Стан глутатіонової ланки антиоксидантної системи крові практ

Клітини ссавців досить стійкі до впливу , Завдяки наявності Глутатіонпероксидазну і каталазної ферментативних систем, перша з яких ефективно працює при малих концентраціях перекису, друга - при високих.
Гіпогалоіди. Утворюються головним чином в результаті ферментативної реакції перекису водню з галідамі, що каталізується мієлопероксидази, пероксидазою еозинофілів, які розрізняються за структурою і субстратної специфічності. Основним продуктом мієлопероксидази є , Пероксидаза еозинофілів каталізує утворення і . Гіпогалоіди інактивують -Антитрипсин, переводять коллагеназу в активну форму Б, окислюють лейкотрієни, імуноглобуліни, альбумін, церулоплазмін, трансферин. Викликають структурну модифікацію і інактивацію , -SOD можуть як індукувати, так і пригнічувати процеси ПОЛ.
Гідроксильний радикал є найбільш реакційноздатними АФК, що утворюється в біологічних системах, він може розривати будь-яку вуглецеву зв'язок [Андрєєв, 1999]. Освіта ОН-радикала показано в реакціях окислення арахідонової кислоти, в реакції Габера-Вейса, при мікросамальном окисленні, в реакціях з флавінових ферментами і убіхінон, але основним джерелом OH-радикалів у біологічних системах служить реакція Фентона за участю металів змінної валентності, головним чином :

Зворотне відновлення можливо в реакції з :

а також при взаємодії з аскорбіновою кислотою, глутатіоном, цистеїном та іншими окиснюються сполуками [Зенков, Меньщикова, 2004].
Синглетний кисень. У кисні внутрішньомолекулярної відбувається перебудова електронів і виникає більш високий енергетичний рівень [Владимиров, 1998]. Джерелом синглетного кисню є реакції фотосенсібілізірованного окислення біологічних субстратів, при не фотохімічних реакції не ферментативна дисмутації супероксидних радикалів, що протікають з утворенням перекису водню. має високу хімічну активність, особливо по відношенню до молекул, що містить ділянки підвищеної електронної щільності.
Алкоксильні і перекисні радикали. При розвитку радикальних окислювальних процесів взаємодія органічних радикалів молекулярним киснем призводять до утворення перекисних радикалів , Які з алкоксильні радикалами можуть утворюватися в реакціях розкладання перекису у присутності іонів металів змінної валентності. За фізико-хімічними властивостями алкоксильні і перекисні радикали це дуже гетерогенний клас сполук, що включає високореакційні OH-радикал і мало активні радикали фенольних антиоксидантів. Взаємодія і з вуглеводнями, що призводять до утворення і - Це найбільш повільна стадія розвитку радикальних окислювальних процесів [Владимиров, 1998].
Біологічний ефект і реалізується через шкідливу дію на білки, ферменти, нуклеїнові кислоти, через продукти ПОЛ - органічні перекиси, альдегіди, кетони, епоксиди, які високотоксични для клітин. Інгібітори - аскорбінова кислота, сечова кислота, убіхінон, селен, -Токоферол [Андрєєв, 1999].
Всі форми АФК мають високу цитотоксичність для клітин і клітинних утворень. Можна виділити чотири мішені окисної цитотоксичної атаки АФК: індукція процесів ПОЛ у біологічних мембранах, пошкодження мембраною білків, інактивація ферментів і пошкодження ДНК клітин.
Амінокислоти, з яких складаються білки, схильні окислювальному дії АФК, що призводить до трьох варіантів зміни фізико-хімічних властивостей білків: фрагментації, агрегації та підвищенню чутливості до протеолізу. У першу чергу впливу кисневих радикалів піддаються залишки проліну гістидину та аргініну. Окислювальне пошкодження призводить до денатурації і агрегації білків (кришталика ока). Агрегація білків пов'язана зі здатністю АФК утворювати міжмолекулярні зшивання. У результаті денатурації білків порушується їх конформація, і вони стають більш уразливими до дії протеолітичних ферментів [Зенков, Меньщикова, 2004].
Окисленню АФК в першу чергу піддаються SН-містять групи білків; їх окислення призводить до зниження вмісту відновлених і підвищенню рівня окислених SН-груп, тому співвідношення окислених і відновлених SН-груп білків може бути використано в якості показника розвитку окисного стресу. Найбільш схильні до окислювальному стресу Са ^{2 +-АТФаза,} її пошкодження призводить до порушення транспорту кальцію через мембрану [Владимиров, 1999].
Карбонільні групи і гідропероксиду, які утворюються при окисленні білків, також є показником вільнорадикального окислення.
Окислення ліпідних молекул призводить до необоротної зміни мембранних структур, порушення їх проникність для іонів. Найбільш схильні до перекисного окислення входять до складу мембран ненасичені жирні кислоти: лінолева, арахідонова, докозагексаєнова [Козлов, 2006]. Одним з найважливіших наслідків надмірної освіти АФК є надлишкова і неконтрольована в цих умовах активація процесів ПОЛ. Процеси ПОЛ можна умовно поділити на три послідовних етапи, або фази розвитку: процеси зародження ланцюгів, процеси розвитку ланцюгових реакцій і обрив ланцюгів. На стадії зародження ланцюгів під дією вільних радикалів кисню, іонізуючої радіації, ультрафіолетового опромінення та низки хімічних речовин, що відносяться до прооксидантів, відбувається утворення органічних радикалів (R).



На наступній стадії радикал швидко взаємодіє з киснем, який виступає в якості акцептора електронів. У результаті відбувається утворення пероксирадикал (R О _2), який атакує ненасичені ліпіди. Виникнення в результаті цієї реакції органічних перекисів і нового радикала (R) сприяє продовженню окислювальних реакцій, які купують ланцюговий характер:
R + О ₂ Rо ₂

Органічні перекису (R ООН) включаються в процес генерації радикалів, у присутності металів змінної валентності (міді, кобальту, марганцю, заліза) відбувається утворення реакційного алкоксильні радикала:

Частина утворюються органічних радикалів взаємодіє один з одним, при цьому відбувається утворення неактивних молекул, що обриває хід реакцій вільнорадикального окислення. Гідропероксиду ліпідів здатні піддаватися нерадикальних окислювальним перетворенням, що призводить до утворення первинних (дієнові кон'югати, діальдегіду), проміжних (основи Шиффа) і кінцевих продуктів ПОЛ, а також спиртів, кетонів та альдегідів. Обрив ланцюгових реакцій перекисного окислення можливий при взаємодії радикалів із спеціалізованими ферментними системами, а також з низкою низькомолекулярних речовин, сукупно формують біохімічний компонент антиоксидантної системи організму [Меньщикова з співавт., 2006].
