Вірусні хвороби сільськогосподарських тварин

[ виправити ] текст може містити помилки, будь ласка перевіряйте перш ніж використовувати.

скачати

Контрольна робота

«Ветеринарна вірусологія»

Специфічні фактори противірусного імунітету

Специфічна система імунітету має свої центральні (кістковий мозок, тимус, фабріціевой сумка у птахів, печінка у ссавців) і периферичні органи (селезінка, лімфатичні вузли, лімфоїдні тканини шлунково-кишкового тракту, а також кров і лімфа, в які надходять і безперервно в них циркулюють всі імунокомпетентні клітини).

Органом імунітету є лімфоїдна тканина, а його основними виконавцями - макрофаги (а також інші антиген-представляють клітини), різні популяції і субпопуляції Т-і В-лімфоцитів.

Основною мішенню дії імунної системи є антигени, переважна більшість яких має білкову природу. Лімфоцити представлені двома великими популяціями - В-і Т-клітинами, які відповідальні за специфічне розпізнавання антигенів. Виникнувши з загальної вихідної, так званої стовбурної клітини, і пройшовши відповідну диференціювання в центральних органах імунної системи, Т-і В-лімфоцити набувають імунокомпетентних, виходять в кров і безперервно циркулюють по організму, виконуючи роль його ефективних захисників.

Т-лімфоцити забезпечують клітинний тип імунних реакцій, а В-лімфоцити - гуморальний тип імунної відповіді.

Диференціація попередників Т-лімфоцитів в імунокомпетентні клітини («навчання») відбувається в тимусі під впливом гуморальних факторів, секретується тимусом; дозрівання В-лімфоцитів - у птахів в бурсі, у ссавців спочатку в печінці плоду, а після народження в кістковому мозку.

Зрілі В-і Т-лімфоцити набувають здатність розпізнавати чужорідні антигени. Вони залишають кістковий мозок і тимус і заселяють селезінку, лімфатичні вузли та інші скупчення лімфатичних клітин. Переважна більшість Т-і В-лімфоцитів циркулює в крові та лімфі. Така постійна циркуляція забезпечує контакт як можна більшого числа відповідних лімфоцитів з антигеном (вірусом).

Кожна В-клітина генетично запрограмована на синтез антитіл до одного певного антигену. Зустрівши і розпізнавши цей антиген, В-клітини розмножуються і диференціюються в активні плазматичні клітини, що секретують антитіла на даний антиген. Інша частина В-лімфоцитів, пройшовши 2-3 циклу поділу, перетворюється у клітини пам'яті, які не здатні до вироблення антитіл. Вони можуть жити багато місяців і навіть років базі розподілу, циркулюючи між кров'ю і вторинними лімфоїдними органами. Швидко розпізнають антиген при повторному його надходженні в організм, після чого клітини пам'яті набувають здатність до поділу і перетворюються в плазматичні клітини - секретирующие антитіла.

Таким же чином утворюються клітини пам'яті з Т-лімфоцитів. Це можна назвати «резервом» імунокомпетентних клітин.

Клітини пам'яті визначають тривалість набутого імунітету. При повторному контакті з даним антигеном вони швидко перетворюються на клітини-ефектори. При цьому В-клітини пам'яті забезпечують синтез антитіл у більш короткий термін, в більшій кількості і в основному IgG. Встановлено, що існують Т-хелпери, які визначають перемикання класів імуноглобулінів.

Розрізняють два варіанти видачі імунної відповіді у формі біосинтезу антитіл:

- Первинний відповідь - після першої зустрічі організму з антигеном;

- Вторинний відповідь - при повторному контакті з антигеном, через 2-3 тижнів.

Вони різняться за такими показниками: тривалістю латентного періоду; швидкістю наростання титру антитіл, загальної кількості синтезованих антитіл; послідовністю синтезу імуноглобулінів різних класів. Клітинні механізми первинного і вторинного імунних відповідей також відрізняються.

При первинному імунній відповіді відзначають:

- Біосинтез антитіл після латентного періоду триває 3-5 днів;

- Швидкість синтезу антитіл відносно невелика;

- Титр антитіл не досягає максимальних значень;

- Першими синтезуються IgM, потім IgG і пізніше IgA і IgE.

Вторинний імунну відповідь характеризується:

- Латентний період - у межах декількох годин;

- Швидкість синтезу антитіл має логарифмічний характер;

- Титр антитіл досягає максимальних значень;

- Синтезується відразу IgG.

Вторинний імунну відповідь обумовлений клітинами імунної пам'яті.

Т-клітини мають кілька популяцій з різними функціями. Одні взаємодіють з В-клітинами, допомагаючи їм розмножуватися, дозрівати і утворювати антитіла, а також активують макрофаги - хелперної Т-клітини (Т х); інші пригнічують імунні реакції - супресорні Т-клітини (Тс), а третина популяція Т-клітин здійснює руйнування клітин організму, заражених вірусами або іншими агентами. Цей тип активності названий цитотоксичність, а самі клітини - цитотоксичними Т-клітинами (Тц) або Т-кілерами (Тк).

Оскільки Т-хелпери і Т-супресори діють як регулятори імунної відповіді, ці два типи Т-лімфоцитів називають Т-клітинами-регуляторами.

Істотним чинником у противірусному імунітеті є макрофаги. Вони не просто знищують чужорідні антигени, але й надають антигенні детермінанти для запуску ланцюга імунних реакцій (презентируют). Заклопотані макрофагами антигени розщеплюються на короткі фрагменти (антигенні детермінанти), які зв'язуються з молекулами білків головного комплексу гістосумісності (ГКГС I, II) і транспортуються на поверхню макрофагів, де вони розпізнаються Т-лімфоцитами (Тх, Тк) і В-лімфоцитами, що призводить до їх активації і розмноженню.

Т-хелпери, активуючись, синтезують фактори (медіатори) для стимуляції В-і Т-лімфоцитів. Активовані Т-кілери розмножуються і утворюється пул цитотоксичних Т-лімфоцитів, здатних забезпечити загибель клітин-мішеней, тобто клітин, заражених вірусом. Активовані В-лімфоцити розмножуються і диференціюються в плазматичні клітини, які синтезують і секретують антитіла відповідного класу (IgM, IgG, IgA, IgD, IgE).

Координоване взаємодія макрофагів, Т-і В-лімфоцитів при зустрічі з антигеном забезпечує як гуморальний, так і клітинну імунну відповідь. Для всіх форм імунної відповіді потрібно узгоджена взаємодія основних факторів імунної системи: макрофагів, Т-, В-лім-фоцитів, NK-клітин, системи інтерферонів, комплементу, головної системи гістосумісності. Взаємодія між ними здійснюється за допомогою різноманітних синтезованих і секретується медіаторів.

