1. Встановити морфо-тинкторіальні властивості змішаної культури бактерій іприготу вати мазок
іпофарбувати за методом Грама).
Приготувати препарат-мазок із суміші бактерій, зафіксувати на полум'ї пальника. На фіксований мазок покласти фільтрувальний папір, змочений гонціанвіолетом, нанести на нього декілька крапель дистильованої води, фарбувати 2 хв, зняти папірець і на мазок нанести р-ч Люголя на 1 хв, злити р-н
|знебарвити мазок 26" спиртом 30с), промити водою ідофарбувати алкоголь-водним р-ном фуксину
(2хв), промити водою, висушити фільтрувальним папером імікраскопувати вімерсійній системі.
Фіолетові мікроби будуть грам позитивними, а череоні - грам негативними. Це зумовлено тим, що У грам позитивних стінка складається з пептидоглікану і тейхоєвих кислот, а грам негативних немає цих кислот.
2. Описати морфо-тинкторіальні властивості бактерій у готовому препараті (втанавити наявність капсул). Вказати методи фарбування та функції капсул для життєдіяльності бактеріальних клітин.
При фарбуванні метиленовим синім капсули не забаралюються, або стають рожеві, а мікроби сині.
При забарвленні фуксином капсули незабарвлені на фоні червоного мікроба, За Буррі Гінсом мікроби зафарбовують тушшю, що утворює фон, а самі мікроби фарбуються фуксином - на темному фоні видно бактерію, оточену прозорим обідком з капсулою, За Дробаотько мікроби зафарбовують конго-ротом, що утворює темний фон, а бактерії фарбуються у чарвоний фуксином, будуть оточені безколірною капсулою. Капсула захищає мікроб від висихання, визначає антигенні та імуногенні властивості, захищає від фагоцитозу.
3. Пояснити суть ряду методів визначення чутливості мікроорганізмів до антибіотиків |дифузійних, Е- тесту, стріпів, серійних розведень).
Дифузійний. На чашку Петрі з МПА засівають культуру, в агарі створюють лунки, в кожну вносять по 0.1 мл антибіотика. Вимірюють діаметри зони затримки росту для кожного препарату. Чим більша зона 2 тим більш чутливий мікроб до антибіотика.
Серійних розведень. Дозволяє встановити мінімальну інгібуючу концентрацію антибіотика проти даного мікроба. У 8-ми пробірках готують серію подвійних розведень препарату на серадовищі МПБ, заносять рівні об'єми культури мікробів. Враховують концентрацію при якій ріст затримався повністю або найбільше - зменшення прозорості середовища. Якщо цей антибіотик має бактерицидну дію - при пересіванні культури і пробірки в середовище росту не буде. Якщо має бактеріостатичну - ріст буде, але слабкий.
Метод дискодифузійний. На чашки засівають мікроби, потім вносять диски з фільтрувального паперу, просоченого антибіотиками. Відмічають величинузон затримки росту, Високочутливими вважають ті мікроби, які дають зону затримки росту більшу 25 мм, чутливими - 15-25 мм, малочутливими -нижче 10 мм.
Метод стріпів - те ж, тільки вкладають не диски, а стріпи (смужки).
Е-тест -на чашку Петрі їз посіяними мікробами накладають градуйовані смужки із певними концентраціями антибіотика навпроти значень цих концентрацій, Відмічають загибель бактерій (пусті зони). Таким чином визначають мінімальну інгібуючу концентрацію антибіотика - ту концентрацію, при якій загинули мікроби. Також визначають концентрацію при якій зона смерті мікробів найбільша.
4. Вибрати антибіотики, механізм дії яких полягає у пригніченні синтезу білка у бактеріальних клітинах, а також у впливі на цитоплазматичну мембрану бактеріальних клітин, пригніченні синтезу клітинної стінки, пригніченні синтезу нуклеїнових кислот.
Інгібітори синтезу білка- тетрацикліни (доксициклін), аміноглікозиди (стрептоміцин, гентаміцин), макроліди (азитроміцин, еритроміцин).
