Зміст
1. Особливості будови клітин бактерій. Постійні і непостійні компоненти бактеріальної клітини. Опції. Принципи фарбування за Грамом
2. Способи живлення бактерій. Пропионово-кисле бродіння. Збудники хімізм, використання в промисловості
3. Дія температури на мікроби. Використання для подовження термінів зберігання продуктів
4. Мікрофлора вершкового масла. Дефекти олії, що викликаються мікробами. Санітарна оцінка масла за мікробіологічними показниками
Список використаної літератури
Завдання № 1
Бактерії освоїли всі середовища життя. Вони зустрічаються в атмосфері, літосфері, гідросфері, в організмах людей, тварин і рослин.
Клітини їх дуже дрібні - від 0,1 до 10 мкм. За формою клітини можуть бути сферичні (коки), паличкоподібні (бацили), зігнуті (вібріони), спіральні (спірили), які можуть утворювати колонії - нитки кульок (стрептококи).
Бактерії не мають диференційованого ядра, а молекула їх ДНК зосереджена в обмеженому просторі (нуклеоїд) і замкнута у вигляді кільця. Невеликі молекули ДНК (плазміди) розташовані поза нуклеоида. Мітохондрії та хлоропласти у клітині відсутні, їх функції виконує цитоплазматична мембрана. Є рибосоми. Бактерії мають запасні речовини - полісахариди, жири, сірку, поліфосфати. Клітинна стінка бактерії складається з білка муреіна, слизова капсула - з полісахаридів.
Бактерії мають такі обов'язкові структури: клітинну стінку (за винятком мікоплазм), цитоплазматичну мембрану, цитоплазму, нуклеоїд, рибосоми.
Необов'язкові (непостійні структури бактеріальної клітини): капсула, джгутики, суперечки, включення в цитоплазмі.
Складні методи фарбування використовуються для виявлення окремих структур клітини і вимагають застосування двох і більше барвників та впливу деяких додаткових речовин і фізичних факторів.
До складних методів фарбування відносяться:
за Романовським-Гімзою;
за Грамом;
по Нейссер;
за Цілем-Нільсену та ін
Метод Грама є універсальним методом забарвлення і рекомендується для фарбування прокаріотичних клітин. Всі бактерії по відношенні до цього методу поділяються на дві групи: грампозитивні (стафілококи, стрептококи, сарцини, коринебактерії, клостридії, бацили і інші, окрашивающиеся у фіолетовий колір) і грам негативні (ешерихії, псевдомонади, нейсерії, сальмонели, клебсієли, протеї та інші , окрашивающиеся в рожевий колір).
У грам позитивних бактерій основною речовиною клеточ ної стінки (до 90%) є муреин (пептидогликан), в поєднанні з тейхоєвих кислотою і рубонуклеатом магнію. Він розташовується в три шари.
У грамнегативних бактерій пептидогликан одношаровий, його менше в клітинній стінці (близько 10%), а основний компонент представлений ліпополісахаридів. Тейхоєвих кислот немає.
Проникність клітинної стінки у грам позитивних бактерій менше, ніж у грамнегативних. Тому що утворився комплекс: генііан в польоту, йоду і пептидоглікану у грампозитивних бактерій утримується в клітинній стінці при обробці етиловим спиртом, тоді як грамнегативні бактерії втрачають цей комплекс, знебарвлюються спиртом і потім дофарбовувати водним фуксином в рожевий колір. Бактерії, що втратили клітинну стінку частково або повністю, називаються протопластами, сферопласта, L-формами. Метод Грама не може бути застосований для їх ідентифікації.
Завдання № 2
За способом живлення бактерії поділяються на:
-Гетеротрофів, які використовують готові органічні речовини;
-Сапрофітів (бактерії гниття, бродіння), які харчуються мертвими органічними речовинами;
-Паразитів (холерний вібріон, правцева паличка), які харчуються органічними речовинами живих організмів;
-Хемосинтетики (залізобактерій, серобактерии);
-Фотосінтетіков (зелені, пурпурні, серобактерии).
По відношенню до кисню розрізняють такі групи бактерій:
-Аеробні, які використовують для дихання атмосферний кисень (бактерії гниття);
-Анаеробні, які живуть за відсутності кисню;
-Факультативні, які живуть як в кисневій, так і в безкисневому середовищі.
