктів ПОЛ, що реагують з тіобарбітурової кислотою, підтверджує роль перекисного окислення в механізмах розвитку гострої фокальної ішемії мозку і формування інфарктних ушкоджень.

1.2.3.2. Біохемілюмінесценція як метод оцінки стану вільнорадикальних процесів при ішемічному інсульті головного мозку

Одним з методів оцінки вільнорадикальних процесів при ішемії головного мозку є хемілюмінесценція. Хемілюмінесценції (ХЛМ) називається світіння, що супроводжує хімічні реакції. Вона спостерігається у тому випадку, якщо в реакції відбувається виділення великої кількості енергії, наприклад в реакції взаємодії двох радикалів у реакціях за участю перекисів. Власне ("надслабких") світіння клітин і тканин тварин і людини зумовлена ​​реакціями вільних радикалів: радикалів ліпідів та кисню, а також окису азоту, - сполуками, що грають величезну роль в житті організму, а при певних умовах - і розвитку ряду патологічних станів [12].

Реєстрація індукованої біохемілюмінесценції біологічних об'єктів є сучасним методом для вивчення інтенсивності вільнорадикальних процесів, зокрема перекисного окислення ліпідів. Він застосовується для діагностики порушень ліпідного обміну, запальних, інфекційних та онкологічних захворювань. У клінічних умовах хемілюмінесцентний показник може бути застосований для визначення гостроти процесу, ступеня тяжкості за динамікою значень хемілюмінесценції.

Метод хемілюмінесценції застосовується також для визначення фагоцитарної активності клітин крові. Він заснований на реєстрації активних форм кисню, що утворюються в процесі фагоцитозу, і пов'язаний з їх фагоцитарною активністю [63].

Метод люмінолзавісімой хемілюмінесценції (ХЛМ) характеризує інтенсивність «респіраторного вибуху», тобто генерації O ₂ •, O ₂ і ОН • лейкоцитами при активації клітин [24].

ЛХЛ цільної крові можна спостерігати протягом 10-12 годин, причому при її розведенні фізіологічним розчином або розчином Хенкса інтенсивність ХЛМ збільшується [13].

Метод люмінолзавісімой хемілюмінісценціі можна застосовувати як метод оцінки стану вільнорадикальних процесів при ішемічному інсульті головного мозку.

Відомо, що на першу добу захворювання у всіх хворих незалежно від тяжкості інсульту інтенсивність - як спонтанної, так і індукованої - хемілюмінесценції сироватки крові зростає в порівнянні з контрольною групою, що вказує на активацію процесів вільнорадикального окислення [38]. У цей же період різко збільшується амплітуда «швидкої» спалаху (тобто інтенсивність свічення в момент введення індуктора), яка відображає стан оксидантної системи, і достовірно збільшується коефіцієнт загасання (тобто відношення максимальної амплітуди свічення до мінімальної), що побічно свідчить про дисбаланс оксидантно-антиоксидантної системи.

Надалі, на сьому добу, картина змінюється. У порівнянні з початком захворювання у всіх хворих зменшується амплітуда «швидкої» спалаху і достовірно збільшується коефіцієнт загасання. Разом з тим у хворих з ішемічним інсультом легкого ступеня тяжкості триває незначне наростання процесів пероксидації. У хворих з інсультом середньої тяжкості зниження індукованої хемілюмінесценції супроводжується достовірним підвищенням спонтанної хемілюмінесценції в порівнянні з першими цілодобово захворювання [35].

У хворих, що перенесли повторні порушення мозкового кровообігу, напружені обидві системи - і оксидантно, і антиоксидантна. У хворих з одним або декількома інсультами в анамнезі справи йдуть інакше: у них активація оксидантної системи поєднується з виснаженням антиоксидантної системи, що веде до більш активної деструкції мозкової тканини при гіпоксії головного мозку [35].

3. Антиоксидантна система: контроль за процесами перекисного окислення ліпідів при ішемії мозку

Окислення і продукція вільних радикалів є невід'ємною частиною метаболізму живих організмів. Активні форми кисню (АФК) генеруються в різних біологічних системах в ході нормального аеробного дихання мітохондрій. Екзогенними джерелами АФК є ультрафіолетова радіація, інфекційні агенти (віруси, бактерії), прозапальні цитокіни, окислювальний стрес. У нормі вільні радикали беруть участь у виконанні найважливіших фізіологічних процесів в організмі: підтримці судинного тонусу, у механізмах пам'яті, реакціях запалення, регуляції клітинного росту. Контроль продукції АФК здійснює антиоксидантна система, яка регулює баланс освіти і усунення вільних радикалів. До складу цієї системи входять ферменти (супероксиддисмутаза, каталаза та ін), білки (феритин, трансферин, альбумін тощо) і численні низькомолекулярні антиоксиданти (вітамін Е, убіхінол, каротиноїди, вітамін С та ін).

Для мозку характерна низька антиоксидантний захист. Саме дефіцит антиоксидантної системи в мозковій тканині пояснює її особливу чутливість до продукції вільних радикалів. Складаючи всього 2% від загальної маси тіла, мозок утилізує 20-25% одержуваного організмом кисню, тому перехід у вільнорадикальних форму навіть 0,1% метаболізуються нейронами кисню виявиться токсичним для мозкової тканини [27].

У нормальних умовах процес перекисного окислення ліпідів перебуває під суворим контролем ферментативного і неферментативного систем клітини, від чого швидкість його невелика. Виникаючі порушення метаболізму при гострій ішемії головного мозку ведуть до підвищення рівня вільних радикалів і сприяють накопиченню речовин, що каталізують ПОЛ, що, в кінцевому підсумку, і приводить до прискорення вільнорадикальних реакцій, тим більше що в умовах гіпоксії проникність мембран для кисню значно збільшується [44, 70]. У процесі ішемії співвідношення продуктів СРО і концентрації антиоксидантів в нейрональних клітинах порушується. У зв'язку з цим створюються "сприятливі" умови для інтенсифікації ПОЛ та накопичення токсичних ліпідних перекисів, які активно руйнують структуру мембран нейронів, інактивують ферменти і посилюють деструктивні процеси в тканині мозку [46].

