Активність основних карбоксипептидази при дії нейролептиків

[ виправити ] текст може містити помилки, будь ласка перевіряйте перш ніж використовувати.

скачати


ЗМІСТ

СПИСОК СКОРОЧЕНЬ

ВСТУП

РОЗДІЛ 1. ОГЛЯД ЛІТЕРАТУРИ

  1. 1.1. Вплив психолептиків на пептідергіческіе системи

  2. 1.1.1. Нейропептиди при дії діазепаму

  3. 1.1.2. Нейропептиди при дії галоперидолу

  4. 1.2. Основні карбоксипептидази та їх роль у процессингу регуляторних пептидів

  5. 1.2.1. Протеолітичні ферменти обміну регуляторних пептидів при дії психолептиків

  6. 1.2.2. Карбоксипептидаза Н

  7. 1.2.3. Карбоксипептидаза М

  8. 1.2.4. ФМСФ-інгібіруемая карбоксипептидаза

  9. РОЗДІЛ 2. МАТЕРІАЛИ І МЕТОДИ ДОСЛІДЖЕННЯ

  10. 2.1. Матеріали дослідження

  11. 2.1.1. Схема експерименту

  12. 2.2. Методи дослідження

  13. 2.2.1. Метод визначення активності карбоксипептидази Н

  14. 2.2.2. Метод визначення активності карбоксипептидази М

  15. 2.2.3. Метод визначення активності ФМСФ-інгібіруемой карбоксипептидази

  16. 2.2.4. Статистична обробка результатів дослідження

  17. 3. РЕЗУЛЬТАТИ ДОСЛІДЖЕННЯ

  18. 3.1. Активність карбоксипептидази Н в тканинах щурів у нормі і при дії психолептиків

  19. 3.1.1. Розподіл активності карбоксипептидази Н в тканинах інтактних щурів

  20. 3.1.2. Вплив фізіологічного розчину на активність карбоксипептидази Н в тканинах щурів

  21. 3.1.2.1. Вплив одноразового введення фізіологічного розчину на активність карбоксипептидази Н в тканинах щурів

  22. 3.1.2.2. Вплив хронічного введення фізіологічного розчину на активність карбоксипептидази Н в тканинах щурів

  23. 3.1.3. Активність карбоксипептидази Н в тканинах щурів при введенні діазепаму

  24. 3.1.3.1. Вплив одноразового введення діазепаму на активність карбоксипептидази Н в тканинах щурів

  25. 3.1.3.2. Вплив хронічного введення діазепаму на активність карбоксипептидази Н в тканинах щурів

  26. 3.1.4. Активність карбоксипептидази Н в тканинах щурів при введенні галоперидолу

  27. 3.1.4.1. Вплив одноразового введення галоперидолу на активність карбоксипептидази Н в тканинах щурів

  28. 3.1.4.2. Вплив хронічного введення галоперидолу на активність карбоксипептидази Н в тканинах щурів

  1. 3.2. Активність ФМСФ-інгібіруемой карбоксипептидази в тканинах щурів у нормі і при дії психолептиків

  2. 3.2.1. Розподіл активності ФМСФ-інгібіруемой карбоксипептидази в тканинах інтактних щурів

  3. 3.2.2. Активність ФМСФ-інгібіруемой КП в тканинах щурів при введенні фізіологічного розчину

  4. 3.2.2.1. Вплив одноразового введення фізрозчину на активність ФМСФ-інгібіруемой КП в тканинах щурів

  5. 3.2.2.2. Вплив хронічного введення фізіологічного розчину на активність ФМСФ-інгібіруемой КП в тканинах щурів

  6. 3.2.3. Активність ФМСФ-інгібіруемой КП в тканинах щурів при введенні діазепаму

  7. 3.2.3.1. Вплив одноразового введення діазепаму на активність ФМСФ-інгібіруемой КП в тканинах щурів

  8. 3.2.3.2. Вплив хронічного введення діазепаму на активність ФМСФ-інгібіруемой КП в тканинах щурів

  9. 3.2.4. Активність ФМСФ-інгібіруемой КП в тканинах щурів при введенні галоперидолу

  10. 3.2.4.1. Вплив одноразового введення галоперидолу на активність ФМСФ-інгібіруемой КП в тканинах щурів

  11. 3.2.4.2. Вплив хронічного введення галоперидолу на активність ФМСФ-інгібіруемой КП в тканинах щурів

  12. 3.3. Активність карбоксипептидази М в тканинах щурів у нормі і при введенні психолептиків

  13. 3.3.1. Розподіл активності карбоксипептидази М в тканинах інтактних тварин

  14. 3.3.2. Активність карбоксипептидази М в тканинах щурів при введенні фізіологічного розчину

  15. 3.3.2.1. Вплив одноразового введення фізрозчину на активність карбоксипептидази М в тканинах щурів

  16. 3.3.2.2. Вплив хронічного введення фізіологічного розчину на активність карбоксипептидази М в тканинах щурів

  17. 3.3.3. Активність карбоксипептидази М в тканинах щурів при введенні діазепаму

  18. 3.3.3.1. Вплив одноразового введення діазепаму на активність карбоксипептидази М в тканинах щурів

  19. 3.3.3.2. Вплив хронічного введення діазепаму на активність карбоксипептидази M в тканинах щурів

  20. 3.3.4. Активність карбоксипептидази М в тканинах щурів при введенні галоперидолу

  21. 3.3.4.1. Вплив одноразового введення галоперидолу на активність карбоксипептидази М в тканинах щурів

  22. 3.3.4.2. Вплив хронічного введення галоперидолу на активність карбоксипептидази М в тканинах щурів

  23. 3.4. Активність основних карбоксипептидази in vitro при дії психолептиків

  24. ГЛАВА 4. ОБГОВОРЕННЯ РЕЗУЛЬТАТІВ

  25. ВИСНОВКИ

  26. ЛІТЕРАТУРА

СПИСОК СКОРОЧЕНЬ

АКТГ - адренокортикотропний гормон

АПМЯК - аминопропилмеркаптоянтарная кислота

АПФ - ангиотензинпревращающий фермент

БД-рецептори - бензодіазепінових рецепторів

ГАМК - γ-аміномасляна кислота

ГТ-Рг - гонадотропін-рилізинг гормон

ГПЯК - гуанідінопропілянтарная кислота

ГЕМЯК - гуанидиноэтилмеркаптоянтарная кислота

ДА-рецептор - дофаміновий рецептор

DBI - інгібітор зв'язування діазепаму

ДСІП - дельта-сон індукуючий пептид

КП - карбоксипептидаза

КПА - карбоксипептидаза А

КПВ - карбоксипептидаза У

КПM - карбоксипептидаза M

– карбоксипептидаза N КП N - карбоксипептидаза N

КП Н - карбоксипептидаза Н

КРФ - кортикотропін-рилізинг фактор

МСГ - меланоцітстімулірующій гормон

ODN - октадеканейропептід

ПБР - периферичний бензодіазепінових рецепторів

ПОМК - проопиомеланокортина

ПХМБ - п-хлормеркурійбензоат

– триаконтатетранейропептид TTN - тріаконтатетранейропептід

ФМСФ - фенілметілсульфонілфторід

ФМСФ-КП - фенілметілсульфонілфторід-інгібіруемая карбокси-пептідаза

ЕДТА - етілдіамінтетрауксусная кислота

ВСТУП

Психічні захворювання займають в сучасній медицині досить велику нішу хвороб людини. Їх можна віднести до групи найбільш важко виліковних. Враховуючи високий ризик виникнення психічних розладів, в тому числі через зростання в сучасному світі різних стресових впливів, екологічних факторів, актуальною є проблема профілактики і лікування патології нервової системи.

У психофармакології використовують препарати, що діють на медіаторні системи [39, 107, 328]. Загальновизнано, що галоперидол є анатгоністом дофамінових, а діазепам - агоністом бензодіазепінових рецепторів [39, 169, 310]. Проте різноманіття фармакологічних ефектів цих препаратів важко пояснити тільки із цієї позиції. Останнім часом обговорюється питання про участь пептідергіческой системи в механізмах дії психолептиків [120, 173, 174]. Встановлено при цьому, що введення галоперидолу та діазепаму призводить до порушення балансу ряду пептидів, що беруть участь у розвитку стрес-реакції (АКТГ, енкефалінів, речовини Р) [95, 263], психічних хвороб (кортикотропін-рилізинг фактору, нейротензин, речовини Р, холецистокініну ) та інших регуляторних пептидів [164, 193, 228]. Проте механізм впливу психолептиків на рівень біологічно активних пептидів до цих пір залишається невивченим.

Зміст регуляторних пептидів в організмі залежить від співвідношення швидкостей їх синтезу і розпаду [184, 196]. Нейропептиди синтезуються у вигляді високомолекулярних попередників, які активуються при обмеженому розщепленні пептид-гідролазами (процессингу) [106, 166, 184, 196, 309]. У кінцевій стадії процесингу беруть участь основні карбоксипептидази, каталізують відщеплення залишків аргініну і лізину з С-кінця попередників регуляторних пептидів [9, 26, 147, 311]. Одним з основних ферментів, які беруть участь у синтезі таких нейропептидів як АКТГ [128, 175], енкефаліни [147, 148], речовина P [104], гормон росту [103], пролактин [103] є карбоксипептидаза Н (КФ 3.4.17.10) . Відомо також, що в обмін енкефалінів та інших нейропептидів в організмі втягується карбоксипептидаза М (КФ 3.4.17.12) [118]. Вона бере участь в інактивації або модуляції активності пептидних гормонів до або після їх взаємодії з рецепторами [301]. Разом з тим припускають, що функції нещодавно виявленої ФМСФ-інгібіруемой карбоксипептидази схожі з такими КП Н [9, 26]. Однак біологічна роль цього ферменту практично залишається неясною.

Таким чином, вивчення активності КП Н, ФМСФ-КП та КП М у відділах мозку та органах щурів при введенні психолептиків може сприяти уточненню біологічної ролі цих ферментів, а також з'ясування молекулярних механізмів взаємодії дофамін-та ГАМК-ергіческіх систем з пептідергіческой.

Метою цієї роботи було з'ясування ролі основних карбоксипептидази (карбоксипептидази Н, фенілметілсульфонілфторід-інгібіруемой карбоксипептидази і карбоксипептидази М) в механізмах дії психолептиків на пептідергіческую систему.

При виконанні роботи були поставлені наступні завдання:

1. Дослідження гострого введення діазепаму і галоперидолу на активність карбоксипептидази Н, фенілметілсульфонілфторід-інгібіруемой карбоксипептидази і карбоксипептидази М в головному мозку, надниркових і сім'яниках щурів через різні проміжки часу.

2. Вивчення зміни активності досліджуваних карбоксипептидази в тканинах самців щурів через різні терміни після хронічного введення діазепаму і галоперидолу.

3. при действии аналогичных доз данных препаратов. Дослідження активності карбоксипептидази Н, ФМСФ-інгібіруемой карбоксипептидази і карбоксипептидази М in vitro при дії аналогічних доз даних препаратів.

Наукова новизна і практична цінність роботи. Вперше вивчено вплив галоперидолу та діазепаму на активність ВПП, ФМСФ-КП і КПМ в тканинах щурів. Показано, що активність ферментів різним чином змінюється у відділах мозку та органах тварин при гострому та хронічному введенні досліджуваних психолептиків. Встановлено залежність зміни активності досліджуваних ферментів від часу після введення препаратів.

Отримані результати становлять інтерес для розуміння механізмів функціонування пептідергіческіх систем і ролі основних карбоксипептидази в реалізації цих механізмів при введенні психолептиків. Отримані дані можуть бути використані при розробці фармакологічних препаратів для корекції діяльності пептідергіческіх систем при психічних захворюваннях.

Апробація роботи. Матеріали дисертації докладені: на науковій конференції Російської Академії Природознавства «Фундаментальні і прикладні проблеми медицини та біології» (Туніс, червень, 2005 р.), на V Сибірському фізіологічному з'їзді (Томськ, червень-липень 2005 р.), на міжнародній конференції «нейроспецифічних метаболіти і ензимологічні основи діяльності центральної нервової системи» (Пенза, вересень 2006 р.) та на підсумкових наукових конференціях ПДПУ (2004, 2005 рр..). За темою дисертації опубліковано 6 робіт.

глава), материалов и методов исследования ( II глава), результатов ( III глава), обсуждения ( IV глава), выводов. Структура та обсяг дисертації. Дисертація викладена на 156 сторінках машинописного тексту і складається з 6 розділів: вступу, огляду літератури за темою дисертації (I розділ), матеріалів і методів дослідження (II голова), результатів (III розділ), обговорення (IV розділ) , висновків. Робота ілюстрована 6 рисунками, 19 таблицями та 1 схемою. Список літератури містить 336 найменувань російською та іноземними мовами.

РОЗДІЛ 1. ОГЛЯД ЛІТЕРАТУРИ

1.1. Вплив психолептиків на пептідергіческіе системи

1.1.1. Нейропептиди при дії діазепаму

Діазепам (7-хлор-1 ,3-дигідро-1-метил-5-феніл-2Н-1 ,4-бензодіазепін-2-он) є класичним транквілізатором, який проявляє анксіолітичний, седативний, снодійний, міорелаксуючої, протисудомний і інші ефекти [39]. Бензодіазепіни були введені в клінічну практику близько 40 років тому і до цих пір знаходять широке застосування [52]. У 1977 р. було виявлено, що бензодіазепіни взаємодіють з безодіазепіновимі рецепторами, які, як виявилося, були невід'ємною частиною ГАМК A-рецептора [163]. Комплекс рецептора був ізольований і секвенований в 1987 р. [249].

Найбільша щільність бензодіазепінових рецепторів виявлена ​​в корі великих півкуль, потім у гіпокампі, мозочку, гіпоталамусі, стріатумі, середньому мозку [40, 218, 222]. По ряду фармакологічних і біохімічних властивостей бензодіазепінових рецепторів можна розділити на центральні і периферичні: центральні знайдені тільки в головному мозку, а периферійні - як у мозку, так і в інших органах [40, 152, 276]. Найбільша щільність периферичних бензодіазепінових рецепторів виявлена ​​в корі надниркових залоз [40]. периферические бензодиазепиновые рецепторы, в отличие от центральных, не связаны с ГАМК-рецепторами [267]. Згідно з результатами дослідів in vitro периферичні бензодіазепінових рецепторів, на відміну від центральних, не пов'язані з ГАМК-рецепторами [267].