Одним з кінцевих продуктів ПОЛ є насичені низькомолекулярні вуглеводні (етан, гексан, пентан), які в нормальних умовах переходять в газоподібний стан.
Ідентифіковано понад 20 типів окисних пошкоджень молекул нуклеїнових кислот: різні пошкодження підстав, виникнення одно-та двох цепочечних розривів, зшивок і хромосомних аберацій. Пряма дія і на ДНК не викликає ушкодження підстав чи освіти зшивок між основами. Основним пошкоджуючим агентом виступає OH-радикал, який ефективно взаємодіє з дезоксирибози, пуринових і піримідинових основ. Синглетний кисень більш специфічно, ніж , Взаємодіє з гуаніном. Перексінітріт викликає нітрозілірованіе і дезамінування аміногруп в підставах ДНК, при цьому 8-нітрогуанін є індикатором ушкоджуючої дії пероксинітриту. В умовах окисного стресу в найбільшою мірою пошкоджується ДНК мітохондрій, що пов'язано з низькою активністю систем репарації і низьким зміст гістонових білків, які надають захисну дію [Зенков, Меншикова, Шергін, 1993].
1.3. Характеристика антиоксидантної системи
У процесі еволюції в клітинах для захисту від АФК виробилися спеціалізовані системи: ферментативна антиоксидантна система (АОС) і неферментативного АОС. Як неферментативної АОС можуть виступати: жиророзчинні антиоксиданти (вітамін Е, β-каротин, убіхінон) [Абрамова, 2004], водорозчинні (аскорбат, рутин, глутатіон). Гідрофобні антиоксиданти локалізовані в біомембранах, гідрофільні - в цитозолі клітини.
Ферментативна АОС включає: супероксиддисмутазу (SОD), каталізують реакцію дисмутації О ₂ ˉ в Н ₂ О _2, каталазу (CАТ), що розкладає Н ₂ О _2, глутатіонпероксидази (GPO), глутатіон-S-трансферазу (GSТ), глюкозо-6- фосфатдегідрогенази (G6FD), глутатіонредуктази (GR), глутатіонзалежної ферменти видаляють органічні перекиси [Бріскін, Рибаков 2000].
Супероксиддисмутаза має кілька ізоферментних форм, що розрізняються будовою активного центру. Мідь-цинкова форма чутлива до ціаніди і міститься в цитозолі та межмембранное просторі мітохондрій клітин еукаріотів, марганецьвмісних форма локалізована в мітохондріях клітин еукаріот, а так само бактерій, екстрацелюлярний високомолекулярна форма SOD (Е-SOD) [Біленко, 1999]. Е-SOD володіє високою спорідненістю до гепарину і добре зв'язується з гепарінсульфатом глікокаліксу ендотеліоцитів. Нативна форма SOD витримує нагрівання при 100 ^є З протягом однієї хвилини, стійкий до коливань значень pН у широкому діапазоні. SOD істотно прискорює реакцію дисмутації О ₂ ˉ, обриваючи тим самим небезпечну ланцюг вільнорадикальних перетворень кисню:
О ₂ ˉ + О ₂ ˉ → H ₂ O ₂ + O ₂
HO + ^HO. → H ₂ O ₂ + O ₂
^HO. ₂ + Н ⁺ → H ₂ O ₂ + O ₂
У певних умовах медьсодержащих форма SOD може взаємодіяти з перекисом водню і виступати в якості прооксидантів, ініціюючи освіта радикалів - супероксиду і гідроксилу:
Cu ^{2 +-СОД} + H ₂ O ₂ ← → Cu ^+-СОД + 2Н ^{+ +} О ₂ ˉ
Cu ^+-СОД + H ₂ O ₂ ← → Cu ^{2 +-СОД} + ^ОН. + ОН ⁺
СОД грає важливу роль у захисті клітин від дії супероксид-аніон радикала, стабілізує клітинні мембрани, запобігаючи процеси ПОЛ, знижуючи рівень О ₂ ˉ, вона захищає від його дезактивуючих дії CAT і GPO [Александров, 2007].
Регулюючий вплив на активність SOD надають глутатіон, цистеїн, інші SH-містять сполуки, а також опосередковано ферменти глутатіонової обміну [Зенков, Меньщикова, 2004].
Каталаза - фермент, що бере участь у детоксикації нерадикальної активної форми кисню - Н ₂ О _2. Ця гемвмісного фермент, локалізований переважно в пероксисомах клітин. Велика молекулярна маса ферменту перешкоджає його проникненню через клітинну мембрану [Біленко, 1999]. Розкладання Н ₂ О ₂ каталазою здійснюється у два етапи.
CAT + Н ₂ О ₂ → CAT - Н ₂ О ₂
CAT - Н ₂ О ₂ + Н ₂ О ₂ → CAT + 2Н ₂ О + О ₂
При цьому в окисленому стані каталаза працює і як пероксидаза, каталізує окислення спиртів або альдегідів:
CАТ - Н ₂ О ₂ +> CHOH → CАТ + 2Н ₂ О +> C = O
Каталаза інгібується азидом, ціанідом, пероксидом водню у високих концентраціях і деякими органічними гідроперекисів. Каталаза може виступати джерелом утворення АФК. 0,5% кисню, що утворюється в результаті розкладів перекису водню, виникає у збудженому синглетному стані.
Глутатіонпероксидаза - фермент, службовець для інактивації перекису водню в клітинах вищих тварин. GPO-глікопротеїн, що має в активному центрі чотири атома селену. Він є гідрофільним з'єднанням, що утрудняє його проникнення в ліпідний шар мембран, основна частина ферменту локалізована в цитозолі, а інша - в мітохондріях. GPO має селенові ізоферменти: позаклітинне GPO, виявлена ​​в плазмі і молоці, GPO-G1, виділена з цитозолю клітин печінки і кишечника, а також неселеновий ізофермент, ідентичний GSТ.
«Класична» GPO представляє собою тетрамер, що складається з чотирьох ідентичних сферичних субодиниць. Кожна субодиниця містить по одному атому селену, на тетрамер є два активних GSH-зв'язуючих центру. При зменшенні рівня GPO знижується стійкість організму до окислювальному ураження, що може призводити до розвитку вільнорадикальної патології [Бєлоусов, Суслова, Трунова, 1998].
