Хіміко-токсикологічне дослідження роду хвощ

[ виправити ] текст може містити помилки, будь ласка перевіряйте перш ніж використовувати.

скачати

ЗМІСТ

Введення

Огляд літератури

Глава I 1.1 Ботанічна характеристика роду хвощ, його хімічний склад, перспективність створення лікарських препаратів

1.1.1 Ботанічне опис

1.1.2 Анатомічна будова (мікроскопія)

1.1.3 Географічне поширення

1.1.4 Хімічний склад рослин роду хвощ

1.1.5 Застосування роду хвощ в народній і официнальной медицині

1.2 Нові протигрибкові препарати

Висновок

Глава II Матеріали, методи та апаратура

Глава III Перспективність використання роду хвоща для створення лікарських препаратів

3.1 Перспективність використання роду хвоща для створення лікарських препаратів

3.2 Біологічна активність і перспективність деяких таксонів для створення лікарських препаратів

Глава IV Вивчення хімічного складу роду хвощ

4.1 Якісний склад

4.2 Кількісне визначення

4.3 товарознавчі показники

Глава V Розробка технологічного процесу одержання сухого екстракту

Висновки

Літературний огляд




ВСТУП

АКТУАЛЬНІСТЬ ТЕМИ: Проблема створення нових лікарських засобів рослинного походження - одна з актуальних у сучасній фармації. Це завдання може бути вирішена за рахунок підвищення якості існуючих і впроваджених нових лікарських засобів.

Кількість рослин, які використовуються в якості лікарських дуже велике. Але тільки незначна частина з них, найбільш важливих і частіше застосовуються, визнана официнальной і входить в сучасну фармакопею.

Дикоростучим лікарським рослинам великий інтерес приділяється завдяки великим зонам проростання, і, отже, дозволяє забезпечити потреби охорони здоров'я в лікарській сировині.

Для лікування дерматологічних захворювань поруч з гормонами, антибіотиками та синтетичними продуктами в даний час успіхом користуються препарати, отримані з лікарської рослинної сировини, перевага яких полягає в широті фармакологічної дії, малої токсичності, можливості тривалого застосування без побічних ефектів.

Хвощ, користується підвищеною увагою дослідників і клініцистів завдяки наявності цінних цілющих властивостей, достатніх площ зростання, а значить сировинної бази.

Поряд з цим відзначається неповне вивчення фармакологічної дії хвоща, його лікарських форм і методів оцінки, що зумовило передумови для більш поглибленого вивчення хвоща як лікарського засобу.

Великий ареал зростання дозволяє використовувати хвощ в якості сировини для промислового виробництва препаратів.

МЕТА РОБОТИ: Хіміко-токсикологічне дослідження, розробка технології екстракту хвоща сухого.

ОСНОВНІ ЗАВДАННЯ:

  1. Визначити перспективний вид роду хвоща.

  2. Вивчити антигрибкову активність роду хвощ.

  3. Вивчити хімічний склад роду хвоща.

  4. Розробка технологічного процесу сухого екстракту хвоща.


НАУКОВА НОВИЗНА: Вперше проведено фітохімічний аналіз деяких видів роду хвощ, розроблена технологія одержання екстракту, визначена протигрибкова активність.

ПРАКТИЧНА ЗНАЧИМІСТЬ: Розроблено схему технологічного процесу одержання сухого екстракту хвоща польового.

ОГЛЯД ЛІТЕРАТУРИ

Глава I.

  1. Ботанічна характеристика деяких видів роду хвощ, його хімічний склад, перспективність створення лікарських препаратів.

1.1.1Ботаніческое опис.

Хвощ польовий (Eqisetum arvense L), сімейство хвощові (Eqisetaceae) - це багаторічна трав'яниста споровое рослина з повзучим, глибоко зануреним, буро-чорним кореневищем, нерідко несучим кулясті бульби. Стебла двоякого роду: спороносні, з'являються навесні, і літні - безплідні, що залишаються до осені.

Спороносні пагони не гіллясті, соковиті, заввишки 7-25 см, світло бурі з гладкими ребрами і дзвінковим бурими піхвами, закінчуються спороносні колоском. Колоски овально-циліндричні, суперечки кулясті зеленуваті. Після осипання суперечка спороносні стебла швидко відмирають, і з цього ж кореневища відростають літні вегетативні пагони. Літні пагони прямостоячі, борознисті, заввишки до 50-60 см, без колосків, зелені, тонкі, членисті, жорсткі з численними гілками, всередині порожні. Гілки безлисті, в мутовках по 6-8, косо вгору спрямовані, прості, чотирьох-, п'ятигранні. Піхви стебел, що представляють собою редуковані листя, циліндричні, 4-8мм довжини, з трикутно-ланцетними, чорно-бурими, белоокаймленнимі зубцями, зазвичай зрощені між собою по 2-3, піхви гілочок зелені з 4-5 бурими, дліннооттянутимі зубчиками [].

Складний зовнішній вигляд мають і інші види хвощів, що істотно ускладнює встановлення автентичності.

Хвощ луговий (Eqisetum pratense L). Багаторічна, споровое, трав'яниста рослина з тонким, повзучим чорним кореневищем без бульбочок. Спороносні стебла 10-20 см заввишки, блідо-зелені, прості, гладкі, по дозріванню суперечка розвивають зелені гілки і стають схожими з вегетативними пагонами. Піхви на них не більше 1,5 см завдовжки, узкоколокольчатие. Колос 0,8-1,5 см завдовжки, циліндричний.

Хвощ лісовий (Eqisetum sylvaticum L). Багаторічна, споровое, трав'яниста рослина з тонким, повзучим, чорно-бурим, гіллястим кореневищем. Спороносні стебла 20-40 см заввишки, до 0,5 см в діаметрі, рудуваті або червонуваті, прості з гладкими ребрами. Піхви на них дуже великі, 1.5-3см довжиною, 1см шириною, у нижній частині зелені, у верхній бурі, перетинчасті, в числі 6-10. Колоски 2-4см завдовжки, циліндричні. Після дозрівання спор генеративні пагони зеленіють і розвивають мутовки багаторазово гіллястих гілок. Безплідні стебла з10-14 ребрами. Піхви 6-12см завдовжки, дзвіночки, блідо-зелені, з іржаво-коричневими лопатями. Гілки численні, 3-5-гранні, тонкі, з'являються з 4-5 вузла. [].

Хвощ болотний (Eqisetum palustre L). Болотне, гидрофильное рослина. Кореневище матово-чорне, розгалужене, з бульбами. Стебла 15-40 см заввишки, 1.5-3 мм діаметром, зелені, звичайно гіллясті чи прості, з тонко поперечно-зморшкуватими крилатими ребрами. Піхви 5-12мм завдовжки, узкоколокольчатие, зелені або темні, зубці в числі 5-8, коротше піхв, чорно-коричневі, c широкою білою облямівкою. Гілки вгору спрямовані, колос 1-3см довжиною, циліндричний, тупий, на короткій ніжці. [].

Хвощ зимуючий (Eqisetum hiemale L). Кореневище майже чорне, вертикально розгалужене. Стебла 50-80 см заввишки, 3-5мм діаметром, циліндричні, міцні, жорсткі, з широкою внутрішньою порожниною. Ребра численні, тонкі. Піхви 5-10мм завдовжки, блідо зелені, на верхівці і біля основи чорні, c 10-30 шіловіднимі зубцями, які рано обламуються. Колос 1-3 см довжиною, овальний, вгорі загострений. [].


1.1.2 Анатомічна будова (мікроскопія)


Поперечні зрізи міжвузля стебла різних видів хвоща округлі і, відповідно з більш-менш виступаючими ребрами і втиснутими борозенками стебла. Центр стебла зазвичай порожній і серцевина відсутня; знаходиться навколо центральної порожнини однорядний пояс провідних пучків відмежований ендодерми від корковою частини. У корковою частини стебла під епідермісом розташовується колленхіма суцільним або перерваним кільцем; найбільше вона розвинена у виступах. За колленхімой слід хлорофілоносная паренхіма, яка найбільше розвинена під борозенками, що несуть продихи. У таких паренхімних ділянках утворюються, шляхом розбіжності клітин або розриву, великі повітроносні порожнини. Проти виступів ребер розташовуються провідні пучки. До периферії від пучкової порожнини розташована флоема. Центр стебла зайнятий великої воздухоносной порожниною.

Устячка мають надзвичайно своєрідну будову, характерне для всіх видів хвоща. Супроводжуючі клітини їх забезпечені на внутрішній своїй поверхні ребрами, що виступають в порожнину клітини. На поверхневих препаратах видно ці ребра, променисто розходяться навколо устьячкові щілини. По розташуванню продихів розрізняють два типи: в одних видів супроводжують клітини розташовані на рівні і в площині клітин епідермісу, в інших - вони занурені. При занурених продихах велике поглиблення над супроводжуючими клітинами частково перекрито виступаючим окременевшем краєм зовнішніх стінок сусідніх епідермальних клітин, що залишають лише посередині неправильне отвір. Так утворюється велика повітроносних порожнину над продихи, отвір якої й видно в першу чергу на поверхневих препаратах.

Види хвоща добре відрізняються між собою по контуру стебла, будовою паренхіми, ендодерми і типом продихів.