Медіатори, що виробляються клітинами імунної системи і беруть участь в регуляції її активності, отримали загальну назву цитокінів (від грец. Cytos - клітина і kineo - приводити в рух). Їх поділяють на монокіи - медіатори, які продукують моноцитами і макрофагами; лімфокіни - медіатори, секретуються активованими лімфоцитами; лімфокіни, які хімічно ідентифіковані та отримані в чистому вигляді. У 1979 р. було запропоновано назвати їх інтерлейкіну. Вони позначаються номерами - 1, 2, 3, 4, 5 і т.д. Сімейство інтерлейкінів поповнюється новими представниками, які здійснюють взаиморегуляции імунної, нервової та ендокринної систем. Всі імунокомпетентні клітини на своїх мембранах несуть унікальні рецептори, за допомогою яких вони розпізнають і сприймають сигнали від інших імунних клітин, перебудовують свій метаболізм, синтезують або усувають свої власні рецептори. Завдяки цьому всі клітини імунної системи функціонують як добре налагоджена система.

Основні особливості противірусного імунітету. Особливості прояву імунної відповіді при вірусних захворюваннях визначаються тим, що віруси є облігатними внутрішньоклітинними паразитами зі своєрідним способом розмноження. Головною властивістю всіх клітин-кілерів є те, що під їх впливом клітці-мішені запускаються механізми апоптозу (запрограмованої загибелі клітини). Лізис клітини відбувається після від'єднання кілера, що дозволяє одному кілеру лизировать кілька клітин-мішеней. У процесі лізису беруть участь секретуються лімфоцитами перфорини і гранзіми. Перфорини, вбудовуючись в мембрану клітини, формує в ній канал, через який в клітку проникає вода. Клітка розбухає і лізується. Вважають, що гранзіми зумовлюють індукцію апоптозу.

Рання стадія інфекції, як правило, полягає в протиборстві вірусу із захисними системами організму-господаря. Самий перший захисний бар'єр - шкірні покриви і слизові оболонки організму. У разі порушення їх цілісності в дію вступають механізми екстреної неспецифічної захисту (фактори вродженого імунітету). Серед них особливо виділяють противірусну активність інтерферону, ЕК-клітини (природні кілери) і макрофаги.

Противірусна дія інтерферону. Інфікування клітини вірусом викликає синтез інтерферону. Під його дією активуються захисні механізми сусідніх клітин, забезпечуючи їх стійкість до вірусної інфекції. Інтерферон індукує синтез двох ферментів: протеінкенази, що веде до придушення синтезу вірусних білків, і 2 ', 5'-олігоаденілатсинтетаза, що активує ендонуклеази, яка руйнує вірусну і-РНК. Крім того, інтерферон сильно активує макрофаги і ЕК-клітини.

Противірусну дію ЄК-клітин і макрофагів. Активні ЄК-клітини з'являються вже через дві доби після зараження організму-господаря вірусом. ЄК-клітини і макрофаги знищують заражені клітини. Головним чином ЄК-клітини здійснюють реакцію антитілозалежна клітинної цитотоксичності (АЗКЦ).

Якщо вірусу вдається подолати бар'єри вродженої захисту, він викликає розвиток специфічної імунної відповіді з появою Т-кілерів, Т-хелперів і противірусних антитіл. Головну роль в імунній відповіді відводять антитіл і Т-кілерам. Основні механізми противірусного імунітету зводяться до блокади розповсюдження вірусних часток і знищення заражених вірусом клітин, тобто клітин, які фактично є «фабриками» з виробництва нових вірусів.

Поширення вірусу в організмі блокують в основному антитіла. У процесі розвитку специфічного імунітету синтезуються антитіла до більшості антигенів вірусу. Проте вважається, що вірусну інфекцію стримують в основному антитіла до поверхневих глікопротеїнів. Ці антигени, часто звані протективного, локалізовані на поверхні віріонів або експресуються на мембрані зараженої вірусом клітини. Механізми гуморального противірусного імунітету можуть бути різними. Спосіб усунення інфекційності вірусних частинок залежить від їх локалізації - позаклітинної або внутрішньоклітинної.

Антитіла, адсорбируясь на поверхні віріонів, блокують його життєво важливі функції. Перш за все, це блокада прикріплення до клітини господаря, проникнення в неї, роздягання вірусу. Адсорбція антитіл на білках капсида не дозволяє деяким вірусам (вірусу чуми м'ясоїдних, кору та ін) проникати з клітини в клітину шляхом їх злиття. Крім того, вважають, що антитіла, активуючи систему комплементу, викликають пошкодження оболонки деяких вірусів і блокують клітинні рецептори для вірусів. Проте в даний час цей процес не вважають суттєвим в противірусної захисту.

Дія антитіл, крім нейтралізації позаклітинних вірусів, полягає в тому, що вони викликають руйнування інфікованих вірусами клітин, активуючи систему комплементу. Другий механізм дії антитіл на внутрішньоклітинний вірус - це реакція антитілозалежна клітинної цитотоксичності, здійснювана ЄК-клітинами. Антитіла, фіксовані на мембрані ураженої вірусом клітини, контактують з ЄК-клітинами (через Fc-фрагмент IgG), які вбивають заражені клітини за допомогою перфорини і гранзімов.

У імунітет до вірусних інфекцій Т-клітини виконують різноманітні функції. Т-хелпери грають важливу роль в утворенні антитіл у відповідь на антигени, крім того, ці клітини допомагають в індукції Т-кілерів, а також у залученні макрофагів і Е-клітин у вогнище вірусної інфекції і в їх активації. Т-кілери здійснюють противірусний імунологічний нагляд, і діють вони досить ефективно і вибірково, руйнуючи інфіковані вірусами клітини за допомогою перфорини і гранзімов. Проникнувши всередину клітини-мішені, гранзіми через каскад реакцій активують ендонуклеази. Цей фермент сприяє розриву ланцюгів ДНК і розвитку апоптозу (програмована загибель клітин).

Механізми «відходу» вірусів від імунного нагляду організму хазяїна. Віруси мають різноманітними властивостями захисту від розпізнавання їх антитілами:

найбільш ефективно цьому служить зміна антигенів: у вірусних білках відбувається зміна іммунодомінатних областей. Антигенна мінливість спостерігається у вірусів імунодефіциту людини і у вірусів грипу. Так, у вірусу грипу вона називається антигенним «дрейфом» (поступові зміни) і «шифтом» (різкі зміни). Гуморальний імунітет до цих вірусним інфекціям зберігається лише до появи нового сероваріантів збудника, що не дозволяє розраховувати на довготривалий ефект вакцинації;

антитіла можуть видаляти вірусні антигени з плазматичної мембрани клітини шляхом кеппінга (агрегації молекул клітинної поверхні). Так, герпесвіруси кодують глікопротеїни, що зв'язують антитіла через Fc-фрагмент, при цьому порушується активація комплементу і блокується дія противірусних антитіл;

ряд вірусів (цітомегало-, аденовіруси та ін) індукують вироблення білків, що пригнічують експресію молекул ГКГС класу на мембрані уражених клітин. Це дає вірусу перевагу, допомагаючи уникнути розпізнавання ці окремі віруси (герпесвіруси) мають генами білків, гомологічних цитокінової рецепторів. У результаті ці «розчинні» рецептори як «пастки» пов'язують цитокіни і нейтралізують їх дії;

деякі віруси (вірус Епштейна - Барра, аденовіруси) здатні протидіяти ефекту інтерферонів - вони продукують короткі відрізки РНК, які якимось чином пригнічують активацію протеїнкінази;

багато віруси здатні викликати у макрофагів вироблення супрессірующего цитокінів, що пригнічують розвиток імунної відповіді.