GPO каталізує реакцію відновлення глутатионом нестійких органічних гідропероксидів, включаючи гідропероксид поліненасичених жирних кислот, стабільні сполуки - оксикислоти:
2 GSH + ROOH → GSSG + ROH + H ₂ O
Всі GPO, подібно каталази, здатні також утилізувати перекис водню:
2 GSH + H ₂ O ₂ → GSSG + 2 H ₂ O
Також селеновмісних GPO бере участь у знешкодженні пероксинітриту:
2 GSH + ONOO ^- → GSSG + NO + H ₂ O
Спорідненість GPO до Н ₂ О ₂ вище, ніж у каталази, тому перша більш ефективно працює при низьких концентраціях перекису водню, в той же час у захисті клітин окисного стресу, викликаного високими концентраціями Н ₂ О _2, ключова роль належить каталази. У цілому ж, GPO значно важливіше, ніж каталаза, так як каталаза зосереджена в мікросомах, а GPO - у цитозолі і мітохондріях, спорідненість GPO до пероксиду водню значно вище, тому Н ₂ О ₂ елімінується GPO, в деяких тканинах каталаза майже відповідає і GPO відіграє головну роль у валовому метаболізмі Н ₂ О ₂ [Зубакова, Варакіна, Ніколенко, 1999]. У клітинах ссавців також виявлений ізофермент GPO, названий «GPO гідроперекисів фосфоліпідів». Ізофермент крім Н ₂ О ₂ і ліпідних гідроперекисів здатний відновлювати гіроперекісі фосфоліпідів, він ефективно взаємодіє з гідроперекисів фосфотіділхоліна, холестерину і ефіру холестерину в мембранах і ліпопротеїнів низької щільності. Спільно з токоферолом GPO гідроперекисів фосфоліпідів практично повністю пригнічує ПОЛ в біомембранах.
Активність GPO в живих клітинах збільшується при дії іонізуючої радіації, інтоксикації етанолом, акрилонітрилом, при Е-авітамінозі. Особливо важлива роль GPO в умовах окислювального стресу, так як він попереджає виникнення і розвиток пероксидації, усуває її джерела і продукти, GPO - є одним з найважливіших компонентів ферментативної АОС [Бріскін, Рибакова, 2000].
Глутатіон-S-трансфераза входить у сімейство ферментів, що нейтралізують токсичний вплив різних гідрофобних і електрофільних сполук шляхом їх коньюгации з відновленим глутатіоном, GST локалізовані переважно в цитозолі клітин. Основна функція GST-захист клітин від ксенобіотиків та продуктів ПОЛ за допомогою їх відновлення, приєднання до субстрату молекули глутатіону або нуклеофільного заміщення гідрофобних груп:
ROOH + 2 GSH → ROH + GSSG + H ₂ O
R + GSH → HRSG
RX + GSH → RSG + HX
GST здатні відновлювати гідропероксі-групи окислених фосфоліпідів безпосередньо в мембранах без їх попереднього фосфоліпідного гідролізу вільними жирними кислотами. Цей фермент кон'югуються з GSН токсичні продукти ПОЛ (нонена, деціналі, холестерин-α-оксид) і тим сприяють їх виведенню з організму. Таким чином, GST є важливим компонентом антиоксидантного захисту, особливо від ендогенних метаболітів, що утворюють при окислювальному стресі [Владимиров, 1998].
Глутатіонредуктаза. У багатьох реакціях, що каталізуються GPO і GST, дві молекули GST з'єднуються дисульфідній зв'язком і утворюють окислений глутатіон. Для відновлення GSSG в клітинах існує спеціальний фермент - глутатіонредуктаза [Зенков, Меньщикова, 2004].
ГР широко поширений флавінових фермент, що підтримує високу внутрішньоклітинну концентрацію GSH, каталізує оборотне NFDFH-залежне відновлення GSSG з утворенням двох молекул GSH.
GSSG + NADFH + H ⁺ → 2 GSH + NADF ⁺
ГР міститься в основному в розчинній частині клітини.
Глюкоза-6-фосфатдегідрогеназа. Для відновлення окисленого глутатіону ГР в якості Донара водню використовується NADFH, який утворюється в пентозофосфатному шляху в ході глюкозо-6-фосфатдегідрогеназной реакції [Андрєєв, 1999]
G6FD - фермент, що каталізує початкову реакцію пентозофосфатного шляху: відновлення глюкозо-6-фосфату в 6-фосфоглюконат. Вона складається з двох типів субодиниць, які складаються з 479 амінокислотних залишків, мають один і той же СООН - кінцевий ділянку, але різні NH _{2-кінці,} Ці субодиниці розрізняються по довжині і послідовності амінокислот. Реакції, що каталізується G6FD, з кінетичної точки зору можна розглядати як двухсубстратную реакцію, що протікає з участю субстрату і коферменту, що виконує роль другого субстрату. Фермент дуже сильно пригнічується NADFH і ATF, за типом конкурентного інгіірованія.
Глутатіон - трипептид (L-γ-глутаміл-L-цістеінілгліцін), який при фізіологічних значеннях рН має дві негативно заряджені карбоксильні групи і позитивно заряджену аміногрупу.
Наявність γ-глутамільной зв'язку захищає трипептид від деградації внутрішньоклітинними пептідаза, а сульфгідрильних груп цистеїну може служити донором електронів, надаючи глутатіону властивості відновника і здатність видаляти вільні радикали. Одноелектронні реакція GSH з вільними радикалами призводить до утворення тіільного радикала ^GS., Який при димеризації з іншим ^GS. Радикалом дає дисульфід глутатіону (GSSG). Другий тип окисно-відновних реакцій, в яких бере участь глутатіон - це реакції тіол-дисульфідного обміну [Brune, 1995]. При окисно-відновних реакціях третього типу відбувається двухелектронное окислення з утворенням інтермедіату, який потім реагує з другої молекулою, ідентичною першою або відмінною від неї. При цьому в першому випадку утворюється GSSG, а в другому-змішаний дисульфід.
У клітинах всіх типів GSH синтезується в ході двох послідовних реакцій, що каталізуються γ-глутамілцістеінсінтетазой (γ-GCS) і GSН-синтетазою (GS). γ-GCS каталізує утворення пептидного зв'язку між γ-карбоксильною групою глутамату і α-аміногрупи цистеїну. Глутатіонсінтетаза утворює пептидний зв'язок між α-карбоксильною групою цистеїну в складі γ-глутамілцістеіна і α-аміногрупи гліцину. Обидві реакції є ATF-залежними, мають подібний каталітичний механізм і протікають через освіту ацілфосфатного інтетрмедіата [Davies, 1995].