Розмножуються бактерії шляхом ділення кожні 20-30 хвилин (може зустрічатися статевий процес у формі кон'югації). Деякі бактерії здатні утворювати спори. З однієї клітини утворюється велика ендоспори, покрита товстою захисною оболонкою. Вона здатна довго витримувати заморожування, висушування, нагрівання і т.д.
Життя мікробів можлива і без доступу кисню повітря. Енергія, необхідна для життєдіяльності організму, в цих умовах утворюється в результаті процесів бродіння. Найбільш поширені види бродінь, в процесі яких відбувається розпад органічних речовин (переважно Сахаров) під впливом мікроорганізмів, що представляє сукупність окислювально-відновних реакцій. Бродіння ніколи не приводять до повного окислювання органічних речовин. Багато характерні форми бродіння протікають без участі кисню повітря - анаеробно.
Оскільки вільний кисень, що є на нашій планеті, утворився в результаті фотосинтезу, що виник на більш пізніх етапах розвитку життя на Землі, абсолютно очевидно, що анаеробний спосіб добування енергії - бродіння - більш давній, ніж процес дихання.
Бродіння відомо людям з незапам'ятних часів. Тисячоліттями людина користувалася спиртовим бродінням при виготовленні вина. Ще раніше було відомо про молочнокислом бродінні. Люди вживали в їжу молочні продукти, готували сири. При цьому вони не підозрювали, що ці процеси відбуваються з допомогою мікроорганізмів. Термін "бродіння" був введений голландським алхіміком Ван Хельмонтом в XVII ст. для процесів, що йдуть з виділенням газів (fermentatio - кипіння). Потім в XIX ст. основоположник сучасної мікробіології Луї Пастер показав, що бродіння є результатом життєдіяльності мікробів, і встановив, що різні бродіння викликаються різними мікроорганізмами.
Молочнокисле бродіння. При молочнокислом бродінні кінцевим продуктом є молочна кислота.
З цим бродінням люди знайомі здавна. Сквашування молока, приготування кисляку, кефіру, квашення овочів - результати молочнокислого зброджування цукру молока або вуглеводів рослин. Цей вид бродіння здійснюється за допомогою молочнокислих бактерій, які поділяються на дві великі групи (в залежності від характеру бродіння): гомоферментативное, що утворюють з цукру тільки молочну кислоту, і гетероферментативних, що утворюють, окрім молочної кислоти, спирт, оцтову кислоту, вуглекислий газ.
Гомоферментативное молочнокисле бродіння викликають бактерії роду Lactobacillus і стрептококи. Вони можуть зброджувати різні цукри з 6-ю (гексози) або 5-ю (пентози) вуглецевими атомами, деякі кислоти. Однак коло зброджуваний ними продуктів обмежений.
У молочнокислих бактерій немає ферментативного апарату для використання кисню повітря. Кисень для них або байдужий, або пригнічує розвиток.
Процес утворення молочної кислоти надзвичайно близький до процесу спиртового бродіння. Глюкоза також розщеплюється до піровиноградної кислоти. Але потім її декарбоксилювання (відщеплення СО2), як при спиртовому бродінні, не відбувається, тому що молочнокислі бактерії позбавлені відповідних ферментів. У них активні дегідрогенази (НАД). Тому піровиноградна кислота сама (а не оцтовий альдегід, як при спиртовому бродінні) приймає водень від відновленої форми НАД і перетворюється на молочну кислоту. У процесі молочнокислого бродіння бактерії отримують енергію, необхідну їм для розвитку в анаеробних умовах, де використання інших джерел енергії утруднено.
Гетероферментативних молочнокисле бродіння - процес більш складний, ніж гомоферментативное: зброджування вуглеводів призводить до утворення ряду сполук, що накопичуються в залежності від умов процесу бродіння. Одні бактерії утворюють, крім молочної кислоти, етиловий спирт і вуглекислоту, інші - оцтову кислоту; деякі гетероферментативних молочнокислі бактерії можуть утворювати різні спирти, гліцерин, маніт.
Гетероферментативних молочнокисле бродіння викликають бактерії роду Lactobacterium і роду Streptococcus. Хімізм цих бродінь вивчене не так добре, як спиртового або гомоферментативного молочнокислого бродіння.