Вірус інфекційного бронхіту птахів

Інфекційний бронхіт (ІБ) - висококонтагіозна хвороба виявляється у курчат респіраторним і уремическим синдромом, а у курей - поразкою гермінативних органів і зниженням несучості.

Захворювання поширене в усіх країнах з розвиненим промисловим птахівництвом. Завдає величезної економічної шкоди, що полягає у зниженні м'ясної та яєчної продуктивності на 50-60%, загибелі курчат першого місяця життя до 30%, вибракуванню до 60% птиці при хронічному перебігу хвороби з ускладненнями бактеріальними інфекціями.

У природних умовах сприйнятливі кури всіх вікових груп; найбільш схильні до захворювання курчата до 30-денного віку. Людина хворіють з легкими ознаками ураження верхніх дихальних шляхів.

Характеристика збудника.

Збудник ІБ - РНК-вірус, що відноситься до сімейства Coronaviridae. Віріони його ізометричної форми, розміром 70-120 нм, укладені в суперкапсідную оболонку з рідкісними булавовидними виступами, що нагадують сонячну корону.

Всі штами вірусу ІБ дуже чутливі до УФ-опроміненню, протягом трьох хвилин знешкоджуються 1%-ним розчином фенолу, крезолу, формаліну, 70%-ним розчином етилового спирту. У аллантоісной рідини при мінус 25 ° С зберігають активність до 537 днів.

Вірусу притаманна значна антигенна варіабельність. Визначено 7 серотипів. Виділені в нашій країні штами відносяться до серотипам Массачусетс і Коннектикут. Виділення польових ізолятів, що відрізняються за антигенним складом від цих серотипів, змушує вести роботу зі створення нової вакцини.

Антигенна структура. Білки вірусу розрізняються за тканинному тропізму. Патогенність штамів вірусу пов'язана з ізоелектричної точками їх білків. Класифікація білків на основі ізоелектрична точок дозволяє ідентифікувати високопатогенні і персистентні штами. На поверхні вірусу виявлено п'ять агглютининов: А, В, С, D, Е, з яких перші чотири відповідальні за нейтралізацію вірусу. З 16 моноклональних антитіл всі реагували з білками пепомеров, а один тип антитіл нейтралізував інфекційність і пригнічував гемагглютінірующую активність вірусу.

Переболевание птиці супроводжується утворенням антігемагглютінірующіх, віруснейтралізуючою антитіл і практично довічним імунітетом до гомологічною типом вірусу. У курей-реконвалісцентов віруснейтралізующіе антитіла виявлялися 482 дня. Преципитирующие антитіла з'являлися в сироватці крові через 2-3 тижнів, але зникали раніше, ніж віруснейтралізующіе антитіла. У крові курей-реконвалісцентов знайдені Комплементзв'язуючі антитіла.

Культивування вірусу. Вірус вдається культивувати на курячих ембріонах при зараженні в аллантоісную порожнину, амніон або на ХАО. Ознаки розмноження вірусу в курячому ембріоні - «ефект карликовості» (уповільнення зростання), муміфікація, куляста форма зародка і загибель на 3-6-й день після зараження. Значна кількість штамів вірусу розмножується в культурі клітин курячого ембріона і ВНК-21 з утворенням ЦПД.

У більшості штамів вірусу І Б вона не спостерігається. Штам Коннектикут здатний агглютинировать еритроцити курей, штам ж Массачусетс виявляє таку активність тільки після обробки трипсином або фосфоліпазою С.

Відзначають три клінічних синдрому хвороби: респіраторний, нефрозо-нефрітний і репродуктивний.

Респіраторний синдром проявляється частіше у курчат до 1-місячного віку і характеризується кашлем, трахеальних хрипами, носовими витіканнями, утрудненим диханням, кон'юнктивітом, синуситом та високою летальністю. У курчат 1-2-місячного віку хвороба протікає хронічно з колибактериозом і мікоплазмозом.

Нефрозо-нефрітний синдром спостерігають у курчат до 2-тижневого віку при зараженні їх нефротропнимі штамами вірусу. З'являється діарея, гине до 70% курчат.

Репродуктивний синдром реєструють зазвичай у курей старше БМЕС; характеризується різким зниженням несучості, неправильною формою шкаралупи яєць. У 20-25% курей-несучок, що перехворіли ІБ в ранньому віці, відзначають недорозвиненість яйцевих фолікул.

При розтині виявляють серозний катаральний і казеозний ексудат у трахеї та бронхах (при респіраторному синдромі) ураження нирок і сечоводів (при нефрозо-нефрітном синдромі), недорозвиненість яйцевих фолікулів (при репродуктивному синдромі).

У перші два тижні хвороби вірус адсорбується на клітинах слизових оболонок респіраторного тракту та розмножується в них. Розвиток інфекційного процесу супроводжується віремії з локалізацією вірусу в лейкоцитах і еритроцитах протягом декількох тижнів після зараження. З кров'ю вірус потрапляє в нирки, легені, яєчники та яйцеводи, в клітинах яких розмножується і викликає патологічний процес. Вдається виявити його також у селезінці (до 49 днів), в нирках (до 35 днів), в клоака (до 45 днів).

Виділяється вірус з витіканнями з очей і носа, а також з фекаліями, у півнів - зі спермою протягом 20 днів після зараження. З вмістом яєць від хворих курей вірус виділяється до 6 тижнів після їх зараження.

Основне джерело інфекції - хворі і перехворіли курчата і кури. Видужали птахи залишаються вірусоносіями, а господарство ряд років вважається неблагополучним щодо захворювання. Вірус передається аерогенним, аліментарно, прямим і непрямим контактом, а також трансоваріально.

Діагноз ставлять на підставі епізоотологічних даних, клінічних ознак хвороби, патологоанатомічних змін і лабораторних досліджень.

Лабораторна діагностика. Патологічним матеріалом для лабораторних досліджень служать змиви з гортані, трахеї від хворих птахів і зіскрібки від трупів, шматочки легенів, нирок, а від дорослої птиці - нирки і яйцепроводи.

Виявлення вірусної нуклеїнової кислоти в патологічному матеріалі проводять за допомогою ПЛР. Антиген вірусу можна швидко виявити в РДП і РІФ. Використання в РІФ группоспецифических моноклональних антитіл або гіперімунної сироватки дозволяє відразу ж провести серотіпізацію.

Активний вірус ІБ виявляють біопроб. Найбільш результативно проведення її на курчатах 10-25-денного віку з господарств, благополучних по респіраторним хворобам. Суспензією, отриманої з патологічного матеріалу, заражають курчат інтратрахеально і через 1-5 днів спостерігають появу респіраторних симптомів і патологоанатомічних змін, характерних для ІБ.

Для постановки біопроби на 8-10-денних курячих ембріонах необхідно провести 6-8 «сліпих» пасажів. У процесі пасирування польовий ізолят вірусу адаптується до курячих ембріонах, і на них починають проявлятися типові для ІБ патологічні зміни. Культуру клітин для біопроби не використовують, тому що в ній вірус може викликати ЦДП тільки після адаптації до курячим ембріонам.