Статус глутатіону визначається як загальна концентрація глутатіону і кількісне співвідношення між різними формами, в яких він існує в клітці. Статус глутатіону обумовлений динамічною рівновагою між реакціями синтезу, деградації, транспорту, окислення та відновлення і тому може змінюватися в залежності від переважання тих чи інших реакцій, що визначається станом клітини і навколишнього середовища. Зміна статусу GSH може спостерігатися як при нормальних фізіологічних ситуаціях, так і при стресах. Для інгібування синтезу GSH у еукаріотів широко використовується інгібітор γ-глутамілцістіінсінтетази [Gebhardt, 1984].
Редокс-активність глутатіону при одночасній його стійкості до окислення киснем, висока концентрація і можливість підтримання у відновленому стані роблять GSH найважливішим внутрішньоклітинним редокс-буфером. Редокс система глутатіону включає в себе сам глутатіон, GPO і ГSТ [Davies, 1995].
GSH реагує з дуже великим числом електрофільних компонентів з утворенням GSH-кон'югатів. Ця реакція може відбуватися спонтанно або каталізувати ферментами GSТ, потім кон'югати деградують до відносно нешкідливих меркаптурових кислот. Глутатіон також бере участь у детоксикації деяких реактивних альдегідів, які можуть утворюватися при окисних процесах в клітинах. У еукаріотів глутатіон відіграє ключову роль в захисті від окислювального стресу як кофактор селенозавісімих і незалежних GPO (Мал. 2). При окислювальному стресі йде інтенсивне окислення GSH, і зниження співвідношення GSH / GSSG є одним з основних ознак окисного стресу в клітинах [Brune, 1995].
Захист живих організмів від окисних пошкоджень не обмежується розглянутими вище антиоксидантними системами, а здійснюється так само великою кількістю репараційних систем, специфічними протеолітичними ферментами; макрофагами і гепатоцитами, ефективно захоплюючими окислені ліпопротеїни через спеціальні «скевенджнр-рецептори». Ця ще раз свідчить про важливість і складності окислювальних процесів за участю АФК, що протікають в живому організмі.

РОЗДІЛ 2. МАТЕРІАЛИ І МЕТОДИ
2.1. Об'єкт дослідження
Об'єктом дослідження стали еритроцити крові практично здорових людей, що проживають в Радянському та Жовтневому районах м. Красноярська, а так само еритроцити крові людей з ЛОР-патологіями.
Всього обстежено 131 осіб у віці від 18 до 54 років, забір матеріалу дослідження проводився на клінічно-діагностичної лабораторії ГУ НДІ медичних проблем Півночі СО РАМН. Групу контролю склали 102 практично здорові людини, неболевших гострими респіраторними захворюваннями в протягом останнього місяця і не мають хронічних ЛОР-захворювань. Здорові люди були відібрані в 2-х районах міста Красноярська ЛОР-лікарем за даними клінічного огляду. Група людей з ЛОР-захворюваннями склала 29 осіб, які проживають в різних районах м. Красноярська.
Таблиця 1
Характеристика матеріалу дослідження та обсягу проведених робіт
Визначення активності глутатіонзалежної ферментів - GPO, GST та GR, а так само зміст GSH проводили в упакованих еритроцитах крові (табл. 1).
2.2. Приготування еритроцитів
Гепаринизированную кров центрифугують 20 хвилин при 3000 об / хв. (1700g). Після центрифугування прибирають шар плазми і тонку білу лейкоцитарну плівку. Плазму відбирають окремо і зберігають. Частину, що залишилася після відбору плазми еритроцитарну масу тричі відмивають фізіологічним розчином (0,9%-ним NaCl) і центрифугують по 15 хвилин при 3000 об / хв. (1700g). Супернатант відкидають. Остання центрифугування проводять протягом 20 хвилин для більш щільної упаковки клітин [Авраамового, Титова, 1978].
2.3. Визначення вміст гемоглобіну
Зміст Hb визначають уніфікованим геміглобінціанідним методом з використанням набору реактивів фірми "Агат-Мед".
Принцип методу полягає в наступному: Hb крові при взаємодії з залізосиньородистим калієм (червона кров'яна сіль) окислюється в Met-Hb, утворює з ацетонціангідрін геміглобінціанід (ціанметгемоглобін), оптична щільність якого при 540 нм пропорційна концентрації Hb в зразку крові [Меньшиков, 1987]. Зміст Hb у дослідних зразках виражали в грамах на літр упакованих еритроцитів.
Реактиви:
1. Трансформуючий реагент - суха суміш натрій вуглекислий кислий, 1,0 г, калій залізосиньородистим, 200 мг.
2. Ацетонціангідрін.
3. Калібрувальний розчин гемоглобін з концентрацією 120 г / л.
Хід визначення
До 5 мл трансформуючого розчину додають 0,02 мл крові (розведення в 251 разів) або гемолізаті, добре перемішують. Визначення проводять через 10 хвилин проти холостої проби (трансфор мірующего розчину), забарвлення стійка протягом не менше 1 години.
При використанні фотоколориметр визначення проводять в діапазоні довжин хвиль 500-560 нм (зелений світлофільтр). Калібрувальний розчин гемоглобіну обробляють також, як і пробу цільної крові. Розрахунок вмісту гемоглобіну проводять за формулою:
,
де:
Hb - вміст гемоглобіну в дослідній пробі, г / л;
Dо - оптична щільність дослідної проби;
Dx - оптична щільність калібрувальної проби;
120 - вміст гемоглобіну в калібрувальному розчині, г / л.
2.4. Визначення кількості відновленого глутатіону
Принцип методу заснований на взаємодії GSH з ДТНБК (5,5 '-дітіо-біс-2-нітробензойною кислотою) з утворенням забарвленого в жовтий колір аніону 2-нітро-5-тіобензоата. Збільшення концентрації жовтого аніону в ході даної реакції реєстрували спектрофотометрично при довжині хвилі 412 нм [Beutler, 1990].
Хід визначення
Готуємо гемолізат додаванням 0,2 мл відмитих від плазми і упакованих еритроцитів до 1,8 мл дист. Н ₂ О, охолодженої до 0єС. Для осадження білків до гемолізаті додавали 3 мл осаджуючої розчину. Проби ретельно перемішували і після 20 хвилинного стояння при кімнатній температурі фільтрували через великопористий фільтр. Фільтрат повинен бути прозорим і безбарвним. 1 мл фільтрату поміщали в спектрофотометричних кювету об'ємом 3 мл, додавали 4 мл фосфатного буфера. Потім в пробу вносили 500 мкл розчину ДТНБК. Відразу ж після перемішування повинна з'явитися жовте забарвлення через утворення дисульфіду глутатіону з ДТНБК. Пробу фотометріровалі при довжині хвилі 412 нм у кюветі з товщиною шару 1,0 см . Оскільки розчин ДТНБК має слабожелтую забарвлення, паралельно з досвідченою пробою готували контрольну, що містить замість фільтрату облягати розчин, розведений дист. Н ₂ О в відношенні 2:5.