Ксантиноксидаза грає чільну роль у генерації АФК, внаслідок чого відбувається збільшення рівня вільного заліза в плазмі крові шляхом мобілізації заліза з феритином в печінці. Гіпоксантіокідантную реакцію можна вважати одним з основних джерел утворення АФК, а також основною причиною СРО в ішемізірованом органі [50].

Існуюча в організмі фізіологічна антиоксидантна (АТ) система являє собою сукупну ієрархію захисних механізмів клітин, тканин, органів і систем, спрямованих на збереження та підтримання у межах норми реакцій організму, в тому числі в умовах ішемії. Вона включає внутрішньоклітинні антиокислювальні ферментні системи, що протидіють окислювальному стресу та знешкоджуючі АФК. До антиокислювальною внутрішньоклітинним ферментам відносяться, перш за все, супероксиддисмутаза (СОД), що здійснює інактивацію супероксидного радикала, і каталаза, розкладаюча перекис водню [43, 73].

Однак регулювання інтенсифікації ПОЛ здійснюється не тільки системою СОД-каталаза. Детоксикація в фосфоліпідних структурах відбувається головним чином за допомогою ферментів системи глутатіону, і, перш за все, глутатіонредуктази, глутатіонпероксидази та глутатіонтрансферазой [43, 55].

Особливу роль у регуляції ПОЛ грають метали змінної валентності: Fe ² , Cu ² , Mn ² , Co ² , З яких основним прооксидантів в тканини мозку є залізо [20, 25]. Так, в умовах церебральної патології ішемічного генезу з клітинного депо виходить залізо, що знаходилося там в трехвалентном стані в комплексі з феритину. Під дією супероксид-радикалу залізо відновлюється до Fe2 +. Далі по реакції Фентона (Н2О2 + Fe2 + → ОН + ОН-+ Fe3 +) двовалентне залізо розкладає перекис водню з утворенням гідроксильного радикала, будучи найбільш довготривалим, високореакційні і токсичним для тканинного метаболізму, що в кінцевому підсумку призводить до загибелі нейронів в умовах окисного стресу на фоні ішемії [34].

Отже, узагальнюючи існуючі сучасні уявлення, слід підкреслити, що посилення СРО грає найважливішу роль в патогенезі ішемії головного мозку. У перші хвилини ішемії за рахунок залишкового кисню продукти ліпопероксидації особливо енергійно накопичуються після відновлення кровопостачання. АФК атакують мембранні структури клітин і їх органел, викликаючи їх деструкцію, деенергізацію і загибель нейронів, що, безумовно, вимагає раціональної фармакологічної корекції [39].

1.3. Моделі ішемії головного мозку

Існує 5 основних методик моделювання ішемії головного мозку у щурів. . Метод, запропонований в роботі Smrĉ ka M. та ін [74], полягає у введенні монофіламентні волокна через розріз біфуркації аорти у внутрішню сонну артерію, а потім інтракраніальної. У методі емболізації [72] використовують введення попередньо виготовленого згустку гепаринизированной крові через катетер у внутрішній сонній артерії. . При використанні методу, описаного в роботі Gill R. та ін [69] виробляють лігування середньої мозкової артерії (СМА) через трепанаціонное отвір, виконане в тому місці, де артерія перетинає носову розколину. [56] заключается в перевязке СМА через трепанационное отверстие в области между овальным отверстием и отверстием зрительного нерва. Метод за Tamura [56] полягає у перев'язці СМА через трепанаціонное отвір в області між овальним отвором і отвором зорового нерва. Метод за Розвадовського [42] полягає в лигирование загальних сонних і підключичних артерій, дистальніше відходження внутрішніх грудних артерій і проксимальніше відходження хребетних артерій.

, поскольку он позволяет более точно смоделировать патологические процессы, возникающие при развитии ишемического инсульта у людей. На думку авторів [28] найбільш ефективним методом є метод за Tamura, оскільки він дозволяє більш точно змоделювати патологічні процеси, що виникають при розвитку ішемічного інсульту у людей. . Однак цей метод, як і метод, описаний в роботі Smrĉ ka M. є досить складним у виконанні. . Метод емболізації і метод, описаний в роботі Gill R. , однако также сложны и отличаются высокой себестоимостью. є близькими по ефективності до методу за Tamura, проте також складні і відрізняються високою собівартістю. Метод за Розвадовського найбільш простий у використанні, володіє низькою собівартістю. Головним його недоліком є виникнення ішемії не тільки в басейні СМА, але і в інших відділах головного мозку [28].

При моделюванні гострої неповної ішемії головного мозку у щурів в тканинах сірої речовини спостерігається зростання процесу пероксидації та антиагрегаційну активності і зниження активності супероксідісмутази. При постішеміческой реперфузії головного мозку в ньому залишається посиленим перекисне окислення ліпідів, зростає активність антиоксидантних ферментів, нормалізуються тромбоцітоактівірующіе і прокоагулянтних властивості. Зміни зазначених реакцій у тканинах мозку приводили до нормалізації агрегації тромбоцитів і згортання крові. У хворих з різними порушеннями мозкового кровообігу (ішемічний та геморагічний інсульт) в тканинах мозку різко активуються реакції перекисного окислення ліпідів, гемостазу та інгібується фібриноліз. У крові таких хворих знижуються антиоксидантні і збільшуються гемостатичні функції з інгібуванням на цьому тлі реакцій фібринолізу.

Використання вітамінів-антиоксидантів (А, Е, С, Р) в експериментальних умовах у щурів повертає тромбоцітоактівірующіе і прокоагулянтних властивості його тканин до рівня, що спостерігається у інтактних тварин. Застосування на цьому фоні інгібіторів агрегації тромбоцитів (аспірину, індометацину, тиклид) призводило до різних реакцій. Аспірин не запобігав посилення агрегаційну властивостей тканин головного мозку, викликаних його ішемією (мабуть, як інгібітор простацикліну). Індометацин, і особливо, тиклид в цьому відношенні діяли більш сприятливо, знижуючи агрегаційні властивості тканин мозку.

Тканини мозку надають регулюючий вплив на процеси перекисного окислення ліпідів та стан антиоксидантної системи, гемостазу та фібринолізу, що має важливе значення для перебігу згаданих вище реакцій не тільки місцево (у головному мозку), але і в загальному кровотоці в умовах норми і патології [37] .