Інгібітори синтезу клітинної стінки - бета лактамні пеніциліни - Ампіцилін, амоксицилін, аугментин, амоксиклав (з інгібіторами пеніциліназ). Щефалоспорини - цефазолін, цефалексин, цефтриаксон, цефпіром, цефепім. Карбаленеми - конет, імпінем, тієнам. Монобактами - азтреонам. Глікопептиди - ванкоміцин. Циклосарин, єтіонамід, ізоніазид.
Інгібітори синтезу нуклеїнових кислот -рифампіцин.хіноліни,метронідазол,олівоміцин, саркоміцин,
Порушують функції цитоплазматичної мембрани - поліміксини А, В; полієнові антибіотики (ністатин, лаворин, амфотерицин В) Граміцидини
5. Вибрати серед хіміотерапевтичних засобів препарати, що належать до сульфаніламідів, фторхінолонів. гідразидівізонікотинової кислоти, імідазальних та триазольних похідних.пояснити механізм і спектр дії цих препаратів.
Сульфаніламіди - похідні параамінобеанзоату, діють як антиметаболіти цієї кислоти, бо вона необхідна для бактерій. Мають широкий спектр дії. Сульфален, сульфадиметоксин, сульфазин, сульфаматоксазол.
Фторхінолони - блокують празу та порушують синтез стінки. Абактал,еноксор, цифран, ципрофлоксацин, сфлоксацин. Широкий спектр дії.
Нітроімідазоли - проти найпростіших іграмнегативних бактерій - метронідазол. Вузький спектр дії.
Гідразини ізонікотинової кислоти - ізоніазид, тубазид, фтивазид, етамбутол, єтіонамід - проти туберкульозу. Вузький спектр дії.
6. Провести мікроскопічне дослідження клінічного матеріалу з метою виявлення синцитієутворення при герпетичній інфекції.
Для лабораторних досліджень використовують кров і ліквор хворих, а також вміст пухирців, біоптати шкіри, виділення з носоглотки. За допомогою мікроскопа в мазках з вмісту пухирців виявляють багатоядерні клітини з еозинофільними включаннями в ядрі. Вдаються також до
імунофлюоресцентного фарбування клітин, взятих з основного шару шкіри. Для культивування вірусу придатні фібробласти шкірно-м'язової тканини та курячий ембріон - на ХАО виявляють бляшки, позитивна РГА. виявляється поліморфний багатоядерний синцитій зтільцями Каудрі.
7. Провести облік реакції затримки гемаглютинації, поставленої з метою виявлення противірусних антитіл, інтерпретувати результат дослідження.
Якщо еритроцити осідають ґудзичками (у центрі виїмки) - значить стандартну сироватку проти віруса підібрано правильно. Якщо осідають парасольками (на дно і стінки виїмки планшетки) - аглютинація еритроцитів відбулась, сироватка підібрана неправильно.
8. Провести облік реакції затримки гемаглютинації, поставленої з метою дослідження парних сироваток. Зробити висновок про наростання титруантитіл
Особливість діагностики полягає у виявленні Ат до збудника, в динаміці - виявлення зростання титру специфічних Ат на початку і вкінці хвороби. Ат виявляють у парних сироватках. Першу пробу беруть на початку хвороби, другу вкінці тобто через 2 тижні сироватки позбавляють вірусних інгібіторів.
Реакція вважається позитивна, якщо титр збільшився у 4 і більше разів.
9. Провести облік реакції нейтралізації ЦПД за кольоровою пробою, Зробити висновок про вид вірусу.
ЦПД виявляють при розмноженні віруса в культурі клітин. Для ідентифікації віруса використовують реакції нейтралізації ЦПД антитілами проти віруса стандартними. Роблять розведення тої сироватки, до неї додають вірус, потім заражають культуру клітин. Якщо не буде ЦПД - рН кисле. Кольорова проба передбачає, що при взаємодії вірусів з культурою клітин останні гинуть, рН середовища залишається лужним, і колір індикатора не змінюється.