Реактиви:
1. Облягати розчин: 1,67 г крижаної ортофосфорної кислоти, 0,2 г ЕДТА і 30 г хлористого натрію розчиняли в дист. Н ₂ О і доводили до мітки 100 мл.
2. Фосфатний буфер: 0,3 М Na ₂ HPO ₄
3. ДТНБК: 0,02%-ний розчин, приготовлений на 1%-ном розчині цитрату натрію
Зміст відновленого глутатіону розраховували з урахуванням коефіцієнта молярної екстинкції (13600 М ^-1 'см ^-1) пофарбованого аніону, що утворюється при взаємодії GSH з ДТНБК і виражали в мкмоль на грам Hb.
Зміст глутатіону розраховують за формулою:
,
де:
С - концентрація відновленого глутатіону, мкмоль / г Hb;
Е ₁ - оптична щільність дослідної проби до додавання ДТНБК;
Е ₂ - оптична щільність дослідної проби після додавання ДТНБК;
138 - розведення еритроцитів в реакційній пробі;
Hb - гемоглобін, г / л;
1000 - коефіцієнт для перерахунку концентрації глутатіону від молярної до міллімолярной;
F - відношення оптичної щільності контрольної проби до додавання ДТНБК (Е ₁ ) І після додавання (Е ₂ );
13600 - коефіцієнт молярної екстінціі пофарбованого катіона, що утворюється при взаємодії GSH з ДТНБК;
2.5. Визначення активності глутатіонпероксидази
Принцип методу: глутатіонпероксидаза каталізує реакцію взаємодії GSH з гідроперекисів трет-бутилу (ДПТБ). Активність ферменту при цьому може бути оцінена по зміні змісту GSH в пробах до, і після інкубації з модельним субстратом в ході кольоровій реакції з ДТНБК [Paglia, Valentine, 1967].
Хід визначення
Відмиті та упаковані еритроцити гемолізованих охолодженої до 0єС водою у співвідношенні 1:200. 0,2 мл гемолізаті змішували з 0,73 мл складного буфера і термостатіровалі 10 хв при 37SYMBOL 176 \ f "Symbol" \ s 14 ° С. Реакцію ініціювали внесенням у реакційну суміш 0,07 мл 0,14%-ного розчину ДПТБ (комерційний препарат). Строго за секундоміром через 5 хв інкубації при 37SYMBOL 176 \ f "Symbol" \ s 14 ° С реакцію зупиняли додаванням 0,2 мл 20%-ного розчину Тху. У контрольні проби 0,14%-ний розчин ДПТБ вносили після осадження білка Тху. Отримані проби центрифугували при 1700g протягом 10 хв. Супернатант використовували для визначення кількості відновленого глутатіону: до 0,1 мл супернатанту додавали 2,65 мл 0,1 М трис-HCl буфера. Після перемішування проби фотометріровалі на СФ-26 при довжині хвилі 412 нм у кюветі з довжиною оптичного шляху 1,0 см проти дист. Н ₂ О. Активність ферменту в еритроцитах виражали в мкмоль GSH, окисленого за 1 хвилину на грам Hb, використовуючи коефіцієнт молярної екстинкції (13600 М ^-1 'см ^-1) пофарбованого аніону, що утворюється при взаємодії GSH з ДТНБК.
Реактиви:
1. Складний буфер: 0,1 М Трис-HCl-буфер, pH8, 5, що містить 6мм ЕДТА і 12мм азид натрію. Безпосередньо на цьому буфері готують 4,8 мМ розчин GSH
2. 0,14%-ний розчин трет-бутил гідропероксиду
3. 20%-ний розчин Тху
4. 0,1 М трис-HCl буфер, pH8, 5
5. ДТНБК на абсолютному метанолі, 0,01 М
Активність розраховують за формулою:
,
де:
А - активність ферменту, мкмоль / мінЧл;
ΔС - різниця концентрацій GSH у дослідній і контрольній пробах;
V _пр. - Об'єм проби, використовуваний для визначення концентрації GPO
t - час інкубації;
V _р.с.. - Обсяг реакційної суміші;
201 - ступінь розведення еритроцитів у гемолізаті;
1000 - коефіцієнт для перерахунку активності GPO від молярної до міллімолярной;
Hb - гемоглобін г / л;
Активність GPO можна також висловити в мкмоль / хв на 1 г Hb
2.6. Визначення активності глутатіон-S-трансферази
Принцип методу: активність глутатіон-S-трансферази визначали за швидкістю утворення глутатіон-S-кон'югатів між GSH і 1-хлор-2 ,4-динітробензолів (ХДНБ).
Збільшення концентрації кон'югатів в ході реакції реєстрували спектрофотометрично при довжині хвилі 340 нм (максимум поглинання глутатіон-S-ХДНБ) [Habig et al., 1974].
Хід визначення
Джерелом ферменту служив осмотичний гемолізат, який готували додаванням до одного обсягу упакованих еритроцитів двадцяти обсягів дист. Н ₂ О, охолодженої до 0 ° С. У кювету з довжиною оптичного шляху 1,0 см , Що містить 2,5 мл 0,1 М калій-фосфатного буфера рН = 6,5, додавали 0,2 мл 0,015 М розчину відновленого глутатіону і 0,1 мл гемолізаті. Реакцію ініціювали внесенням до кювету 0,2 мл 0,015 М ХДНБ (готували на абсолютному метанолі). Паралельно дослідної готували контрольну пробу, в яку замість гемолізаті вносили дист. Н ₂ О. Реєстрацію оптичної щільності проводили при t = 25 ° C і довжині хвилі 340 нм проти води відразу після перемішування протягом трьох хвилин. Активність ферменту розраховували, використовуючи коефіцієнт екстинкції для ГS-ХДНБ при довжині хвилі 340 нм, рівний 9,6 мМ ^-1 * см ^-1, і висловлювали в ммоль утворюються глутатіон S-кон'югатів у хвилину на грам Hb.
Реактиви:
1. 0.1м калій - фосфатний буфер РН6, 5;
2. 0.015М розчин GSН;
3. 0.015М розчин ХДНБ.