1.1.3 Географічне поширення


Хвощ польовий має космополітичний тип ареалу. Це найпоширеніший вид хвоща, що росте майже по всюди, крім пустель, напівпустель, а також Крайньої Півночі. Південна межа хвоща йде від Каспійського моря до Азовського, звідки повертає на схід, перетинає Волгу у Волгограда і річку Урал і йде за межі країни [].

Хвощ польовий росте на луках, в ялинових, светлохвойних, липових, соснових, сосново-березових, березових і змішаних лісах. Віддає перевагу заплавні місця, береги річок, чагарникові зарості, узбіччя доріг, відкоси залізничних насипів, піщані і глинисті кар'єри. Нерідко утворює на прирічкових мулистих пісках майже чисті зарості. Часто зустрічається в озимих та ярих посівах і є трудноіскоренімим кореневищні бур'яном, вважається індикатором кислих грунтів [].

Хвощ болотний найбільш поширений на трав'янистих і мохових болотах, луках, чагарниках прибережних чагарників, по задернінням кам'яним розсипам і покладів, лісовій смузі, в Європейській частині заходить і в а Арктику, де знайдений по північному узбережжю Кольського півострова, на Канін і на Колгуєві, через Большеземельную тундру доходить до Полярного Уралу. У арктичній Сибіру відсутня, і лише на крайньому сході знайдений в Анадирі. На південь вид поширений до Чорного моря; поширений по всьому Кавказу. Відсутній в нижньому Поволжі та в Криму; займає весь Сибір і весь Далекий Схід [].

Хвощ лісовий поширений в лісах, чагарниках, на лісових та субальпійських луках, кочкарних болотах.

Хвощ луговий зустрічається в Західному Сибіру, ​​Тюменської області, в Хакасской автономної області, Курганської області, Омської, Новосибірської, Кемеровській областях. Найчастіше зустрічається в лісах, серед чагарникових заростей, на кам'янистих розсипах.

Хвощ зимуючий виростає в лісах, серед заплавних чагарників, на лісових луках, стрімчастих берегах річок, струмків.

Хвощі можна зустріти в різних рослинних зонах і спільнотах, але в будь-якому випадку біля води або в місцях з достатнім вмістом вологи в грунті або з відносно не глибоким заляганням грунтових вод.

Входячи до складу піонерних рослинних угруповань і захоплюючи території з порушеним природним рослинним покривом, хвощі нерідко утворюють чисті або майже чисті зарості в тих місцях, де інші рослини не можуть жити, наприклад, з-за великої кількості води або, навпаки через її нестачі в тих шарах грунту, де розташована коренева система цих рослин. Раз оселившись на який-небудь території, хвощі завдяки наявності глибоко залягають кореневищ, успішно протистоять таким несприятливих впливів зовнішнього середовища, як посухи, лісові пожежі і т.п. і успішно конкурують з іншими рослинами, довго утримуючи захоплену територію. Поселяючись на місцях з порушеним рослинним покривом.

1.1.4 Хімічний склад рослин роду хвощ


Перші роботи з дослідження хімічного складу рослин сімейства хвощові з'явилося в 40-х роках XX століття. Ранні роботи носили розрізнений характер і стосувалися виділення і вивчення лише окремих сполук (сапонінів, алкалоїдів, флавоноїдів) [].

Нахамура і Хукуті (1940) виділили з хвоща польового флавоноїди еквізетрін, ізокверцетін і 5-глікозид лютеоніна []. Пізніше Харборн (1967) і Салех (1972) отримав з сировини хвоща польового флавоноїдні сполуки, похідні кемпферол і кверцетину [].

Ці ж сполуки були ідентифіковані чеськими вченими (1980) методом тонкошарової хроматографії та визначено їх кількісний вміст. Порівняльне дослідження хімічного складу польських видів хвоща також показало присутність флавоноїдів і фенолкарбонових кислот у всіх видах.

У нашій країні, в результаті хімічного дослідження свіжої трави хвоща польового і його спороносних стебел, Сирчіной А.І. встановлено наявність 26 фенольних сполук, до складу яких входять флавоноїди, фенолокислоти, і похідні 1-інданона. Флавоноїдні з'єднання хвоща польового представлені: флавононамі (нарінгенін), флавонолами (аромодендрін, таксіфолін, кемпферол, кверцетин), флавонами (генхванін, лютеолін, апігенін, 6-хлорапігенін) [].

Цим же автором методом газорідинної хроматографії в хвощі польовому ідентифіковані оксібензойние і оксикоричні кислоти: п-оксібензойная, протокатеховая, ванілінова, галова, п-кумаровая, феруловая, кавова [].

Вивчаючи рослини роду Eqisetum, з хвоща польового виділили сапонін - еквізетонін (до 5%), що розщеплюється при гідролізі на аглікон - еквізетогенін і фруктозу [].

Виявлено водорозчинні кислоти: аконітовая, арабіноновая, лимонна, фумарова, глюконова, малонова, фосфорна, хінна, треоновая.

Хвощ польовий є рекордсменом серед рослин за змістом кремнію. Так, в сухій речовині хвоща польового міститься 9% кремнезему, а в золі до 96%. У соку хвоща польового кремній виявлений в розчинній формі кремнієвої кислоти, пов'язаної з органічними сполуками. З ростом рослини вміст кремнію зростає, досягаючи максимуму в кінці вегетації. Також в хвощі знайдені особливі ферменти - сілікази, що сприяють перетворенню неорганічних сполук кремнію в органічні [].

Хімічний склад алкалоїдів рослин сімейства хвощові представлений в роботах К. Еугстера, Губанова І.А., Баньковський А.І. та ін Хвощ польовий містить у вегетативних органах невелика кількість (до 0,26%) алкалоїдів (нікотин, 3-метоксіпірідін і палюстрін), що є загальним для всіх видів хвощів [].

Також у траві хвоща польового виявлені гіркоти, дубильні речовини, смоли, 30-190мг% аскорбінової кислоти, 4.7мг% каротину, вітаміни групи В [].


1.1.5 Застосування роду хвоща в народній і официнальной медицині


Препарати хвоща польового (настої і відвари) призначають як сечогінний засіб при застійних явищах серцевого походження (пороки серця, серцева недостатність), а також при набряках, пов'язаних з легеневою недостатністю, при плевритах, з великою кількістю ексудату [].

При захворюваннях сечовивідних шляхів і сечового міхура (пієліти, цистити, уретрити), хвощ польовий використовується одночасно з толокнянкой або іншими рослинами, що володіють сечогінними і протизапальними властивостями []. При нефриті і пієлонефриті застосування препарату протипоказано, тому що вони можуть викликати подразнення нирок [].

Широко використовують траву хвоща польового при гемороїдальних, маткових, шлункових та інших кровотечах [].

Настій трави хвоща польового застосовується при водянці, туберкульозі легенів, кишкових інфекціях, кривавому проносі, для видалення каменів з нирок, при головних болях, аддісоновой хвороби, запалення сідничного нерва, при ревматизмі і подагрі.

З огляду на здатність хвоща прискорювати виведення свинцю з організму, його рекомендують при гострому і хронічному отруєнні свинцем.

Трава хвоща польового входить до складу протиастматичних мікстури по пропису Тарсакова, пасти''Фітолізин'', протидіабетичного збору''Арфазетин''[].

Застосовують хвощ і для догляду за шкірою обличчя. При жирній і пористій шкірі серветки, змочені настоєм, накладають на обличчя. Настій трави хвоща польового входить до складу косметичних кремів''СОТ''і''Оленка''.

Також хвощ застосовується як протисвербіжну для лікування алергічних дерматитів [].

У народній медицині застосовується не тільки хвощ польовий, а й інші види хвоща.

Хвощ зимуючий використовується як сечогінний, в'яжучий, кровоспинний, болезаспокійливий, седативну, потогінний засіб, застосовується при туберкульозі легень, при ревматизмі, головних болях, при жовтяниці, грижі, для лікування виразок, пухлин, запалень.

Хвощ лісовий теж використовується як в'яжучий і сечогінний засіб.


1.2 Нові протигрибкові препарати.

Інфекційні захворювання людини, що викликаються грибами, носять загальна назва мікози. Етіологія, патогенез і клінічна картина мікозів надзвичайно різноманітні, проте практично у всіх випадках цих захворювань в патологічний коло втягується шкіра.

Переважна більшість патогенних і умовно-патогенних грибів викликають захворювання тільки при наявності факторів, що знижують нормальну фізіологічну захисну функцію шкіри і порушують резистентність організму проти інфекції (особливо при імунодефіцитних станах). Кількість цих причин останнім часом різко зросла (несприятливі екологічні фактори, збільшення кількості хворих із злоякісними хворобами, особливо імунної системи, широке використання медичних препаратів володіють імуносупресивні властивості: цитостатиків, гормонів, антибіотиків і т.д.)

Аміказол (Amycozolum) - 5% мазь і 2-5% пудра. Активний отнашении дерматофітів і дрожеподобних грибів роду Candida.

Амфоглюкамін (Amphoglucaminum) - застосовується при локалізованих і глибоких мікозах.

Анкотіл (Ancotil) - випускається у вигляді таблеток (0,5) і розчину для інфузій. Показання: системний кандидоз, криптококоз і хромобластомікоз; аспергільоз.

Антіфунгол (Antifungol) - активна речовина клотримазол. Випускається у формі мазі, вагінального крему і вагінальних таблеток.

Батрафен (Batrafen) - випускається у формі крему, розчину і пудри для зовнішнього застосування, лаку для нігтів і вагінального крему.