Гетероферментативних бактерії утворюють молочну кислоту іншим шляхом. Остання стадія - відновлення піровиноградної кислоти до молочної - та ж сама, що й у випадку гомоферментативного бродіння. Але сама піровиноградна кислота утворюється при іншому розщепленні глюкози - гексозомонофосфатном. Вихід енергії набагато менше, ніж при спиртовому бродінні.
Гетероферментативних бактерії зброджують обмежене число речовин: деякі гексози (причому певної будови), пентози, сахароспирти і кислоти.
Молочнокисле бродіння широко використовується при виробленні молочних продуктів: кисляку, ацидофіліну, сиру, сметани. При виробництві кефіру, кумису поряд з молочнокислим бродінням, що викликається бактеріями, має місце і спиртове бродіння, що викликається дріжджами. Молочнокисле бродіння відбувається на першому етапі виготовлення сиру, потім молочнокислі бактерії змінюються пропионово кислими.
Молочнокислі бактерії знайшли широке застосування при консервації плодів і овочів, в силосуванні кормів. Чисте молочнокисле бродіння застосовується для отримання молочної кислоти в промислових масштабах.
Молочна кислота знаходить широке застосування у виробництві шкір, фарбувальній справі, при виробленні пральних порошків, виготовленні пластмас, у фармацевтичній промисловості і в багатьох інших галузях. Молочна кислота також потрібна в кондитерській промисловості і для приготування безалкогольних напоїв.
Завдання № 3
Дія низької і високої температур є одним з основних методів консервування харчових продуктів. Консервуванням харчових продуктів називають створення таких умов їх обробки або зберігання, при яких припиняється розмноження мікробів і дія тканинних ферментів. Цим запобігається псування продуктів і зберігаються їх харчова цінність і доброякісність.
Дія низької температури. Для збереження якості харчових продуктів застосовують охолодження і заморожування. Під охолодженням розуміють зберігання продуктів при температурі, близькій до 0 ° С, під заморожуванням - при температурі -25-40 ° С і нижче. Охолодження частіше застосовується для зберігання продуктів, що містять велику кількість вологи (фрукти, овочі, молоко). Заморожування використовується для зберігання швидкопсувних продуктів, багатих білком (м'ясо, риба, яєчний меланж).
Сутність дії низької температури на мікробну клітку полягає в тому, що її протоплазма ущільнюється, рідка фаза перетворюється в лід, а при дуже низькій температурі (-20 ° С) - в склоподібний стан. Обмінні процеси в мікробній клітині з навколишнім середовищем (продуктом) стають неможливими. При короткочасній дії низької температури цей процес оборотний, тобто після розморожування продукту мікроби зберігають свою життєдіяльність. При тривалій дії низької температури в протоплазмі мікробних клітин наступають незворотні зміни і мікроби гинуть. Однак деякі мікроорганізми (псіхрофіли), особливо цвілі, здатні розмножуватися навіть при дуже низькій температурі.
Тому при зберіганні продуктів у холодильних камерах нерідко відзначається їх пліснявіння. Патогенні для людини мікроби не розмножуються при низькій температурі, але можуть зберігати життєздатність тривалий час: наприклад, паличка черевного тифу при температурі -18 ° С зберігає життєздатність протягом 6 міс, золотистий стафілокок - 5 міс, мікроби групи сальмонела - 5 міс. Отже, низька температура запобігає розмноженню патогенних мікробів, але не викликає їх загибелі. Продукти, що підлягають заморожуванню, повинні бути доброякісними як у санітарному, так і в епідеміологічному відношенні. Не можна заморожувати продукти, що вже мають ознаки псування, так як заморожування тільки замаскує, а не покращить їхню якість. Не можна заморожувати і продукти, що містять патогенні мікроби.
Велике значення для збереження смакових якостей продукту і його поживної цінності мають спосіб заморожування і правильне проведення дефростації - розморожування. Рекомендується заморожування робити швидко, поміщаючи продукт у спеціальні камери-морозилки, де температура повітря -24 ° С і нижче. При швидкому заморожуванні утворюється багато точок кристалізації води (утворення льоду), кристали виходять дрібні, не травмують і не руйнують м'язову тканину. Розморожування, навпаки, доцільно здійснювати повільно, щоб рідина, яка звільнилася при таненні льоду, вбиралася назад в клітини тканин. Це важливо тому, що в рідині містяться водорозчинні поживні речовини, деякі білки, солі, вітаміни.