11. Провести облік реакції імуноферментного аналізу, поставленої з метою виявлення противірусних антитіл окремих класів. Інтерпретувати результат дослідження
Стандартні антигени адсорбовані на планшетці взаємодіють із сироваткою людини, що має антитіла проти них. Вони фіксуються до антигенів на планшетках і не змиваються промивним розчином, отже
їх можна виявити за допомогаю ензим мічених сироваток проти окремих класів імуноглобулінів людини. Далі вносять субстрат для ферманту і хромоген - речовину, що змінює колір при реакції.
Виявлення великої кількості IgG свідчить про перенесену хворобу, IgM про початок захворювання і гостру стадію хвороби. Виявлення тих і тих свідчить про рецидив. Це метод називається непряма
ІФА,
12. Вибрати та описати препарати, що застосовуються з метою специфічної профілактики поліомієліту. Пояснити механізм дії та принципи застосування цих препаратів.
Для специфічної профілактики використовують убиту вакцину Солки, вводиться парентерально, не створює місцевого імунітету, потребує багатьох ревакцинацій.
Жива вакцина Себіна переваги: вводиться перорально, створює місцевийі! і загальний
імунітет ,потребує меншої кількості ревакцинацій інактивована вакцина містить вірус поліомієліту, вбитий формаліном. Її вводять трикратно внутрішньом'язово і це спричинює вироблення специфічного гуморального імунітету. Жива поліомієлітна вакцина містить живий ослаблений
(атенуйований) вірус, її вводять перорально, стимулює крім гуморального також і вироблення клітинного імунітету.
Дітей імунізують живою вакциною, починаючи з 1,5-однорічного віку, кілька разів за певною схемою, з інтервалами в 45 днів і більше. Вакцину дають через рот, у вигляді крапель або цукерок, або вводять внутрішньом'язово. До цього віку, з 3-х місяців застосовують інактивовану (не живу) вакцину.
13.Вибрати та описати препарати, що застосовуються з метою етіотропного лікування та специфічної профілактики грипу. Пояснити механізм дії та принципи застосування цих препаратів.
Етіотропна терапія полягає в призначенні протигрипозних препаратів: ремантадин (Механізм противірусної дії обумовлений пригніченням ранньої стадії специфічної репродукції після проникнення вірусу в клітину та до початкової транскрипції РНК.) При тяжких формах може бути введений донорський імуноглобулін з високими титрами протигрипозних антитіл.
Основним методом профілактики є вакцинація. Найширше застосовують інактивовані протигрипозні вакцини. Ці вакцини формують в організмі високий рівень гуморальних антитіл класу IgG.
14. Вибрати та описати препарати що застосовуються з метою специфічної профілактики захворювань що викликаються параміксовірусами Пояснити механізм та принцип застосування цих препаратів
Вірус парагрипу-нама
Паротит - жива атенуйована вакцина яка може містити різні штами вірусу паротиту, випускається у вигляді моновакцини чи у комбінації з вакцинами проти кору та краснухи. Відповідно до календаря щеплень вакцинацію проводять дітям у віці 12-15міс. Та 5 років. Вакцинація формує гуморальний довічний імунітет,
Профілактика кору проводять живою вакциною що містить атенуйований вірус випускається у вигляді моно вакцини чи комбінованої проти кору краснухи паротиту. Вакцинацію починають у
12-15міс ревакцинація у 6 років
15. Вибрати серед вакцинних препаратів що застосовується з метою специфічної профілактики вірусних інфекцій вакцину отриману методом генної інженерії. Пояснити принцип одержання та мету застосування.
В Україні поки що використовується лише рекомбінантна вакцина проти гепатиту В
Усі генно-інженерні вакцини поділяються на очищенні антигенні препарати і на векторні або живі генно-інженерні вакцини.Векторні отримують шляхом введення гена що кодує протективний антиген у геном деяких авірулентних вірусів-вектарів. Такими живими рекомбінантними вірусами векторами
імунізують організм людини.