У головному мозку бензодіазепінових рецепторів локалізовані на постсинаптичних мембранах ГАМК-ергіческіх систем і входять до складу ГАМК А-бензодіазепін-іонофорного комплексу, що складається з трьох компонентів: бензодіазепінового рецептора, ГАМК-рецептора і хлорного каналу [267, 325]. Робота всього комплексу спрямована на відкривання хлорних каналів, опосередковувані ГАМК-рецептором. Класичні бензодіазепіни в клінічному використанні збільшують ефективність ГАМК, знижуючи концентрацію, необхідну для відкриття каналу.

ионов [249]. ГАМК А-бензодіазепінових рецепторів складається з п'яти білкових субодиниць, розташованих подібно розетки навколо центрального каналу і пронизують мембрану клітини, непроникну для Cl - іонів [249]. Аналіз літературних даних [74, 121, 249] показує, що активна форма ГАМК А-бензодіазепінового рецептора представлена ​​двома α-субодиницями, двома β-субодиниця і однієї γ-субодиницею. Вважають, що α-субодиниця пов'язує бензодіазепіни, а β-субодиниця - ГАМК [121, 249]. γ-субодиниця, мабуть, не пов'язує бензодіазепіни і ГАМК, але вона може впливати на здатність α-і β-субодиниць до рецепції «своїх» лігандів. . Таким чином, ГАМК, зв'язуючись з β-субодиницею, викликає конформаційні зміни білків іонофорного каналу, що призводять до посилення струму Cl -. Алостеріческая модуляція цих змін обумовлена ​​зв'язуванням лігандів з α-субодиницею рецептора [74, 249].

Наявність на синаптичних мембранах нервових клітин високоаффінних місць зв'язування для бензодіазепінів свідчило про існування ендогенного ліганда цих рецепторів. Costa з співробітниками виділили спочатку з мозку щура, а потім і людини білок, здатний інгібувати зв'язування [3 Н]-діазепаму з синаптичними мембранами [112, 133]. 9000, который был назван DBI – ингибитор связывания диазепама (англ. diazepam binding inhibitor ). Було визначено, що ендогенний ліганд являє собою поліпептид з Mr 9000, який був названий DBI - інгібітор зв'язування діазепаму (англ. diazepam binding inhibitor). преобладают основные аминокислоты, N -конец пептида защищен; С-конец определяет биологическую активность при взаимодействии пептида с рецептором [77]. DBI является предшественником ряда биологически активных пептидов, главные из которых DBI 33-50, или октадеканейропептид ( ODN ), DBI 17-50, или триаконтатетранейропептид ( TTN ) и DBI 26-50, или эйкозапентанейропептид ( EPN ). У структурі DBI переважають основні амінокислоти, N-кінець пептиду захищений; С-кінець визначає біологічну активність при взаємодії пептиду з рецептором [77]. DBI є попередником ряду біологічно активних пептидів, головні з яких DBI 33-50, або октадеканейропептід (ODN), DBI 17-50, або тріаконтатетранейропептід (TTN) і DBI 26-50, або ейкозапентанейропептід (EPN). и его фрагменты объединяют термином эндозепины. Всі ці пептиди містять однакову послідовність на С-кінці: Глн-Ала-Тре-Вал-гли-АСП-Вал-АСН-Тре-АСП-Арг-Про-гли-Лей-Лей-АСП-Лей-Ліз [112]. DBI і його фрагменти об'єднують терміном ендозепіни. Вони є негативними аллостеріческій модуляторами ГАМК А-рецептора, що знижують ефективність взаємодії ГАМК з рецептором [8, 112], і відносяться до анксіогенним сполукам, що підсилює стан тривоги, страху і «проконфліктние» відповіді в тесті Фогеля [8, 152].

Ендозепіни знайдені в тканинах людини, пацюки, свині, бика, жаби Rana ridibunda, форелі [209, 264, 320]. (10 - 50 мМ) в коре больших полушарий, гиппокампе, мозжечке, гипоталамусе, миндалине [72, 113]. Імунногісто-хімічне картування мозку щура показало найбільші концентрації DBI (10 - 50 мМ) у корі великих півкуль, гіпокампі, мозочку, гіпоталамусі, мигдалині [72, 113]. У людини найвищі концентрації були знайдені в мозочку, мигдалині, гіпокампі, гіпоталамусі і чорній речовині, а також у спинному мозку і спинномозкової рідини [133]. На клітинному рівні, DBI був виявлений в нейронах і клітинах глії, тоді як ODN і TTN були головним чином знайдені в нейронах [61, 113, 320]. Найбільш високі рівні мРНК DBI були знайдені в мозочку і епендима третього шлуночка мозку щура, проміжні рівні - в нюхової цибулини, дугоподібному ядрі, епіфізі і гіпофізі [62].

За допомогою електронної мікроскопії показано присутність ODN в перікаріоне нейронів, ЕПР, апараті Гольджі, мікротрубочки, вільних рибосомах [61]. и ODN накапливаются в синаптических везикулах [61, 132]. У закінченні нейронів DBI і ODN накопичуються в синаптичних везикулах [61, 132]. высвобождаются ГАМК и энкефалины, что указывает на их сосуществование в одном пресинаптическом окончании. При деполяризації синаптичних закінчень під дією К + одночасно з DBI вивільняються ГАМК та енкефаліни, що вказує на їх співіснування в одному пресинаптическом закінчення. зависит от присутствия Са 2+ [132]. К +-стимульоване викид DBI залежить від присутності Са 2 + [132].

Є дані, згідно з якими ендозепіни впливають на ріст клітин глії через аутокринно механізми [149]. стимулировали синтез ДНК в глиальных клетках крысы, действуя через центральный тип бензодиазепиновых рецепторов. Низькі концентрації ODN (10 -10 -10 -14 М) in vitro стимулювали синтез ДНК в гліальних клітинах щура, діючи через центральний тип бензодіазепінових рецепторів.

и его производные широко распространены в тканях, содержащих периферические бензодиазепиновые рецепторы и участвующие в липидном обмене [55, 88, 108, 128]. DBI і його похідні широко поширені в тканинах, що містять периферичні бензодіазепінових рецепторів і беруть участь у ліпідному обміні [55, 88, 108, 128]. Найбільша концентрація ендозепінов виявлена ​​в клітинах надниркових залоз, печінки, сім'яників, нирок [63, 72, 113]. Кількість ODN в цих тканинах становить 400-800 пмоль / г сирої маси [8]. Крім того, ендозепіни виявлено у клітинах Шванна [63]. в периферических органах крысы [62, 91] и человека [252] позволяет заключить, что эндозепины синтезируются и в периферических тканях. Присутність мРНК DBI в периферичних органах щури [62, 91] і людини [252] дозволяє зробити висновок, що ендозепіни синтезуються і в периферичних тканинах. выполняет иные функции, чем в нейронах: он не высвобождается из срезов периферических органов при деполяризации [132]. Тут DBI виконує інші функції, ніж у нейронах: він не вивільняється з зрізів периферичних органів при деполяризації [132]. Через рецептори, розташовані на мембрані мітохондрій, ендозепіни можуть здійснювати регуляцію внутрішньоклітинного метаболізму [96, 124]. транспортирует холестерол к внутренней мембране митохондрий [113]. Зокрема, DBI транспортує холестерол до внутрішньої мембрані мітохондрій [113]. с периферические бензодиазепиновыми рецепторами усиливает вход холестерола в митохондрии с последующим усилением синтеза предшественника стероидов прегненолона. Взаємодія DBI з периферичні бензодіазепіновими рецепторами посилює вхід холестеролу в мітохондрії з подальшим посиленням синтезу попередника стероїдів прегненолона. Цей процес спостерігається як в клітинах кори надниркових залоз [96, 113, 131], так і в гліальних клітинах мозку [113, 124]. У наднирниках це АКТГ-залежний процес. и белка, связывающего ацил-коэнзим А, выделенного из ткани печени [100, 113], указывает на способность DBI опосредовать синтез жирных кислот. Ідентичність DBI і білка, який зв'язує ацил-коензим А, виділеного з тканини печінки [100, 113], вказує на здатність DBI опосередковувати синтез жирних кислот. играет существенную роль в синтезе стероидных гормонов в различных тканях за счет регуляции лимитирующей стадии [202]. Таким чином, DBI грає істотну роль в синтезі стероїдних гормонів в різних тканинах за рахунок регуляції лімітуючої стадії [202].

Рівень DBI в наднирниках залежить від рівня АКТГ в організмі. Видалення гіпофіза у щурів викликало зменшення концентрації DBI і ПБР в наднирниках, введення АКТГ зменшило цей ефект, тобто існує позитивна кореляція між рівнем DBI і ПБР у надниркових і рівнем кортикостерону в плазмі крові [96, 131]. Можливо, що de novo синтез DBI в наднирниках є важливим чинником, опосредующим АКТГ-залежний стероїдогенез.

Локалізація бензодіазепінових рецепторів дозволяє припустити, що вони залучені в регулювання стрес-систем: 1) гіпоталамо-гіпофізаро-надниркової осі, 2) симпатичної нервової системи, 3) ренін-ангіотензинової системи і 4) нейроендокринної-імунної осі. Щільність ПБР найбільш висока в периферичних органах, які активізуються при стресі (серце, нирки, надниркові залози і легені). Збільшення кількості ПБР в мозку і периферичних тканинах при гострому стресі може забезпечити нервову і метаболічну підготовку організму для його подолання [270]. Крім того, при плавальному та операційному стресі відбувається збільшення щільності та ЦБР в корі великих півкуль [248, 270]. Різні види стресу викликали збільшення рівня DBI у надниркових і гіпокампі щурів [24, 45, 131], а також рівень мРНК DBI в мозку миші [192]. Введення діазепаму відновлює рівень DBI [45]. Оскільки ліганди ПБР можуть регулювати транспорт холестерину в мітохондрії, то, можливо, збільшення синтезу і секреції глюкокортикоїдів при стресі опосередковується саме ПБР.

ГАМК-ергіческой система впливає на рівень регуляторних пептидів і їх попередників. Так, ГАМК виявляє тонізуючий інгібуючий вплив на ПОМК нейрони гіпоталамуса, а також на меланотропние клітини проміжної частки гіпофіза [83, 151]. Введення інгібіторів ГАМК-трансамінази протягом чотирьох днів призвело до збільшення рівня ГАМК в передній і проміжної частках гіпофіза, що, у свою чергу, викликало зменшення рівня мРНК ПОМК на 40-60% в проміжному, але не в передньому гіпофізі. Вже через добу після першої ін'єкції рівень ПОМК був зменшений на 40%, а концентрація α-меланоцітстімулірующего гормону збільшена на 34% по відношенню до контролю, можливо, через інгібування секреції гормону. Після 4 і 8 днів обробки рівень α-меланоцітстімулірующего гормону, також як і рівень мРНК ПОМК зменшився. ГАМК в концентрации 10 мкмоль/л уменьшила уровни мРНК ПОМК на 40 % после 3 дней обработки. У дослідах in vitro ГАМК у концентрації 10 мкмоль / л зменшила рівні мРНК ПОМК на 40% після 3 днів обробки. Ці результати показують, що ГАМК виявляє прямий інгібуючий ефект на експресію гена ПОМК в проміжній частці гіпофіза [213].

произвели дозозависимое ингибирование экспрессии гена ПОМК в промежуточном гипофизе крыс. Внутрішньовенна та интрацеребровентрикулярная ін'єкції ODN виробили дозозалежне інгібування експресії гена ПОМК в проміжному гіпофізі щурів. Подібні результати були отримані і в нейронах гіпоталамуса [108, 153]. в дозах 1 и 0,1 мкг/кг вызвала увеличение уровня мРНК ПОМК в гипоталамусе на 33,5 и 27,4%, соответственно [108]. Givalois и др. в подобных условиях получили уменьшение уровня мРНК ПОМК на 17 и 7% в передней и промежуточной долях гипофиза крыс соответственно [156]. Интрацеребровентрикулярная ін'єкція ODN в дозах 1 і 0,1 мкг / кг викликала збільшення рівня мРНК ПОМК в гіпоталамусі на 33,5 і 27,4%, відповідно [108]. Givalois та ін в подібних умовах отримали зменшення рівня мРНК ПОМК на 17 і 7% в передній і проміжної частках гіпофіза щурів відповідно [156]. Наведені дані показують, що активація ГАМК А-рецептора ендогенним бензодіазепіновими лігандом може інгібувати експресію гена ПОМК в гіпофізі і гіпоталамусі [151, 156]. : произошло увеличение уровня мРНК ПОМК в промежуточном и переднем гипофизе на 60 и 10% соответственно, по сравнению с контролем. Видалення наднирників призвело до зміни ефекту, викликаного ODN: відбулося збільшення рівня мРНК ПОМК в проміжному і передньому гіпофізі на 60 і 10% відповідно, у порівнянні з контролем. , наблюдаемого в контрольных животных. Видалення сім'яників викликало зменшення вмісту мРНК ПОМК в передній долі і збільшення в проміжній частці гіпофіза, але не змінило негативного впливу ODN, спостережуваного в контрольних тварин. уменьшение уровня мРНК ПОМК в гипофизе, вызванное эндогенными бензодиазепинами, модулируется гормонами надпочечников и половых желез [156]. Таким чином, in vivo зменшення рівня мРНК ПОМК в гіпофізі, викликане ендогенними бензодіазепінами, модулюється гормонами надниркових і статевих залоз [156].

-эндорфина в гипоталамусе, гиппокампе и коре головного мозга [193, 194]. Введення діазепаму (2 мг / кг) значно збільшило рівні β-ендорфіну в гіпоталамусі, гіпокампі та корі головного мозку [193, 194].

Гостра внутрішньочеревна ін'єкція діазепаму (2 мг / кг) інгібує діяльність гіпоталамо-гіпофізарно-наднирковозалозної самок щурів, тобто зменшує концентрацію АКТГ і кортикостерону [263]. Таку ж дію надає діазепам і на рівень АКТГ у плазмі людини [290]. ингибирует синтез кортизола и альдостерона в клетках надпочечников быка [170]. Holloway та інші показали, що діазепам in vitro інгібує синтез кортизолу та альдостерону в клітинах надниркових залоз бика [170]. Крім того, введення діазепаму стресованих тварин призводило до зменшення рівня кортикостерону, АКТГ і норадреналіну [51, 111, 316, 330].