Ідентифікація. Матеріал, отриманий в результаті біопроби, містить вірус, який необхідно ідентифікувати в РДП, РНГА і РІФ, а типову приналежність визначають в РН на курячих ембріонах і в РГГА.

Швидше поставити діагноз дозволяють серологічні дослідження.

Серодіагностика заснована на виявленні у хворих та перехворілих птахів антитіл в РН, РНГА та ІФА. Причому якщо рН визначає накопичення антитіл в організмі в період з 10-го по 36-й день хвороби, то РНГА - з 2-го по 14-й день, ІФА - з 3-го дня.

Встановлено, що серологічні дані не дозволяють судити про резистентності конкретного поголів'я птахів до зараження вірусом І Б, так як не завжди рівень антитіл корелює з резистентністю. В останньому випадку важливу роль грає місцевий тканинний імунітет респіраторного трахеїту.

Слід враховувати, що ІБ подібний з інфекційним ларинготрахеїтом, ньюкаслської хворобою та грип птахів. Диференціальну діагностику цих захворювань проводять лабораторними методами.

Перехворіла птиця резистентна до зараження гомологічним штамом вірусу протягом 5-6 міс. Труднощі забезпечення специфічної профілактики інфекційного бронхіту курей обумовлена ​​великою антигенної та імунологічної варіабельністю польових штамів вірусу.

Для профілактики інфекції застосовують як живі, так і інактивовані вакцини. Материнські антитіла від імунних курей-несучок передаються через яйце курчатам і захищають їх в перші 2-4 тижнів життя. Найбільш виражений імунну відповідь отримана при вакцинації в 3-4-тижневому віці живою вакциною, а в 16-тижневому - інактивованої. Враховуючи факт утворення місцевого тканинного імунітету в респіраторному тракті, живі вакцини застосовують орально (з питною водою) або шляхом закапування в ніс.

Вірус ящуру

Ящур - гостроплинна висококонтагіозна хвороба парнокопитних, що виявляється лихоманкою, везикулярним поразкою слизових оболонок рота, шкіри віночка і вимені, у молодих тварин - поразкою міокарда і скелетних м'язів. Ящур реєструється в багатьох країнах світу.

У природних умовах до вірусу ящура сприйнятливі домашні та дикі парнокопитні. Можуть заражатися і безсимптомно хворіють собаки і кішки. Людина заражається рідко при вживанні незнезараженої молока від хворих тварин.

РНК-вірус відноситься до сімейства Picornaviridae, роду Aphtovirus. Геном представлений єдиної односпіральной лінійної плюс-РНК. Віріони вірусу представляють собою позбавлені суперпапсідной оболонки частки кубічної симетрії діаметром 22-30 нм.

Стійкість до фізико-хімічних впливів. Вірус ящуру стійкий до ефіру, хлороформу, фреону. Швидко інактивується в середовищі з рН 6,0 і нижче. Найбільш стабільний при рН 7,0-7,5. Хлорне вапно, креолін, крезол, фенол вбивають вірус лише через кілька годин. Розчини лугів (2%-і) інактивують його за 10 хв. Вірус стійкий до впливу факторів зовнішнього середовища; афтозний лімфа, що містить вірус, інактивується при температурі 31 ° С за 24 год, в молоці при температурі від 66 до 78 ° С вірус гине через 1 хв. Низькі температури його консервують: при мінус 40 - мінус 70 ° С зберігає біологічні властивості кілька років. У стічних водах вірус виживає до 103 днів. Хороший консервант - 50%-ний розчин гліцерину на фосфатному буфері, в ньому при 4-8 ° С вірус зберігається протягом 40 днів. Кращі дезінфікуючі засоби - 2 - або 3%-і гарячі розчини гідрокарбонату натрію і 1%-ний розчин формальдегіду.

У віруссодержащей суспензії присутні інфекційні інеінфекціонние вірусні частинки: 140 S - повні віріони; 5 S - капсиди без РНК; 12 S -14 S - білкові субодиниці і Via-чтіген, який знаходиться в інфікованих клітинах, але не є складовою частиною віріона. Всі названі компоненти володіють антигенними властивостями, але імуногенними є лише 140 S - і 755-частинки. Інфекційність володіють тільки HOS-частинки (повні віріони).

Антигенна варіабельність.

В даний час відомі 7 антигенних типів вірусу ящуру: А, О, С, Сат-1, Сат-2, Сат-3 і Азія-1. Всередині основних типів існують варіанти, або підтипи, що відрізняються один від одного. Тип А має 32 варіанта, тип О - 11 варіантів, тип С -5, тип Сат-1 -7 варіантів, тип Сат-2 - 3 варіанти, тип Сат-3 - 4 варіанти і тип Азія-1 - 2 варіанти. Антигенні типи та варіанти, встановлені в РСК, розрізняються і імунологічно. Тварини, що перехворіли набувають виражений імунітет до гомологічною вірусу. Отже, для специфічної профілактики ящуру на кожен тип вірусу повинна бути вакцина.

В організмі природно сприйнятливих тварин вірус індукує утворення віруснейтралізуючою, комплементзв'язуючих і преципитирующих антитіл.

Вірус культивується на природничо сприйнятливих і лабораторних тварин: новонароджених мишенят і кроленят, хом'яках 60-денного віку, дорослих морських свинках. Добре розмножується в культурі клітин нирок сприйнятливих тварин, в культурі експлантантов епітелію мови великої рогатої худоби і в деяких перещеплюваних лініях клітин (ВНК-21, СНЕВ та ін) з вираженим цитопатическим дією.

Експериментальна інфекція. Легко відтворюється шляхом аплікації віруссодержащего матеріалу в скаріфіцірованную поверхню слизистої мови, ясен великої рогатої худоби, овець і свиней (у п'ятачок), а також при підшкірній інокуляції вірусу новонароджених мишенят або крольчатам і внутрішньошкірне введення матеріалу в плантарной поверхню задніх лапок морських свинок.

Інкубаційний період триває 1-3 дні, іноді до 7-10 днів. Самий характерна ознака даного захворювання у тварин - везикулярне ураження слизових рота, шкіри віночка і вимені. У великої рогатої худоби і свиней ящур протікає гостро, у дорослих тварин, як правило, доброякісно. Захворювання дуже швидко поширюється. Спочатку відзначають погіршення апетиту, підвищену салівацію, підвищення температури тіла (до 40,5-41,5 ° С). На 2-3-й день на внутрішній поверхні губ і на мові з'являються афти. У деяких тварин афти утворюються на вимені. Захворювання кінцівок супроводжується кульгавістю. Через добу афти розриваються і утворюються ерозії. Через 2-3 тижнів. ерозії гояться і тварини одужують. У свиней, овець і кіз поразка спостерігають частіше на кінцівках і рідше на слизових оболонках рота. Досить часто уражається вим'я. У молодняку ​​ящур зазвичай протікає злоякісно (загибель - 80% і більше), афт, як правило, немає.

Патологоанатомічні зміни.