16. Вибрати та описати препарати, що застосовуються з метою специфічної профілактики та лікування сказу. Пояснити механізм дії та принципи застосування цих препаратів.
Проблема етіотропної терапії сказу не вирішена, хоча пропонують для застосування антирабічний
імуноглобулін та препарати рекомбінантного інтерферону, Лікування здебільшого симптоматичне.
Прогноз при розвитку захворювання на сказ несприятливий.
Специфічна профілактика сказу при укусах хворою твариною зводиться до введення антирабічного
імуноглобуліну і через 24 год проведення щеплень живими й інактивованими антирабічними вакцинами. Поствакцинальний імунітет розвивається черева 2 тижні і зберігається протягом 6 місяців.
Ефективне застосування антирабічного імуноглобуліну, добутого гіперімунізацією коней фіксованим вірусом.
17, Вибрати та описати препарати, що застосовуються з метою втіотропного лікування інфекцій, що спричиняються герпесвірусами. Пояснити механізм дії та принципи застосування цих препаратів.
До основних протигерпетичних препаратів, ефективність яких доведена в рандомізованих клінічних дослідженнях, належать чотири близьких за структурою ациклічних аналоги нуклеотидів
- ацикловір і ациклогуанізин), валацикловір, панцикловір, фамцикловір, зовірако, йоддезоксиуридин, ганцикловір іцитомегаловірус), які вибірково пригнічують реплікацію ДНК вірусу, не ушкоджуючи ДНК нормальних клітин організму людини. У комплексній тералії хварих з
ГІ для нормалізації клітинної та гумаральної ланок імунітету долучають засоби імуно- та
інтерферонозамісної терапії, індуктори інтерферону, імуномодулятори та адаптогени. З метою специфічного лікування використовують імуноглобулін. який отримують з крові реконвалесцентів, полегшуючий перебіг захворювання, та інтерферон
18. Вибрати та описати препарати, що застосовуються з метою специфічної профілактики інфекцій, що спричиняються герпесвірусами. Пояснити механізм дії та принципи застосування цих препаратів.
імунізація інактивованою формаліном вакциною проти герпесу типу 1 та 2.
Механізм дії: Валацикловір і фамцикловір є аналогами пуринів, які після фосфорилювання всередині клітини перетворюються в активні форми, що пригнічують синтез ДНК вірусу.
19, Вибрати та описати препарати, що застосовуються з метою етіотропного лікування ВІЛ-інфекції.
Пояснити механізм ді та принципи застосування цих препаратів.
Використання препаратів, що блокують зворотну транскриптазу віруса, що перетворює РНК в ДНК.
Це аналоги нуклестидів - азидотимідин, дідезоксицитидин. А також інгібітори транскриптази інші - невірапін. інгібітори протеаз - інвіразе. Також антибактеріальні, протигрибкові засоби, антипротозойні. Імуномодулятори, інтарферон.
20. Пояснити принципи індикації вірусної репродукції у курячих ембріонах. Описати хід досліджень.
Провести облік реакції гемаглютинації. Інтерпретувати отриманий результат.
Зараження провадять в жовтковий мішок, алантоїсну порожнину, ХАО. Віруси розмножуються у клітинах ембріональних оболонок і накопичуютья в алантоїсній рідині. Для виявлення вірусів проводять овоскопію - зрізають шкаралупу над повітряною камерою, на ХАО відмічають зміни - зменшення прозорості, крововиливи, накротичні бляшки. Алантоїсну рідину відбирають і вливають в виїмки планшеток, додають туди еритроцити. Якщо вірус і справді є, відбудеться гемоліз еритроцитів
- еритроцити осідають на дно та стінки виїмки парасольками. Якщо немає віруса, гемолізу не буде, еритроцити будуть в цантрі у вигляді гудзичка.
21. Вибрати та описати середовища та розчини, що використовуються з метою вирощування клітинних культур. Пояснити принципи індикації вірусної репродукції у клітинних культурах.
Описати хід досліджень.
Основою середовищ для культур клітин є сольові буферні розчини з глюкозою - Хенкса, Ерла.