Активність GPO розраховують за такою формулою:

де:
А - активність ферменту, моль \ мінЧHb
ΔE - зміна оптичної щільності в хв.
d - товща кювети (1см)
f - коефіцієнт розведення еритроцитів у пробі
ε - коефіцієнт молярної екстинкції при χ = 340нм (9600М ^-1 Чсм ^-1)
Hb - гемоглобін г / л
1000 - коефіцієнт для перерахунку активності GST від молярної до міллімолярной;
V _пр. - об'єм проби, використовуваний для визначення активності GST
V _р.с.. - Обсяг реакційної суміші;
2.7. Визначення активності глутатіонпероксидази
Принцип методу: визначення активності глутатіонредуктази засноване на вимірюванні швидкості окислення NADPH, яка реєструється спектрофотометрично щодо зменшення оптичної щільності при довжині хвилі 340 нм.
Для визначення активності глутатіонредуктази використовували осмотичний гемолізат, приготований таким чином. До одного обсягу упакованих та відмитих від плазми еритроцитів додавали дев'яти кратний обсяг холодної дистильованої води.
Хід визначення:
У спектрофотометричних кювету з відстанню між робочими гранями 10 мм послідовно вносять 2,7 мл калій-фосфатного буфера, 0,1 мл розчину NADPH, 0,1 мл гемолізаті і 0,1 мл розчину GSSG. Реакція запускається додаванням до проби окисленого глутатіону. Суміш перемішують. Изменеие оптичної щільності реєструють через 1 хвилину протягом 3 хвилин проти проби, що містить всі компоненти, крім GSSG.
Реактиви:
1. 50 мМ калій-фосфатний буфер, рН 7,0, що містить 1мМ EDTA;
2. 0,1 мМ розчин NADPH;
3, 0,5 мМ розчин окисленого глутатіону (зберігають у замороженому вигляді).
Активність ферменту виражають в мкмоль ¤ р Hb в хвилину. Розрахунок роблять за формулою:
,
де:
А - активність глутатіонредуктази;
DЕ - зміна оптичної щільності;
К - коефіцієнт, що враховує розведення еритроцитів в реакційній пробі, рівний 300;
6,22 - коефіцієнт екстинкції для NADPH в см ^-1 / мМ ^-1, при довжині хвилі 340 нм;
t - час спостереження, хв;
d - відстань між робочими гранями кювети ( 10 мм );
Hb - гемоглобін у г / л.
2.8. Статистична обробка результатів
У роботі використані стандартні статистичні прийоми підрахунку, медіани, визначення 25 і 75 перцентеля за допомогою пакету прикладних програм Statistica 7.0. Достовірність отриманих даних оцінювали за допомогою непараметричного критерію Манна-Уітні, з вірогідністю Р <0,05, кореляційний аналіз за Спірману.

РОЗДІЛ 3. РЕЗУЛЬТАТИ ДОСЛІДЖЕНЬ І ЇХ ОБГОВОРЕННЯ
3.1. Аналіз змісту GSH і активності глутатіонзалежної ферментів в еритроцитах крові практично здорових людей і людей з ЛОР-захворюваннями
Повітряні забруднення грають ключову роль у розвитку окислювального стресу, який є причинного розвитку патології дихальної системи [Меншикова, 2008]. Особливе положення, яке займає епітелій легкого щодо організму з насиченою киснем зовнішнім середовищем, робить його об'єктом токсичної дії радикалів екзогенного та ендогенного походження. Гострі респіраторні захворювання є головною причиною дитячої смертності: від пневмонії щорічно у світі помирає понад 4 млн. дітей. В останні десятиліття спостерігається зростання кількості хронічних неспецифічних захворювань легенів, в даний час вони займають 3-е місце серед причин смертності, в північних регіонах на них припадає на 2 / 3 усіх днів непрацездатності [Меншикова, 2008].
Проведені дослідження показали, що вміст відновленого глутатіону у ЛОР-хворих людей в 1,29 рази нижче, ніж у практично здорових людей. Активність GPO і GST в еритроцитах у ЛОР-хворих людей знижується в 2,77 і 1,46 разів відповідно, у порівнянні з активністю досліджуваних показників в еритроцитах практично здорових людей. За активністю GR достовірних відмінностей між досліджуваними групами не виявлено. Отримані дані наведені в табл. 2.
Зміни вмісту GSH і активності глутатіонзалежної ферментів може бути обумовлено збільшенням утворення АФК при ЛОР-патологіях, оскільки процес розвитку гострих респіраторних захворювань супроводжується генерацією великої кількості АФК [Miller, 1995]. Інгаляція атмосферних прооксидантних полютантів призводить до збільшення кількості альвеолярних макрофагів [Martin, 1985]. При контакті з мембраною альвеолярного макрофага частки повітря інтенсивно підвищують рівень споживання клітиною кисню. Практично весь додатково поглинений кисень не використовується ні на енергетичні, ні на пластичні потреби клітини. Особлива ферментна система фагоцитів, вбудована в зовнішню клітинну мембрану - NADPH-оксидаза змінює електронну структуру молекули кисню, перетворюючи його на головну зброю бактерицидної захисту клітини - кисневі радикали. Прооксиданти підвищують проникність епітелію, ушкоджують фібробласти, знижують вироблення суперксідного аніону полімофноядернимі нейтрофілами. Пошкоджуюча дію АФК полягає у збільшенні епітеліальними клітинами слизу з високим молекулярною вагою, ослабленні функції війок, стимуляції утворення тромбоксану, зниженні сурфактантної активності [Lee, 1997].
Таблиця 2
Зміст GSH і активність глутатіонзалежної ферментів в еритроцитах крові практично здорових та ЛОР-хворих людей
Знайдене нами зниження активності ферментів глутатіонової метаболізму також може бути пов'язано з безпосереднім модифицирующим дією АФК, на ферментативні білки. Так Devies KJ і співробітники (1987) показали в дослідах in vitro, що АЛЕ ^· або АЛЕ ^· + О _{`2</sub> викликають зміна первинної, вторинної та третинної структур білкової молекули. На прикладі великої кількості білків автори виявили високу їх чутливість до дії АФК, що супроводжується в залежності від типу АФК або фрагментацією, або агрегацією білкових молекул. Так, для більшості білків інтенсивний вплив радикалів АЛЕ <sup>·</sup> призводить до їх агрегації, але в присутності Про <sub>`2} кращим процесом стає фрагментація білкових макромолекул. Наслідком таких структурних ушкоджень є, зокрема, різке підвищення чутливості білків до протеолітичної деградації [Devies, 1995; Дубініна, 2001; Пасічник, 2001]. Окислення окремих амінокислот (сірковмісних, ароматичних та інших) ферментів супроводжується зміною ферментативної активності та структури білка [Devies, 1995]. При цьому окислені білки здатні виступати в якості джерела вільних радикалів і виснажувати запаси клітинних антиоксидантів, таких як аскорбінова кислота і глутатіон [Simpson, 2002; Dean, 2007; Cakatay, 2000]. In vitro показано, що продукти CРО білків опосередковує окисне пошкодження ДНК [Halliwell, 2001; Morin, 1998]. Таким чином, окислені протеїни є не лише «свідками», а й активними учасниками процесу вільнорадикального ушкодження.