При розтині полеглих молодих тварин відзначають геморагічне запалення кишечника і дегенеративні зміни в м'язах серця («тигрове» серце), подібні зміни знаходять у скелетних м'язах.

Локалізація вірусу. Від хворих тварин вірус можна виявити вже в інкубаційний період з молока, сперми, слини (за 4-7 днів до клінічних ознак). Найбільша кількість вірусу міститься в епітелії і рідини везикул (до 8 жовтня ВД / г). Екскрету і секрети хворих тварин інфекційних більше 10 днів. Виділяється вірус і з повітрям, що видихається. Переболевание може супроводжуватися тривалим вірусоносійство. Близько 50% великої рогатої худоби може виділяти вірус протягом 8 міс., А деякі - до двох років. У свиней персистентного носійства вірусу не встановлено. У стадах буйволів інфекцію протягом багатьох років підтримують вірусоносії і тварини з прихованим перебігом інфекції.

Джерелом інфекції служать хворі тварини і вірусоносії. Дуже суттєва епізоотологічне роль диких парнокопитних. Вірус дуже контагиоз, тому хвороба швидко поширюється серед сприйнятливих тварин. У поширенні ящура серйозну роль грають продукти і сировину тваринного походження, а також предмети догляду, гній і корми, забруднені виділеннями хворої худоби. Переносниками інфекції можуть бути і несприйнятливі до ящуру тварини (собаки, кішки, коні і птахи).

Діагноз на ящур ставлять на підставі епізоотологічних даних (висока контагіозність і вибіркове ураження тільки парнокопитних), клінічних ознак (везикулярне ураження слизових оболонок рота, шкіри, кінцівок і вимені), патологоанатомічних змін (при загибелі молодняку ​​- поразка кишечника і м'язів серця) і результатів лабораторних досліджень.

Діагностувати ящур за клінічними ознаками досить легко, але для лікаря господарства важливо знати, яким типом вірусу ВИКЛИКАНІ захворювання, щоб застосовувати відповідну вакцину. Тип вірусу визначають у лабораторії.

Взяття і підготовка матеріалу. Для лабораторних досліджень від 2-3 хворих тварин відбирають не менше 5 г стінки та вмісту афт на слизовій оболонці язика (у великої рогатої худоби), на п'ятачку (у свиней), на шкірі вінчика і міжпальцевих щілини (у великої і дрібної рогатої худоби, свиней, верблюдів та ін.) При відсутності афт беруть кров тварин у момент температурної реакції, з трупів молодняка тварин усіх видів - лімфатичні вузли голови та заглоточного кільця підшлункову залозу і м'яз серця. Для дослідження на вірусоносійство беруть стравохідно-глоткову слиз (спеціальним зондом).

Матеріал необхідно отримувати так, щоб попередити винос вірусу за межі неблагополучного вогнища та лабораторії, убезпечити персонал, що працює з інфекційним матеріалом.

Для цього:

а) ветлікар господарства повинен мати певні навички взяття матеріалу від хворих тварин;

б) необхідно підготувати все для відбору матеріалу - пінцети, ножиці, серветки, товстостінні флакони, лейкопластир, гумові пробки, 50%-ний розчин стерильного гліцерину на фізіологічному розчині хлориду натрію, термос з охолоджувальною сумішшю, дезрозчин - 2%-ний розчин NaOH або 1%-ний розчин оцтової або молочної кислоти; спецодяг - халати, комбінезони, косинки чи шапочки, маски, гумові чоботи, рукавички і т.д. Все необхідне поміщають в контейнер і їдуть у неблагополучний вогнище, де, перш ніж увійти в приміщення з хворими тваринами, переодягаються; в) після взяття матеріалу від хворих тварин інструменти, маску, рукавички занурюють у дезрозчин; зовнішню поверхню флаконів і термоса обробляють дезрозчином. У санпропускнику знімають весь одяг і приймають душ.

У носової порожнини у людей вірус ящура переживає до 7 днів, отже, протягом цього часу після відвідування неблагополучного господарства небажаний контакт зі здоровими парнокопитними тваринами.

Проби матеріалу без ознак розкладання поміщають у флакони з загвинчуються або притертими пробками і заморожують, а при відсутності умов заморожування - заливають консервирующей рідиною (50%-ним стерильним розчином гліцерину на фізіологічному розчині NaCI). На флакони наклеюють етикетки із зазначенням виду тварин, найменування матеріалу, його кількості, дати відбору та адреси відправника. Флакони ставлять в непроникний металевий контейнер, опечатують і поміщають у термос з льодом, який теж опечатують. До матеріалу докладають підписаний лікарем супровідний лист, в якому вказують: дату взяття матеріалу, від тварин якого виду і який матеріал взято, повідомляють епізоотичну обстановку по ящуру у господарстві, ім'я лікаря. Матеріал відправляють з нарочним. Для роботи з вірусом ящуру в лабораторії виділяють окрему кімнату (бокс з предбоксніком), де повинно бути необхідне обладнання та матеріали для проведення діагностичної роботи (підготовка матеріалу, постановка РСК, біопроби і т.д.). При роботі в боксі повністю змінюють спецодяг та взуття, надягають гумові рукавички і маску. Після роботи нічого не знешкоджених виносити з боксу не можна. Посуд і інструменти кип'ятять, спецодяг занурюють у контейнер для автоклавування; столи, підлогу, стіни обробляють дезинфікуючим розчином з наступним опроміненням УФ-променями.

У лабораторії ведуть суворий облік надходження матеріалу і його витрата з точністю до 1 мг. Поступив в лабораторію матеріал зберігають до дослідження і в період використання в закритому на ключ і опечатаному холодильнику. Після закінчення роботи складають акт на знищення залишився від дослідження матеріалу і тварин після біопроби.

Лабораторні дослідження на ящур включають:

- Виявлення та ідентифікацію антигену вірусу ящура в РСК (визначення його типової і варіантної приналежності);

- Виявлення і титрування антитіл до вірусу ящуру у перехворілих тварин (реконвалесцентів) в реакції радіальної иммунодиффузии (РРІД) і непрямої реакції імунофлуоресценції (НРІФ).

Виявлення та ідентифікація антигену вірусу ящура за допомогою РЗК. Компоненти реакції: випробувані антигени з епізоотичних штамів вірусу від хворих тварин; сироватки морських свинок, гіперімунізованих стандартними типовими і варіантних штамами вірусу ящура (біофабричного виробництва); антигени контрольні - з типових і варіантних штамів вірусу ящура (біофабричного виробництва); комплемент - свіжа або суха нормальна сироватка морських свинок; гемолізин біофабричного виробництва; еритроцити барана - у вигляді 2%-ної суспензії на фізіологічному розчині; 0,85%-ний розчин хімічно чистого хлориду натрію на дистильованій воді; набір специфічних сироваток і антигенів до інших вірусів, що викликають везикулярні поразки.

РСК ставлять в різних обсягах: в загальному обсязі 1 мл - беруть 0,2 мл кожного компонента, в загальному обсязі 0,5 мл - беруть 0,1 мл кожного компонента або мікрометодом - загальний обсяг 0,125 мл, при цьому кожен компонент дорівнює 0,025 мл .

Приготування антигену вірусу ящуру.