, в дозах 0,1, 1 и 4 мкг/кг, уменьшил содержание мРНК кортикотропин-рилизинг гормона в гипоталамусе на 33, 18 и 26%, соответственно [106]. Зворотний агоніст бензодіазепінових рецепторів, ODN, в дозах 0,1, 1 і 4 мкг / кг, зменшив зміст мРНК кортикотропін-рилізинг гормону в гіпоталамусі на 33, 18 і 26%, відповідно [106]. и вызвало увеличение уровня мРНК кортикотропин-рилизинг гормона на 21%. Видалення наднирників змінило дію ODN і викликало збільшення рівня мРНК кортикотропін-рилізинг гормону на 21%. Можливо, це пов'язано з припиненням інгібуючого ефекту глюкокортикоїдів. . Кастрація не змінила інгібуючої дії ODN. , через активацию бензодиазепиновых участков ГАМК А -рецептора, отрицательно модулирует деятельность нейронов, синтезирующих КРФ, и что на этот процесс могут влиять центральные и периферические стероиды [155]. Ці результати показують, що ендогенний ODN, через активацію бензодіазепінових ділянок ГАМК А-рецептора, негативно модулює діяльність нейронів, які синтезують КРФ, і що на цей процес можуть впливати центральні і периферичні стероїди [155].

Ендозепіни впливають на репродуктивну систему на різних її рівнях. в дозе 3 мкг/кг вызвало 40%-ое уменьшение уровня мРНК ГнРф [119, 207]. Так, интрацеребровентрикулярное введення ODN в дозі 3 мкг / кг викликало 40%-не зменшення рівня мРНК ГнРф [119, 207]. Крім того, DBI (0,3-10 нмоль, інтрацеребровентрікулярно) зменшив рівні статевих гормонів у сироватці крові самців і самок мишей. Цей ефект спостерігався вже через 1 годину і тривав протягом чотирьох годин після ін'єкції. [123]. Ці результати припускають, що DBI діє як ендогенний модулятор, який регулює рівні статевих гормонів in vivo [123].

инкубация клеток гипофиза с ГАМК (10-100 мкM) вызвала дозозависимое уменьшение уровня мРНК пролактина. У дослідах in vitro інкубація клітин гіпофіза з ГАМК (10-100 мкM) викликала дозозалежне зменшення рівня мРНК пролактину. Інгібітори ГАМК А-рецептора запобігали дану дію. при введении ингибиторов трансаминазы. Такі ж результати були отримані і в дослідах in vivo при введенні інгібіторів трансамінази. Дані результати свідчать про ингибирующем вплив ГАМК на секрецію пролактину та експресію його гена в гіпофізі [213].

Зворотний агоніст ГАМК А-рецептора справив протилежний ефект на експресію гена пролактину. Так, интрацеребровентрикулярная ін'єкція ODN за 4 години до декапітації викликала збільшення рівня мРНК пролактину в гіпофізі самців щурів. Видалення наднирників призвело до збільшення рівня мРНК пролактину та посилення ефекту ODN. Автори припускають, що ендогенний ліганд ГАМК А-рецептора може стимулювати експресію гена пролактину і що в наднирниках синтезується фактор (и), здатний зменшити рівень мРНК пролактину [327].

Агоніст ГАМК А-рецептора, діазепам, введений внутрішньочеревно в дозі 5 мг / кг, збільшив концентрацію лютеїнізуючого та не вплинув на рівень фолікулостимулюючого гормонів у сироватці крові самців щурів [224].

Діазепам впливає на рівень енкефалінів - компонентів стрес-лімітуючих систем [95, 117, 237]. Так, однократна ін'єкція діазепаму викликала зміна концентрації енкефалінів в мозку щурів: збільшила в гіпоталамусі на 35% і знизила в стріатумі приблизно на 25%, в довгастому і середньому мозку зміни не виявлені. Максимальний ефект від введення препарату був досягнутий вже через 2-5 хвилин після ін'єкції. Зміни, що спостерігаються в гіпоталамусі, були короткостроковими, тоді як зменшення концентрації енкефалінів в стріатумі мало більш тривалу тривалість [117]. Збільшення рівня мет-енкефаліну в гіпоталамусі свині Гвінеї спостерігалося і при хронічному збільшенні концентрації ГАМК (обробка амінооксіуксусной кислотної) [237].

1, 2, 4, 8-денна активація ГАМК-ергіческой системи призвела до зменшення рівня мет-енкефаліну в стріатумі самців щурів. У гіпоталамусі, гіпокампі, лобовій корі і мосту подібних змін не виявлено. Збільшення концентрації ГАМК протягом 8 днів викликало зростання рівня мРНК препроенкефаліна, тоді як 1 -, 2 - або 4-денні обробки не вплинули на нього [272, 298]. Хронічне підвищення рівня ГАМК у стріатумі при введенні інгібіторів ГАМК-трансамінази (амінооксіуксусная кислота, етаноламін-О-сульфат, γ-вініл-ГАМК) призвело також до зменшення рівня динорфінів (1-8) та збільшення рівня його мРНК [272].

Таким чином, ГАМК впливає на рівень енкефаліну й динорфінів в стріатумі через інгібування експресії їх мРНК [238, 272].

За даними ряду дослідників речовина Р залучається до модуляцію стресу і занепокоєння [126, 285]. Вплив різноманітних стресорів підвищує рівень речовини Р в різних областях мозку: мигдалині, перегородці, гіпоталамусі [95, 105, 126]. Введення антагоністів нейрокінінових рецепторів запобігає даний ефект і здійснює транквилизирующий ефект [126, 285]. Крім того, у пацієнтів з депресивними розладами рівень речовини Р підвищений в цереброспінальній рідині [78] та плазмі крові [126]. Ведення діазепаму в дозі 5 мг / кг призводить до зменшення рівня речовини P через 140 хвилин після ін'єкції в гіпокампі і сірій речовині спинного мозку на 40% (p <0,001) і 28% (p <0,05) відповідно в порівнянні з контролем [ 95].

Автори [126, 285] припускають, що інгібування речовина Р-ергіческой системи може бути використано для розробки нових антидепресантів та транквілізаторів.

играет в мозге роль транквилизатора [24, 93, 94]. ODN , анксиогенное вещество, вызвал существенное уменьшение уровня мРНК нейропептида Y в гипоталамусе на 17,4-31,4%. Нейропептид Y грає в мозку роль транквілізатора [24, 93, 94]. ODN, анксіогенним речовина, викликав істотне зменшення рівня мРНК нейропептида Y в гіпоталамусі на 17,4-31,4%. Ступінь впливу залежала від дози речовини [108].

Введення діазепаму протягом 28 днів призвело до підвищення рівня мРНК інтерлейкіну-1-бета (пептид, що активує Т-лімфоцити) у гіпоталамусі, гіпокампі, фронтальній корі та стовбурі мозку щура [312].

Таким чином, діазепам і агоністи бензодіазепінових рецепторів змінюють рівень ПОМК і його дериватів (ендорфінів, АКТГ), енкефалінів, пептидів статевої системи (ГнРф, лютеїнізуючого гормону, пролактину) та інших регуляторних пептидів, що беруть участь у розвитку психічних розладів, через модуляцію ГАМК-ергіческой системи . Механізм цього явища до кінця не з'ясований.

1.1.2. Нейропептиди при дії галоперидолу

Галоперидол (4 - (пара-хлорфеніл) -1 - [3'-(пара-фторбензоіл)-пропіл] - піперідінол-4) широко застосовують у клінічній практиці як антипсихотичної засіб при лікуванні шизофренії, різних психозів, а також для купірування психомоторного збудження різного генезу [38, 69, 262]. Крім того, для галоперидолу характерна протиблювотну активність, пов'язана з виборчим пригніченням хеморецепторной тригерних зон довгастого мозку [38, 256], а також анестезуючу дію [99].

Клінічні дії нейролептика обумовлені здатністю вибірково блокувати дофамінові рецептори ЦНС [328]. В даний час охарактеризовано п'ять типів ДА-рецепторів. Галоперидол зв'язується переважно з Д 2-рецепторами. ДА-рецептори можуть розташовуватися на пресинаптичних мембранах дофамінових нейронів (авторецептори), а також на постсинаптичних мембранах різних нейронів, включаючи пептідергіческіе нейрони. Постсинаптические ДА-рецептори можуть бути представлені всіма підтипами, як ж авторецепторов можуть виступати тільки Д 2 - і Д 3-рецептори. Активація авторецептора інгібує дофамінових трансмісію шляхом зменшення секреції та синтезу дофаміну в нейронах. Низькі концентрації агоністів ДА-рецепторів призводять до активації авторецепторов, тоді як більш високі концентрації активують постсинаптичні ДА-рецептори, що призводить до збільшення дофаминовой передачі [79].

У межах ЦНС ДА-рецептори знайдені в середньому, проміжному мозку, нюхової цибулини і сітківці. 80-90% всіх ДА-рецепторів виявлено в стріатумі. Крім того, тіла нейронів дофаминергической системи знаходяться в лимбических утвореннях, корі головного мозку, деяких ядрах гіпоталамуса, мозкових оболонках і в периферичних тканинах [3, 49, 79, 101]. У залежності від локалізації ДА-рецепторів дофамін надає різну дію. При зв'язуванні з постсинаптическим ДА-рецепторами смугастого тіла дофамін стимулює рухову активність, поведінкові ефекти; зв'язування дофаміну з постсинаптическим ДА-рецепторами гіпофіза призводить до інгібування секреції гіпофізарних гормонів; з ДА-рецепторами надниркових залоз - до регуляції секреції альдостерону [70, 79, 103, 284 ]. Нейролептики блокують ці ефекти [1, 2, 49, 98, 273, 287].

У патогенез шизофренії, шізотіпіческіх і маячних розладів крім ДА-рецепторів залучаються і пептидні рецептори [4]. У розвиток психічних хвороб залучаються КРФ, вазопресин, нейротензин, речовина Р, холецистокінін [120, 173, 174].

В організмі діяльність пептідергіческіх нейронів перебуває під контролем дофаминовой системи, тому зміна її функціонування при введенні галоперидолу призводить до зміни рівня регуляторних пептидів в мозку.

Одноразове введення нейролептика збільшило рівень мРНК препроенкефаліна в стріатумі і аккумбентном ядрі [66]. Так, одноразова внутрішньочеревна ін'єкція галоперидолу збільшила зміст мРНК проенкефаліна і пронейротензіна в хвостатому і аккумбентном ядрах у щурів [261]. Подхроніческая доза галоперидолу (3 мг / кг, що вводиться внутрішньочеревно щодня протягом 5 днів) викликала зростання рівня мРНК препроенкефаліна в стріатумі в 1,8 разів (р <0,001) в порівнянні з контрольними тваринами. Рівень опіоїдних пептидів підвищився в 1,6 разів (р <0,001) [57].

Таким чином, дофамін виявляє інгібуючу дію на експресію мРНК препроенкефаліна в стріатумі і аккумбентном ядрі щури, яке здійснюється через Д 2-рецептори [97, 154, 239]. При введенні антагоніста цих рецепторів, галоперидолу, даний ефект пригнічується [167, 228, 314].

Активація або інгібування дофамінових рецепторів впливає на зміст мет-енкефаліну в гіпофізі щурів.

Так, введення бромокриптину (агоніста дофаміну) протягом 3 днів викликало зменшення рівня мет-енкефаліну в проміжній частці гіпофіза, а після 4-тижневої обробки рівень мет-енкефаліну знизився на 60-70%. Ці ефекти зберігалися протягом 4 днів після припинення введення бромокриптину. У гіпоталамусі і передньої долі гіпофіза суттєві зміни виявлені не були [153, 154]. Відповідно при введенні галоперидолу рівень мет-енкефаліну в проміжній частці гіпофіза був вище, ніж у контролі [153]. Але існують також дані про зниження вмісту мет-і лей-енкефаліну при повторній ін'єкції галоперидолу [43] і зменшенні рівня мРНК препроенкефаліна на 42% при хронічному споживанні нейролептика (3 тижні) в передній долі гіпофіза у самців щурів.

Галоперидол впливає на секрецію енкефаліну. агонисты Д 2 -рецептора увеличивали секрецию энкефалина при деполяризации клеток стриатума, не влияя на секрецию недеполяризованных клеток. У дослідах in vitro агоністи Д 2-рецептора збільшували секрецію енкефаліну при деполяризації клітин стріатуму, не впливаючи на секрецію недеполярізованних клітин. Цей ефект був відвернений галоперидолом. или in vivo облегчает секрецию энкефалина в стриатуме, но эндогенный дофамин не влияет на деятельность нейронов при обычных условиях [183, 211]. Можливо, збудження Д 2-рецептора in vitro або in vivo полегшує секрецію енкефаліну в стріатумі, але ендогенний дофамін не впливає на діяльність нейронів при звичайних умовах [183, 211].

Речовина P бере участь у розвитку психоневрологічних розладів через взаємодію з дофаминовой системою [169].

Одноразове чи багаторазове внутрішньоочеревинне введення нейролептика в дозі 1 мг / кг знижувало в нігростріатальной області мозку вміст речовини Р і К, а також α-і β-препротахікінінових мРНК. Крім того, спостерігався паралелізм між термінами зниження вмісту досліджених мРНК і термінами максимального клінічного дії галоперидолу як антипсихотичної речовини. Вважають, що галоперидол знижує біосинтез препротахікініновой мРНК, а взаємодія між тахікініновимі і дофаміновими нейронами грає роль в модуляції функцій базальних гангліїв [67, 73, 187].

Хронічний вплив галоперидолу призвело до збільшення рівня мРНК препротахікініна А в гіппокампальной CA3 підобласті і в корі великих півкуль [334], а також до зменшення рівня мРНК препротахікініна А в аккумбентном ядрі (14%) [210, 226], в дорсолатеральній (19%) і медіальної (15%) частинах хвостатого ядра [210, 226, 294]. Зміст мРНК препросоматостатіна не змінилися в досліджених областях мозку [65, 226]. У гіпофізі і септ нейролептик збільшив експресію мРНК препротахікініна [89, 294]. Споживання галоперидол протягом 45 днів призвело до зменшення вмісту фактора росту нервів в гіпокампі [254].