Гіно-дактарин (Gino-dactarin) - вагінальні свічки по 0,1 г. Застосування: місцеве лікування вагінальних кандидозів та суперінфекції, викликаних грампозитивними мікроорганізмами.

Гіно-травоген (Gino-travogen) - кульки вагінальні по 0,6 г. Показання: Грибкові інфекції піхви.

Дактозін (Daktozin) - комбінований препарат, випускається у формі мазі. Оснавная показання-лікування «пелюшкового» кандидозу у дітей.

Дифлюкан (Diflucan) - желатинові капсули по 0.05; 0.1; 0.15; 0.2; і розчин для інфузій. Застосовується при лікуванні різних кандидозів і при профілактиці грибкових інфекцій у хворих із злоякісними захворюваннями, які схильні до таких інфекцій внаслідок хіміотерапії цитостатиками.

Ламізил (Lamisil) - протигрибковий препарат для перорального і місцевого застосування. Препарат має широкий спектр протигрибкової дії.

Лоцеріл (Loceril) - лак для нігтів-5% по 5 мл, упаковка містить також 60 тампонів, змочених 70% ізопропіловим спиртом у пакетиках з фольги, 10 лопаточок, 30 пил для нігтів. Крем 0,25% по 20 г у тубах. Застосування: мікози нігтів, стоп, гладкої шкіри.

Нізорал (Nizoral) - пігулки, крем, шампунь. Показання: грибкові інфекції шкіри, волосся, нігтів, статевих органів.

Орунгал (Orungal) - капсули по 0,1 г. Показання: захворювання шкіри і слизових оболонок, викликані чутливими до препарату грибами: кандидозний вульвовагініт, висівкоподібний лишай, мікози, спричинені дерматофітами.

Толміцен (Tolmicen) - 1% паста, 1% лосьйон, 0,5% порошок. Показання: мікози гладкої шкіри, складок, стоп, висівкоподібний лишай.

Еконазол (Econasol) - крем 1%, лосьйон 1% для зовнішнього застосування, аерозоль 1% для місцевого застосування. Володіє широким спектром дії.

Висновок

Рослини роду хвощ - широко поширене багаторічне дикоросла трав'яниста рослина, здавна використовуються як у народній так і в официнальной медицині.

Виділено і вивчено основні біологічно активні речовини трави хвоща польового: фенольні сполуки, органічні сполуки кремнію і сапоніни.

Широке використання засобів на основі біологічно-активних речовин хвоща в народній медицині спонукало нас вивчити його інші види активності, чому присвячена експериментальна частина роботи.

Глава II. Матеріали, методи та апаратура

1. Об'єктом вивчення служила надземна частина (трава) хвоща, зібрана в середині літа в 1996-1998 р. на території Томської області, сушіння сировини повітряно-тіньова.

  1. Як шукачів при отриманні екстрактів використовувалися: вода очищена, етанол 70%, 40%, 20%, хлороформ, ацетон.

  2. Для хроматографії застосовували папір хроматографічну Ленінградську марки «М» у системі ацетон: бутанол: вода (7:2:1).

  3. Апаратура:
  1. Спектрофотометр «Спектроскан»;

  2. Сушильну шафу;

  3. Термостат ТС-80 МУ42;

  4. Перколятора лабораторні.

5. Якісний аналіз змісту різних груп природних сполук.

5.1 Виявлення алкалоїдів.


Для виявлення алкалоїдів в досліджуваному рослинній сировині, готували кисле витяг: 5,0 г сировини заливали 50мл 1% розчином хлорноводородной кислоти і залишали на ніч. Витяг фільтрували та визначали в ньому алкалоїди за допомогою общеосадітельних реактивів:

  1. реактив Драгендорфа;

  2. реактив Фреде;

  3. реактив Вагнера;

  4. 1% розчин пікринової кислоти;

  5. 1% розчин кремнієво-вольфрамова кислота;

  6. 1% розчин фосфорно-вольфрамової кислоти;

  7. 1% розчин фосфорно-молібденової кислоти.


    1. Виявлення флавоноїдів.

Для якісного виявлення флавоноїдів проводили ціанідіновую пробу (проба Синоду).

1,0 г сировини заливають 10 мл 96% етанолу і нагрівалися на водяній бані до кипіння. Колба стріпувала кілька разів, закривалася пробкою і залишалася на 3-4 години. Спиртове витяг зливали і концентрували до 2-х мл, до нього додавали 5-7 крапель концентрованої хлорноводородной кислоти і 10 мг металевого цинку.


  1. Виявлення дубильних речовин

Приготування вилучення: 1 г подрібненої рослинної сировини заливали 100 мл води. Нагрівали на водяній бані 20-30 хв, проціджували через вату і отримане витяг використовували для проведення якісних реакцій.

  1. До 2-3 мл вилучення додавали кілька крапель розчину железоаммоніевих квасцов у разі гідролізуемих дубильних речовин з'являється чорно-синє забарвлення або осад, а конденсованих-чорно-зелене забарвлення або осад.

  2. До 1 мл вилучення додавали 2 мл розчину 10% оцтової кислоти і 1 мл розчину 10% середньої солі ацетату свинцю. При наявності конденсованих дубильних речовин фільтрат забарвиться в чорно-зелений колір від збільшення 5 крапель 1%-вих железоаммоніевих квасцов і 0,1 г ацетату свинцю.


  1. Виявлення сапонінів.

Приготування вилучення. Готували водний настій 1:10, нагріваючи подрібнена сировина на водяній бані протягом 10 хв. Настій після охолодження фільтрують і проводять з ним реакції.

Реакція піноутворення. Беруть дві пробірки, в одну доливають 5 мл 0,1 моль / л хлорноводородной кислоти, а в іншу-5мл 0,1 моль / л гідроксиду натрію. Потім в обидві пробірки додають по 2-3 краплі витягу або розчинів сапонінів і сильно струшували. При наявності в сировині тритерпенових сапонінів в обох пробірках утворюється стійка піна.


  1. Виявлення аліфатичних кислот.

  1. Щавлева кислота.

До 2 мл водного витягу додали 4 краплі розчину кальцію сульфату насиченого, в результаті має утворитися осад розчинний в соляній кислоті і не розчинний в оцтовій кислоті.

  1. Янтарна кислота.

До 1 мл вилучення додати кілька кристаликів резорцину, потім по стінці пробірки додати 0,5 мл концентрованої сірчаної кислоти, охолодити і додати 0,5 мл 10% розчину гідроксиду амонію, повинна з'явитися зелена флуоресценція.

  1. Лимонна кислота.

1 мл вилучення помістити в випарювальну чашку, додати кілька кристаликів ваніліну і випарувати насухо. До залишку додати 2-3 краплі конц. сірчаної кислоти, нагріти на водяній бані до появи фіолетового фарбування.

  1. Яблучна кислота.

До 2 мл екстракту додати 0,1 -нафтолу та 1каплю конц. сірчаної кислоти. Опустити пробірку на 1 / 2 хв у киплячу водяну баню повинна з'явитися яскраво-жовта з зеленим флуоресценція.

  1. Винна кислота.

4 краплі водного екстракту випарити насухо в порцеляновій чашці, додати 1 мл конц. сірчаної кислоти і декількома кристалами резорцину, нагріти на водяній бані до появи вишнево-червоного забарвлення.


  1. Виявлення полісахаридів.


До 8,0 сировини додали 260 мл води, потім збовтувати протягом 1 години, залишили на одну добу на холоду, злили з сировини вилучення та профільтрували його. У фільтраті осаджували водорозчинні полісахариди (попередньо упарив фільтрат до1 / 3) 2-х кратним обсягом 96% етанолу (фр.А).

Сировину, що залишилася обробили 100 мл киплячої водою очищеною з 0,4 мл конц. хлорноводородной кислотою і 30 хв витримали на киплячій водяній бані. Потім у фільтраті осаджували пектинові речовини 2-х кратним обсягом 96% етанолу (фр. Б).

Сировина обробляли 10% розчином гідроксиду натрію, залишали на добу, потім фільтрували і у фільтраті осаджували полісахариди 50% оцтовою кислотою (фр. В).

Кожну фракцію в окремо фільтрують на воронку Бюхнера. Опади сушили при температурі +90  С до постійної маси.

Далі проводили кислотний гідроліз. Точну наважку (0,1) кожної фракції поміщали в ампули, додавали в кожну по 5 мл 10% розчину сірчаної кислоти. Ампули запаювали і нагрівали при температурі +105  С протягом 3-х годин. Ампули охолоджували і вміст кількісно переносили в мірну колбу на 25 мл, обсяг доводілім до мітки водою (розчин А).

10 мл гідролізату (розчину А) розбавити 5 мл води і нейтралізували порошком карбонату барію по універсального індикаторного папері. Розчин фільтрували через паперовий фільтр, промивши водою. Отриманий фільтрат упаривали до обсягу 0,5 мл (розчин Б).

На хроматографічну папір Ленінградської фабрики марки «М» наносимо 0,02 мл упаренного фільтрату і стандартні зразки цукрів, хроматографіровалі висхідним методом у системі ацетон: бутанол: вода (7:2:1).

Висушену хроматограму обробляли анілінфітолатом і сушили в сушильній шафі при температурі +105  С до появи плям.

Нейтральні цукру:

    - Глюкоза Rf-0.15;

    - Галактоза Rf-0.12;

    - Арабіноза Rf-0.24;

    - Ксилоза Rf-0.27;

    - Рамноза Rf-0.4.