Стінки афт від хворих тварин відмивають від консервирующей рідини фізіологічним розчином рН 7,4-7,6, висушують фільтрувальним папером, зважують, подрібнюють і ретельно розтирають у фарфоровій ступці із стерильним битим склом нейтральним до отримання однорідної маси, до якої додають подвійне по відношенню до масі афт кількість фізіологічного розчину, тобто на 1 г афт -2 мл розчину. Отриману 33% суспензію екстрагують при кімнатній температурі 2 год, при мінус 10-20С протягом 5-18 ч. Після розморожування центрифугують 15-30 хв при 3000-5000 хв -1. Надосадову рідину інактивують при 58 ° С 40 хв. Після інактивації, якщо в рідині залишаються пластівці, її центрифугують повторно 10-15 хв при 3000 хв -1 і потім використовують в якості антигену в РЗК.

Етапи постановки РСК.

  1. Титрування гемолизина. Проводять при отриманні нової серії за загальноприйнятою методикою. У головний досвід беруть гемолізин в 4-кратної концентрації від його граничного титру (робоче розведення).

  2. Приготування гемолітичної системи (гемсістеми). Для цього змішують гемолізин в робочому розведенні з рівною кількістю 2%-ної суспензії еритроцитів барана.

  3. Титрування комплементу. Проводять у гемолітичної систему у день взяття головного випробування за загальноприйнятою методикою. Для головного досвіду РСК комплемент беруть з надлишком у 1% від його титру в гемсістеме. Правильно взята робоча доза комплементу - неодмінна умова нормального перебігу реакції, що забезпечує достовірність результатів.

  4. Приготування робочого розведення типоспецифічних сироваток. У головний досвід для визначення типу вірусу ящуру сироватки використовують у подвоєному титрі (від граничного титру), наприклад, якщо граничний титр сироватки складає 1:40, то робочий титр буде 1: 20.

  5. Приготування робочого розведення типоспецифічних антигенів. Антигени також використовують в подвоєних титрах, наприклад, якщо граничний титр дорівнює 1: 6, то робочий титр буде 1: 3.

  6. Випробуваний антиген в реакції досліджують цільним (33%-ва суспензія) і в розведеннях 1:2, 1:4 і 1:8.

Примітка. За представленими результатами всі стандартні антигени і сироватки активні і тіпоспеціфічни. Випробуваний антиген відноситься до типу А.

Облік реакції ведуть через 5-10 хв після водяній лазні, і остаточний результат одержують через 10 - 12 ч. Ступінь затримки гемолізу оцінюють в хрестах: (++++) - 100%-ва затримка гемолізу; (+++) - 75 %-ва; (+ +) - 50%-ва; (+) - 25%-ная затримка гемолізу; (-) - повний гемоліз.

Якщо випробуваний антиген гомологічен специфічним антитіл, то буде затримка гемолізу і реакція буде позитивною, якщо ж гомологічні антитіла відсутні, реакція негативна і спостерігається повний гемоліз.

При виробничій необхідності після визначення типової приналежності вірусу ящура встановлюють його підтип (варіант). Для цього ставлять РСК за тією ж методикою, але використовують варіантні сироватки і варіантні антигени встановленого типу. Причому варіантні сироватки використовують в граничному титрі, а антигени у подвоєному. Антиген (досліджуваний) відносять до того варіанту, з сироваткою якого він дає позитивну реакцію у більш високих розведеннях.

Коли доставленого з господарства вірусного матеріалу недостатньо для дослідження в РЗК, проводять його расплодку на культурі клітин або на 3-6-денних мишенят-сосунов, або на дорослих морських свинках. Мишенята досліджувану суспензію вводять підшкірно в області спини в дозі 0,1-0,2 мл, морським свинкам - внутрішньошкірно в подушечки обох задніх кінцівок в дозі 0,2-0,5 мл. За тваринами спостерігають 5-7 днів.

У разі загибелі мишенят з їх тушок готують антиген для РСК. У морських свинок в позитивних випадках на лапках утворюються афти; стінки афт і їх вміст використовують в РСК. При необхідності проводять 2-3 «сліпих» пасажу. Пробу досліджуваного матеріалу вважають негативною, якщо в третьому пасажі не буде відзначено дегенерації клітин і відмінка білих мишей, а при дослідженні отриманих з них суспензій в РСК не буде виявлено антиген вірусу ящуру.

Ретроспективна діагностика.

Матеріалом для дослідження на наявність антитіл до вірусу ящуру служать сироватки крові тварин, підозрюваних у переболевания ящуром або іншими везикулярним хворобами. Сироватки крові повинні бути взяті не раніше ніж через 7 днів з моменту появи у тварин ознак везикулярного захворювання. На дослідження слід спрямовувати 5-10 проб сироватки від тварин кожної вікової групи. При сумнівних результатах первинного дослідження необхідно відібрати кров повторно від тих же тварин через 7 - 10 днів.

Сироватку, отриману загальноприйнятим методом, консервують антибіотиками (по 500 ОД / мл пеніциліну і стрептоміцину) або заморожують при мінус 20 ° С. На дослідження направляють від кожної тварини не менше 5 мл сироватки в термосі з льодом.

У лабораторії сироватку досліджують за допомогою реакції радіальної иммунодиффузии (РРІД) і реакції непрямої імунофлуоресценції (НРІФ).

РРІД. Суть реакції полягає у формуванні зони специфічної преципітації вірусних антигенів антитілами, включеними до складу агарового гелю. РРІД тіпоспеціфічна.

Для постановки реакції розплавлений 2%-ний агар змішують з рівним об'ємом нагрітої до 50-55 ° С випробуваної сироватки в розведеннях 1:5,1:10,1:20 і т.д. до 1: 320 і наносять по 4 мл на предметне скло. У застиглому агарі вирізують лунки (діаметром 4-7,7 мм), які заповнюють еталонними типовими антигенами. Потім скла поміщають у вологу камеру при температурі 37 ° С. Результати враховують через 6-7 год і остаточно через 18 ч.

Позитивна реакція характеризується утворенням кільця преципітації у вигляді опалесцентний зони навколо лунки з антигеном, гомологічним збудника, який викликав захворювання.

Антитіла, виявлені в випробуваної пробі сироватки, відносять до того серотипу, з антигеном якого вони дали позитивну реакцію. Їх титром вважають максимальне розведення випробуваної сироватки, з яким спостерігається позитивна реакція.

Після переболевания тварин титри антитіл зазвичай перевищують 1: 160.

НРІФ. Дана реакція заснована на тому, що наявність антитіл у сироватці крові перехворілих тварин виявляє специфічне світіння (комплексу антиген + антитіло), а при використанні сироваток від вакцинованих тварин світіння комплексу не спостерігається.

Техніка постановки полягає в наступному. На препарат з культури клітин ВНК-21, ВЕК, ПЕМ, інфікованих вірусом ящура будь-якого типу, наносять випробувану сироватку в розведенні 1:10 і 1:20; інкубують у вологій камері при 37 ° С 30 хв; відмивають незв'язані антитіла; підсушують на повітрі і забарвлюють сумішшю робочих розведень флуоресціює антивидові сироватки і бичачого альбуміну, міченого родаміном; Інкубують у вологій камері при 37 ° С 30 хв; відмивають; підсушують і переглядають під люмінесцентним мікроскопом (об'єктив х40, окуляр х4 або х5). Позитивна реакція характеризується зеленим або з рудно-зеленим світінням цитоплазми клітин.