Холецистокінін виявляє ефекти, подібні до дією нейролептиків [323, 336]. У пацієнтів з діагнозом шизофренія, які отримують нейролептики, рівень мРНК холецистокініну в мозку підвищено у порівнянні зі здоровими людьми [286]. Такий же ефект спостерігався в гіпокампі і корі великих півкуль при введенні галоперидолу [324].

Головні ділянки експресії гена ПОМК - проміжна і передня частки гіпофіза і дугоподібне ядро гіпоталамуса [260]. Роль дофаміну була досліджена шляхом введення галоперидолу і бромокриптину. У дугоподібному ядрі бромокриптин збільшив, а галоперидол зменшив рівень мРНК ПОМК. Навпаки, в проміжній частці гіпофіза бромокриптин помітно знизив, а галоперидол підвищив рівень мРНК на 100-150% [69, 172, 253]. [76]. Ефект бромокриптину на клітини гіпофіза підтвердився і дослідами in vitro [76]. Підвищення рівня мРНК ПОМК в проміжній частці гіпофіза в результаті дії галоперидолу спостерігалося вже через 6 годин після обробки [103]. Повне анулювання ефектів галоперидолу було відмічено через 2 тижні після відміни препарату [172]. Ці дані вказують на те, що експресія гена ПОМК регулюється дофамином і що цей процес відрізняється в мозку і гіпофізі [258, 319]. Хронічний галоперидол (2 мг / кг протягом 14 днів) збільшив рівень мРНК ПОМК, пролактину, гормону росту і Д 2-рецептора в гіпофізі [187]. Навіть короткочасна обробка галоперидолом (5 і 2 дні, 2 мг / кг на день) вела до істотних збільшенням рівня мРНК Д 2-рецепторів і ПОМК в проміжній частині гіпофізу. У передній частці гіпофіза подібних змін не було виявлено [70, 103].

- Woodruff и соавт. Meador - Woodruff і співавт. виявили збільшення рівня мРНК ПОМК, а також β-ендорфіну, α-і γ-меланоцітстімулірующего гормону в проміжній частині гіпофізу після хронічного введення галоперидолу і зниження рівня мРНК ПОМК, β-ендорфіну, АКТГ і γ-меланоцітстімулірующего гормону в передній долі [229]. Автори [229] припускають, що біосинтез, процесинг і секреція ПОМК в гіпофізі контролюється дофаминергической системою, але механізм впливу дофаміну на передню та проміжну долю гіпофіза різний.

на клетках гипофиза дофамин (1 м M ) уменьшил уровень мРНК ПОМК в промежуточной доле на 77%, но не повлиял на экспрессию гена ПОМК в передней доле. У дослідах in vitro на клітинах гіпофіза дофамін (1 м ​​M) зменшив рівень мРНК ПОМК в проміжній частці на 77%, але не вплинув на експресію гена ПОМК в передній долі. Бромокриптин (100 нМ) надавав дію подібне дофаміну. ). Ефектів дофаміну і бромокриптину протидіяв галоперидол (10 м M). Рівні β-ендорфіну і α-меланоцітстімулірующего гормону змінювалися паралельно зміни синтезу ПОМК [212].

Галоперидол, який вводиться протягом 7 - 21 днів (1,5 мг / кг, щодня), збільшив рівень β-ендорфіну на 80 - 100% у проміжній частці гіпофіза щурів [69, 171, 172] і секрецію β-ендорфіну in vitro [ 172], а також стимулював меланотропную діяльність [284]. Бромокриптин відповідно зменшував рівень α-меланоцітостімулірующего гормону в проміжній частці гіпофіза [284].

Хронічний вплив антагоніста Д 2-рецептора (1 мг / кг) збільшило рівень β-ендорфіну в проміжній частці гіпофіза, особливо N-ацетил-β-ендорфіну-(1-31) і N-ацетил-β-ендорфіну-(1-27 ), не торкнувшись рівень N-ацетил-β-ендорфіну-(1-26) [236], а також в середньому і довгастому мозку всіх N-ацетільних похідних ендорфіну. Рівень NH 2-пептидів не змінився ні в одному з відділів [165, 236]. Обробка галоперидолом викликала істотне збільшення концентрації β-, γ-, α-ендорфіну і α-меланоцітстімулірующего гормону в проміжній частці і β-ендорфіну в передній долі гіпофіза [103, 314]. У передній частці гіпофіза значно збільшилося співвідношення β-ендорфін / α-ендорфін. У проміжній частці подібних ефектів не спостерігалося [314]. Ці результати вказують, що дофамінергічних система впливає не тільки на секрецію, але і на посттрансляційної модифікацію гіпофізарного β-ендорфіну [165, 237]. Крім того, нейролептик вибірково збільшив зміст β-, γ-і α-ендорфіну в гіпоталамусі [314], гіпокампі [314] і перегородці [164, 171].

Підвищення рівня β-ендорфіну в плазмі спостерігалося при однократної ін'єкції галоперидолу. Причому ступінь зміни залежала від дози препарату [129, 164, 171, 229]. Збільшення концентрації β-ендорфіну, а також α-меланотропін в плазмі відбувалося і при хронічному введенні нейролептика [171, 314].

Таким чином, синтез і секреція β-ендорфіну в проміжній частці гіпофіза і de novo синтез ПОМК знаходиться під інгібуючим впливом дофаміну [103, 172].

Нейротензин, можливо, відіграє важливу роль в етіології і / або медикаментозному лікуванні шизофренії та інших психоневрологічних захворювань. Встановлено, що рівень нейротензин в цереброспінальній рідині хворих на шизофренію зменшений, але відновлюється після лікування галоперидолом [58, 92, 269, 290]. При цьому, чим вище був рівень психопатології, тим нижче рівень даного пептиду [89, 292].

Подібні ефекти, які спостерігаються при периферичному введенні антипсихотичних ліків та центральному введення нейротензин, призвели до виникнення гіпотези про те, що нейротензин є ендогенною антипсихотичною засобом [243]. Локалізація нейротензин та його рецепторів у мезолімбічної ДА-системі підтверджує гіпотезу про залучення нейротензин в етіологію шизофренії. Крім того, передбачається участь даного пептиду в екстрапірамідальні розладах (паркінсонізм, дискінезії, гіперкінези), розвиваються при лікуванні антипсихотичними препаратами [73, 269].

Існує безліч даних про вплив галоперидолу на нейротензіновую систему [59, 73, 243]. Так, гостра ін'єкція галоперидолу (1 мг / кг) збільшила експресію гена нейротензин / нейромедіна N у дорсолатеральних стріатумі і аккумбентном ядрі у щурів [117, 231, 233]. Причому час після ін'єкції впливало на рівень мРНК. Експресія мРНК нейротензин / нейромедіна N в дорсолатеральній частини хвостатого ядра, що не виявлена ​​в контролі, збільшилася через 0,5 і 7 годин після ін'єкції і зменшувалася через 20-24 години. У дорсомедіально і вентролатеральной частини хвостатого ядра, ледь обнаруживаемая базальна експресія мРНК нейротензин / нейромедіна N, яка спостерігається в контролі, помітно збільшилася через 24 години після введення галоперидолу [231, 335]. Викликаному нейролептиком підвищенню рівня зрілої мРНК в стріатумі передувало збільшення рівня гяРНК. Ці дані вказують, що гостре вплив активує транскрипцію гена нейротензин / нейромедіна N, хоча супутній ефект на стабільність первинних транскриптів не виключається [231]. Навіть єдина досить низька доза нейролептика (0,5 мг / кг) через годину приводила до збільшення рівня мРНК нейротензин / нейромедіна N майже в 3 рази у дорсолатеральних стріатумі мишей і щурів [233]. Хронічне споживання галоперидолу збільшило концентрацію нейротензин в аккумбентном, хвостатому ядрах і в чорній субстанції [244]. Крім того, галоперидол (1 мг / кг), який вводиться щурам протягом 2 тижнів збільшив рівень мРНК рецептора нейротензин на 10% (p <0,05) в чорній речовині [85]. Ці ефекти є наслідком блокади галоперидолом дофамінових Д 2-рецепторів [59].

Очевидного підвищення транскрипції гена нейротензин / нейромедіна N після єдиної ін'єкції галоперидолу передувало збільшення рівня c-fos мРНК в тій же самій області [117, 162, 232, 235]. При цьому в клітинах дорсолатеральній стріатума мРНК c-fos і нейротензин / нейромедіна N солокалізовани [232]. Введення пептиду, що блокує експресію c-fos гена, призвело до 50%-ному зниженню рівня мРНК нейротензин / нейромедіна N у дорсолатеральних стріатумі після введення нейролептика. З іншого боку, експресія мРНК препроенкефаліна у дорсолатеральних стріатумі і нейро-тензін/нейромедіна N в аккумбентном ядрі не змінилася. Таким чином, c-fos відіграє певну роль у регулюванні транскрипції гена нейротензин / нейромедіна N у дорсолатеральних стріатумі щурів після гострого впливу галоперидолу [230]. Існують дані про те, що промотор гена нейротензин містить два передбачуваних ділянки для закріплення Fos-білків, які можуть збільшити транскрипцію гена [52].

Зменшення концентрації нейропептида Y в стріатумі спостерігалося після хронічного введення галоперидолу і аминазина [250]. Після хронічного впливу нейролептиків в дорсальном стріатумі відбулося збільшення як числа клітин, що експресують мРНК нейрокининов У (45%), так і концентрації пептиду в окремих клітинах (37%) [227]. Введення галоперидолу протягом 28 днів призвело до підвищення рівня мРНК інтерлейкіну-1-бета (пептид, що активує Т-лімфоцити) у гіпоталамусі, гіпокампі, фронтальній корі та стовбурі мозку щура [312].

Агоніст дофамінових рецепторів, бромокриптин, впливає на ростові процеси в клітині. Так, введення бромокриптину протягом 8 днів викликало зменшення діаметра ядра і зниження синтезу ДНК в клітинах гіпофіза [188].

Дофамінергічних система впливає на репродуктивну систему. Хронічне введення бромокриптину збільшило рівень мРНК ГТ-Рг в мозку щурів на 70%, галоперидол знизив цей параметр на 20% [208].

Таким чином, галоперидол через інгібування дофаминергической системи змінює функціонування репродуктивної системи, впливає на концентрацію опіоїдних пептидів і їх попередників, а також на експресію їх мРНК в головному мозку.

1.2. Основні карбоксипептидази та їх роль у процессингу регуляторних пептидів

Більшість біологічно активних пептидів синтезується у вигляді високомолекулярних неактивних попередників - препробелков, які піддаються посттрансляційної модифікації [43, 309]. Синтез попередників здійснюється на мембранозв'язаних рибосомах ЕПР. -конце препроформы нейропептида набора гидрофобных аминокислот, так называемой сигнальной последовательности, позволяет предшественнику транспортироваться внутрь ЭПР. Наявність на N-кінці препроформи нейропептида набору гідрофобних амінокислот, так званої сигнальної послідовності, дозволяє попередникові транспортуватися всередину ЕПР. Тут сигнальна послідовність відщеплюється сигнальної пептидаз і утворюється пропептид. Подальший процесинг здійснюється в ході пересування молекул по ЕПР, комплексу Гольджі і в секреторних везикулах [309].

- и С-концах “лишние” остатки основных аминокислот. Спочатку під дією ендопептидаз, розщеплюють нейропептиди по синглетний і дуплетним залишкам основних амінокислот (фурин, РС1 / 3, РС2, РС4 [291], проопиомеланокортина-перетворює фермент [215], тіолових прогормонконвертаза [71], динорфин-перетворює фермент [115] і ін), утворюються неактивні пептиди, що містять на N - і С-кінцях "зайві" залишки основних амінокислот. Видалення цих амінокислот у секреторних везикулах здійснюється відповідно амінопептідазу-В-подібним (і) [19] і карбоксипептидази-В-подібним (і) ферментами [12, 21, 137].

Таким чином, для розуміння механізмів дії нейропептидів істотним моментом є вивчення їх утворення та деградації. Основним карбоксипептидази як ферментам, що беруть участь у кінцевих стадіях освіти і початкових стадіях деградації, належить важлива роль в регуляції рівня нейропептидів в організмі. У зв'язку з цим, великий інтерес представляє вивчення активності основних карбоксипептидази в нормі і при різних фізіологічних і патологічних станах організму, що супроводжуються зміною вмісту біологічно активних пептидів.

1.2.1. Протеолітичні ферменти обміну регуляторних пептидів при дії психолептиків

Біологічні властивості регуляторних пептидів, зміна їх рівня під впливом різних дій в певній мірі обумовлені особливостями функціонування ферментативних систем обміну біологічно активних пептидів. Зміна інтенсивності процесів синтезу і деградації при зміні функціонування медіаторних систем [65, 83, 95, 193, 225, 238] свідчить про регуляторну функції протеолізу, яка складається у запуску і перериванні ряду біохімічних і фізіологічних процесів. Біологічно активні пептиди, у свою чергу, можуть визначати фізіологічні ефекти лікарських препаратів, залучатися до розвитку залежності від них. Тому дуже важливим видається дослідження активності ферментів обміну нейропептидів при гострому та хронічному введенні галоперидолу та діазепаму.

При хронічному споживанні діазепаму спостерігалася тенденція до зниження активності ангіотензинперетворювального ферменту та підвищенню активності карбоксипептидази Н в гіпофізі, гіпоталамусі і стріатумі щурів [20]. Разом з тим, введення протягом 10 днів діазепаму супроводжується підвищенням вмісту в мозку ендозепінов [8], що може вказувати на посилення їх біосинтезу та ослаблення розпаду. Автори [20] припускають, що досліджувані ферменти залучаються в обмін цих пептидів.

При спільній дії стресу та діазепаму зміни активності карбоксипептидази Н у всіх відділах були меншими, ніж при їх роздільному впливі. Введення діазепаму при емоційному стресі призвело до зниження активності ангіотензинперетворюючого ферменту у порівнянні з тваринами, котрі зазнали впливу тільки діазепаму або тільки стресу [20].