Приготування анілінфітолата:

0,93 сірчанокислого аніліну

1,66 фталевої кислоти

100 мл водонасиченого бутанолу.


  1. Виявлення кремнію

Для ідентифікації сполук кремнію проводити якісну реакцію утворення жовтого і синього кремнемолібденового комплексу з молибдатом амонію в кислому середовищі. В якості відновника використовували аскорбінову кислоту.

Для цього 1,0 г подрібненої сировини спалювали у фарфоровому тиглі на електричній плитці і прокаливали в муфельній печі. Потім золу обробляли 1% розчином соляної кислоти, фільтрували, осад на фільтрі промивали 1% розчином соляної кислоти і розчиняли в 5% розчині гідроксиду калію. З розчином силікату калію проводили реакцію з 10% підкисленим розчином молібдату амонію, приготованого таким чином: до 90 мл 11% розчину молібдату амонію додавали 10 мл 50% розчину сірчаної кислоти.

До 1 мл отриманого розчину силікату калію додавали 2 мл 10% підкисленого розчину молібдату амонію, має утворитися жовте забарвлення, при додаванні декількох кристаликів аскорбінової кислоти жовте забарвлення повинна переходити в інтенсивно синій колір.


  1. Виявлення ефірних масел.

Використовувався метод перегонки водяною парою. Наважку подрібненої сировини поміщають в шірокогорлую круглодонну колбу місткістю 700-800 мл, доливають 300 мл води і закривають гумовою пробкою зі зворотним холодильником. У пробці знизу зміцнюються металеві гачки, на які за допомогою тонкого дроту підвішують градуйований приймач так, щоб кінець холодильника знаходився точно над воронкоподібним розширенням приймача, не торкаючись його. Колбу з вмістом нагрівають до кипіння і слабо кип'ятять.

Пари води та ефірної олії конденсуються в холодильнику і рідина стікає в приймач. Масло відстоюють у градуйованому коліні приймача, а вода через менше коліно приймача випливає знову в колбу.


  1. Виявлення сесквітерпенових лактонов.

50 мл водного витягу (1:10) поміщали в ділильну воронку, додавали 10 мл хлороформу і обережно збовтують, потім хлороформно витяг зливали в колбу. До цього ж водному витяганню додавали свіжу порцію хлороформу, друге витяг об'єднували з першим. Потім хлороформ відганяли під тягою до отримання «смолки».

ІЧ-спектр знімали на спектрофотометрі «Specord UR» з призмами Li F і NaCl у таблетках KBr заввишки 1 мм при співвідношенні речовин, наповнювача 1:400 і в плівці.


  1. Кількісне визначення флавоноїдів

Близько 1,0 г сировини поміщали в колбу з притертою пробкою на 50 мл, заливали 20 мл 90% етанолу з вмістом 2%-тов концентрованої соляної кислоти, екстрагували із зворотним холодильником на киплячій водяній бані і декантировали в мірну колбу на 50 мл. Витяг повторювали ще двічі, заливаючи по 10 мл 90% підкисленого етанолу. Об'єднане витяг доводять до мітки 90% етанолом.

0,2 мл екстракту наносили на смужку хроматографічного паперу розміром 45  15 см і хроматографіровалі в системі 0,1 М соляної кислоти. Хроматограму висушували, в УФ-світлі відзначали плями флавоноїдів, вирізали і елюіровалі 96% етанолом три рази по 10, 5 і 5 мл в колбі спрітертой пробкою зі зворотним холодильником на водяній бані. Отримане витяг флавоноїдів зливали в мірну колбу на 25 мл, доводили до мітки 96% етанолом і знімали оптичну щільність елюятов за допомогою спектрофотометра з товщиною шару 1 см при довжині хвилі 353нм.

Суму флавоноїдів перераховували на кверцетин (Е = 387,5) поформуле:

C = Д * У1 * К * У2 * 100 / (Е * I * М * (100-В) * У3, де

Д-оптична щільність

У1-обсяг першого витягу, мл (50 мл)

У2-обсяг другого вилучення, мл (25мл)

У3-об'єм, який пішов на хроматографування, мл (0,2 мл)

Е-питомий показник поглинання

М-маса наважки, г

По-вологість сировини,%

  1. товщина шару, см

К-поправочний коефіцієнт на неповне елюювання з паперу (1,15)


  1. Кількісне визначення сполук кремнію

У попередньо прожарений фарфоровий тігльпомещалі близько 1,0 г сировини, спалювали і прокаливали в муфельній печі при температурі не вище 560-650  С до постійної маси (3-5 годин).

Після охолодження золу кількісно переносили в стакан ємністю 150 мл, додавали 50 мл 5% розчину соляної кислоти і нагрівали на киплячій водяній бані протягом 20 хв. Отриманий розчин фільтрують через рихлий беззольний фільтр, осад промивали 1% розчином соляної кислоти.

Фільтр з осадом переносили в конічну колбу на 150 мл, додавали 50 мл 5% розчину гідроксиду калію, потім прикривши годинниковим склом, нагрівали до кипіння і кмпятілі протягом 20 хв (колбу перед нагріванням зважили). Після охолодження вміст колби доводили до первісної маси 5% розчином гідроксиду калію.

1 мл отриманого фільтрату поміщали в мірну колбу на 25 мл, додавали 2 мл 5% розчину сірчаної кислоти, доводили водою до мітки. Через 15 хв визначали оптичну щільність за допомогою фотоелектроколориметри в кюветі з товщиною шару 10 мм при довжині хвилі 400 нм, використовуючи як розчин сравнеія фільтрат без додавання реактивів.


  1. Методика визначення екстрактивних речовин.


20 г сировини подрібнювали і просівали крізь сито з отворами діаметром 1 мм, поміщали в конічну колбу приплив розчинника до «дзеркала». Колбу закривали пробкою, зважували і залишали на 16 годин. Потім вміст ретельно збовтують і фільтрували через сухий фільтр у суху колбу. Фільтрат переносили у фарфорову чашку діаметром 7-9 см, попередньо висушену при t  +100  C до постійної маси і зважену на аналітичних вагах. Фільтрат випаровують на водяній бані насухо, і сушать при t  100-105  С протягом 3 годин, охолоджували в ексикаторі і зважували.


9. Визначення мікроелементного складу.


Для визначення мінерального складу трави хвоща використовувався рентгено-флуоресцентний метод.

У чашку (тигль) беруть наважку подрібненого продукту (проби зважують з похибкою не більше + 0,01 г), поміщають у сушильну шафу і висушують при температурі близько +105  С.

Вміст чаші змочують 2-3 мл 32% розчином азотної кислоти і нагрівають на водяній бані до припинення виділення пари. Обробку азотною кислотою повторюють ще двічі. Потім чашу поміщають на електроплитку і проводять обвуглювання до припинення виділення диму, потім чашу переносять в електропіч при температурі близько +250  С. Мінералізацію проводять, поступово підвищуючи температуру електропечі на +50  С через кожні 30 хв і, довівши її до температури +450  С, продовжують мінералізацію за цих умов до отримання золи. Чашу з золою виймають з електропечі, охолоджують до кімнатної температури і змочують золу 0,5-1,0 мл 32% розчином азотної кислоти. Потім кислоту насухо випарюють на електроплитці зі слабким нагріванням і знову поміщають чашу з пробою в електропіч при температурі, поступово доводячи температуру до 450  С і витримують 1 год. Мінералізацію вважають закінченою, коли зола стане білого або злегка пофарбованого кольору, без обвуглених частинок. При наявності обвуглених частинок повторюють обробку золи розчином азотної кислоти або водою.

У чашу з золою додають 10 мл 32% розчину азотної кислоти, нагрівають на електроплитці зі слабким нагріванням до появи запахів азоту. Вміст чаші фільтрують у склянку через фільтр "біла стрічка». Ретельно обполіскують чашу водою очищеною, фільтруючи змив чаші в той же стакан. У фільтрат, що містить важкі метали додають азотнокислий цирконію, нагрівають, фільтрують. Отриманий осад аналізують на приладі спектрометрі «Спектроскан».


  1. Дослідження антигрибковой активності

З метою вивчення антигрибкових властивостей БАР хвоща польового повітряно-суху сировину подрібнювали до розміру часток 2-5 мм, заливали до «дзеркала» екстрагентом (вода очищена, спирт етиловий 70%, бутанол, хлороформ, ефір) наполягали протягом 16 годин, фільтрували і отримані екстракти висушували в струмені повітря, нагрітого до +30  С.

Антигрибкові властивості отриманих екстрактів досліджували методом дворазових серійних розведень в рідкому середовищі Сабуро за методикою Вічкановой С.А.. Склад середовища Сабуро:

    - 10,0 пептона,

    - 40,0 мальтози,

    - Води очищеної до 1 л.

В якості тест-культури використовували штами Aspergillus niger 163/3685, Candida albicans 4337, Trichophiton rubrum ВКПГ248/700, T. Mentagrophytes var. Interdigitale ВКПГ 268, Microsporum canis ВКПГ 326/316, які були отримані у відділі мікології центрального шкірно-венерологічного інституту Міністерства охорони здоров'я Росії м. Москва.

Підготовка грибів-дерматофітів до досвіду, посів і їх облік проводили за методом Г.М. Першина. Для посіву використовували суспензії як правило, добової агарної культури дріжджів, культури цвілеподібного гриба 4-5 добові, інших дерматофітів 7-10 добові. Суспензії грибів готували у фізіологічному розчині по оптичному стандарту мутності.