При моделюванні транзиторною фокальної ішемії головного мозку у щурів, виробляють перев'язку середньої мозкової артерії.

У дослідах на щурах лінії Вістар, у яких моделювали неповну глобальну ішемію мозку шляхом двосторонньої перев'язки сонних артерій, виявлено дворазове збільшення генерації оксиду азоту (NO) і помірне підвищення вмісту вторинних продуктів перекисного окислення ліпідів у корі мозку, при цьому виявлено високий рівень кореляції між вмістом NO і виразністю неврологічного дефіциту у ішемізованих тварин [58].

РОЗДІЛ 2. МАТЕРІАЛИ І МЕТОДИ

2.1. Матеріали дослідження

Об'єктом дослідження служили цільна кров та сироватка крові 56 статевозрілих самців щурів лінії Вістар масою 221,2 ± 30,9 р. Тварин утримували в стандартних умовах віварію з вільним доступом до води та їжі [3].

В експерименті відтворювалися неповна ішемія головного мозку і механізм реперфузійного пошкодження головного мозку [3].

Всі процедури експерименту відповідали вимогам Міжнародних правил гуманного ставлення до тварин, відбитим у Санітарних правилах з обладнання та утримання експериментально-біологічних клінік (віваріїв) [3].

Вибір об'єкта експерименту був обумовлений схожістю ангіоархітектоніки головного мозку щурів і людини, а також близькістю основних гемодинамічних параметрів [3].

Тварин декапітованих під ефірним наркозом (попередньо оцінивши стан неврологічної сфери за шкалою Mc ‚ 1977) и производили забор крови. Для получения сыворотки кровь центрифугировали при 1000 об/мин в течении 15 мин. Из эксперимента исключалась гемолизированная сыворотка. Graw, 1977) і виробляли забір крові. Для отримання сироватки кров центрифугували при 1000 об / хв протягом 15 хв. З експерименту виключалася гемолізованих сироватка. Сироватка використовувалася як джерело МДА [3].

У роботі були використані сім груп тварин (табл.1).

Таблиця 1. Групи експериментальних тварин.

2.2. Методи дослідження

2.2.1. Моделювання неповної ішемії у щурів

В експерименті відтворювалися неповна ішемія головного мозку і механізм реперфузійного пошкодження головного мозку. З цією метою в нижній третині шиї проводився шкірний розріз, з обох сторін виділявся судинно-нервовий пучок і на загальні сонні артерії після їх препаровки накладалася лігатура.

Рис 1. Будова Віллізіїва кола щури (за І. В. Ганнушкин)

Ішемія головного мозку здійснювалася повної перев'язкою обох сонних артерій. Для створення реперфузійної моделі ішемічного пошкодження н а обидві загальні сонні артерії на 1 годину накладалися кліпси, після чого кровотік по загальним сонних артеріях відновлювали, домагаючись реперфузії раніше ішемізованої тканини.

Контрольну групу складало 8 тварин аналогічного статі та маси. У тварин контрольної групи відтворювалася наркотизація, шкірний розріз і виділення артерій без наступної перев'язки судин. Всі хірургічні процедури проводили під наркозом (внутрішньочеревний введення тіопенталу натрію у дозі 40-50 мг / кг, розчиненого в 1 мл фізіологічного розчину).

- index M с Graw в модификации НИИ неврологии РАМН через 2 часа после оперативного вмешательства и по динамике неврологического дефицита на 1-е и 3-и сутки (Приложение 1. табл.1). Про тяжкість ішемічного пошкодження судили за ступенем неврологічного дефіциту, оцінюваного за шкалою Stroke - index M з Graw в модифікації НДІ неврології РАМН через 2 години після оперативного втручання і по динаміці неврологічного дефіциту на 1-е і 3-ю добу (Додаток 1. Табл. 1).

2.2.2. Метод визначення концентрації малонового діальдегіду в

сироватці крові

Концентрацію малонового діальдегіду визначали за методом Uchiyama ., Mihara M., Mihara . M. [75]. До 3 мл 1,4% ортофосфорної кислоти додавали 0,25 мл сироватки крові, потім доливали 1 мл 0,5% розчину тіобарбітурової кислоти і поміщали в киплячу водяну баню на 45 хвилин. Проби охолоджували, додавали 4 мл бутанолу та струшували протягом 1 хв до утворення суспензії.

535 - Після центрифугування супернатант, фотометріровалі при двох довжинах хвиль λ = 535 нм і λ = 570 нм проти холостої проби в кюветі з довгою оптичного шляху 1 см. розрахунок вмісту ТБК-активних продуктів проводили за формулою С = (D 535 - 570 )/0,156 х 16, где С – концентрация ТБК-активных продуктов в опытной пробе; D 535 - оптическая плотность пробы при 535 нм; D 570 – оптическая плотность при 570 нм; 0,156 – коэффициент молярной экстинкции комплекса малоновый диальдегид-ТБК в л/мкмоль/см; 16 – коэффициент разведения сыворотки. D 570) / 0,156 х 16, де С - концентрація ТБК-активних продуктів у дослідній пробі; D 535 - оптична щільність проби при 535 нм; D 570 - оптична щільність при 570 нм; 0,156 - коефіцієнт молярної екстинкції комплексу малоновий діальдегід-ТБК в л / мкмоль / см; 16 - коефіцієнт розведення сироватки.

2.2.3. Метод люмінолзавісімой хемілюмінесценції в цільної крові

Хемілюмінесценцію вимірювали на апараті ХЛМ-003 у відповідності з інструкцією до приладу та методичними рекомендаціями авторів розробки [10, 23, 59, 60].

Перед дослідженням відбирали необхідну кількість робочого розчину люмінолу з розрахунку 2 мл на одну пробу і нагрівали в термостаті до 37 ° С. Попередньо розливали по 2 мл розчину в стаканчики для вимірювання хемілюмінесценції, які також поміщали в термостат. У 2 мл теплого розчину люмінолу додавали 0,1 мл гепаринизированной крові, ретельно перемішували і поміщали в кюветноє камеру приладу, налаштованого за програмою КРОВ (термостат включений, мішалка виключена, час вимірювання 10 хвилин).