Таким чином, якщо при прийомі діазепаму в поєднанні з емоційним стресом спостерігалася тенденція до компенсації змін активності КП Н, то зниження активності ангіотензинперетворювального ферменту було більш вираженим. Відомо, що карбоксипептидаза Н бере участь у біосинтезі АКТГ [128, 304], секреція якого при стресі зростає. Введення бензодіазепінових транквілізаторів, зокрема, феназепаму зменшує концентрацію АКТГ [51, 111, 316, 330] при стресі. Активність карбоксипептидази Н в разі введення діазепаму при стресі знижується в порівнянні з такою тільки при стресі. Разом з тим, ангиотензинпревращающий фермент бере участь, мабуть, в деградації енкефалінів, речовини Р і пептиду дельта-сну [182], які сприяють адаптації до стресу [48]. Зниження активності ангіотензинперетворювального ферменту могло б, ймовірно, сприяти підвищенню їх змісту. Можливо, що діазепам надає антистрессорного вплив на організм шляхом модуляції активності карбоксипептидази Н і ангіотензин-перетворюючого ферменту, що, у свою чергу, може призводити до зменшення вмісту АКТГ, і збільшення вмісту пептидів, що сприяють адаптації.

Ступінь емоційності тварин впливала на активність ангіотензинперетворюючого ферменту в мозку щурів. Найбільш виражені зміни спостерігались у нізкоемоціональних тварин [20]. Також впливав діазепам і на активність ангіотензинперетворюючого ферменту в сироватці крові. Однак введення діазепаму на тлі стресу призвело до найбільш значимого зниження активності ферменту в мозку у високоемоціональних, а в сироватці - у нізкоемоціональних тварин [20].

Споживання діазепаму протягом 10 днів викликало зниження активності ангіотензинперетворювального ферменту в мозку щурів. Найбільш виражене зниження активності спостерігалося в гіпофізі (на 63%) [13]. У гіпоталамусі і стріатумі зниження активності ферменту було менш вираженим (на 20 і 23% відповідно). Автори [13] припускають, що ангиотензинпревращающий фермент відіграє певну роль в обміні опіоїдних, стрес-і DBI-відбуваються пептидів.

При одночасному споживанні щурами етанолу та діазепаму спостерігалося підвищення активності ангіотензинперетворювального ферменту у порівнянні з активністю при роздільному споживанні цих речовин у гіпофізі та гіпоталамусі [13]. На думку авторів, купірування диазепамом алкогольного абстинентного синдрому може бути обумовлено тим, що при спільній дії ці речовини викликають менш виражене зниження активності ангіотензинперетворювального ферменту, ніж при роздільному. Подібність поведінкових та фізіологічних ефектів етанолу та діазепаму можливо пояснюється їх подібним впливом на активність ангіотензинперетворюючого ферменту.

Введення галоперидолу (1 мг / кг) протягом 7 днів призвело до зменшення активності амінопептидази N в стріатумі і корі великих півкуль, що, у свою чергу, викликало зменшення накопичення фрагментів (тирозин і гли-гли-фен-мет), що утворюються при дії ферменту на мет-енкефалінів [199].

Тир-гли-гли - похідне енкефаліну, отримане при дії енкефалінази. Гостра дія агоністів Д 2-рецепторів викликало підвищення вмісту тріпептідов в стріатумі щурів. Цей ефект був блокований галоперидолом, в той час як, просто ін'єкція галоперидолу не змінила рівень тир-гли-гли. Проте хронічне споживання нейролептика призвело до збільшення вмісту фрагмента енкефаліну в стріатумі, можливо, шляхом активації енкефалінази [199, 213].

Нейтральна ендопептидаз 24.11, як відомо, використовує в якості субстратів ряд нейропептидів, включаючи енкефаліни і нейротензин. Хронічна обробка галоперидолом (1 мг / кг / день, 12 днів) збільшила активність ферменту в аккумбентном ядрі. Більш високі дозування практично не вплинули на активність нейтральної ендопептидаз 24.11. активність ферменту в гіпоталамусі не змінилася при введенні галоперидолу [198].

Гостра дія галоперидолу призвело до підвищення рівня каталітичної одиниці цАМФ-залежної кінази в стріатумі [321].

и соавт. Grigoriants і співавт. виявили збільшення рівня мРНК КП Н при введенні його протягом 14 і 21 дні в дозі 2 мг / кг у проміжній і задній частках гіпофіза на 90 - 110% [158]. Введення бромокриптину протягом 1 - 5 днів призвело до зниження рівня мРНК прогормонконвертази 2, КП Н і пептіділгліцін-α-амідірующей монооксигенази в проміжній частці гіпофіза, споживання галоперидолу викликало зворотний ефект [253].

, нейтральной эндопептидазы 24.11 и прогормонконвертаз 1 и 2 в хвостатом ядре и фронтальной коре мозга крысы не изменился после 7-дневного потребления галоперидола (1 мг/кг). Рівень мРНК амінопептидази N, нейтральною ендопептидаз 24.11 і прогормонконвертаз 1 і 2 в хвостатому ядрі та фронтальній корі мозку щура не змінився після 7-денного споживання галоперидолу (1 мг / кг). Автори припускають, що можливо велику роль у модуляції діяльності пептидаз грає трансляція мРНК або вбудовування білка в мембрану [329].

Калікреіноподобний фермент відноситься до сімейства аргінінових ендопептидаз. введение бромокриптина и галоперидола вызвало соответственно уменьшение и увеличение уровня мРНК фермента в промежуточной, но не в передней доле гипофиза самцов крыс [266, 268]. У дослідах in vivo введення бромокриптину і галоперидолу викликало відповідно зменшення і збільшення рівня мРНК ферменту в проміжній, але не в передній долі гіпофіза самців щурів [266, 268].

Таким чином, психолептиків викликають зміну активності ряду протеолітичних ферментів. Це, у свою чергу, веде до зміни рівня багатьох регуляторних пептидів, які забезпечують основні і побічні ефекти препаратів.

1.2.2. Карбоксипептидаза Н

Карбоксипептидаза Н (КП Н, енкефалінконвертаза, карбоксіпепті-Даза Е, КФ 3.4.17.10) вперше була виділена і охарактеризована в 1982 р. Fricker LD і Snyder SH з хромафінних гранул надниркових залоз [147].

КП Н широко представлена ​​в тканинах людини, бика, пацюки, миші, акули, шпорцевой жаби, ската-вудильника, молюска Aplysia [143, 149, 280, 297, 311] і володіє подібним регіональним поширенням, фізико-хімічними і каталітичними властивостями.

Висока активність КП Н була виявлена ​​в гормонпродуцірующіх клітинах гіпофіза [128, 145, 181, 190, 197], a - і b-клітинах підшлункової залози [111, 119, 157], хромафінної клітинах надниркових залоз [147, 148, 149, 175, 311], більш низька - у пептідергіческіх нейронах гіпоталамуса, стріатуму, гіпокампу, середнього мозку, великих півкуль і мозочка [15, 148, 149, 308]. При цьому в гіпоталамусі висока активність КП Н виявлена ​​в медіальному узвишші, супраоптіческого, паравентрикулярного і супрахіазматичному ядрах [220]. У гіпокампі фермент виявлений в пірамідальних клітинах і у внутрішній частині молекулярного шару зубчастої звивини. КП Н також виявлена ​​в центральних нейронах мигдалини [219]. Є відомості про наявність активності КП Н в водянистої рідини ока людини [251], в плаценті [26]. Таким чином, тканинне розподіл активності цієї карбоксипептидази в цілому відповідає розподілу нейропептидів [26].

У клітці КП Н локалізована, в основному, в секреторних гранулах, в структурних елементах ендоплазматичного ретикулума і комплексу Гольджі, що містять біологічно активні пептиди - АКТГ [128, 175], гормон росту [103], пролактин [103], інсулін [114], глюкагон [159], енкефаліни [147, 148], вазопресин [282], окситоцин [247], речовина Р [104], атріальний натрійуретичний фактор [220].

Ген КП Н був клонований і секвенований [60, 225, 277]. Транскрипція КП Н здійснюється з єдиного сайту транскрипції [245, 304]. мРНК КП Н складається з 2100 нуклеотидів [137]. Повний ген охоплює приблизно 50000 підстав і складається з дев'яти екзонів, кожен з яких містить кодують білок області [190].

Рівні мРНК КП Н і активності КП Н в мозку і тканинах в цілому корелюють між собою [81]. Найвищі рівні мРНК КП Н виявлені в пірамідальних клітинах гіпокампу, в передній і проміжної частках гіпофіза, епендімних клітинах бічних шлуночків мозку, базолатеральной мигдалині, супраоптіческого і паравентрикулярного ядрах. Середні рівні мРНК КП Н у щурів виявлені в таламусі, медіальному колінчастому ядрі, корі мозочка і проміжної оливі. Найменші рівні виявлені в гранулярному клітинному шарі гіпокампу, латеральному гіпоталамусі, блідій кулі і в ретикулярної формації ніжки мозку [221]. Висока експресія мРНК КП Н відзначена в паравентрикулярному і супраоптіческого ядрах гіпоталамуса - місцях переважного синтезу окситоцину і вазопресину [86]. мРНК КП Н і ферментативна активність виявлена ​​також у клонах ендокринних клітин - AtT-20, GH-3, GH4C1 і неендокрінних - L, 3T3, SK-HEP-1, HEK293, COS, C127 [124, 188], а також в культурі астроцитів [198].

КП Н є глікопротеїном і складається з однієї поліпептидного ланцюга [15, 114, 140, 220, 245]. 75000 [240, 277, 306], который превращается в активную форму под действием трипсиноподобных ферментов в ходе созревания секреторных везикул [134, 160]. Фермент синтезується у вигляді неактивного зимогена, що складається з 476 амінокислотних залишків, з Mr 75000 [240, 277, 306], який перетворюється на активну форму під дією ферментів тріпсіноподобних в ході дозрівання секреторних везикул [134, 160]. 65000 [176, 177], которая превращается в активные формы с Mr 52000 – 53000 и 55000 – 57000 [134, 160, 255]. Спочатку утворюється неактивна форма з Mr 65000 [176, 177], яка перетворюється в активні форми з Mr 52000 - 53000 і 55000 - 57000 [134, 160, 255]. Відмінності в Mr цих форм не залежать від ступеня глікозилювання [134, 255, 257]. Форма з Mr 55000 - 57000 відрізняється від форми з Mr 52000 - 53000 присутністю N-кінцевого сигнального пептиду [255]. Обидві форми існують і в розчинній, і в зв'язаному з мембранами вигляді [134, 160]. Є відомості про те, що мембранна форма КП Н (57000) пов'язана з ендоплазматичним ретикулумом і елементами комплексу Гольджі, а розчинна форма КП Н (54000) - з секреторними гранулами [159]. За зв'язування ферменту з мембранами відповідає C-кінцева амфіфільних послідовність, яка присутня тільки у мембранозв'язаних форми [140]. Вона складається з 21 залишку чергуються гідрофобних і гідрофільних амінокислот. Активність розчинної форми ферменту в розрахунку на молекулу ферменту вище, ніж мембранозв'язаних [136, 141]. Співвідношення між розчинної і мембранозв'язаних формами змінюється в міру дозрівання секреторних везикул [178]. Активність розчинної і мембранозв'язаних форм КП Н в різних клітинах і тканинах різному. Зокрема, в клітинах ліній RIN 1046-38 і 1046-44 RIN 75% зрілої КП Н виявлено в мембранозв'язаних формі [134]. З іншого боку, в передній і задній частках гіпофіза 70% всієї активності КП Н представлено розчинної формою [255].

Фермент проявляє максимальну активність при рН 5,6-6,0, що відповідає рН всередині секреторних гранул [137, 148, 149, 247]. 2+ (в 2 – 3 раза), полностью ингибируется ионами Cu 2+ , Cd 2+ и ЭДТА. КП Н сильно активується іонами З 2 + (в 5 - 10 разів) і у меншій мірі - іонами Ni 2 + (у 2 - 3 рази), повністю інгібується іонами Cu 2 +, Cd 2 + і ЕДТА. 2+ , Ca 2+ , Mg 2+ ) не влияют на его активность [147, 148, 149]. Іони інших двовалентних металів (Zn 2 +, Ca 2 +, Mg 2 +) не впливають на його активність [147, 148, 149]. 2+ полностью восстанавливают активность КП Н после ингибирования его действия 1 мМ раствором ЭДТА, при добавлении ионов Со 2+ и Ni 2+ активность фермента значительно повышалась, а Ca 2+ и Mg 2+ активность фермента не восстанавливали [15]. Іони Zn 2 + повністю відновлюють активність КП Н після інгібування його дії 1 мМ розчином ЕДТА, при додаванні іонів Со 2 + та Ni 2 + активність ферменту значно підвищувалася, а Ca 2 + і Mg 2 + активність ферменту не відновлювали [15]. Іони Ca 2 + впливають на агрегацію і вивільнення білка з секреторних везикул [161, 242, 305]. 2+ [15]. Таким чином, карбоксипептидаза Н - це металлозавісімий фермент, в активному центрі якого знаходиться іон Zn 2 + [15]. 2 и N -этилмалеимид существенно ингибируют активность фермента [144]. Реагенти на сульфгідрильні групи HgCl 2 і N-етілмалеімід істотно інгібують активність ферменту [144]. 2-меркаптоетанол, каптоприл і ФМСФ не роблять помітного впливу на активність КП Н [15, 220]. -группу(ы) и является тиолзависимым цинк-металлоферментом [15]. Карбоксипептидаза Н містить SH-групу (и) і є тіолзавісімим цинк-металоферментів [15]. Активність КП Н інгібується CuCl 2, HgCl 2, р-хлормеркурфенілсульфатом, АПМЯК, ЕДТА, 1,10-фенантроліном і 2-меркаптометіл-3-гуаніділетілтіопропановой кислотою [123, 149, 175, 181]. Найбільш ефективними інгібіторами є ГЕМЯК і ГПЯК з K i 8,8 і 7,5, відповідно [114, 144, 280, 311]. - и Leu -энкефалина, АКТГ [180, 259, 282]. Активність ферменту суттєво знижується при додаванні рилізинг-фактора лютеїнізуючого гормону, речовини Р, тиреотропін-рилізинг фактора, вазопресину, окситоцину, Met - і Leu-енкефаліну, АКТГ [180, 259, 282].