Після додаткових розведень стандартного розчину мікробна навантаження патогенних грибів становила 1000 грибкових тіл в 1 мл середовища. Посіви інкубували в термостаті, дріжджі при 37  С, інші при 33  С.

Облік культури дріжджів проводили через 24 години, інші культури на 7-10 добу. Гранична доза препарату випробувана нами, відповідала 1000 мкг / мл. Повторність кожного досвіду 4-6 кратна. Контролем служили пробірки з живильним середовищем, засіяні аналогічним кількість тест-культури, а також пробірки з середовищем і препарати без культури (для перевірки каламутності та осадження препарату).

За критерій антигрибковой активності препарату брали фунгістатичний титр, який оцінювали в мікрограма на 1 мл (мкг / мл) живильної середовища. За фунгістатичний титр брали граничну концентрацію препарату в середовищі, при якій був відсутній видимий ріст культури в умовах оптимальної темпиратуре і заданої мікробного навантаження.


Глава III Перспективність використання роду хвоща для отримання лікарських препаратів


  1. Перспективність використання роду хвоща для отримання лікарських препаратів.

Як у нашій країні так і за кордоном відомо сечогінну дію хвоща польового. Нами було проведено вивчення різних літературних даних і в деяких з них зустрічається інформація про можливість використання хвоща польового в косметології та дерматології. У таблиці 1 представлені результати дослідження, в якій у порівнянні з хвощем польовим наведено ще 43 види лікарських рослин виростають на території Сибіру і використовуються в косметології та дерматології.


Таблиця 1


Лікарські рослини косм-е ср-во дерматит. алергії псоріаз / екзема антімікр ср-во
1. Аніс звичайний

/ +
2. Береза ​​бородавчаста + +

3. Бузина чорна + + / +
4. Волошка синя +


5. Верба біла +


6. Вероніка лікарська +
/ +
7. Тирлич хрестоподібна +
+ / +
8. Буркун лікарський + +

9. Материнка звичайна + +

10. Звіробій продірявлений. + + / +
11. Суниця лісова +


12. Календула лікарська + +

13. Калина звичайна +
+ / + +
14. Крушина ламка + +
+
15. Картопля + +

16. Полуниця дика +


17. Кропива звичайна + +

18. Лопух великий +
+ / + +
19. Цибуля ріпчаста + +
+
20. Малина звичайна + +
+
21. Морква звичайна +
/ + +
22. Медуниця лікарська + + + / +
23. Меліса лікарська + +
+
24. Ялівець обикн. + +
+
25. М'ята перцева +

+
26. Обліпиха крушиновидна + + + / +
27. Овес польовий +


28. Кульбаба ліків-й + +
+
29. Петрушка городня + + + / +
30. Подорожник великий + +
+
31. Полин гіркий + +
+
32. Родіола рожева + + + /
33. Шипшина коричний + +

34. Ромашка аптечна +


35. Ряска мала +
+ / +
36. Сосна звичайна + +

37. Деревій обикн. +

+
38. Чемериця Лобеля + +

39. Череда трироздільна + + + / +
40. Фіалка триколірна + + / +
41. Чебрець звичайний + +

42. Чистотіл великий +
+ / +
43. Шавлія лікарський + +
+
44. Хвощ польовий + + + / + +

З перерахованих 44 видів лікарських рослин 43 види використовуються в косметології. Застосування в дерматології вивчався за такою активності: антимікробний засіб, псоріаз, екзема, алергодерматози.

З таблиці 1 видно, що для лікування алергодерматозів застосовуються 28 видів з 44 (береза ​​бородавчаста, бузина чорна, буркун лікарський, материнка звичайна, звіробій продірявлений, календула лікарська, жостір ламкий, картопля, кропива звичайна, цибуля ріпчаста, малина звичайна, медунка лікарська, меліса лікарська, ялівець звичайний, обліпиха крушиновидна, кульбаба лікарський, петрушка городня, подорожник великий, полин гіркий, родіола рожева, лопух великий, сосна звичайна, чемериця Лобеля, низка трироздільна, фіалка триколірна, чебрець звичайний, шавлія лікарська, хвощ польовий).

Для лікування псоріазу використовують 11 видів (тирлич хрестоподібна, калина звичайна, лопух великий, медунка лікарська, обліпиха крушиновидна, петрушка городня, родіола рожева, ряска мала, низка трироздільна, чистотіл великий, хвощ польовий).

Для лікування екземи застосовують 11 видів (аніс звичайний, бузина чорна, вероніка лікарська, звіробій продірявлений, калина звичайна, лопух великий, морква звичайна, медунка лікарська, петрушка городня, фіалка триколірна, хвощ польовий).

Результати таблиці 1 показують, що деякі види мають антимікробну дію, точніше 20 видів (тирлич хрестоподібна, калина звичайна, крушина ламка, лопух великий, цибуля ріпчаста, малина звичайна, морква звичайна, меліса лікарська, ялівець звичайний, м'ята перцева, обліпиха крушиновидна, кульбаба лікарський, подорожник великий, полин гіркий, ряска мала, деревій звичайний, череда трироздільна, чистотіл великий, шавлія лікарська, хвощ польовий).

У результаті проведеного аналізу слід сказати, що за всіма зазначеними в таблиці критеріям активності, хвощ польовий є одним з найбільш перспективних.


  1. Біологічна активність і перспективність деяких таксонів для створення лікарських препаратів.

Проводячи вивчення хвоща польового, нам здалося цікавим визначити чи володіє він протигрибковою дією, так само нам хотілося дізнатися чи мають настільки ж дією інші види хвоща (хвощ зимуючий, хвощ болотний, хвощ лісовий, хвощ луговий) та визначити їх перспективність використання для створення лікарських препаратів .

Антифунгальних активність екстрактів визначали за максимальним розведення, в якому зростання грибів був менше, ніж у контролі. В якості препарату-порівняння використовували ністатин.

Результати досліджень представлені в таблицях 2-6.

Екстракт хвоща польового

Таблиця 2


Екстрагент

Trichophyton mentagroph. Trichophyt. rubrum Candida albicans Aspergill. niger Microsp. canis

Вода 100  С

1 / 15, 6 1 / 125 1 / 1000 1 / 500 1 / 31, 3
Етанол 40% 1 / 250 1 / 1000 1 / 1000 1 / 1000 1 / 1000
Етанол 70% 1 / 1000 1 / 7, 8 1 / 250 1 / 1000 1 / 1000
ХЛФ 1 / 1000 1 / 62, 5 1 / 125 1 / 1000 1 / 250
Ефір 1 / 1000 1 / 250 1 / 500 1 / 1000 1 / 1000

З таблиці 2 видно, що екстракт хвоща польового активний отнашении таких грибів як Trichophyton mentagrophytes, Trichophyton rubrum, Aspergillus niger, Microsporum canis, так само видно, що активність вище, коли в якості екстрагенту використовувалася вода.

Екстракт хвоща болотного

Таблиця 3


Екстрагент Trichophyton mentagroph. Trichophyt. Rubrum Candida albicans Asperg. niger Microsp. canis

Вода 100  С

1 / 1000 1 / 7, 8 1 / 1000 1 / 1000 1 / 1000
Етанол 40% 1 / 1000 1 / 1000 1 / 1000 1 / 1000 1 / 1000
Етанол 70% 1 / 1000 1 / 1000 1 / 1000 1 / 1000 1 / 1000
ХЛФ 1 / 1000 1 / 1000 1 / 1000 1 / 1000 1 / 1000
Ефір 1 / 1000 1 / 1000 1 / 1000 1 / 1000 1 / 1000

З таблиці 3 видно, що екстракт хвоща болотного проявляє

активність тільки відносно Trichophyton rubrum, причому активний тільки водний екстракт.

Екстракт хвоща зимующего

Таблиця 4


Екстрагент Trichophyton mentagroph. Trichophyt. rubrum Candida albicans Asperg. niger Microsp. canis

Вода 100  С

1 / 1000 1/7.8 1 / 1000 1 / 250 1 / 1000
Етанол 40% 1 / 1000 1 / 1000 1 / 1000 1 / 1000 1 / 1000
Етанол 70% 1 / 1000 1 / 1000 1 / 1000 1 / 1000 1 / 1000
ХЛФ 1 / 1000 1 / 1000 1 / 1000 1 / 1000 1 / 1000
Ефір 1 / 1000 1 / 1000 1 / 1000 1 / 1000 1 / 1000

Таблиця 4 показує, що хвощ зимуючий активний відносно двох видів грибів: Trichophyton rubrum і Aspergillus niger. Активність проявляє тільки водний екстракт.

Екстракт хвоща лугового

Таблиця 5


Екстрагент Trichophyton mentagroph. Trichophyt. rubrum Candida albicans Asperg. niger Microsp. Canis

Вода 100  С

1 / 1000 1 / 7, 8 1 / 1000 1 / 1000 1 / 1000
Етанол 40% 1 / 1000 1 / 1000 1 / 1000 1 / 1000 1 / 1000
Етанол 70% 1 / 1000 1 / 1000 1 / 1000 1 / 1000 1 / 1000
ХЛФ 1 / 1000 1 / 1000 1 / 1000 1 / 1000 1 / 1000
Ефір 1 / 1000 1 / 1000 1 / 1000 1 / 1000 1 / 1000

З таблиці 5 видно, що хвощ луговий володіє не високою антигрибковой активністю, ефективний лише водний екстракт щодо Trichophyton rubrum.