2.3. Статистична обробка результатів дослідження

) до 75 квартиля ( high quartile ) [40]. Дані представлені у вигляді медіани і інтерквартільного розмаху від 25 (low quartile) до 75 квартиля (high quartile) [40].

Порівняння між групами було виконано з використанням тесту Манна - Уітні, при порівнянні більше 2 груп застосовувався тест Крускала - Уолліса. Для порівняння відносних величин застосовувався критерій χ ². Для дослідження кореляційних взаємодій виконувався кореляційний аналіз Спірмена.

Відмінності вважалися статистично значимими при р <0,05. 5,5". Всі статистичні розрахунки проводилися за допомогою пакета програм "Statistica 5,5".

РОЗДІЛ 3. РЕЗУЛЬТАТИ ДОСЛІДЖЕННЯ

3.1. Вільнорадикальні процеси при ішемічному інсульті

Ішемія мозку супроводжується розвитком складного каскаду патобіохімічних реакцій. -метил- D -аспартатными рецепторами приводит к увеличению концентрации свободного кальция в цитоплазме нервных клеток. Згідно сучасним уявленням, взаємодія надлишкових концентрацій збуджуючих нейромедіаторів (глутамату) з N-метил-D-аспартатнимі рецепторами призводить до збільшення концентрації вільного кальцію в цитоплазмі нервових клітин. Вміст вільного Са ^{2 +} зростає і в результаті відкриття потенціалзалежні іонних каналів при деполяризації нейронів, а також виходу кальцію з внутрішньоклітинних депо (ендоплазматичного ретикулума, мітохондрій). Подальша активація кальційзалежних ферментів, в т.ч. , приводит к усилению синтеза NO и формированию других свободных радикалов (супероксида, гидроксирадикалов, перекиси водорода). і конститутивний NOS, призводить до посилення синтезу NO і формування інших вільних радикалів (супероксиду, гідроксірадікалов, перекису водню).

Т.ч., оксидантний стрес виступає як один з провідних чинників пошкодження мозку при ішемії. У нашій роботі оцінка показників, що характеризують вільнорадикальної окислення, здійснювалася за визначенням концентрації ТБК-активних продуктів - малонового діальдегіду (МДА), показниками люмінолзавісімой хемілюмінесценції.

3.2. Дослідження активності хемілюмінесценції цільної крові і концентрації МДА в сироватці крові при експериментальній ішемії головного мозку

Центральне місце у вивченні ішемічного інсульту займають експериментальні моделі на тваринах [65]. Саме за результатами експерименту сформульовано основні положення про патогенез і морфогенезі ішемічного інсульту. Хоча слід зазначити, що універсальної моделі, що адекватно відтворює ішемію людського мозку, на сьогодні поки що не існує.

Виходячи з поставлених завдань даного дослідження, нами вивчено активність хемілюмінесценції цільної крові і концентрація МДА в сироватці крові, як біохімічних показників, що характеризують вільно-радикальне окислення, на експериментальній моделі ішемії головного мозку щурів.

3.2.1 Показники вільнорадикального окислення при моделюванні ішемії головного мозку

Надлишковий синтез оксиду азоту і оксидантний стрес є основними ланками останнього етапу формування вогнищевого некрозу головного мозку - експресії, на якому відбуваються незворотні зміни. Ця ланка каскаду характеризується накопиченням високотоксичних сполук, що призводять до загибелі клітини. Показники оксидантного стресу в експерименті були оцінені за вмістом у сироватці крові щурів ТБК-активних продуктів і показниками люмінолзавісімой хемілюмінесценції цільної крові.

3.2.1.1. Дослідження динаміки ТБК-активних продуктів при моделюванні ішемії головного мозку

Порушення кровообігу, що настають при ішемічному пошкодженні мозку, викликають посилену генерацію АФК, і, як наслідок, посилення ПОЛ. Дані з вивчення вмісту ТБК-АП представлено на рис. 2 і рис. 3. (Додаток 2, табл. 1).

При дослідженні динаміки ТБК-активних продуктів виявлено достовірне збільшення (у порівнянні з контрольною групою тварин) концентрації МДА у всіх серіях експерименту. Достовірне підвищення концентрації МДА після оклюзії зазначено у всі терміни після спостереження, проте найбільші зміни (у 2,5-3 рази) виявлялося через 24 і 72 години. Реперфузійні процеси супроводжувалися значним підвищенням (в 3 рази) концентрації МДА через 2, 24 і 72 години після реперфузії.

Таким чином, вивчення показників ПОЛ при моделюванні ішемії виявило активацію цього процесу. Реперфузійні процеси в мозку супроводжувалися найбільш значущими змінами з боку досліджуваного показника.

3.2.1.2. Дослідження динаміки показників хемілюмінесценції при моделюванні ішемії

Утворення вільних радикалів є одним з механізмів, за допомогою яких фагоцитарні клітини проявляють свою активність. Додавання в систему люмінолу збільшує квантовий вихід реакції, яка адекватно відображає динаміку функціональної активності лейкоцитів. Тому одним з перспективних методів дослідження вільнорадикальних процесів є хемілюмінесценція, що відображає надслабких біологічне світіння [59, 60].

Отримані нами дані з дослідження хемілюмінесценції цільної крові наведено на рис. 4 і рис. 5 (Додаток 2, табл. 2).

Максимальна, достовірно значуще, підвищення ХМЛ відзначено після 2-годинний оклюзії і 2-годинний реперфузії. Підвищеними, відносно групи контрольних тварин ці значення зберігалися і в наступних термінах експерименту. Згідно з отриманими даними оклюзійні процеси супроводжувалися більш значущим (в 2,5-4 рази) підвищенням ХЛМ цільної крові тварин. Показники ХЛМ у групі тварин з реперфузійних поразкою мозку були достовірно вище показників контрольної групи через 2 (в 4 рази) та 24 години (У 2 рази) після операції. Через 72 години після реперфузії показники ХЛМ були статистично не достовірними в порівнянні з контролем.

Таким чином, вивчення люмінолзавісімой хемілюмінесценції при моделюванні ішемії головного мозку підтверджує роль вільнорадикальних процесів у розвитку цієї патології. Найбільші зміни були зареєстровані після 2-х годинний оклюзії і 2-х годинний оклюзії з подальшою реперфузією.