Модифікації під дією АФК можуть піддаватися всі амінокислотні залишки, але найбільш чутливими є залишки триптофану, тирозину, гістидину і цистеїну. Крім того, відзначено роль окисної модифікації лізину, аргініну, проліну і серину [Devies, 1995; Арчаков, 1989; Пасічник, 2001]. До того ж за наявності в середовищі SH-вмісних сполук вони піддаються окислення в першу чергу, що оберігає від окислення інші функціональні групи і молекули [Зенков, Меньщикова, Шергін, 1993]. Виходячи з цього можна зазначити, що в структурі активних центрів розглянутих нами ферментів є перераховані амінокислотні залишки і вільні SH-групи. Так, в активному центрі молекули GSТ є гістидин, а також вільна SH-група. Активний центр GR містить тирозин і SH-групи, при належні цистеїну і беруть участь в зв'язуванні з окисленим глутатіоном. Ферменти GPO містить в своєму активному центрі аргінін та лізин [Кулінський, 1993; Чернов, 1995; Yeh, 2001].
АФК можуть надавати модифікуючу дію на білки і за опосередкованими механізмам, тобто через продукти їх первинного взаємодії з іншими біомолекулами. Так, продукти взаємодії АФК з ліпідами здатні надавати инактивирующие дію на багато ферментів, шляхом окислення їх SH-, NH2-і CH3-груп амінокислотних залишків, а також утворення стабільних комплексів з білками та ініціювання полімеризації білкових молекул, що сприяє руйнуванню клітинних структур. Наприклад, продукти взаємодії АФК з ліпідами (МДА, 4-гідрокси-2-ноненаль і Е-2-октеналь) активно реагують з e-NH _{2-групами} залишків лізину, утворюючи поперечні зшивки в молекулах білка [Абрамова, 1985].
Виявлене нами зниження рівня GSH в еритроцитах хворих людей може бути пов'язано з інтенсивному використанні відновленого глутатіону на метаболічні процеси (для утилізації прооксидантів). Загальне зниження активності антиоксидантних ферментів може бути обумовлено компенсаторними реакціями, що протікають в організмі в результаті розвитку гострих респіраторних захворювань, а так само з виявленим нами пониженням вмісту GSH. Фермент GPO при розвитку ЛОР-захворювань відіграє істотну роль, оскільки його інгібування потенціює пошкодження епітеліальних клітин екзогенної перекисом і призводить до запалення тканини [Engstrom, 2000].
У захисті епітелію трахеї, бронхів і альвеол від окисного ушкодження важливу роль відіграють ферментативні антиоксиданти (SOD, CAT, GPO, GST), жиророзчинні фенольні антиоксиданти і аскорбінова кислота, а також SH-містять антиоксиданти. Основними антиоксидантами бронхоальвеолярной рідини є глутатіон, концентрація останнього в бронхах у 70 разів більше, ніж у сироватці крові. Глутатіон - внутрішньоклітинний антиоксидант, джерелом його появи в бронхоальвеолярной рідини служать розвантажуються клітини, передусім, лейкоцити, які мігрують в альвеоли і бронхи, а так само епітеліальні клітини, що секретують глутатіон в позаклітинне середовище [Меншикова, 2008].
3.2. Аналіз зміст GSH і активність глутатіонзалежної ферментів в еритроцитах крові практично здорових людей, які проживають в різних за рівнем забруднення районах г.Красноярска
Місто Красноярськ адміністративно поділений на 7 районів, що розрізняються за рівнем техногенного навантаження, яка визначається структурою промисловості і енергетики, початкового і одержуваного продукту, особливостями природно-кліматичних умов. У Радянському районі розташований один з найбільших заводів Росії - Красноярський алюмінієвий завод, тому його відносять до екологічно несприятливому для проживання району. Жовтневий район вважають екологічно чистим районом, тому що на його території немає заводів, велика кількість зелених насаджень, а так само він знаходиться на певній відстані від промислових підприємств міста. Райони знаходяться на одному березі р.. Єнісей, але розділені ландшафтом.
Основними шкідливими факторами алюмінієвого виробництва є фтор, його солі і фтористий водень. За даними ряду авторів рівень забруднення атмосферного повітря фтористими сполуками в зоні впливу викидів алюмінієвого заводу перевищує ГДК в 1,6-2,1 рази [Ахмедов, 2001; Новиков, 1999]. Фтористі з'єднання так само виявляються у воді та грунті і перевищують контрольні в 5 разів. Токсичні сполуки фтору в значній кількості надходять через дихальні шляхи, з продуктами харчування, питною водою. З віддаленням населених пунктів від джерела забруднення загальна захворюваність знижується, що свідчить про певну ролі шкідливих викидів алюмінієвого виробництва на формування здоров'я населення. Найбільш частими при даному джерелі забруднення є захворювання органів дихання, сечостатевої системи, опорно-рухового апарату, шкіри, підшкірної клітковини, а так само зустрічається рівень хвороби шлунка та дванадцятипалої кишки.
Надмірне надходження фтору в організм призводить до розвитку складного захворювання флюороз. Фтор, володіючи високою хімічною активністю, є учасником багатьох біохімічних процесів. «Надлишки» фтору опосередковано, за рахунок взаємодії з іонами марганцю, кальцію, заліза, магнію, здатні впливати на ферменти: гальмувати гліколіз і блокувати обмін ліпідів на етапі окислення жирних кислот; зменшувати активність аденозинтрифосфатаза, розщеплює АТФ; придушувати дезоксирибонуклеаза, яка розщеплює ДНК на тетрануклеотидом і, імовірно, відіграє певну роль у розвитку злоякісних новоутворень [Іванищев, 2002]. За деякими даними, фтор може впливати на холіноестеразу - фермент, що призводить до підвищення рівня ацетилхоліну в синоптичної щілини холінергічних нейронів і, як наслідок, підвищення чутливості до ацетилхоліну скелетних м'язів, гладкої мускулатури кишечника і залоз внутрішньої секреції. І що важливо: за наявними відомостями, надлишок фтору порушує процеси кальцифікації [Xi, 2003; McLeish, 2003].
У ході роботи показано, що вміст GSH в еритроцитах крові людей проживають в екологічно несприятливому районі в 1,83 рази нижче, ніж в еритроцитах крові людей проживають в екологічно сприятливому районі. Активність GPO і GST у людей проживають в Радянському районі в 1,76 і 1,93 разів вище, ніж у людей проживають в Жовтневому районі (табл. 3).