Дія високої температури. Висока температура (60 ° С і вище) викликає коагуляцію білка в протоплазмі мікробної клітини. Ці зміни незворотні, в результаті чого мікробна клітина стає нежиттєздатною. Коагуляція білка в протоплазмі мікробів швидше відбувається під дією високої температури у вологому середовищі. При температурі 60 ° С більшість вегетативних форм мікробів (але не всі) гине протягом 1-10 хв, а при 100 ° С - миттєво. Дуже стійкі до високої температури спори бацил. Наприклад, суперечки Cl. botulinum витримують кип'ятіння протягом 6 год, а температуру 120 ° С - кілька хвилин. Термостійкість суперечка пояснюється тим, що вода в їхніх клітинах перебуває у зв'язаному стані, не відбувається коагуляції білка. Однак життєздатність прогрітих при високій температурі суперечка знижується.
У практиці консервування харчових продуктів застосовуються такі температурні режими.
Пастеризація - знищення вегетативних форм мікробів.
Застосовується тривала (низькотемпературна) пастеризація - нагрівання харчових продуктів при температурі 63-65 ° С протягом 30 хв і короткочасна (високотемпературна) - нагрівання харчового продукту при температурі вище 80 ° С декілька хвилин. Більш широко застосовується високотемпературна пастеризація як більш ефективна і економічно вигідна. Миттєва пастеризація проводиться при 90 ° С протягом декількох секунд.
Стерилізація - знищення вегетативних і спорових форм мікробів. Спори Cl. botulinum, наприклад, гинуть при температурі 120 ° С протягом 10-20 хв, при 105 ° С вони витримують 2 год, при 100 ° С - 5 ч. Токсин Cl. botulinum менш термостійкий: він руйнується при 100 ° С протягом декількох хвилин, при 80 ° С - через 30 хв, а при 58 ° С руйнується тільки через 3 години
Стерилізація за допомогою високої температури проводиться при нагріванні продукту понад 100 ° С; така температура досягається в автоклавах при тиску до 1,5 атм і більше. Удосконалення технологічного обладнання для консервування харчових продуктів дозволяє досягати температури 130-150 ° С і відповідно до цього скорочувати час стерилізації. Так, в НДР запропонована уперізація - нагрівання молока до 150 ° С протягом 3 / 4 с, після чого молоко охолоджують. Уперізація дозволяє одержати молоко без специфічного присмаку кип'яченого або стерилізованого молока; при цьому зберігаються вітаміни С, В1, D.
Знешкоджувальні дія високої температури підвищується при додаванні до продукту харчових кислот або підвищення лужності продукту, а також при великих концентраціях солі (8-10%); малі концентрації солі (1-2%), навпаки, підвищують стійкість мікробів до дії високої температури.
Приготування баночних консервів. При дії високої температури не тільки гинуть мікроорганізми, але також відбуваються глибокі зміни в білку самого продукту (коагуляція та денатурація). У результаті цього білок стає більш сприятливим середовищем для зростання патогенних мікробів, якщо вони потраплять у нього. Цьому сприяє також відсутність мікробів-конкурентів і антагоністів. Пастеризовані і стерилізовані харчові продукти є консервованими при герметичній упаковці, що захищає від проникнення мікроорганізмів із зовнішнього середовища. На цьому принципі засноване приготування баночних консервів.
Схема послідовності приготування консервів:
1) підготовка сировини (продукту) - рассортірованіе, порціонування, бланшування (обробка парою, окропом);
2) закладання порцій на банки;
3) герметизація банок (закочування);
4) перевірка на герметичність у вакуум-апараті;
5) стерилізація в автоклаві.
Кожному виду консервів відповідає певний режим стерилізації. Наприклад, консерви "Яловичина тушкована" стерилізують при температурі 113 ° С протягом 90 хв, при цьому необхідна температура повинна бути досягнута в протягом 20 хв, а потім після стерилізації протягом 20 хв продукт повинен бути охолоджений під холодним душем. При режимі стерилізації (експозиція 50 хв замість 90) білки м'яса менше денатуруються, разом з тим досягається повна стерильність продукту. Поліпшується ефект стерилізації при обертанні банок в автоклаві.