ГЛАВА 4. ОБГОВОРЕННЯ РЕЗУЛЬТАТІВ ДОСЛІДЖЕННЯ

В основі розвитку ішемії мозку лежить порушення кровообігу. У зв'язку з цим першочергового значення набуває вивчення біохімічних процесів, що лежать в основі вазомоторних реакцій, що виникають у відповідь на церебральну ішемію.

Численні експериментальні дані свідчать про активацію процесів ПОЛ у хворих з ішемічними ураженнями мозку [3, 19, 26, 62]. МДА можна розглядати як біохімічний маркер ліпопероксидації в постішеміческіх тканинах [15, 26]. Підвищення концентрації ТБК-активних продуктів в спинномозковій рідині хворих ішемічним інсультом корелювало як з тяжкістю процесу, так і обсягом ураженого мозку [4, 19, 26]. Вивчення МДА як маркера активації ПОЛ при ішемії за даними периферичної крові зумовлено більшою доступністю біологічного матеріалу.

Згідно сучасним уявленням, посилення процесів вільнорадикального окислення відіграє найважливішу роль у патогенезі ішемії головного мозку. Повна оклюзійна ішемія мозку в експерименті на тварин супроводжується збільшенням вмісту продуктів ПОЛ вже починаючи з 5-хвилинної ішемії [26]. Найбільша активація процесів з участю вільних радикалів характерна для періоду реперфузії [3, 4], хоча в ряді експериментальних робіт показано посилення ПОЛ і в період обмеження доступу кисню [62].

Рішенням медико-соціальних проблем, що виникають у зв'язку з поширеністю інсульту, сприяє вивчення механізмів захворювання на різних експериментальних моделях. Будова судин мозку, їх топографія, молекулярна та клітинна біологія нервових клітин гризунів має високий ступінь гомології з приматами. Це й зумовило вивчення активності ферментів обміну регуляторних пептидів у крові та мозкової тканини експериментальних тварин.

, так и in vitro , показали, что в основе ишемии головного мозга лежат сложные механизмы. Використання різних експериментальних досліджень як in vivo, так і in vitro, показали, що в основі ішемії головного мозку лежать складні механізми.

В експериментальній частині дослідження нами була вивчена динаміка показників хемілюмінісценціі цільної крові і зміна концентрації МДА при оклюзії і оклюзії-реперфузії у щурів.

При моделюванні фокальної ішемії, як правило, відтворюється основний патофізіологічний процес - ішемія в певному басейні кровопостачання, наслідком останнього є підвищення внутрішньоклітинної концентрації вільного Са ^{2 +,} лактоацидоз, активація вільнорадикального окислення. У патогенезі ішемії мозку окислювальний стрес, гіперпродукція вільних радикалів та інших АФК відіграють роль необхідної ланки в деструкції мембран і загибелі нейронів. При помірному рівні синтезу АФК діють як специфічні сигнальні молекули.

Відомо, що МДА є універсальним маркером ПОЛ. За літературними даними [26], вже з 5 хвилини ішемії реєструється підвищення всіх продуктів ПОЛ - первинних і вторинних. Факт різкої активації процесів ПОЛ у вогнищі ішемії підтверджується не тільки збільшенням дієнових кон'югатів і МДА, але посиленням хемілюмінесценції гомогенату. Ми проаналізували дані експерименту з вивчення МДА і показників люмінолзавісімой хемілюмінесценції в сироватці крові щурів в різні терміни після оклюзії.

Активація вільнорадикальних процесів відзначалася у всіх серіях експерименту з оклюзією. Підвищення (в порівнянні з групою ложнооперірованних тварин) показників МДА в сироватці крові щурів після 2-годинний оклюзії свідчить про посилення процесів ПОЛ вже в перші години розвитку захворювання. Максимальне збільшення концентрації ТБК-активних продуктів зареєстровано в 1 добу після 2-годинний оклюзії. У тварин на 3 добу після 2-годинний оклюзії концентрація МДА також перевищувала значення контрольної групи.

Вивчення показників ПОЛ при реперфузії показало, що зміни виявлені на всіх етапах експерименту, що узгоджується з літературними даними про посилення СРО в даний період.

Відомо, що у пацієнтів з важким і вкрай важким варіантом ішемічного інсульту виявляється активація вільнорадикальних процесів (за показниками МДА і ХЛМ) [33]. Максимальне підвищення концентрації МДА у хворих з ішемічним інсультом відзначається вже в перші години і добу розвитку захворювання, що, на думку авторів [20, 25, 33], відображає реперфузійні процеси, що відбуваються в мозку і показує залежність процесів ПОЛ від тяжкості захворювання. Особливо значимою була залежність рівня ТБК-активних продуктів від перебігу захворювання: у тяжелоінвалідізірованних хворих приріст досягав 7,6 нмоль / мл. Наростання концентрації ТБК-активних продуктів у сироватці крові хворих в перші години і добу розвитку захворювання, на думку авторів, свідчать про активізацію вільнорадикальних процесів у мозковій тканині, а підвищення рівня С-реактивного білка (СРБ) відображає розвиток запальної реакції [33].

Таким чином вивчення процесів СРО на експериментальній моделі неповної ішемії у щурів і порівняння даних, отриманих при дослідженні пацієнтів з ішемічним інсультом, показало їх принципова подібність і їх значущість у патогенезі захворювання.

Значну роль у розвитку процесів ПОЛ грають поліморфноядерні лейкоцити - нейтрофіли. У процесі їх стимулювання відбувається активація мембранних фосфоліпаз, вивільнення арахідонової кислоти і активація міелопероксідазной системи. Ці процеси призводять до запуску внутрішньоклітинних реакцій за типом «дихального вибуху» і до підвищеної продукції високоактивних форм кисню (супероксиданіон, гідроксильного радакала, синглетного кисню, перекису). Додавання в систему люмінолу збільшує квантовий вихід реакції. Це дозволяє реєструвати люмінолзавісімую хемілюмінесценцію.

Для більш докладного аналізу процесів СРО вивчена динаміка показників ХМЛ при моделюванні ішемії головного мозку щурів. Найбільші значення цих показників зареєстровані після 2-х годинний оклюзії. В інших серіях експерименту (1 і 3 доби після 2-х оклюзії) також відмічено підвищення хемілюмінесценції, достовірно відрізняються від показників групи контролю, узгоджується з даними літератури [29].