КП Н володіє, практично, абсолютною специфічністю по відношенню до пептидним субстратів з С-кінцевими основними амінокислотами [26, 27, 123, 326]. - Met -энкефалин- Arg 6 , 125 I - Met -энкефалин- Lys 6 [19], АКТГ- Lys 15 - Lys 16 - Arg 17 , Arg 8 -вазопрессин- Gly - Lys - Arg являются природными субстратами исследуемого фермента [175, 181, 282]. КП Н добре відщеплює залишки-Lys-Arg і від природних і синтетичних субстратів. 125 I - Met-енкефалінів-Arg 6, 125 I - Met-енкефалінів-Lys 6 [19], АКТГ-Lys 15 - Lys 16 - Arg 17, Arg 8-вазопресин-Gly - Lys - Arg є природними субстратами досліджуваного ферменту [175, 181, 282]. и Snyder с использованием таких субстратов как дансил- Phe - Ala - Arg и дансил- Phe - Leu -А rg [144, 149, 311]. Для визначення активності КП Н розроблено безліч методів, найбільш часто використовуваним є флюорометричних метод Friker і Snyder з використанням таких субстратів як данс-Phe - Ala - Arg і данс-Phe - Leu-А rg [144, 149, 311]. - Ala - Arg [45], даларгин [47], Leu 5 -энкефалин [47], [ 3 Н]-бензоил- Phe - Leu - Arg , [ 3 Н]-бензоил- Phe - Ala - Arg [278, 308], 125 I-acetyl-Tyr-Ala-Arg, гиппурил- Arg [143] и другие также были предложены в качестве субстратов для определения активности КП Н. О-кумароіл-Phe - Ala - Arg [45], даларгін [47], Leu 5-енкефалінів [47], [3 Н]-бензоїл-Phe - Leu - Arg, [3 Н]-бензоїл-Phe - Ala - Arg [278, 308], 125 I-acetyl-Tyr-Ala-Arg, гіппуріл-Arg [143] та інші також були запропоновані в якості субстратів для визначення активності КП Н.

/ fat единичная точечная мутация Ser 202 на Pro в гене, кодирующем КП Н, приводит к нарушению созревания регуляторных пептидов: инсулина [186], холецистокинина [203], пронейротензина и промеланоцитстимулирующего гормона [102, 283], тириолибирина [246], проэнкефалина [139], а также изменяет деятельность опиоидных рецепторов [88, 139]. У мишей лінії fat / fat одинична точкова мутація Ser 202 на Pro в гені, що кодує КП Н, призводить до порушення дозрівання регуляторних пептидів: інсуліну [186], холецистокініну [203], пронейротензіна і промеланоцитстимулирующего гормону [102, 283], тіріолібіріна [246 ], проенкефаліна [139], а також змінює діяльність опіоїдних рецепторів [88, 139]. Крім того, порушується внутрішньоклітинний транспорт гормонів гіпофіза через констітутатівний шлях [246, 293]. Це призводить до численних ендокринною порушень, включаючи гіперінсулінемію і безпліддя [110, 216, 307].

Слід зазначити, що зовнішній вплив здатне швидко змінювати рівень мРНК КП Н. Збільшення концентрації мРНК КП Н в гіпоталамусі спостерігається при збільшенні вмісту окситоцину і вазопресину [86], в гангліонарних клітинах сітківки ока рівень мРНК КП Н підвищується відразу після зміни умов освітленості [288] .

У клітинах GH4C1 (з переднього гіпофіза щури, які продукують пролактин) 50 мМ розчин KCl збільшує секрецію КП Н і пролактину в 10 разів, а 100 мМ тиреотропін-рилізинг чинник - у 2 - 3 рази [145]. Крім того, естрадіол (1 нМ), інсулін (300 нМ) і фактор росту епідермісу (10 нМ) збільшують внутрішньоклітинний рівень КП Н в 2 рази в порівнянні з контролем. Km при цьому не змінюється, але збільшується V max [145].

Rodriguez і співавт. виявили, що дія дексаметазону на клітини AtT-20 знижує рівень мРНК КП Н і ПОМК приблизно на 30% [277]. З іншого боку, додаток кортикотропін-рилізинг фактора до клітин, які піддавалися дії дексаметазону, викликає 2 - 3-х кратне збільшення рівня мРНК КП Н і ПОМК [277]. Автори вважають, що рівні мРНК ПОМК і КП Н узгоджено регулюються кортикотропін-рилізинг чинником і стероїдними гормонами. При дії кортикотропін-рилізинг фактору на клітини AtT-20, які не піддаються дії дексаметазону, відбувається зростання активності КП Н [223].

При хронічному додатку дексаметазону, кортикостерону, кортикотропін-рилізинг фактору, соматостатину до клітин лінії AtT-20/D16v рівень мРНК КП Н і активність КП Н не змінюються [223, 318].

При введенні дексаметазон і гідрокортизон (у дозах 1 і 100 мг на кг маси тіла, відповідно) знижують активність розчинної і мембранозв'язаних форми КП Н в гіпофізі, гіпоталамусі і стріатумі щурів, але динаміка впливу в часі відрізняється [19]. У вивчені інтервали (0,5, 4 і 24 години після ін'єкції) дексаметазон сильніше пригнічує активність в початковий період, тоді як дія гідрокортизону більш виражено через 24 години після введення. In vitro дексаметазон і гідрокортизон не впливають на активність КП Н [19]. Автори [19] припускають, що зниження активності КП Н in vivo відбувається за рахунок зниження синтезу мРНК КП Н.

Субстратна специфічність, оптимум рН, клітинному і субклітинному розподіл, спільна локалізація ферменту і біологічно активних пептидів, свідчать про залучення КП Н в процесинг багатьох нейропептидів, таких як окситоцин, вазопресин, нейротензин, меланоцітстімулірующій гормон, речовина Р, енкефаліни та ін [149, 175, 181, 259, 282, 283]. Показано, що КП Н залучається до визначення агресивності [30], стійкості до стресу [29], схильності до споживання етанолу [31], у розвиток фізичної залежності від етанолу [6, 30, 31] in vivo. Крім того, зміна рівня мРНК КП Н і активності ферменту під дією галоперидолу [158, 219], глюкокортикоїдів [19, 223, 277, 318] in vivo зумовлюють інтерес до вивчення активності КП Н в умовах зміни функціонування медіаторних систем при введенні галоперидолу та діазепаму .

1.2.3. Карбоксипептидаза М

и соавторами в цитоплазматических мембранах периферических тканей и мозга [302]. Карбоксипептидаза М (КП М, КФ 3.4.17.2) була виявлена ​​Skidgel і співавторами в цитоплазматичних мембранах периферичних тканин і мозку [302].

Фермент широко поширений в людській плаценті, нирках, легенях [303], периферичних нервах, головному мозку [241], жовтому тілі [333], гранулярних клітинах зростаючих і незрілих фолікулів [333], ендотеліальних клітинах кровоносних судин [289], лейкоцитах [116 ], Активність карбоксипептидази М в нервовій тканині на порядок нижче, ніж у плаценті, а в периферичних нервах вище, ніж у головному мозку [241]. У мозку фермент виявлений в клітинах глііі, а також у комплексі з мієліном і міелінформірующімі клітинами [241].

62000 [118, 301]. КП М є глікопротеїном з Mr 62000 [118, 301]. Фермент представлений однією поліпептидного ланцюгом і пов'язаний з плазматичною мембраною за допомогою залишку глікозил-фосфатидилінозитолу [118, 301]. При дії трипсину і фосфоліпази С КП М переходить в розчинну форму за рахунок видалення залишку глікозил-фосфатидилінозитолу [118, 300]. , так как фермент обнаружен в моче и амниотической жидкости [300]. Цей процес можливий і in vivo, так як фермент виявлений у сечі та амніотичній рідини [300]. 48000, который состоит из 439 аминокислотных остатков [295, 303]. При хімічному деглікозілірованіі утворюється поліпептид з Mr 48000, який складається з 439 амінокислотних залишків [295, 303]. и КП Н, на 15% – КПВ и КПА. Амінокислотна послідовність ферменту на 41% ідентична КП N і КП Н, на 15% - КПВ і КПА. Багато залишки активного центру відповідають таким КПА та КПВ, але перехресної реакції з антисироватки до інших КП фермент не дає [303, 315].

Максимальна активність КП М відзначається при рН 7,0. 2+ [301]. В активному центрі ферменту знаходиться іон Zn 2 + [301]. Іони Со 2 + підвищують активність КП М в 1,5 - 2 рази, причому ступінь активації зростає при зниженні рН [118]. 2+ , о-фенантролином, 2-меркаптометил-3-гуанидилэтилтиопропановой кислотой и ГЭМЯК [118, 301]. HgCl 2 , ФМСФ, апротинин, каптоприл и фосфорамидон не влияют на его активность [120, 301]. Дія ферменту інгібується іонами Cd 2 +, о-фенантроліном, 2-меркаптометіл-3-гуаніділетілтіопропановой кислотою і ГЕМЯК [118, 301]. HgCl 2, ФМСФ, апротинін, каптоприл і фосфорамідон не впливають на його активність [120, 301].

КП М відщеплює залишки тільки основних амінокислот, причому за відсутності іонів Со 2 + краще відщеплює аргінін, а в присутності Со 2 + - лізин. КП М отщепляет остатки аргинина и лизина с С-конца Met 5 -энкефалин- Arg 6 , Met -энкефалин- Lys 6 , Leu 5 -энкефалин- Arg 6 , брадикинина, динорфина А 1-13 [120, 271, 301], фактора роста эпидермиса [189, 300], анафилотоксинов С3а, С4а и С5а [265], различных синтетических пептидов [118, 302]. Фермент більшою мірою проявляє естеразную активність, ніж пептідазную [118, 301]. In vitro КП М відщеплює залишки аргініну і лізину з С-кінця Met 5-енкефалінів-Arg 6, Met-енкефалінів-Lys 6, Leu 5-енкефалінів-Arg 6, брадикініну, динорфінів А 1-13 [120, 271, 301], фактору росту епідермісу [189, 300], анафілотоксинів С3а, С4а і С5а [265], різних синтетичних пептидів [118, 302].

Вважають, що карбоксипептидаза М бере участь в інактивації або модуляції активності пептидних гормонів до або після їх взаємодії з рецепторами, втягується в процеси клітинного росту та диференціації. У зв'язку з цим становить інтерес вивчення активності КП М при введенні галоперидолу та діазепаму.

1.2.4. ФМСФ-інгібіруемая карбоксипептидаза

ФМСФ-інгібіруемая карбоксипептидаза була вперше описана в розчинній фракції сірої речовини головного мозку котів [22]. Оскільки фермент повністю інгібується ФМСФ, він був названий ФМСФ-інгібіруемой карбоксипептидази [22].

ФМСФ-інгібіруемая КП знайдена у всіх відділах мозку і практично у всіх тканинах і органах щурів. Найбільша активність ферменту відзначена в наднирниках, яєчниках, сім'яниках, гіпофізі, нюхових цибулинах [9]. У гіпофізі активність була в 1,6 рази менше, а в сім'яниках - в 2,5 рази менше, ніж у наднирниках [53, 54]. У порядку зниження активності ферменту відділи головного мозку можна розташувати наступним чином: гіпофіз, нюхові цибулини, великі півкулі, гіпоталамус, стріатум, мозочок, гіпокамп, четверохолміе [16, 23, 53, 54]. У відділах мозку, багатих тілами нейронів, активність ферменту вище, ніж у провідних шляхах [16, 23].

100000 – 110000, проявляет максимальную активность при рН 6,0 – 6,5 [22, 26, 27]. ФМСФ-інгібіруемая карбоксипептидаза має Mr 100000 - 110000, проявляє максимальну активність при рН 6,0 - 6,5 [22, 26, 27]. При нейтральних і слаболужних значеннях pH фермент інактивується, але стабілізується NaCl [26, 27]. ФМСФ-інгібіруемая КП, мабуть, не є металлозавісімой карбоксипептидази, тому що не інгібує ЕДТА і ГЕМЯК [9, 19]. Активність ферменту повністю пригнічується інгібітором серинових протеїназ - ФМСФ і реагентом на сульфгідрильні групи - ПХМБ. Іодацетамід знижує активність дії ферменту приблизно в 2 рази. -этилмалеимид, ионы Со 2+ не изменяют активность ФМСФ-ингибируемой КП [22, 25, 26]. ЕДТА, 2-меркаптоетанол, N-етілмалеімід, іони Со 2 + не змінюють активність ФМСФ-інгібіруемой КП [22, 25, 26].

ФМСФ-інгібіруемая КП представлена ​​в мозку як у розчинній формі, так і в комплексі з мембранами субклітинних структур [9]. 5 -энкефалин- Arg 6 и дансил- Phe - Leu - Arg , причем сродство фермента к дансил- Phe - Leu - Arg в несколько раз выше, чем к дансил- Phe - Ala - Arg (К m для гидролиза дансил-Phe-Leu-Arg 48 мкМ, дансил-Phe-Ala-Arg – 96 мкМ) [22, 25, 26]. Згідно з даними тонкошарової хроматографії фермент відщеплює аргінін від Leu 5-енкефалінів-Arg 6 і данс-Phe - Leu - Arg, причому спорідненість ферменту до данс-Phe - Leu - Arg в кілька разів вище, ніж до данс-Phe - Ala - Arg ( До m для гідролізу данс-Phe-Leu-Arg 48 мкМ, данс-Phe-Ala-Arg - 96 мкМ) [22, 25, 26].

Тканинне і регіональний розподіл ФМСФ-інгібіруемой КП корелює з розподілом нейропептидів і секретується білків [9, 33, 201]. Разом з тим слід зазначити, що у відділах головного мозку розподіл активності ферменту дещо не збігається з розподілом біологічно активних пептидів у цілому [201]. Найбільш висока активність ФМСФ-КП виявлена ​​в ендокринних тканинах, що синтезують стероїдні гормони: яєчниках, наднирниках, сім'яниках [54]. - Leu - Arg значительно выше, чем сродство КП Н [9]. У наднирниках, де синтезується велика кількість енкефалінів, активність ФМСФ-КП у 8 - 9 разів вище, ніж активність КП Н. Крім того, спорідненість ФМСФ-КП до данс-Phe - Leu - Arg значно вище, ніж спорідненість КП Н [9] . 5 - Arg 6 ). Це дозволяє припустити, що ФМСФ-інгібіруемая КП як і КП Н бере участь в процессингу нейропептидів, і ймовірно, найбільш кращим ендогенним субстратом для ФМСФ-інгібіруемой КП є проенкефалін (енкефалінів-Leu 5 - Arg 6).