Екстракт хвоща лісового

Таблиця 6


Екстрагент Trichophyton mentagroph. Trichophyt. rubrum Candida albicans Asperg. niger Microsp. canis
Вода 1 / 1000 1 / 1000 1 / 250 1 / 1000 1 / 1000
Етанол 40% 1 / 1000 1 / 1000 1 / 1000 1 / 1000 1 / 1000
Етанол 70% 1 / 1000 1 / 1000 1 / 1000 1 / 1000 1 / 1000
ХЛФ 1 / 1000 1 / 1000 1 / 1000 1 / 1000 1 / 1000
Ефір 1 / 1000 1 / 1000 1 / 1000 1 / 1000 1 / 1000

За даними таблиці 5 можна зробити висновок, що хвощ лісовий має саму низьку антигрибковой активністю. Активність проявляється у водного витягу щодо Candida albicans.


Примітка: В умовах нашого досвіду за максимальну концентрацію бралося 1000 мкг / мл, так як згідно з літературними даними більш високі кількості не представляють інтересу в плані практичного використання рослин.


Як видно з даних таблиць, всі п'ять видів дослідженого сировини виявили фунгістатичну активність, але різною мірою. Найбільшу активність виявив екстракт хвоща польового. Він виявився активним у відношенні всіх п'яти використаних тест-культур. Екстракти хвощів болотного, зимующего і лучного виявилися активними тільки в отнашении Tr. rubrum, а екстракт хвоща лісового активний отнашении Asp. niger.

Фунгістатичну активність змінюється в залежності від вибору екстрагенту. З таблиць видно, що оптимальним екстрагентом є вода гаряча.


Глава IV Вивчення хімічного складу роду хвощ


  1. Якісний склад.
  1. Виявлення алкалоїдів

Проводили спомощью общеосадітельних реактивів. Результати представлені в таблицях 7 і 8.

По таблиці 7 видно, що всі види досліджуваних хвощів проявили однакову чутливість до реактиви Фреде, по відношенню до реактиви Драгендорфа найбільш чутливими виявилися хвощ лісовий і хвощ зимуючий, з реактивом Вагнера найбільш помітний результат вийшов у відношенні хвоща лугового.

Таблиця 7


р. Фред р. Драг-фа р. Вагнера
Хв. польовий + + + +
Хв. луговий + + + + +
Хв. лісової + + + + -
Хв. болотний + + + +
Хв. зимуючий + + + + +

З таблиці 8 видно, що найкращий результат з 1% розчином фосфорно-вольфрамової кислоти показали хвощі: луговий, польовий і болотний, з розчином фосфорно-молібденової кислоти - хвош лісової і хвощ зимуючий, з розчином кремнієво-вольфрамової кислоти-польовий, луговий і лісовий, з розчином пікринової кислоти результати реакцій були менш значні.

1%-е розчини кислот

Таблиця 8


ф-вольфрам. к-та ф-молібден. к-та кр.-вольфрам к-та пікрінов. к-та
Хв. польовий + + + + + + + -
Хв. луговий + + + + + + + +
Хв. лісової + + + + + + +
Хв. болотний + + + + + + -
Хв. зимуючий + + + + + -

Примітка: (-) - відсутність помутніння, осаду;

(+) - Слабка опалесценція;

(+ +) - Добре помітне помутніння;

(+ + +) - Наявність осаду.

Виходячи з отриманих результатів взаємодії кислого витяги з трави хвоща польового, лугового, лісового, зимующего і болотного з общеосадітельнимі реактивами на алкалоїди робимо висновок, що дана група речовин є у досліджуваних об'єктах.


  1. Ідентифікація флавоноїдів.

Проба Синоду.

При нагріванні суміші спиртового витягу трави хвоща польового з соляною кислотою і цинком з'являлося рожеве забарвлення. Таке ж фарбування спостерігалося і у випадку хвоща лісового, що говорить про наявність даної групи речовин у досліджуваних об'єктах. У випадку інших об'єктів (хвощів болотного, лучного, зимующего), видимих ​​змін забарвлення не відбувалося, можливо що в цих об'єктах флавоноїди перебувають у меншій кількості і необхідні більш чутливі методи для їх ідентифікації.


  1. Визначення дубильних речовин.

При взаємодії водних витягів всіх п'яти видів досліджуваних хвощів з залізоамонійний галуном утворилося чорно-зелене забарвлення, а в разі хвоща польового і лісового так само виділився осад чорно-зеленого кольору, що вказує на присутність групи конденсованих дубильних речовин. Цей результат підтверджується реакцією взаємодії витягів з 10% оцтовою кислотою і 10% сіллю ацетату свинцю (утворювалося чорно-зелене забарвлення).


  1. Виявлення сапонінів.


Проводили реакцію піноутворення водних витягів досліджуваних об'єктів з гідроксидом натрію і з соляною кислотою, після струшування утворювалася стійка піна в усіх випадках, що свідчить про наявність сапонінів тритерпенових природи.


  1. Виявлення аліфатичних кислот.

Дослідження аліфатичних кислот проводилося і раніше, але нам здалося цікавим перевірити наявність таких кислот як щавлева, бурштинова, яблучна і винна і підтвердити наявність вже відомої лимонної кислоти.

Досліджувався тільки водне витягання хвоща польового.

Результати представлені в таблиці 9.

Таблиця 9

Проведена реакція Результат
1.Реакции на щавлеву кислоту Осаду не утворилося
2.р-ція на янтарну кислоту Зелена флуоресценція не з'явилася
3.р-ція на лимонну кислоту при нагріванні з'явилося фіолетове забарвлення
4.р-ція на яблучну кислоту при нанесенні на хроматограмі. папір крайня зона після поділу флуоресціює жовто-зеленим кольором
5.р-ція на винну кислоту утворюється малинове забарвлення, що переходить при нагріванні в вишневе

Результати таблиці свідчать про наявність в траві хвоща польового лимонної, яблучної та винної кислот.


  1. Визначення полісахаридного комплексу.

Для розділення полісахаридного комплексу використовували метод висхідній паперової хроматографії в системі ацетон: бутанол: вода з використанням цукрів-свідків. Після обробки хроматограми анілінфітолатом і нагрівання в сушильній шафі при t  105  С виявилися плями з Rf = 0.27 і Rf = 0.24, що відповідає ксилози і арабінози.


  1. Визначення мінерального складу.

У результаті проведення рентгено-флуоресцентного аналізу на спектрометрі «Спектроскан» сухих залишків хвощів польового, лугового, лісового, зимующего і болотного були виявлені такі важкі метали: свинець, цинк, нікель, мідь, кобальт, залізо, марганець, хром.

  1. Культивують лактони

ІЧ спектри отриманої «смолки» в плівці давали смуги поглинання 1750см-1, що свідчить про -лактон природі виділеної суми речовин.

  1. Сполуки кремнію

Реакція утворення жовтого і синього кремнемолібденового комплексу з молибдатом амонію в кислому середовищі з використанням як відновника аскорбінової кислоти, підтвердила наявність у всіх досліджуваних видах з'єднань кремнію.

  1. Кількісне визначення.
  1. Визначення вмісту флавоноїдів

Для вивчення вмісту флавоноїдів використовували методику хроматоспектрофотометричним визначення. Дослідження показало, що найбільша кількість флавоноїдів міститься в хвощах польовому та болотному, в решті досліджуваних зразках кількість флавоноїдів трохи нижче.

Результати представлені в таблиці 10

Таблиця 10

хвощ польовий хвощ лісовий хвощ зимуючий хвощ луговий хвощ болотний
3,37% 1,09% 2,83% 3,2% 3,78%

  1. Визначення вмісту кремнію

Визначення проводили використовуючи метод фотоколориметрії, результати дослідження показали, що вміст сполук кремнію в траві хвоща польового склало 1,11%, у траві хвоща лісового-1,12%, у траві хвоща зимующего 2,12%, у траві лугового і болотного відповідно 1 , 67% і 2,08%.


4.2.3 Вивчення змісту екстрактивних речовин в траві хвоща польового.

Визначення вмісту екстрактивних речовин проводили паралельно з дослідженням щодо вибору екстрагенту і часу екстрагування. Результати дослідження представлені в таблицях.

З представлених даних в таблиці 11 видно, що максимальна кількість екстрактивних речовин в траві хвоща польового витягується водою очищеною, як холодної так і гарячої.


Зміст екстрактивних речовин в траві хвоща польового в залежності від екстрагенту. (1)

Таблиця 11

Екстрагент Вихід, г %
Етанол 40% 5,78 28,92
Етанол 70% 5,8 29,0
Етанол 96% 1,8 9,0

Вода 20  С

6,88 34,4

Вода 90-100  С

7,31 36,55
Хлороформ 1,4 7,0
Ацетон 0,15 2,14

Дослідження часу настоювання на вихід екстрактивних речовин показало, що максимальний вихід спостерігається після 16-ти годин настоювання і в наступні години змінюється незначно і перебуває в межах від 34 до 34,45.

Отримані результати наведені в таблиці 12, в якості екстрагенту використовувалася вода гаряча.


Вплив часу настоювання на вихід екстрактивних речовин хвоща польового.