Особливо небезпечною для нервової тканини вважається реоксигенації або реперфузія, яка веде до вибуху генерації АФК. У серіях експерименту з моделюванням цього патологічного процесу нами також вивчена люмінолзавісімая хемілюмінесценція.

Результати проведених досліджень показали, що реперфузійні процеси також супроводжуються посиленням ХМЛ. У даній серії експериментів виявлено підвищення процесів ХМЛ на всіх етапах. Однак найбільш вираженими вони були після 2-годинний реперфузії, що узгоджується з літературними даними про активацію СРО в перші хвилини та години після реоксигенації.

Таким чином, вивчення показників ХМЛ показало їх активацію практично на всіх етапах експерименту. Даний метод дослідження процесів СРО є досить надійним і перспективним з огляду на його чутливості і надійності. На нашу думку, метод ХЛМ може бути використаний при оцінці СРО у хворих з ішемічними поразок головного мозку.

Вивчення вільнорадикальних процесів як у хворих ішемічним інсультом, так і в експерименті показало їх активацію, яка залежала від стадії процесу (оклюзія або реперфузія), тяжкості захворювання.

ВИСНОВКИ

1. Оклюзійні і реперфузійні процеси при моделюванні ішемії головного мозку супроводжувалися посиленням вільнорадикальних процесів.

2. Концентрація МДА в сироватці крові щурів значно підвищувалася в першу добу після оклюзії, а також в усі періоди спостереження після реперфузії.

3. При моделюванні неповної ішемії головного мозку максимальні зміни хемілюмінесценції крові експериментальних тварин спостерігалися після 2-х годинний оклюзії і 2-х годинний реперфузії.

4. Показано принципову схожість показників ХЛМ та рівня МДА в сироватці крові щурів при експериментальній ішемії і цих показників у хворих ішемічним інсультом [33].

ЛІТЕРАТУРА

1. Адамов А.К., Павлова Ю.П. Антимікробну дію системи ксантиноксидаза-ксантин на збудника холери / / Мікробіологія, епідеміологія та імунологія. 1990. № 8. С. З.

2. Банкова В. В. Роль малонового діальдегіду в регуляції перекисного окислення ліпідів в нормі та патології: Автореферат дис. ... д-ра біол. наук. М, 1990.

3. Біленко М.В. Ішемічні та реперфузійні пошкодження органів. М.: Медицина, 1989. 368 с.

4. Біленко М.В., Тельпухов В.І., Чураков Т.Д. Вплив ішемії та реперфузії головного мозку щурів на процеси ПОЛ і захисний ефект антиоксидантів / / Бюл. т фіз. біології та медицини. 1988. № 4. С. 394-397.

5. Боголєпов Н.К. Церебральні кризи та інсульт. М.: Медицина, 1971. 392 с.

6. Болдирєв А.А. Проблеми аналізу ендогенних продуктів ПОЛ / / Підсумки науки і техніки. 1986. Т.18. 134 с.

7. Верещагін Н.В. Патологія вертебробазилярної системи та порушення мозкового кровообігу. М.: Медицина, 1980. 310 с.

8. Верещагін Н.В., Моргунов В.А., Гулевська Т.С. Патологія головного мозку при атеросклерозі та артеріальної гіпертонії. М.: Медицина, 1997.

9. Верещагін Н.В., Сусліна З.А. Інсульт у дзеркалі медицини і суспільства / / Вісник РАМН. 2003. № 11. С. 48-55.

10. Владимиров Ю.А. Активні форми кисню та азоту: значення для діагностики, профілактики і терапії / / Біохімія. 2004. Т. 69. Вип. 1. С. 5-7.

11. Владимиров Ю.А. Вільні радикали і антиоксиданти / / Вісник РАМН. 1998. № 8. С. 43-51.

12. Владимиров Ю.А. Надслабких світіння при біохімічних реакціях. М.: Наука, 1966.

13. Войков В.А., Новіков К.Н. съезда биофизиков России: М, 1999. Нізкоїнтенсивная хемілюмінесценція цільної крові людини відображає її властивості як кооперативної біологічної системи / / Тез. II з'їзду біофізиків Росії: М, 1999. З 98-101.

14. Ворлоу Г.П., Денніс М.С., ван Гейн Ж. та ін Інсульт. Практичне керівництво для ведення хворих. СПб.: Політехніка, 1998. 374 с.

15. Ганнушкіна І.В. Мозковий кровообіг при різних видах циркуляторної гіпоксії мозку / / Вісник РАМН. 2000. № 9. С. 22-27.

16. Гомазков О. А. ангиотензинпревращающий фермент в кардіології: молекулярні та функціональні аспекти / / Кардіологія. 1997. № 11.

С. 58.

17. Гусєв Є.І., Бурд Г.С., Боголєпов М.М. Судинні захворювання головного мозку. М.: Медицина, 1979. 142 с.

18. Гусєв Є.І. Ішемічна хвороба головного мозку / / Актова мова на сесії РАМН. Москва, 1992.

19. Гусєв Є.І., Скворцова В.І., Мартинов М.Ю. Церебральний інсульт: проблеми та рішення / / Вісник РАМН. 2003. № 11. С. 44-48.

20. Гусєв Є.І., Скворцова В.І. Ішемія головного мозку. М.: Медицина, 2001. 326 з.

21. Гусєв Є.І., Скворцова В.І., Коваленко О.В., Соколов М.А. Механізми пошкодження тканини мозку на тлі гострої фокальної ішемії / / Журнал неврології і психіатрії ім. С.С. Корсакова. 1999. № 2. С.65-70.

22. Давиденкова Є.Ф. Мієлопероксидази нейтрофілів і її можливу участь у процесі перекисного окислення ліпідів / / Клінічна медицина. 1989. № 6. С. 51.

23. Друх В.М., Фархутдінов Р.Р., Загідулліна Ш.З. Метод вивчення хемілюмінісценціі лейкоцитів цільної крові / / Клінічна лабораторна діагностика. 2004. № 12. С. 41-43.