Завдання № 4
Розрізняють два основних типи вершкового масла: солодковершкове та кисловершкове. Солодковершкове масло готується з пастеризованих вершків, які не заквашується.
У технології цього типу масла мікрофлора небажана: чим менше мікроорганізмів, тим краще масло. Зниження чисельності мікрофлори досягається пастеризацією вершків з подальшою упаковкою і зберіганням масла при низьких температурах (-18, -20 ° С) і належним доглядом за обладнанням. Важливим фактором забруднення олії може бути недоброякісна вода, яка вживається для його промивання.
У 1 мл свіжого солодковершкового олії міститься 50-100 тис. клітин бактерій.
Технологія кисловершкове масло заснована на використанні молочнокислих бактерій для сквашування вершків. Для цього після пастеризації вершків у них вносять закваску, склад мікрофлори якої має значення для підвищення міцності (стійкості при зберіганні) і аромату олії. До складу закваски входять Str. lactis, Str. cremoris і ароматообразующіе бактерії: Str, diacetilactis, Str. citrovorus і Str. paracitrovo. У 1 мл кисловершкова олії міститься від 1 млн. до 10 млн. бактерій. Масло для дослідження беруть стерильним щупом цз двох-трьох місць по 10-15 г і поміщають його у стерильні банки з притертими пробками. При дослідженні на цвілеві гриби роблять зіскоби з поверхні масла, особливо з тих місць, де простим оком чи в лупу видно міцелій гриба.
Перед дослідженням вершкове масло в банку розплавляють на водяній бані, нагрітої до 40-50 ° С. З розплавленого масла, після ретельного перемішування, стерильною піпеткою беруть 1 мл і вносять в пробірку з 9 мл стерильної води, підігрітою до 40 ° С. З отриманого таким чином розведення Ю-1 готують всі наступні (Ю-2, 10_3, Ю-4, Ю-5). З відповідних розведень роблять висів на елективні середовища: для обліку загальної кількості бактерій - на агар з гідролізованим молоком або м'ясо-пептонний агар, для обліку протеолітичних бактерій на молочний агар, для обліку молочнокислих бактерій - на агар з гідролізованим обратом і крейдою, для обліку кількості дріжджів - на Сусловим агар з стрептоміцином, для обліку бродильного титру - на середу Кесслера.
Мікроскопічне дослідження мікрофлори масла.
Для знайомства з мікрофлорою масла (свіжого та несвіжого) його плавлять у скляному стакані на водяній бані при температурі 40 ° С, перемішують, наливають у пробірку і центрифугують центрифужну 10 хв. Верхній шар зливають, з осаду готують препарат. Мазок прогрівають на полум'ї пальника і знежирюють, прикладаючи до неостиглого мазку фільтровану папір. Фарбують метиленовим синім протягом 2-3 хв.
У свіжому кисловершкове масло спостерігаються молочнокислі стрептококи, в несвіжому - поряд з молочнокислими бактеріями зустрічаються дріжджі, цвілі, флуоресціюючі і гнильні бактерії.
Тривалого збереження якості масла сприяють низька температура (нижче 0 ° С), молочна кислота, сіль, мінімальна мікробна забрудненість солодковершкового масла, застосування спеціальних культур дріжджів, певний спосіб вироблення і правильна структура масла, а також набивання та упаковка з дотриманням санітарно-гігієнічних правил.
Низька температура. При температурі нижче -11 ° С припиняється розвиток будь-яких мікробів і різко сповільнюються хімічні процеси в маслі, що значно збільшує стійкість його при зберіганні. При цьому, якщо масло поміщати в холодильник відразу після вироблення, більш стійким виявиться солодковершкове масло, і необхідність використання інших консервуючих факторів відпадає. Кислота і сіль при холодильному зберіганні навіть знижують стійкість масла (у порівнянні з солодко-вершковим несолоним), викликаючи утворення в ньому вад хімічного походження (наприклад, рибний смак).
Молочна кислота. Коли масло зберігають деякий час при температурі вище нуля (до приміщення в холодильник), використовують другий фактор захисту - молочну кислоту. У цих умовах буде більш стійким несолоне кисловершкове масло.
Кухонна сіль. При вимушеному тривалому зберіганні масла при температурі вище 0 ° С найбільш стійким буде кисловершкова солоне масло (концентрація солі в олії повинна бути не більше 1,5%).