Виявлено, що ФМСФ-КП втягується у розвиток алкогольної залежності [17], у відповідь на різні стрессірующіе впливу [5], тому представляє інтерес вивчення активності цього ферменту при модуляції ГАМК-і дофамінергічних систем.

Таким чином, дані препарати змінюють діяльність пептідергіческіх систем. Введення психолептиків призводить до зміни рівня регуляторних пептидів у тканинах. Для розуміння динаміки процесів, що відбуваються в пептідергіческой системі при введенні психолептиків, необхідна інформація про процеси синтезу і деградації регуляторних пептидів [11, 21]. Карбоксипептидази беруть участь у кінцевих стадіях обміну пептидів [21, 30]. Тому вивчення активності КП Н, ФМСФ-КП та КП М при введенні галоперидолу та діазепаму становить значний інтерес, як для уточнення біологічної ролі самих ферментів, так і для розуміння механізмів функціонування пептідергіческіх систем мозку.

РОЗДІЛ 2. МАТЕРІАЛИ І МЕТОДИ ДОСЛІДЖЕННЯ

2.1. Матеріали дослідження

Досліди проводили на самцях лабораторних білих безпородних щурів масою 200-250 г. Тварин утримували в стандартних умовах віварію.

При вивченні гострого впливу психолептиків на активність КП Н, КП М і ФМСФ-КП in vivo діазепам вводили внутрішньочеревно у фізіологічному розчині в дозі 5 мг / кг ваги, галоперидол - 2 мг / кг ваги. Контрольні тварини отримували однакову кількість фізіологічного розчину. Щурів декапітованих під наркозом через 0,5, 4, 24 і 72 години після введення препаратів. При вивченні хронічного впливу психолептиків вищевказані дози препаратів вводилися протягом 10 днів. Через 1 і 3 доби після дії тварин декапітованих. Для дослідження впливу препаратів на КП Н, КП М і ФМСФ-КП in vitro гомогенаті тканин інкубували з психолептиків протягом 60 хв при 4 º С. Концентрації препаратів відповідали дозам при введенні in vivo.

Після декапітації витягували гіпофіз, гіпоталамус, четверохолміе, мозочок, стріатум, гіпокамп, великі півкулі, надниркові залози і насінники. Тканини очищали від оболонок і кровоносних судин, висушували фільтрувальним папером.

в соотношении 1:100 (вес:объем). Для визначення активності основних карбоксипептидази тканини зважували, а потім гомогенізували в скляному гомогенизаторе з тефлоновим товкачиком в 10 мМ натрій-ацетатному буфері (рН = 5,6), що містить 50 мМ NaCl у співвідношенні 1:100 (вага: об'єм).

У якості специфічних інгібіторів застосовували ФМСФ ("Serva", США) і ГЕМЯК (Serva ", США). В якості субстратів використовували данс-фен-ала-арг і данс-фен-лей-арг (синтезовані к.х.н. Каліхевічем В.М.). (“ Serva ”, США) и ацетат натрия (“ Merck ”, Германия), все остальные реактивы были отечественного производства с квалификацией ”ХЧ” и ”ОСЧ”. У роботі використовували трис-HCl ("Serva", США) і ацетат натрію ("Merck", Німеччина), всі інші реактиви були вітчизняного виробництва з кваліфікацією "хч" і "ОСЧ".

2.1.1. Схема експерименту

2.2. Методи дослідження

2.2.1. Метод визначення активності карбоксипептидази Н

Активність КП Н визначали модифікованим методом Fricker LD і Snyder SH [148].

(рН 5,6), добавляли 50 мкл гомогената ткани. Для визначення активності ферменту до 150 мкл (у разі дослідної проби) або 140 мкл (у разі контрольної проби) 50 мМ натрій-ацетатного буфера, що містить 50 мМ NaCl (рН 5,6), додавали 50 мкл гомогенату тканини. У контрольні проби, крім того, додавали 10 мкл 25 мкМ водного розчину ГЕМЯК. Проби преінкубіровалісь 8 хв при 37 о С. Реакцію починали додатком 50 мкл попередньо нагрітого до 37 ° С 210 мкМ данс-фен-ала-арг, приготовленого на воді (кінцева концентрація в реакційній суміші становила 42 мкМ). Далі проби інкубували 60 хв при 37 о С. Реакцію зупиняли додаванням 50 мкл 1М розчину соляної кислоти.

Для екстракції продукту реакції - данс-фен-ала - до проб доливали 1,5 мл хлороформу і струшували протягом 60 сек. Для розділення фаз проби центрифугували 10 хв при 1000 об / хв. Вимірювання флуоресценції хлороформно фази проводили на флюоріметре ФМЦ-2 в кюветі товщиною 1 см при l ex = 360 нм і l em = 530 нм. В якості стандарту використовували 1 мкМ розчин данс-фен-ала в хлороформі.

Активність КП Н визначали як різницю в накопиченні продукту реакції у пробах, що не містять і містять ГЕМЯК, і виражали в нмоль данс-фен-ала утворився за 1 хв інкубації в перерахунку на 1 мг білка.

2.2.2. Метод визначення активності карбоксипептидази М

, рН 7,4 [148]. Визначення активності КП М проводиться по вище викладеній схемі, але в якості буфера використовується 200 мМ трис-HCl, рН 7,4 [148].

2.2.3. Метод визначення активності ФМСФ-інгібіруемой карбоксипептидази

Активність ФМСФ-інгібіруемой карбоксипептидази визначали флюоріметріческім методом [148]. (рН 5,6), 10 мкл 25 мМ раствора ФМСФ, приготовленного на этиловом спирте (конечная концентрация ФМСФ в реакционной смеси составляла 1 мМ) и 50 мкл гомогената. Контрольні проби містили 140 мкл 50 мМ натрій-ацетатного буфера, що містить 50 мМ NaCl (рН 5,6), 10 мкл 25 мМ розчину ФМСФ, приготованого на етиловому спирті (кінцева концентрація ФМСФ в реакційній суміші становила 1 мМ) і 50 мкл гомогенату. У досвідчені проби вносили 150 мкл буфера і 50 мкл гомогенату.

Подальше визначення активності ФМСФ-інгібіруемой карбоксипептидази проводилося так само, як і для КП Н, з тією лише різницею, що замість данс-фен-ала-арг як субстрат використовували 50 мкл 210 мкМ данс-фен-лей-арг. Активність ферменту визначали як різницю в накопиченні продукту данс-фен-лей в пробах, несодержащіх і містять ФМСФ. Активність виражали в нмоль данс-фен-лей утворився за 1 хв інкубації в перерахунку на 1 мг білка.

и соавт. Кількість білка в пробах визначали за методом Lowry та співавт. [217].

2.2.4. Статистична обробка результатів дослідження

-критерия Стьюдента [37]. Достовірність відмінностей між середніми визначали з використанням t-критерію Стьюдента [37]. в Кореляційний та дисперсійний аналізи проводили за допомогою програми Statgraphics (версія 3.0) ("STSC, Inc." США) у и Multifactor ANOVA. Принадлежность подгрупп животных к разным гомогенным группам оценивали с помощью Multiple range analysis (Statgraphics (версия 3.0) (“STSC, Inc.” США)). режимах Simple Correlation, One-Way ANOVA і Multifactor ANOVA. Приналежність підгруп тварин до різних гомогенним групам оцінювали за допомогою Multiple range analysis (Statgraphics (версія 3.0) ("STSC, Inc." США)). Належність експериментальних (тимчасових) підгруп до різних гомогенним групам проводили тільки у разі достовірності критерію Фішера. При цьому оцінювали кількість гомогенних груп, утворюваних експериментальними підгрупами, з рівнем достовірності р <0,05. Бали підгрупах привласнювали на підставі їх належності до різних гомогенним групам у міру збільшення середнього. При цьому мінімальний бал отримувала тимчасова підгрупа з мінімальним середнім, максимальний бал - тимчасова підгрупа з максимальним середнім, а дробовий бал (1,5) отримували підгрупи, які входять одночасно в дві гомогенні групи. На підставі присвоєних балів судили про динаміку зміни активності ферментів.

3. РЕЗУЛЬТАТИ ДОСЛІДЖЕННЯ

3.1. Активність карбоксипептидази Н в тканинах щурів у нормі і при дії психолептиків

3.1.1. Розподіл активності карбоксипептидази Н в тканинах інтактних щурів

Дані про розподіл активності КП Н, отримані в ході дослідження, представлені в таблиці 1.

Таблиця 1. Активність КП Н у інтактних тварин (нмоль продукту, що утворився за 1 хв інкубації на 1 мг білка, М ± m, n = 7-8)

Відділи мозку, органи

КП Н M ± m

Гіпофіз

1,36 ± 0,18

Гіпоталамус

0,29 ± 0,02

Четверохолміе

0,30 ± 0,02

Мозочок

0,18 ± 0,01

Стріатум

0,21 ± 0,01

Гіпокамп

0,26 ± 0,02

Великі півкулі

0,23 ± 0,01

Наднирники

0,13 ± 0,01

Насінники

0,06 ± 0,01

Максимальна активність КП Н виявлена ​​в гіпофізі, де синтезуються пептидні гормони. В інших відділах мозку активність ферменту в 5-6 разів нижче, ніж у гіпофізі (за убуванням): четверохолміе, гіпоталамус, гіпокамп, великі півкулі, стріатум і мозочок. У наднирниках і сім'яниках активність ферменту в 10-20 разів нижче в порівнянні з гіпофізом. Такий розподіл активності корелює з розподілом біологічно активних пептидів у відділах мозку [201].

3.1.2. Вплив фізіологічного розчину на активність карбоксипептидази Н в тканинах щурів

3.1.2.1. Вплив одноразового введення фізіологічного розчину на активність карбоксипептидази Н в тканинах щурів. Введення фізіологічного розчину викликало зменшення активності КП Н в гіпофізі через 0,5 години - на 69%, через 4 години - на 52% і через 24 години - на 35% в порівнянні з інтактною групою (рис. 1). Активність досліджуваного ферменту знижувалася через 0,5 години в гіпоталамусі і мозочку на 28%, в стріатумі на 29% відносно норми. Ймовірно, це пов'язано з особливостями впливу внутрішньочеревно ін'єкції фізрозчину, при якій в організм поступає додаткова кількість рідини. Зниження активності КП Н може сприяти прискоренню вивільнення рідини з організму завдяки зменшенню утворення вазопресину [41]. У четверохолміе, гіпокампі, надниркових і сім'яниках зміни активності КП Н при введенні фізіологічного розчину не виявлено.

Рис. 1. – активность фермента в нмоль субстрата образовавшегося за 1 мин инкубации в пересчете на 1 мг белка) ( M ± m ; n = 5÷6; * – р < 0,05, ** – р < 0,01, *** – р < 0,001 относительно нормы; + – р < 0,05, ++ – р < 0,01, +++ – р < 0,001 относительно контроля). Активність КП Н в тканинах щурів при введенні діазепаму (по осі Y - активність ферменту в нмоль субстрату утворився за 1 хв інкубації в перерахунку на 1 мг білка) (M ± m; n = 5 ÷ 6; * - р <0,05, ** - р <0,01, *** - р <0,001 відносно норми; + - р <0,05, + + - р <0,01, + + + - р <0,001 щодо контролю).

Рис. 1 (продовження). Активність КП Н в тканинах щурів при введенні діазепаму.

3.1.2.2. Вплив хронічного введення фізіологічного розчину на активність карбоксипептидази Н в тканинах щурів. Хронічне введення фізіологічного розчину викликало підвищення активності карбоксипептидази Н в більшості досліджуваних відділах і тканинах через добу після дії і різноспрямовані зміни в окремих відділах головного мозку через 3 доби (рис. 1).

У гіпоталамусі активність КП Н збільшувалася через добу після дії на 79%, в четверохолміе - на 33%, у мозочку - на 33%, в стріатумі - на 43%, в наднирниках - на 69%, в сім'яниках - у 6 разів відносно інтактних тварин.

Через три доби після хронічного впливу спостерігалося зниження активності досліджуваного ферменту в гіпоталамусі на 24% і підвищення активності в мозочку на 55%, в гіпокампі - на 81%, в сім'яниках - в 3 рази в порівнянні з нормою.

Введення фізіологічного розчину протягом 10 днів можна розглядати в якості стресу для тварин. У зв'язку з цим підвищення активності карбоксипептидази Н може бути пов'язано зі збільшенням синтезу регуляторних пептидів при стресі [51].

Для більш повного розуміння характеру виявлених змін активності основних карбоксипептидази первинний експериментальний матеріал був підданий дисперсійному аналізі впливу часу після ін'єкції фізрозчину (табл. 2).

Залежність активності КП Н від часу після ін'єкції спостерігалася в усіх досліджуваних відділах мозку і тканинах за винятком великих півкуль. У гіпофізі активність ферменту знижувалася через 0,5 години після одноразової ін'єкції фізрозчину і залишалася такою до чотирьох годин, через 24 години спостерігалося невелике підвищення активності КП Н, яке зберігалося до 72 годин після введення. Хронічне введення фізіологічного розчину не впливало на зміну активності через добу після впливу і трохи підвищувало активність карбоксипептидази Н через три доби.

Табл. 2. Ф и баллы экспериментальных (временных) подгрупп). Дисперсійний аналіз впливу часу після ін'єкції фізіологічного розчину на активність КП Н в тканинах самців щурів (значення критерію Фішера F Ф і бали експериментальних (тимчасових) підгруп).

Тканина

Ф F Ф

Тимчасові підгрупи



норма

0,5 ч.

4 ч.

24 ч.

72 ч.

1 сут.

3 діб.