На підвищення активності досліджуваних нами ферментів і змісту GSH може впливати вдихаємо повітря, що містить фтористі з'єднання. Фтор активує аденилатциклазную мессенжіровую систему, за допомогою прямого взаємодії з каталітичним центром ключового ферменту аденілатціклазной системи передачі сигналу - аденілатциклази. У свою чергу, аденилатциклаза збільшує освіти цАМФ з АТФ, молекули цАМФ можуть оборотно з'єднуватися з регуляторними субодиницями протеїнкінази А, приводячи її в активний стан. Активна протеїнкіназа А призводить до підвищення активності GPO і GST яке може протікати по двом механізмам. По-перше, активуються транскрипційні фактори, які впливають на експресію генів, відповідальних за синтез цього ферменту. По-друге, активація протеїнкінази А, а так само інших кіназ призводить до фосфорилювання досліджуваних ферментів і таким чином сприяє підвищенню його активності [Меншикова, 2008].
Таблиця 3
Зміст GSH і активність глутатіонзалежної ферментів в еритроцитах крові практично здорових людей, які проживають в різних районах м. Красноярська

Показники	Жовтневий район Median	Радянський район Median	Достовірність відмінностей
GSH Мкмоль / гHb	4,07 2,05 6,37 N = 36	2,23 1,58 3,31 N = 43	Р <0,05
GPO Мкмоль / хв * гHb	22,14 17,87 30,48 N = 34	39,30 25,71 52,85 N = 43	Р <0,05
GST Моль / хв * гHb	5,37 4,09 9,30 N = 37	10,39 6,34 11,350 N = 41	Р <0,05
GR Моль / хв * гHb	11,000 4,500 12,60 N = 25	10,590 7,65 13,56 N = 36	немає

Зниження вмісту GSН в групі людей проживають в екологічно несприятливому районі може бути обумовлено збільшенням його витрати на метаболічні процеси (захист клітини від дії кисневих радикалів, ліпоперекисного процесів, окислювальної модіфікакціі білків, участі у відновленні Met-Hb), а також для протікання реакцій, що каталізуються GPO і GST, які беруть участь у утілізізаціі перекису водню, ліпоперекісей і ксенобіотиків [Кулінський, 2003].
На підставі кореляційного аналізу в досліджуваних групах можна відзначити наступне 1) збільшення активності GPO впливає на зміст GSH і активність каталази (зворотна залежність, Р = 0,039 і Р = 0,048 відповідно), це пояснюється тим, що GSH інтенсивно витрачається на роботу GPO, а активність каталази знижується при низьких концентраціях Н ₂ О ₂ в клітці, але при цьому активність GPO підвищується [Кулінський, 2003], 2) Активність GPO і GST мають зворотну залежність від проникності еритроцитарних мембран; 3) активність GPO і GSТ змінюються прямо пропорційно зміні змісту МДА . Малоновий діальдегід, це кінцевий продукт перекисного окислення ліпідів, його накопичення свідчить про посилення роботи антиоксидантного захисту [Колісниченко, 1999].
3.3. Аналіз зміст GSH і активність глутатіонзалежної ферментів в еритроцитах крові здорових чоловіків і жінок
При визначенні змісту GSH і активності глутатіонзалежної ферментів в групах практично здорових чоловіків і жінок достовірних відмінностей не знайдено. Дані з вивчення даних показників наведені в табл. 4.
Таблиця 4
Зміст GSH і активність глутатіонзалежної ферментів в еритроцитах крові практично здорових чоловіків і жінок

Показники	Жінки Median	Чоловіки Median	Достовірність відмінностей
GSH Мкмоль / гHb	2,74 1,58 5,88 N = 58	2,320 1,670 4,34 N = 32	немає
GPO Мкмоль / хв * гHb	28,16 17,94 42,78 N = 54	32,70 17,87 48,01 N = 31	немає
GST Моль / хв * гHb	7,15 5,110 10,74 N = 54	10,45 5,30 12,53 N = 31	немає
GR Моль / хв * гHb	11,24 5,55 13,46 N = 52	9,85 7,70 13,89 N = 22	немає

Незважаючи на те, що достовірних відмінностей нами не знайдено, можна зазначити, що є літературні дані, згідно з якими активність основних антиоксидантних ферментів у жінок вища, ніж у чоловіків, так само як і вміст відновленого глутатіону. Однією з причин низької продукції АФК у жінок може бути високий вміст естрогенів, при дії яких активується ядерний респіраторний фактор NRF-1, який регулює синтез білків [Меншикова, 2008].
NRF зв'язує і активує промотори різних ядерних генів, що кодують експресію структурних компонентів системи окисного фосфорилювання, що призводить до синтезу мітохондріального транскрипційного фактора А, який регулює реплікацію мітохондріальної мРНК і процес транскрипції [Scarpulla, 2002].
3.4. Зміст GSH і активність глутатіонзалежної ферментів в еритроцитах крові практично здорових людей різного віку
Під час проведення роботи була зроблена спроба виявлення можливих відмінностей за досліджуваними показниками між різними віковими групами практично здорових людей. Досліджувані люди були розподілені на 4 вікові групи: 1 - до 20 років, 2 - від 20 до 30 років, 3 - від 30 до 40 років і 4 - після 40. Отримані результати наведені в таблиці 4 і вказують на те, що достовірних відмінностей за змістом GSH і активності GST та GR не знайдено. Таким чином, рівень даних досліджуваних показників не залежить від віку людей.
При дослідженні активності GPO в різних вікових групах показано, що активність ферменту достовірно знижується при збільшенні віку обстежуваних людей. Так показано, що в групі людей із віком від 20 до 30 років активність GPO знижується в 1,54 рази в порівнянні з активністю ферменту в групі людей з віком до 20 років. У третій групі активність ферменту в 1,39 рази нижче, ніж у другій і в 2,16 рази нижче у порівнянні з першою групою. У четвертій групі активність ферменту в 1,13 рази нижче, ніж в третій групі і в 1,54 і 1,58 рази нижче у порівнянні з першою і другою відповідно (табл.5).
Отримане нами зниження активності GPO порівнянно з даними літератури згідно з якими в з віком посилюється вироблення і накопичення АФК, які ушкоджують хроматин і ДНК, життєво важливі білки, мембрани, колаген, змінюють регуляцію внутрішньоклітинного кальцію та інше, що в кінцевому рахунку призводить до пошкодження та нестабільності геному в цілому і як результат до зниження активності ферментів антиоксидантної системи, накопичуються продукти ПОЛ, окислені білки і вуглеводи, які призводять до старіння організму [Меншикова, 2008].