Діагностичний результат вважають позитивним при виявленні специфічного світіння хоча б в одній з 5-10 сироваток, надісланих з даного господарства.

Для визначення рівня виявлених таким чином антитіл у випробуваної сироватці проводять її титрування. Для цього випробуваний сироватку розводять від 1: 40 до 1: 1280, і кожним розведенням обробляють завідомо інфікований препарат, як було зазначено вище. Про титрі постінфекційний антитіл у сироватці судять за граничним її розведення, яке здатне давати позитивну НРІФ. Наявність специфічного світіння в препаратах, оброблених випробуваної сироваткою в розведеннях 1:10, 1:20 і 1:40, свідчить про те, що сироватка була отримана в період гострого переболевания тваринного ящуром, тобто з моменту його захворювання пройшло близько 7 днів, а наявність специфічного світіння в розведеннях 1: 80 і вище - про те, що сироватка взята від тварини-реконвалесцента.

Результати дослідження на ящур оформляють у вигляді протоколу, в якому вказують дату дослідження, найменування господарства, матеріалу, короткі епізоотологичеськие дані і т.д. і обов'язково найменування компонентів, що використовуються в дослідженні, характеристику контролів.

Необхідно відзначити, що для індикації та типування вірусу ящура розроблено багато інших методів, таких, як ПЦР, РНГА, ІФА, метод перехресного імунітету та ін; для виявлення та типування антитіл - РН, РНГА, реакція серозащіти на мишенят-сосунов та ін

Диференціальна діагностика. Необхідно виключити інші захворювання тварин з везикулярним синдромом, такі, як ВД, ІРТ, везикулярний стоматит, у свиней - везикулярне хвороба, везикулярне екзантему, у овець - катаральну лихоманку.

Імунітет і специфічна профілактика.

Тривалість імунітету у тварин, що перехворіли ящуром, становить 8-12 міс., У свиней - 10-12, у овець - 18 міс. При дуже напруженому імунітет може спостерігатися деяка стійкість до зараження гетерологічние типом вірусу. При ящуре виникає тканинної і гуморальний імунітети. Основне значення в захисті тварин від захворювання належить гуморальним факторам імунітету. Для специфічної профілактики ящуру застосовують інактивовані вакцини. У нашій країні знайшли широке застосування наступні 3 вакцини: лапінізірованная гідроокісьалюмініевая сапонінформолвакціна, яку готують з вірусу, репродукованого в організмі новонароджених кроленят; гідроокісьалюмініевая сапонінформолвакціна з вірусу, що культивується у тканини слизової оболонки мови.

Для свиней використовують протівоящурную емульгованих вакцину з лапінізірованного вірусу.

Імунітет після вакцинації у дорослих тварин триває 4 - 6 міс. Після ревакцинації імунітет більш напружений і тривалий.

Молодняк, що народився від імунних тварин, отримує пасивно антитіла з молозивом. Антитіла у телят зберігаються протягом 5 міс., Хоча пасивний захист триває до 3-4 міс.

Інактивовані вакцини можуть бути моно-або полівалентними, тобто містити антигени одного чи багатьох типів і варіантів вірусу. Живі вакцини проти ящуру не розроблені. Проводяться дослідження з розробки та використання синтетичних вакцин, а також молекулярних вакцин, отриманих за допомогою методів генної інженерії.

Культивування вірусів в культурі клітин

Культури клітин і тканин - це шматочки органів і тканин, вирощених у живильному середовищі поза організмом, зберігають життєздатність, а деякі розмножуються.

Для культивування необхідні:

- Початковий матеріал (тканини ембріонів, клітини нирки, шкіри, селезінки). Обов'язкове дотримання правил асептики і антисептики;

- Температура повинна бути 36 -38 градусів Цельсія;

- Живильне середовище, яка повинна мати буферність і ізотонічностью, тобто включати в себе Na, K, Ca, Mg, Cl, фосфати, карбонати;

- РН середовища повинна бути 7,2 - 7,4 одиниць;

- Всі поживні елементи, особливо глюкоза, яка відповідає за енергетичний обмін;

- Амінокислоти;

- Вітаміни, які є ко-ферментами.

Середовища бувають двох видів:

  1. натуральні або природні (кров, амніотична рідина);

  2. синтетичні і напівсинтетичні (з хімічних речовин, сольові розчини - розчин Ерла і розчин Хенкса)

Методика зводиться до наступного:

1. підбору культури клітин;

2. отриманню вірус - містить матеріалу;

3. підготовці для зараження;

4. зараження клітин віруссодержащім матеріалом;

5. культивування вірусу в клітинах;

6. індикації вірусу в культурі клітин;

7. збору культуральної рідини та ідентифікації в ній вірусу.

Підбір культур клітин. Не всяка клітина чутлива до будь-якого вірусу. Вірус до первинної культурі звичайно успішно адаптується за умови, якщо культура отримана з органів тварини, природно сприйнятливого до даного вірусу. Проте адаптація вірусу до перещеплюваних клітин більш складна, а в ряді випадків нездійсненна. Для культивування деяких вірусів до цих пір невідомо жодної клітинної системи. Для культивування вірусу використовують зазвичай молоді клітини, тобто в перший день формування моношару, а в деяких випадках (для парвовирусов свиней) клітини заражають при їх посіві, так як вірус інтенсивно розмножується при наявності клітин, які діляться (коли вони знаходяться в стадії логарифмічного росту).

Зараження клітин.

Для цього відбирають пробірки (або матраци) із суцільним клітинним монослоем, переглядаючи їх під малим збільшенням мікроскопа. Ростову живильне середовище зливають, клітини 1-2 рази промивають розчином Хенкса, щоб видалити сироваткові антитіла та інгібітори. У кожну пробірку вносять по 0,1-0,2 мл віруссодержащего матеріалу і погойдуванням розподіляють його рівномірно по шару клітин. У такому вигляді пробірки (матраци) залишають від 1 до 2 год при 22 або 37 ° для адсорбції вірусу на поверхні клітин. Потім віруссодержащій матеріал видаляють з пробірок (матраців) і наливають підтримуючу середовище (в пробірку 1-2 мл, в матраци близько 10% його обсягу). При виділенні вірусу з патологічного матеріалу деякі проби (фекалій тощо) можуть надавати токсичну дію на клітини, тому після адсорбції вірусу моношар клітин відмивають 1-2 рази розчином Хенкса (або живильним середовищем) і потім наливають підтримуючу середу.

Культивування вірусу.

Пробірки (матраци) закривають герметично гумовими пробками і ставлять на інкубацію в термостат при 37 ° С. Найбільш широко застосовують стаціонарне инкубирование. При цьому матраци кладуть в горизонтальному положенні, пробірки - під кутом 5 ° так, щоб моношар клітин опинився під живильним середовищем (рисою вгору). У ряді лабораторій заражені культури клітин інкубують на обертається системі - ролерів. Використовуючи цей метод, вдається отримувати великий вихід вірусу, що має більш високий інфекційний титр, ніж при стаціонарному культивуванні.