Вони підтримують життєздатність клітин, але для розмноження потрібно додати серадовища росту, що містять гемогідролізат або гідролізат лактатальбуміну. Більш поширеними є синтетичні саредовища, що містять набір амінокислот, нуклеотидів та вітамінів - 199, Ігла, До середовищ росту обов'язково додають 10% сироватки крові теляти і антибіотики. Середовища підтримування сироватки не містять. Середовища для клітин містять індикатор фенопрот і мають малиновий колір, при рості клітин вони жовтіють. Ідентифікацію вірусів у культурі клітин проводять за ЦПД, Для цього використовують реакцію нейтралізації ЦПД віруса. Готують суміш віруса та противірусної сироватки, це додають у культуру клітин, якщо вірує не знищився, настане
ЦПД і рН не зміниться.
22. Вибрати препарати, що застосовуються для лікування та профілактики вірусних інфекцій з метою підняття неспецифічної резистентності організму людини.
Інтерферони. Утворюються Т-лімфоцитами, В-лімфоцитами, фібробластами. Здатні знищувати віруси в клітинах людини. Мають видоспецифічність. Здатні спричиняти ефект післядії - якщо
інтерферон знищив вірус у клітині, більше ніщо не інфікує її. інтерферон не має специфічності дії - нищить усі віруси. Найефективнішими є препарати рекомбінантних інтерферанів.
23. Вибрати таописати препарати, що застосовуються зметою лікування та специфічної профілактики вірусних гепатитів. Пояснити механізм діїі принципи застосування цих препаратів.
Гепатит А, - інактивована вакцина. Аміксин + інтерферон
Гепатит В - інтерферон та інтерферон із ламівудином, Рекомбінантна вакцина.
Гепатит С - інтерферон + рибавірин.
Гепатит D - вакцина від гепатиту В захищає і від D, але якщо людина заражена ними одночасно.
Якщо окремо то ні.
24, Провести бактеріоскапічні діагностичні дослідження гною пригазовій гангрені. інтерпретувати результат досліджень
Грампозитивні капсульні палички, засівають на Кітта-Тароцці, Вільсон- Блера, молоко. Мають спори, що розміщені центрально або субтермінально -їх виявляють методом Ожашки - спори червоні, вегетативні форми сині. На кров'яному агарі утворюють колонії R-форми, що є сірими, круглими і гладкими. S-форми мають нерівний край. Колонії оточені зоною гемолізу, При контакті з повітрям зеленіють. На середовищі Кітта-Тароцці рівномірне помутніння і газоутворення. На середовищі
Вільсон-Блера чорний колір (відновлює заліза). На молоці - штормова реакція - губкоподібний згусток. Застосовують реакцію нейтралізації (введення антитоксичних сироваток) при біопробі на мишах.
25. Провести бактеріоскопічні діагностичні дослідження при сибірці. інтерпретувати результат досліджень.
На МПА шорсткі з нерівними краями колонії - голова медузи, або левова грива. На МПБ утворює осад у вигляді скупчень вати. За методом Грама та Романовського-Гімзи визначають грам позитивні капсульні бацили, що розміщуються ланцюжками. джгутиків на має, утворює спори в зовнішньому середовищі, у вегетативній формі спори розміщені центрально.
26. Провести бактеріоскопічні | діагностичні | дослідження при спірохетозах. інтерпретувати результат досліджень.
Сифіліс Treponema Pallidum грамнегативна звивиста бактерія, за Гімзою - Романовським фарбується у блідо-рожевий, фарбуються сріблом, за Бурі. Клітина має осьову нитку і протоплазматичний циліндр, ще закручуються один навколо одного, утворюючи спіраль, що оточена цитоплазмою, а далі клітинною стінкою з пептидоглікану. Нитки обумовлюють рух спірохет, бо мають флагелін. Погано фарбується аніліновими фарбами. Ефективна темнопольна мікроскопія та фазовоконтрастна. Трепонему виявляють у в клітинах висипу.
1 2 3