Таблиця 12

Час Кекст-ції, годину Вихід, г Вихід,%
1. 12 5,83 29,15
2. 14 6,22 31,1
3. 16 6,86 34,3
4. 18 6,8 34
5. 20 6,89 34,45

4.2.4 Виявлення ефірних масел.


Проводили по фармакопейної методикою. У результаті проведеного дослідження ефірна олія не було виявлено, тому кількісне визначення не проводили.


4.2.5 Визначення полісахаридного комплексу.


Після фільтрування опадів на воронці Бюхнера, фільтри з опадами висушували і зважували на аналітичних вагах (перед фільтруванням чисті фільтри також зважувалися на аналітичних терезах). Результати представлені в таблиці 13.


Зміст полісахаридних фракцій у траві хвоща польового.

Таблиця 13

Фракція Маса фільтру, м Маса фільтра з осадом, г Маса осаду, у м у%
1. Фр. А 0,2268 0,4564 0,2296 2,1
2. Фр. Б 0,22537 0,29861 0,07324 0,62
3. Фр. У 0,22076 0,4009 0,18014 1,35
Маса загальна
0,48298 4,07

За результатами таблиці 12 випливає, що вміст комплексу полісахаридів в траві хвоща польового становить близько 4,07%. Значну частину з цього комплексу займають водорозчинні полісахариди, які становлять 2,1% (фр.А), трохи менше міститься полісахаридів геміцеллюлези і становить 1,35% (фр. В), пектинові речовини становлять лише 0,62%.


  1. Вміст мікроелементів.

Результати таблиці 14 показують, що в траві хвоща польового найбільше міститься заліза і марганцю, в траві хвоща болотного, лучного і зимующего більше заліза і цинку, в траві хвоща лісового більше марганцю і цинку. Вміст у зразках свинцю, нікелю, міді, кобальту, марганцю (за винятком польового), хрому відносно не висока.

Таблиця 14

Хвощі Pb Zn Ni Cu Co Fe Mn Cr
Польовий 0,82 11,4 7,44 0,34 1,11 16,5 30,39 1,11
Луговий 1,15 10,2 2,42 0,67 1,43 8,82 4,33 1,43
Зимуючий 2,78 26,54 4,67 2,45 2,78 52,8 7,51 0,83
Лісовий 1,72 17,5 2,80 1,33 1,72 13,73 30,1 0,52
Болотний 1,52 13,6 1,99 0,59 1,52 56,94 3,21 1,52

Зміст елементів розраховано в міліграмах на кілограм сухого залишку.


  1. Товарознавчі показники.


Проведено товарознавчий аналіз трави хвоща польового зібраного на території Томської області в 1996-1998 рр.. Аналіз проводився відповідно до фармакопейної статті на хвощ польовий (ГФ XI том 2 ст. 50). Результати аналізу наведені в таблиці 15.


Результати товарознавчого аналізу

Таблиця 15


Наимен-е показників якості за НД Вимоги до якості за НД Результати аналізу

Опис Стебла до 30 см, жорсткі, членисті. Гілки не розгалужені, косо вгору направ-е, піхви циліндр-ие. Колір сіро-зелений, запах слабкий, смак кислуватий. Відповідає

Показники

1. Вологість не більше 13% 7,24%
2. Зола загальна не більше 24% 18,37%
3. Зола нерозч-а в 10% HCL не більше 12% 8,45%
4. Др. частин раст-й не більше 1% 0,1%
5. Др. Видів хвощів не більше 4% немає
6. Орг. домішки не більше 1% 0,15%
7. Мінер. домішки не більше 0,5% немає

Висновок: сировина відповідає вимогам нормативної документації.

Глава V Розробка технологічного процесу одержання сухого екстракту


Характеристика готового продукту:

Екстракт хвоща польового сухий-фармацевтичний препарат застосовується як лікарський засіб.

Екстракт хвоща польового є комплексом водорозчинних речовин, що складається з сапонінів, полісахаридів, дубильних речовин, аліфатичних кислот та інших сполук трави хвоща польового.


Опис:

Аморфний порошок коричневого кольору, гігроскопічний. У герметично закритій тарі зберігає сипучість, при доступі вологи комкуется.

Своєрідний смак і запах.


Розчинність: розчинний у воді, спирті.


Справжність.

Реакція на кремній. Освіта жовтого і синього кремнемолібденового комплексу з молибдатом амонію в кислому середовищі. В якості відновника використовували аскорбінову кислоту.

До сухого екстракту додавали 2% розчин хлористоводневої кислоти, додавали 2 мл 10%-го підкисленого розчину молібдату амонію, спостерігали жовте забарвлення, при додаванні декількох кристаликів аскорбінової кислоти розчин ставав інтенсивно-синього кольору.


Реакція на сапоніни тритерпенових природи.

До 0,1 г екстракту додати 2 мл води і додати кілька крапель основного ацетату свинцю. З'являється білий осад, що підтверджує наявність сапонінів тритерпенових природи.

Реакція піноутворення (див вище).


Зберігання:

У сухому захищеному від світла місці при темпиратуре не вище 20  С.


Технологічна схема виробництва.


ТП 1. Отримання початкового вилучення.

  1. Подрібнення трави хвоща польового.

1.2Удаленіе пилу.

  1. Екстракція сировини.

  1. Відстоювання вилучення.

  1. Фільтрація вилучення.

ТП 2. Отримання готового продукту.

  1. Упарювання вилучення.

  1. Сушіння вилучення.

  1. Подрібнення готового продукту.

  1. Фасування та оформлення готової продукції.


Проміжні продукти. Сировина. Матеріали.

Основною сировиною для отримання екстракту хвоща польового сухого на стадії ТП-1 є подрібнення до частинок розміром 7мм трави хвоща польового, звільнення від пилу (часток менше 0,25 мм). Вологість не більше 13%, золи загальної не більше 24%.

В якості екстрагентів використовувалася вода очищена при температурі 100  С в момент подачі на сировину.

На стадії ТП-2. Отримуємо готовий продукт-комплекс водорозчинних речовин, які складаються з: сапонінів, дубильних речовин, полісахаридів, аліфатичних кислот та інших сполук.


Вимоги до якості застосовуваних у виробництві сировини і матеріалів.

Таблиця 16
наимен-е сировини і матеріалів № ГОСТ або ТУ Кваліфікація Сорт або артикул % Сод-гол. речовини
1. Трава хвоща польового ФС № 50 %
2. Вода очищена ФС № 42 ГФ Xl 100%

Специфікація обладнання, контрольно-аналітичних і регулюючих приладів.

Таблиця 17
наимен-е обладнання. вимірюв. і регул. Приладів кол-во Матеріал робочої частини обладнання Характеристика обладнання контрольно-вимірюв. приладів
1 Перколятора лабораторний 4 скло ємністю 1 л з краном

2 Подрібнювач типу траворезкі 1 нерж. сталь
3 Сито 7 мм 1 кол. метал діаметр отворів 7 мм
4 Сито 0,25 мм 1 кол. метал діаметр отворів 0,25 мм
5 Мірний циліндр 1 скло ємність 0,5 л
6 Ваги тарірние 1 метал граничне навантаження 1кг
7 Колба збірник 4 скло ємність 300мл
9 Сушильна шафа 1 нерж. сталь
10 Ступка з товкачиком 1 фарфор
11 Ваги аналітичні ВЛР 200 1 нерж. сталь граничне навантаження 200,0
12 Воронка скляна 1 стели
13 Випарювальна чашка 1 фарфор

Виклад технологічного процесу.


ТП-1 Отримання початкового вилучення.

  1. Подрібнення трави хвоща польового.

  2. Видалення пилу.

60,0 г подрібненої трави за допомогою сита зі стороною отвори 0,25 мм звільняють від пилу (часток менше 0,25 мм).

  1. Екстракція сировини.

Екстракцію ведуть методом ремацераціі. 20,0 подрібненої і звільненій від пилу трави хвоща польового поміщають в перколятора і заливаємо 260 мл очищеної води t  = 80-100  С. Екстрагент подають знизу безперервним потоком під тиском до «дзеркала». Потім залишають на 8 годин для настоювання, після наполягання з перколятора зливають 88 мл вилучення.

У перколятора знову подають знизу безперервним потоком під тиском киплячу очищену воду 92 мл і залишають на 8 годин. Після 8 годин з перколятора зливають 96 млізвлеченія. Сировина з перколятора вивантажують і віджимають на пресі. Отжим становить 20 мл.

Витяг і віджиму об'єднують і отримують 204мл, що відстоюють при температурі 3-5  С і проціджують через три шари марлі.

Примітка: для імітації «парової сорочки» перколятора покривали тканиною (для зменшення тепловіддачі).

Технологічний процес повторювали 4 рази


Кількість витрачених та отриманих речовин на стадії ТП-1.

Таблиця 18


наимен-е проміжних продуктів, відходів сировини сод-е Оснавная речовин

додано (отримано) за масою за обсягом



Завантажено
1 Трава хвоща польового
20,0
2 Вода очищена 100% 352,0 352,0

Отримано
3 Витяги

204,0

Відходи
4 Шрот
27,12

ТП-2 Отримання готового продукту.


  1. Упарювання ізвлеченіяі сушка

Отримане витяг сушать на електровентилятор «Орбіта» при температурі 30-40  С (метод конвективного сушіння) до вологості не більше10%.


2.2 Подрібнення готового продукту


Готовий продукт подрібнюють у ступці і зважують.