24. Євдокимов Ф.А. Гемодинамічно незалежні ефекти інгібіторів АПФ у хворих на інфаркт міокарда: Автореферат дис. ... На конкурувати. учений. ступеня к.м.н. Москва, 2007. 25 с.

25. Зозуля Ю.А., Боровий В.О., Сутковий Д.А. Вільнорадикальне окислення і антиоксидантний захист при патології головного мозку. М.: Знание-М, 2000. 344 с.

26. Зорова Д.Б., Баннікова С.Ю., Білоусов та ін Друзі чи вороги. Активні форми кисню та азоту / / Біохімія. 2005. Т. 70. Вип. 2. С. 265-272.

27. Карнєєв О.М., Соловйова Е.Ю., Федін А.І., Азізова О.А. Використання преперата α-ліпоєвої кислоти як нейропротективное терапії хронічної ішемії мозку / / Російський державний медичний університет. М.: НДІ фізико-хімічної медицини Міністерства охорони здоров'я Росії. 2006. Т. 4. № 8.

28. Ковальов Г.А., Свідка Є.М. Сучасний погляд на моделювання ішемії головного мозку у щурів. Харків: ХНУ ім. В. Н. Каразіна.

29. Колпікова О.С. Стан вільнорадикального окислення при інсульті та оцінка антиоксидантної активності препаратів / / Автореферат дис. ... На конкурувати. учений. ступеня к.м.н. Уфа, 2003.

30. Курашвілі Л.В., Косий Г.А., Захарова І.Р. Сучасне уявлення про перекисном окисленні ліпідів та антиоксидантної системи при патологічних станах / / Методичний посібник. Пенза: Інс-т усоверш. лікарів МОЗ РФ, 2003. 32 с.

31. Кухтевіч І.І. Ішемічний інсульт. М.: Медицина, 2006. 170 с.

32. Ланкін В.З., Тіхазе А.К., Беленков Ю.М. Вільнорадикальні процеси при захворюваннях серцево-судинної системи / / Кардіологія. 2000. № 7. С. 48-59.

33. Левашова О. А. Активність ферментів обміну регуляторних пептидів і деякі біохімічні показники у хворих ішемічним інсультом та в експерименті: Автореферат дис. ... Канд. біол. наук. Пенза, 2007. 127 с.

34. Лук'янчук В.Д., Лисенко О.А., Савченкова Л.В., Бібік Є.Ю. / / Фармакологія засобів, що регулюють прооксидантно-антиоксидантну стан організму / За ред. проф. В. Д. Лук 'янчука. Луганськ: Наука, 1999. 40 с.

35. Львова Л.В. Наступність / / Журнал Провізор. 2005. № 4. С. 33-41.

36. Мельникова О.В., Скоромец А.А., Шестакова С.А. Межд. та ін Вплив німодипіну на вільнорадикальне окислення ліпідів при експериментальній ішемії на тлі реноваскулярнійгіпертонії / / Матер. IV Міжн. симпозіуму з транскраніальної допплерографії і електрофізіологіч. моніторингу «Ішемія мозку». С.-Петербург, 1997. С. 148-150.

37. Міщенко В.П., Грицай Н.М., Литвиненко Н.В., Міщенко І.В., Гришко Ю.М.. Регулювання тканинами мозку захисних систем крові (антиоксидантну, згортання і фібринолітичної) в умовах норми і патології / / Архів клінічної та експериментальної медицини. Донецький державний медичний університет ім. М. Горького. 2001. С. 189.

38. Наврузов М. Б. Оксидантно-антиоксидантний та біоенергетичний гомеостаз у хворих з ішемічним інсультом у ході лікування: Автореф. дис ... канд. мед. наук. Україна: АМН. 2005. 20 с.

39. Оглобліна В.М. Сучасні основи патогенезу гострої церебральної ішемії. 2005. Т. 6. № 2.

http://www.infomed.com.ua/modules.php?name=Pages&go=page&pid=592

40. Платонов А.Є. Статистичний аналіз в медицині та біології: завдання, термінологія, логіка, комп'ютерні методи. М.: Видавництво РАМН, 2000. 52 с.

41. Рогожин В.В., Курилюк Т.Т. Підвищення чутливості методу визначення концентрації малонового діальдегіду за допомогою тіобарбітурової кислоти / / Тези VII конференції «Аналітика Сибіру і Далекого Сходу». Новосибірськ, 2004. С. 90.

42. Розвадовський В.Д., Тренін С.О., Тельпухов В.І.. Мікрохірургічна модель ішемії головного мозку / / Журнал патологічної фізіології і загальної патології. 1985. № 2.

43. Румянцева С.А. Комплексна антиоксидантна терапія реамбіріном у хворих з критичними станами неврологічного генезу / / Міжнародний медичний журнал. 2002. № 2. С. 129-137.

44. Самойлов М.О. Реакція нейронів мозку на гіпоксію. Л.: Наука. 1985. 185с.

45. Скворцова В.І. Ішемічний інсульт: патогенез ішемії, терапевтичні підходи / / Неврологічний журнал. 2001. № 3. С. 4-9.

46. Скворцова Е.А., Гусєв Є.І., Коміссарова І.А. Комплексне клініко-нейрофізіологічне вивчення ефективності фармацевтичного препарату гліцину в гострому періоді ішемічного інсульту / / Журнал невропатології і психіатрії ім. С. С. Корсакова. 1995. № 1. С.11-18.

47. Скулачов В.П. Кисень в живій клітині: добро і зло / / Російський журнал гастроентерології, гепатології, колопроктології. 1999. № 1. С. 12-18.

48. Сталева І.Д., Горішвілі Т.Д. Метод визначення малонового діальдегіду за допомогою тіобарбітурової кислоти / / Сучасні методи в біохімії. М.: Медицина, 1977. С. 66-68.

49. Стукова Н.Ю. Зміни функціональної активності кисеньзалежного бактерицидних систем фагоцитів при взаємодії з чумних мікробом і його антигенами / / Автореферат дис. ... канд. мед. наук. Саратов, 1991.

50. Сумбаев В.В., Розанов А.Я. Дослідження in vitro регуляції активності ксантиноксидази печінки щурів відновником - антиоксидантом / / Український біохімічний журнал. 1998. № 6. С.47-52.