Мінімальна мікробна забрудненість. Незалежно від умов зберігання більш стійким є масло (будь-якого виду), отримане з вершків високої якості. Якщо масло вироблено з вершків низької якості зі значною бактеріальної обсемененностью, то вже у свіжому стані воно має вади смаку, які посилюються в процесі зберігання.
Для збереження олії гарної якості вирішальне значення має швидке і глибоке його охолодження (до -18-20 ° С), повністю затримує розвиток мікроорганізмів. У маслі, охолодженому безпосередньо після вироблення до температури нижче -11 ° С, мікроби не розмножуються, і продукт не псується. Якщо ж солодковершкове масло охолодити після тривалої витримки (добу і більше) при температурі вище 0 ° С, то кількість бактерій збільшиться в сотні і тисячі разів і це призведе до його псування.
Застосування культур дріжджів. Як фактор псування масла поряд з протеолітичними і пептонізірующімі бактеріями велику роль відіграють цвілі. Для затримки пліснявіння і прогоркания масла С. В. Паращук та С. А. Корольов запропонували використовувати спеціально відібрані види дріжджів. У промисловості застосовують штами дріжджів, не розкладають білків і жиру і не зброджують молочного цукру. Ці штами відносяться до пологів Torulopsis та Candida (Г. Г. Блок, В. М. Богданов). Вважають, що дріжджі уповільнюють підвищення окислювально-відновного потенціалу масла, затримують окислювальні процеси, а значить, запобігають осаливания і розкладання жиру. Дріжджі пригнічують розвиток протеолітичних бактерії, що розкладають білки і жир; утворюючи CO 2, вони пригнічують розвиток цвілі.
Спосіб вироблення і структура масла. Технологічний процес вироблення олії будь-яким способом впливає, з одного боку, на первинне обсіменіння масла мікроорганізмами і, з іншого боку, на розвиток при зберіганні олії тих мікроорганізмів, які потрапили в нього в процесі вироблення. У цьому відношенні найбільше значення має промивання масла і його структура. Якщо для промивання масла застосовують чисту воду, яка задовольняє вимогам ГОСТу за мікробіологічними показниками, то вона практично не збільшує мікрофлори масла, але істотно впливає на розвиток його мікрофлори при зберіганні, оскільки вода - основна частина плазми масла, в якій можуть розвиватися мікроорганізми. Від способу вироблення олії і якості його обробки залежить структура олії, насамперед характер розподілу (диспергування) плазми. Чим краще волога вработана в масло, чим більше дрібних крапель і чим краще вони ізольовані один від одного, тим слабкіше будуть розвиватися мікроорганізми в глибині масла і на його поверхні. Це є одним із заходів попередження пліснявіння масла.
З точки зору різкого обмеження обсіменіння масла мікроорганізмами і створення умов, які обмежують їх розвиток в олії, велика перевага має вироблення олії шляхом перетворення високожирних вершків (в потоці). Масло виробляють з пастеризованих при високій температурі (80-85 ° С) високожирних вершків. Процес перетворення вершків у маслі відбувається в закритому апараті без доступу повітря. Тому незначне бактеріальне обсіменіння пастеризованих вершків можливо тільки в маслообразователь і при фасуванні олії. У результаті вміст бактерій в 1 г масла, виробленого в потоці, не перевищує сотень або кількох тисяч. Ступінь дисперсності вологи в цій олії значно вище, ніж у звичайному. Обмеження первинної мікрофлори і сповільнений розвиток мікробіологічних процесів у маслі обумовлює його високу стійкість при зберіганні.
Набивання та упаковка. Вони істотно впливають частково на обсіменіння масла плесенями, а більшою мірою на розвиток цвілі як всередині масла (там не повинно бути порожнин, заповнених повітрям), так і на його поверхні (пакувальні матеріали повинні добре прилягати до масла).
Список використаної літератури
1.Ассонов Н.Р. Мікробіологія. - М.: Колос, 2007.
2.Волков Л. Д. Харчові захворювання мікробної природи: Учеб. посіб. для вузів. - М.: ФАИР-ПРЕСС, 2006.
3.Мудрецова-Вісс К.Л., Кудряшова О.О., Дедюхіна В.П. Мікробіологія, санітарія та гігієна. - М.: ІД Ділова література, 2008.