Готовий продукт являє собою аморфний порошок коричневого кольору, своєрідного смаку і запаху, розчинний у воді.

Гігроскопічний, при доступі вологи комкуется.


  1. Розфасовка та оформлення готового продукту

Готовий продукт-екстракт хвоща польового сухий поміщають в шірокогорлую флакон з навинчивающейся кришкою. Наклеюють етикетку.

Контроль виробництва.


Аналіз вихідної сировини.

Реакція на кремній. Освіта жовтого і синього кремнемолібденового комплексу з молибдатом амонію в кислому середовищі. В якості відновника використовували аскорбінову кислоту.

До сухого екстракту додавали 2% розчин хлористоводневої кислоти, додавали 2 мл 10%-го підкисленого розчину молібдату амонію, спостерігали жовте забарвлення, при додаванні декількох кристаликів аскорбінової кислоти розчин ставав інтенсивно-синього кольору.


Реакція на сапоніни тритерпенових природи.

До 0,1 г екстракту додати 2 мл води і додати кілька крапель основного ацетату свинцю. З'являється білий осад, що підтверджує наявність сапонінів тритерпенових природи.

Реакція піноутворення


Аналіз готового продукту.

Втрата в масі при висушуванні екстракту повинна бути не більше 5%, золи загальної не більше 10%.

Втрата в масі при висушуванні склала 3,75%, зола загальна-7,2%


Зміст вологи в препараті і золи загальної визначають за методикою ГФ XI видання.

Якісні реакції на кремній і сапоніни вказані вище.


Техніка безпеки.


При організації виробництва екстракту хвоща польового сухого слід керуватися правилами викладеними в книгах «Техніка безпеки і виробнича санітарія в хімічній промисловості» видавництво «Хімія» М., 1965 та «Охорона праці та техніки безпеки в хімічній промисловості», видавництво «Хімія», М. , 1974.

Для виключення пожеж і ліквідації їх наслідків повинен бути передбачений пожежний водопровід. У виробничих та підсобних приміщеннях необхідно встановити пінні вогнегасники, ящик з піском, відра і інші засоби вогнегасіння

відповідно до норм Н-102-54 на випадок пожежі повинен бути складений план евакуації.

Усе електрообладнання повинно бути заземлено, а його тип повинен відповідати класифікації приміщення за небезпекою ураження електричним струмом. Для ламп місцевого освітлення необхідно використовувати напругу 36В в сухих і не вище 12В в сирих приміщеннях.

До обслуговування технологічного устаткування повинні допускатися особи, які пройшли інструктаж з техніки безпеки, а також що пройшли перевірку знань кваліфікаційною комісією.


Перелік виробничих інструкцій.


Правильне ведення технологічного процесу, дотримання правил, з охорони праці та техніки безпеки регламентується наступними інструкціями:

1.Технологіческіе інструкції.

  1. Технологічна інструкція з подрібнення рослинної сировини.

  2. Технологічна інструкція з виробництва екстракту хвоща польового сухого.

  3. Технологічна інструкція по фасуванню, упаковці та оформлення готової продукції.


  1. Інструкції з техніки безпеки, пожежної безпеки та виробничої санітарії.

  1. Інструкція про заходи пожежної безпеки у виробничих приміщеннях.

  2. Інструкція з електробезпеки.

  3. Інструкція по захисту від статичної електрики.

  4. Інструкція санітарного контролю та утримання виробничих і побутових приміщень.


  1. Інструкції з експлуатації приладів.


Техніко-економічні нормативи.


Рослинною сировиною для виробництва екстракту хвоща польового сухого є трава хвоща польового (ФС № 50 ГФ ХI вид т. 2)

В якості сировини для отримання проміжних продуктів використовують воду очищену (ФС № 42 2619-97, ГФ ХI вид).


ВИСНОВКИ


  1. Проведено аналіз 44 видів лікарських рослин, які ростуть на території Сибіру і виявлено перспективність хвоща польового для застосування в дерматокосметології (за літературними даними).

  2. Проведено мікробіологічний скринінг рослин роду хвощ на біологічну активність (хвощ польовий, хвощ луговий, хвощ зимуючий, хвощ болотний і хвощ лісовий). При цьому встановлено, що з обраних видів найкращою протигрибкову активність щодо збудників дерматофітів має хвощ польовий.

  3. Проведено порівняльне вивчення складу БАР у сировині хвоща польового, лугового, лісового, зимующего і болотного та виявлено: аліфатичні кислоти (лимонна, винна, яблучна), полісахариди (арабіноза та ксилоза), флавоноїди, Культивують лактони, алкалоїди, таніди, сапоніни і мікроелементи ( цинк, хром, марганець, залізо, свинець, мідь, кобальт). З них вперше ідентифіковані цукру (арабіноза та ксилоза), мікроелементи, аліфатичні кислоти (яблучна і винна), Культивують лактони.

  4. Встановлено кількісний вміст флавоноїдів, полісахаридів, сполук кремнію, мікроелементів.

  5. Розроблено технологічну схему одержання сухого екстракту хвоща польового.


ЛІТЕРАТУРНИЙ ОГЛЯД


  1. Атлас лікарських рослин СРСР .- М.: Госмедиздат, 1962-704 с.

  2. Атлас ареалів і ресурсів лікарських рослин СССР.-М.: Госмедиздат. 1962.-704 с.

  3. Ботаніко-фармацевтичний словник / За ред. К.Ф. Блінової і Г.П. Яковлєва-М.: Вища школа, 1990-272 с.

  4. Вічканова С.А., Рубінчик М.А. Методика дослідження антимікробних препаратів і вищих рослин-Київ, 1967-138 с.

  5. Воронков М.Г., Кузнєцов І.Г. Кремній в живій природі-Новосибірськ: наука. 1984 - 157 с.

  6. Воронков М.Г., Зельчан Г.М. Кремній і жізнь.-Рига: Знання. 1978.-588 с.

  7. Гаммерман А.Ф. Курс фармакогнозіі.-Л.: Медицина 1967.-690 с.

  8. Гринкевич Н.І., Сафроніч Л.А. Хімічний аналіз лікарських рослин

  9. Гришина Л.Л., Самойлова Є.М. Облік біомаси та хімічний аналіз рослин. М.: 1971-118 с.

  10. Губанов І.А. лікарська флора Далекого Сходу-М.: Медицина 328с.

  11. Гаммерман А.Ф., Грім І.І. Дікорастушіе лікарські рослини СССР.-М.: Медицина, 1976-286 с.

  12. Державна фармакопея СРСР. Дев'яте ізданіе.-М.: Медицина, 1961.-911с.

  13. Державна фармакопея. Одинадцяте видання .- М.: Медіціна.1987.-Т.1.-336с.

  14. Державна фармакопея. Одинадцяте видання. - М.: Медіціна.1987.-Т.2.-400с.

  15. Дмитрук С.І. Дисертаційна робота

  16. Долгов Б.М. Хімія кремнійорганічних сполук. - Л.: 1988 184 с.

  17. Задорожний А.М., Соколов С.Я. Довідник по лікарських рослинах. - М.: Лісова промисловість ,1988-415 с.

  18. Звєрєва О. В. Дія польового хвоща та ниркового чаю на виділення свинцю і ртуті в кроликів / / Праці Хабаровського медичного інституту-Сб.18.-1959.-103-109 с.

  19. Ковальова Н.Г. Лікування растеніямі.-М.: 1971.-351с

  20. Корсун В.Ф., Сіткевіч А.Є., Єфімов В.В. Лікування препаратами рослинного рпроісхожденія .- Білорусь, Мінськ-1995, 383с.

  21. Лікарські рослини середньої смуги європейської частини України.-М.: Планета, 1992.-187 с.

  22. Машковский М.Д. Лікарські засоби. М. 1985-Т.1.-624 с.

  23. Михайлов В. Сучасні фітотерапевтичні препарати, (довідник). М., Стар Ко ,1997-144с.

  24. Муравйов Д.А. Фармакогнозія. М., Медицина ,1991-560 с.

  25. Попов О.П. лікарські рослини в народній медіціне.-Київ, 1967.-315с.

  26. Родіонов А.Н. Грибкові заболеваніякожі.-С.-П.: Пітер 1998.-281с.

  27. Скляревський Л.М., Губанов І.А. Лікарські рослини в биту.-М.: Росагропроміздат.-1989-272 с.

  28. Соколов С.Я., Замотаєв І.П. Довідник по лікарських рослинах. М.: Медицина. 1998 - 463с.

  29. Решетнікова М.Д. Хіміко-токсикологічне дослідження хвоща польового. Дисертаційна робота, Перм 1993 - 117с.

  30. Шретер А.І. Лікарська флора Далекого Сходу. М.: Медіціна.1977-328с.

Додати в блог або на сайт

Цей текст може містити помилки.

Медицина | Реферат
145.1кб. | скачати


Схожі роботи:
Хіміко-фармакологічне дослідження лопуха повстяного
Розробка плану спрямованого хіміко токсикологічного дослідження на трифтазин група фенотіазинів
Хвощ польовий
Хамеріон вузьколистий хвилівник звичайний хвощ польовий 2
Хамеріон вузьколистий хвилівник звичайний хвощ польовий
Лікарські рослини та їх застосування валеріана лікарська чистотіл звичайний хвощ польовий
Категорія роду у ім н сцществітельних
Останній з роду Рішельє
Хіміко-термічна обробка
© Усі права захищені
написати до нас