51. Сусліна З.А., Верещагін, Пірадов М.А. Підтипи ішемічних порушень мозкового кровообігу: діагностика та лікування / / Consilium . Medicum. 2001. Т. 3. № 5. С. 22.

52. Сусліна З.А., Максимова М.Ю., Кістень Б.А., Федорова Т.М. Нейропротекція при ішемічному інсульті: ефективність мілдронату / / Кардіологія, неврологія. М.: ГУ НДІ неврології РАМН, 2005. № 13.

53. Сусліна З.А., Федорова Т.Н., Максимова М.Ю. та ін Антиоксидантна дія мілдронату і L-карнітину при лікуванні хворих з судинними захворюваннями головного мозку / / Експериментальна та клінічна фармакологія. 2003. Т. 60. № 3. С. 32-35.

54. Тарасов Н.І., Тепляков А. Т., Малаховіч Є.В. та ін Стан перекисного оксиления ліпідів, антиоксидантного захисту крові у хворих на інфаркт міокарда, обтяженим недостатністю кровообігу / / Тер. архів. 2002. № 12. C. 12-15.

55. Тимочко М.Ф., Кобільська Л.І. Вільнорадіальні реакції та також їх метаболічна роль / / Мед. хімія. 1999. Т. 1. № 1. С. 19-23.

56. Топчян А.В., Мірзоян Р.С., Баласанян М.Г. Лазерний допплерівський флоуметрии і вивчення фармакологічних впливів на мікроциркуляцію кори головного мозку щурів / / Методологія флоуметрии. М.: Лаб. НДІ фармакології РАМН, 1997. С. 129-136.

57. Тюкавкина Н.А., Бауков Ю.І. Біоорганічна хімія. М.: Дрофа, 2005. С. 444-469.

58. Фадюкова О.Є., Алексєєв А.А., Башкатова В.Г., Толордава І.А., Кузенков В.С., Мікоян В.Д., Ванін А.Ф., Кошелєв В.Б., Раєвський До . С. Семакс попереджає підвищення генерації оксиду азоту в мозку щурів, обумовлене неповної глобальної ішемією / / т фіз. і клинич. фармакологія. 2001. № 2. С. 31-34.

59. Фархутдінов Р.Р. Дослідження хемілюмінесценції біологічного матеріалу і оцінка антиоксидантної активності на приладі ХЛМ-003 / / Методичні рекомендації. Уфа, 2005.

60. Фархутдінов Р.Р., Ліховскіх В.А. Хемілюмінесцентні методи дослідження вільнорадикального окислення в біології та медицині. Уфа: Вид-во БГМІ, 1995. 110 с.

61. Федін А.І. - medicum . Сучасна концепція патогенезу та лікування гострої ішемії мозку / / Consilium - medicum. 2000. Т. 2. № 12. С. 6-12.

62. Федорова Т.Н., Болдирєв А.А., Ганнушкіна І.В. Перекисне окислення ліпідів при експериментальній ішемії мозку / / Біохімія. 1999. Т. 64. Вип. 1. С.94-98.

63. Федоров Г.Н., Леонов С.Д. Особливості хемілюмінесценції цільної розведеної крові / / Електронний математичний і медико-біологічний журнал. 2007. Т. 6. Вип. 4.

64. Чеснокова Н.П. Типові патологічні процеси / / Саратов: Саратовський медичний університет, 2004. С. 132-136.

65. Чехонін В.П., Лебедєв С.В., Петров С.В. та ін Моделювання фокальної ішемії головного мозку / / Вісник РАМН. 2004. № 3. С. 47-54.

66. Шмідт Є. В., Луньов Д. К., Верещагін Н. В. Судинні захворювання головного та спинного мозку. М.: Медицина, 1976. 283 с.

67. Елліот В., Елліот Д. Біохімія та молекулярна біологія. М.: Наука 2002. 446 с.

68. Яхно Н.Н., Парфьонов В.А. Ішемічні гострі порушення мозкового кровообігу / / Consilium . 2000. Т .2. Medicum. 2000. Т .2. № 12.

69. Gill R, Brazell C, Woodruff GN, Kemp JA. The neuroprotective action of dizocilpine (MK-801) in the rat middle cerebral artery occlusion model of focal ischemia / / Br J Pharmacol. 1991. № 103. P. 2030-2036.

70. Hammerman C., Kaplan M. Ischemia and reperfusion injury. The ultimate pathophysiologic paradox / / Clin. Perinatol. 1998. V. 25. Р . № 3. Р. 757-777.

71. Mori T., Asano T., Matsui T., Muramatsu H. Intraluminal increase of superoxide anion follow transient focal cerebral ischemia in rats / / Brain Res. 1999. V. 8. № 2. P. 350-357.

72. Overgaard K., Sereghy T., Boysen G., Pedersen H. Reduction of infarct volume and mortality by thrombolysis in rat embolic stroke model / / Stroke. 1992. № 23. P. 1167-1173.

73. Sheng H., ​​Bart RD Oury TD Mice overexpressing extracellular superoxide dismutase have increased resistance to focal cerebral ischemia Pearlstein RD / / Neuroscience. 1999. V.88. Р . № 1. Р. 185-191.

74. Smrcka M., Otevrel F., Kuchtickova S., Horky M., Juran V., Duba M., Graterol I. Experimental model of reversible focal ischemia in the rat / / Scripta medica (BRNO). 2001. № 74. P. 391-398

75. Uchiyama M., Mihara M. Determination of malonaldehyde precursor in tissues by thiobarbituric acid test / / Analyt. . Biochemia. . 1978. V. . 86. P. 271-278.

ДОДАТОК

Додаток 1

Таблиця1.

, 1977). Оцінка тяжкості неврологічної симптоматики при ішемії головного мозку у щурів (Mc Graw, 1977).

Додаток 2

Таблиця 1.

Динаміка концентрації ТБК-АП (МДА) в сироватці крові при моделюванні ішемії головного мозку (мкмоль / л)

* - Достовірно в порівнянні з контролем, p <0,05

Таблиця 2.

Динаміка показників ХМЛ цільної крові при моделюванні ішемії головного мозку щурів (в отн. Од.)

<0,05. *- Достовірно в порівнянні з групою контролю, p <0,05.