Для кожної проби матеріалу зазвичай використовують не менш 4-10 пробірок з культурою клітин. Для контролю залишають 4-6 пробірок з незараженной культурою клітин, в яких замінюють ростовую середу на підтримуючу.

У культурах клітин, заражених вірусом, живильне середовище можна не змінювати протягом 7 днів, а рН середовища (6,9-7,4) підтримувати за допомогою 7,5%-ного розчину бікарбонату натрію. При більш тривалому культивуванні інфікованих клітин (аденовіруси та ін) середовище змінюють.

Всі пробірки (матраци) після зараження клітин щоденно досліджують під малим збільшенням мікроскопа, порівнюючи культури клітин, заражені вірусом, з контрольними.

У термостаті адсорбувався на клітинах вірусні частинки проникають всередину їх і починається їх репродукція. Нові вірусні частки залишають (повністю або частково) клітини, в яких вони утворилися, проникають в неуражені клітини, репродукуються в них, переходять у нові клітини і вражають їх. Так продовжується до тих пір, поки є живі неушкоджені клітини. У результаті цього процесу практично всі клітини в матраці або пробірці вражаються вірусом, хоча абсолютно все майже ніколи не уражаються.

Вірус накопичується в основному в культуральній рідині, але частина віріонів може залишатися і всередині не зруйнованих вірусом клітин. Щоб залишився в клітинах вірус звільнити, клітини ретельно руйнують чи багаторазовим заморожуванням - відтаванням (2-3 рази), або за допомогою ультразвуку.

Індикація (виявлення) вірусу в культурі клітин.

Існують такі основні методи індикації вірусу в культурі клітин: за цитопатичної ефекту, або цитопатичної дії (ЦПЕ, ЦПД); по позитивної реакції гемадсорбції (РГАДА); по утворенню бляшок; з виявлення внутрішньоклітинних включень; з виявлення вірусів в реакції імунофлуоресценції (РІФ); з виявлення інтерференції вірусів; з придушення метаболізму клітин (кольорова проба); електронною мікроскопією та ін

Найбільш широко і часто про розмноження вірусу в культурі клітин судять по цитопатичної ефекту, або цитопатичної дії. ЦПД називаються будь-які зміни клітин під впливом розмножується в культурі клітин вірусу. Фізіологічні зміни клітин встановити досить складно, а морфологічні зміни виявляються досить легко. Для цього достатньо покласти на предметний столик мікроскопа пробірку або матрац шаром клітин вгору і, використовуючи малу збільшення (об'єктив х8-10, окуляр х7-10), оглянути шар. Корисно порівняти клітини, заражені вірусом, з такими ж клітинами в пробірці, не подвергавшимися зараженню. У цьому випадку практично будь-які спостерігаються в мікроскоп відмінності зараженої культури клітин від контрольної можна вважати проявом ЦПД. Ці відмінності можуть захоплювати весь моношар або відзначатися тільки у вигляді невеликих вогнищ змінених клітин у шарі нормальних клітин. Інтенсивність ЦПД виражається тим, яка частина клітинного моношару змінена вірусом. Хоча загальноприйнятої системи оцінки інтенсивності ЦПД немає, її часто оцінюють у хрестах чи балах. Так, якщо зміні (у порівнянні з контролем) піддався весь моношар в пробірці або матраці, ЦПД оцінюють на чотири хрести, якщо 3 / 4 - на 3 хреста, якщо 1 / 2 - на 2 хрести, 1 / 4 - на один хрест. Але ці оцінки все ж досить умовні.

Форми ЦПД залежать від біологічних властивостей вірусу, виду клітин, дози зараження, умов культивування і т.д. Одні віруси виявляють ЦПД через 2-3 доби. після зараження (ентеровіруси), інші - через 1-2 тижні. (Аденовіруси).

Фрагментація - руйнування клітин на окремі фрагменти, які відокремлюються від скла і переходять у культуральне рідина у вигляді клітинного детриту (вірус везикулярного стоматиту).

Округлення - втрата клітинами здатності прикріплятися до скла, внаслідок чого клітини, зазвичай розпластані по склу, беруть кулясту форму, відокремлюються від скла і вільно плавають у культуральної рідини, де і гинуть (ентеровіруси, аденовіруси та ін.)

Сімпластообразованіе - розчинення клітинних оболонок, внаслідок чого цитоплазми сусідніх клітин зливаються, утворюючи одне ціле, в якому розташовуються (головним чином по периферії) ядра клітин. Такі утворення з цитоплазматичної маси з багатьма клітинними ядрами називаються симпластом (гігантські багатоядерні клітини). Їх утворення пояснюють двояко: порушенням процесу поділу клітин під впливом вірусу або тим, що деякі віруси містять фермент (лецитиназу), що розчиняє клітинні оболонки, в результаті цитоплазми розташованих поруч клітин зливаються. ЦПД в культурі клітин здатне викликати більшість вірусів, тому цей метод індикації вірусів в культурі клітин застосовують дуже широко. Однак є віруси, які, розмножуючись в культурі клітин, ЦПД не викликають (віруси сказу, класичної чуми свиней, деякі штами вірусу діареї великої рогатої худоби та ін.) Клітини залишаються життєздатними, але інтенсивність клітинного ділення знижується, з часом змінюється і їх морфологія.

При неопластичної трансформації уражених клітин в монослое утворюються щільні фокуси трансформації різної величини і форми, білого кольору (вірус саркоми Рауса).

Відсутність ЦПД у першому пасажі ще не говорить про відсутність вірусу, який не завжди розмножується настільки швидко, щоб викликати яскраво виражене ЦПД. Тому й вдаються до «сліпим» пасажів. Необхідно провести не менше трьох «сліпих» пасажів, перш ніж судити про наявність вірусу в досліджуваному матеріалі.

Список літератури.

  1. Р.В. Білоусова, Е.А Преображенський, І.В. Третьякова «Ветеринарна вірусологія» - М.: Колос, 2007 р.

  2. В.Н. Сюрін, Р.В. Білоусова, І.В. Фоміна «Ветеринарна вірусологія» - М.: ВО «Агропромиздат», 1991 р.

  3. Р.В. Білоусова, Н.І. Троценко, Е.А. Преображенська «Практикум з ветеринарної вірусології» - М.: Колос, 2006 р.

Додати в блог або на сайт

Цей текст може містити помилки.

Сільське, лісове господарство та землекористування | Курсова
142.6кб. | скачати


Схожі роботи:
Література - Інфекційні хвороби ВІРУСНІ ГЕПАТИТИ
Шкідники нирок і квіток на плодових культурах Вірусні хвороби зерняткових і агротехнічні
Продуктивність сільськогосподарських тварин
Захворювання сільськогосподарських тварин
Отруєння сільськогосподарських тварин
Екстер`єр сільськогосподарських тварин
Фізіологія сільськогосподарських тварин 2
Фізіологія сільськогосподарських тварин
Анатомія сільськогосподарських тварин
© Усі права захищені
написати до нас