Гіпофіз

4,30 **

2

1

1

1,5

1,5

2

1,5

Гіпоталамус

9,70 ***

1,5

1

1,5

1,5

2

3

1,5

Четверохолміе

1,77 *

1,5

1

1,5

1,5

1,5

2

1,5

Мозочок

7,96 ***

1

1

1

1

1

2

2

Стріатум

4,14 ***

1

1

1

1

1

2

1,5

Гіпокамп

5,24 ***

1

1

1

1

1

1

2

Великі півкулі

0,59

-

-

-

-

-

-

-

Наднирники

8,22 ***

1

1

1

1

1

2

1

Насінники

30,97 ***

1

1

1

1

1

3

2

У гіпоталамусі і четверохолміе активність КП Н трохи знижувалася через 0,5 години після гострого введення фізрозчину, а через 4 години підвищувалась до рівня норми і залишалася такою в четверохолміе до 72 годин, а в гіпоталамусі до 24 годин. У гіпоталамусі спостерігалося підвищення активності ферменту відносно норми через 72 години після одноразової ін'єкції фізіологічного розчину. Хронічне введення фізрозчину викликало значне підвищення активності карбоксипептидази Н в гіпоталамусі через добу після впливу і зниження до рівня норми через три доби. У четверохолміе введення фізрозчину протягом 10 днів призводило до невеликого підвищення активності КП Н тільки через добу після впливу. Активність ферменту в мозочку, стріатумі, гіпокампі, надниркових і сім'яниках не змінювалася протягом 72 годин після гострого введення фізрозчину. Хронічний вплив викликало підвищення активності карбоксипептидази Н в мозочку через 1 і 3 доби, в гіпокампі лише через 3 доби після останньої ін'єкції фізрозчину. У стріатумі активність ферменту підвищувалася через добу і трохи знижувалася через три доби після хронічного впливу. Підвищення активності КП Н в наднирниках відбувалося через добу, а через три доби після хронічного введення фізіологічного розчину спостерігалося зниження активності до рівня інтактних тварин. У сім'яниках активність карбоксипептидази Н підвищувалася через 1 і 3 доби після хронічного впливу, але через добу зміни були більш виражені.

Таким чином, однократна ін'єкція фізіологічного розчину викликала зниження активності карбоксипептидази Н тільки в гіпофізі, гіпоталамусі і четверохолміе, в той час як хронічний вплив підвищувало активність ферменту у всіх досліджених тканинах. Іншими словами тривалий вплив викликало більш виражені зміни активності ферменту.

3.1.3. Активність карбоксипептидази Н в тканинах щурів при введенні діазепаму

3.1.3.1. Вплив одноразового введення діазепаму на активність карбоксипептидази Н в тканинах щурів. Одноразове введення діазепаму викликало зниження активності карбоксипептидази Н в гіпофізі через 24 і 72 години на 59 і 39% в порівнянні з відповідними значеннями контролю (рис. 1). У гіпоталамусі активність досліджуваного ферменту через 4, 24 і 72 години була нижче, ніж у контрольних тварин, на 33, 27 і 36% відповідно. Зниження активності карбоксипептидази Н на 38% спостерігалося в наднирниках через 72 години після впливу. Отримані результати узгоджуються з уявленнями про стрес-протективного дії діазепаму [51] шляхом інгібування гіпоталамо-гіпофізарно-надниркової системи і зменшення секреції і освіти АКТГ при його введенні [263, 290]. Діазепам знижував активність КП Н в четверохолміе через 4 і 24 години в 1,3 рази, через 72 години в 1,5 рази відносно відповідних значень контролю. Активність карбоксипептидази Н у великих півкулях через 4 години становила 81%, через 24 години - 72% і через 72 години - 65% від відповідних значень контрольної групи. У мозочку активність ферменту змінювалася через 4, 24 і 72 години після введення діазепаму: вона знижувалася в порівнянні з контрольними тваринами на 25, 28 і 39% відповідно. Активність КП Н в гіпокампі була менше, ніж у контролю в 1,4 рази через 4, 24 і 72 години. На основі отриманих даних можна припустити, що зменшення рівня холецистокинином під дією бензодіазепінів [24] викликано зниженням активності ВПП. Крім того, за даними низки науковців [126, 285] речовина Р залучається до модуляцію стресу і його рівень підвищений у пацієнтів з депресивними розладами. Зниження рівня цього пептиду в гіпокампі при введенні діазепаму [95] можна бути пов'язано зі зниженням активності ВПП. У сім'яниках активність КП Н знижувалася в 2,3 рази щодо контролю через 72 години після ін'єкції діазепаму. У статевих залозах самців синтезуються енкефаліни, холецистокінін і інші біологічно активні пептиди [195, 260], в обміні яких бере участь карбоксипептидаза Н, тому зниження активності ферменту може впливати на рівень пептидів у насінниках. Однократна ін'єкція діазепаму не впливала на активність КП Н тільки в стріатумі.

3.1.3.2. Вплив хронічного введення діазепаму на активність карбоксипептидази Н в тканинах щурів. Введення діазепаму протягом 10 днів викликало зниження активності КП Н у всіх досліджуваних тканинах за винятком гіпокампу та великих півкуль через добу після дії (рис. 1). Найбільші зміни активності ферменту виявлено в периферичних тканинах: у надниркових - в 7 разів і сім'яниках - в 6,5 разів відносно контрольної групи. У гіпофізі активність карбоксипептидази Н зменшувалася в 4 рази, в гіпоталамусі - в 2,5 рази, в мозочку - на 58%, в стріатумі - на 47% і в четверохолміе - на 42% у порівнянні з відповідними значеннями контролю. Таким чином, хронічне введення діазепаму призводило до таких же змін активності КП Н, як і при гострій дії препарату. Діазепам, який вводиться протягом 10 днів, викликав інгібування гіпоталамо-гіпофізарно-надниркової та гіпоталамо-гіпофізарно-гонадної систем, а також відділів, що відповідають за рухову активність тварин. Через три доби після хронічного введення діазепаму зниження активності КП Н виявлено у відділах з високим вмістом опіоїдних пептидів: в гіпокампі в 1,6 рази і в наднирниках в 3 рази щодо контрольних тварин (рис. 1). Таким чином, хронічне введення діазепаму викликало найбільші зміни активності карбоксипептидази Н через добу після впливу. Статистично значуща тимчасова динаміка зміни активності КП Н спостерігалася в гіпофізі, гіпоталамусі, четверохолміе, мозочку, гіпокампі, великих півкулях, надниркових і сім'яниках (табл. 3).

У гіпофізі спостерігалося зниження активності карбоксипептидази Н щодо норми як після одноразового, так і після хронічного введення діазепаму. Гостра дія викликало зниження активності ферменту в гіпоталамусі через 0,5 години; через 4 години спостерігалося невелике підвищення активності КП Н, яке зберігалося протягом 72 годин, а також після хронічного впливу.

Табл. 3. Ф и баллы экспериментальных (временных) подгрупп). Дисперсійний аналіз впливу часу після ін'єкції діазепаму на активність КП Н в тканинах самців щурів (значення критерію Фішера F Ф і бали експериментальних (тимчасових) підгруп).

Тканина

Ф F Ф

Тимчасові підгрупи



норма

0,5 ч.

4

ч.

24

ч.

72

ч.

1 сут.

3 діб.

Гіпофіз

6,18 ***

2

1

1

1

1

1

1

Гіпоталамус

3,16 **

2

1

1,5

1,5

1,5

1,5

1,5

Четверохолміе

4,17 **

2

1

1

1

1

1,5

1,5

Мозочок

12,29 ***

2

1,5

1

1,5

1

1,5

3

Стріатум

1,71

-

-

-

-

-

-

-

Гіпокамп

5,99 ***

1,5

1

1

1

1

2

2

Великі півкулі

3,92 **

2

1,5

1

1

1

1,5

1,5

Наднирники

12,61 ***

3

2,5

1,5

2

2

1

1

Насінники

29,63 ***

1

1

1

1

1

1

2

У четверохолміе активність ферменту знижувалася через 0,5 години після ін'єкції діазепаму і зберігалася на цьому рівні до 72 годин. Хронічне введення діазепаму викликало лише невелике зниження активності КП Н щодо норми через 1 і 3 доби. Активність карбоксипептидази Н в мозочку поступово знижувалася до 4 годин, через 24 години трохи підвищувалася і знову знижувалася через 72 години після гострого впливу діазепаму. Невелике зниження активності ферменту в мозочку відбувалося через добу після хронічного введення діазепаму, через три доби активність КП Н значно підвищувалася відносно норми. У гіпокампі спостерігалося невелике зниження активності карбоксипептидази Н після одноразової ін'єкції діазепаму та підвищення активності після хронічного введення препарату. Активність КП Н у великих півкулях знижувалася протягом 4 годин після одноразової ін'єкції діазепаму і до 72 годин зберігалася на цьому рівні. Невелике підвищення активності ферменту у великих півкулях відбувалося після хронічного введення препарату. У наднирниках ін'єкція діазепаму викликала поступове зниження активності КП Н до 4 годин, потім невелике підвищення через 24 години, яке зберігалося до 72 годин. Препарат, який вводиться протягом 10 днів, викликав значне зниження активності ферменту в наднирниках через 1 і 3 доби після впливу. У сім'яниках підвищення активності карбоксипептидази Н спостерігалося тільки через три доби після хронічного введення діазепаму.

Таким чином, одноразове введення діазепаму викликало зниження активності карбоксипептидази Н щодо інтактних тварин, а хронічний вплив призводило до різноспрямованим змін в досліджуваних тканинах.

3.1.4. Активність карбоксипептидази Н в тканинах щурів при введенні галоперидолу

3.1.4.1. Вплив одноразового введення галоперидолу на активність карбоксипептидази Н в тканинах щурів. Введення галоперидолу не вплинуло на активність КП Н в четверохолміе, стріатумі, гіпокампі і великих півкулях. У сім'яниках достовірне зниження активності приблизно в 2 рази по відношенню до контролю спостерігалося через 24 і 72 години після впливу (рис. 2). Відомо, що ін'єкція галоперидолу викликає підвищення секреції гонадотропіну [273, 276], що впливає на рівень статевих стероїдів, які в свою чергу знижують активність карбоксипептидази Н [47]. У гіпоталамусі і мозочку активність ферменту через 0,5 години була вище, ніж у контрольної групи на 57 і 46% відповідно. Спостерігалося підвищення активності КП Н в гіпофізі через 0,5 години в 2 рази і через 4 години на 74% у порівнянні з контролем. У наднирниках значення досліджуваного параметра було в 1,6 рази вище, ніж у контрольних тварин, через 4 години і в 1,4 рази через 72 години після ін'єкції галоперидолу. Таким чином, галоперидол у дозі 2 мг / кг викликав достовірні зміни активності ВПП у відділах гіпоталамо-гіпофізарно-надниркової системи. При цьому підвищення активності в гіпоталамусі спостерігалося вже через 0,5 години, в гіпофізі - через 0,5 і 4 години, в наднирниках - через 4 і 72 години після ін'єкції. При введенні галоперидолу відзначається підвищення рівня ПОМК в проміжній частці гіпофіза [103] і посилення секреції гормонів гіпофізу [49, 98, 273, 287]. Зіставлення цих даних з результатами нашої роботи дозволяє припустити, що ВПП бере участь у реалізації ефекту галоперидолу.

Рис. 2. – активность фермента в нмоль субстрата образовавшегося за 1 мин инкубации в пересчете на 1 мг белка) ( M ± m ; n = 5÷6; * – р < 0,05, ** – р < 0,01, *** – р < 0,001 относительно нормы; + – р < 0,05, ++ – р < 0,01, +++ – р < 0,001 относительно контроля). Активність КП Н в тканинах щурів при введенні галоперидолу (по осі Y - активність ферменту в нмоль субстрату утворився за 1 хв інкубації в перерахунку на 1 мг білка) (M ± m; n = 5 ÷ 6; * - р <0,05, ** - р <0,01, *** - р <0,001 відносно норми; + - р <0,05, + + - р <0,01, + + + - р <0,001 щодо контролю).

Рис. 2 (продовження). Активність КП Н в тканинах щурів при введенні галоперидолу.

3.1.4.2. Вплив хронічного введення галоперидолу на активність карбоксипептидази Н в тканинах щурів. Хронічне введення галоперидолу викликало зниження активності КП Н у всіх досліджуваних тканинах і відділах мозку за винятком великих півкуль через добу після впливу (рис. 2).

Найбільші зміни активності ферменту виявлено в надниркових залозах (у 2,2 рази), в гіпоталамусі (у 2 рази), в гіпофізі і сім'яниках (в 1,9 рази) в порівнянні з контролем. У стріатумі спостерігалося зниження активності карбоксипептидази Н через добу після дії на 37%, у мозочку - на 36%, в четверохолміе - на 40%, в гіпокампі - на 30% відносно контрольної групи. У порівнянні з однократним введенням галоперидолу хронічний вплив викликало зниження активності КП Н в більшості досліджуваних відділах мозку. Карбоксипептидаза Н локалізована переважно у везикулах секреторних клітин, в результаті спустошення яких при хронічному впливі галоперидолу вивільняються як пептиди, так і молекули ферменту. Отже, виявлене зниження активності КП Н може бути обумовлено зменшенням числа активних молекул ферменту в секреторних везикулах.

Через три доби після хронічного впливу зафіксовано зменшення активності КП Н у відділах мозку (у четверохолміе - на 25%, в гіпокампі - в 3 рази) та підвищення в периферичних тканинах (у надниркових - на 38%, в сім'яниках - на 33%) ( рис. 2). Різноспрямовані зміни активності ферменту можуть бути пов'язані з ефектом відміни препарату і відновленням ендокринних функцій мозку.

Таким чином, через добу після хронічного впливу спостерігалося зниження активності КП Н в більшості досліджуваних тканинах, а через три доби - різноспрямовані зміни в периферичних тканинах, четверохолміе і гіпокампі.

Дисперсійний аналіз впливу часу після ін'єкції галоперидолу виявив статистично значущі відмінності у динаміці змін активності карбоксипептидази Н в гіпофізі, мозочку, гіпокампі, надниркових і сім'яниках (табл. 4).

У гіпофізі активність карбоксипептидази Н через 0,5 години після одноразової ін'єкції галоперидолу трохи знижувалася і залишалася на цьому рівні до 24 годин; до 72 години спостерігалося подальше зниження активності ферменту. Після хронічного введення препарату активність ферменту незначно знижувалася відносно норми.

Таблиця 4. Ф и баллы экспериментальных (временных) подгрупп). Дисперсійний аналіз впливу часу після ін'єкції галоперидолу на активність КП Н в тканинах самців щурів (значення критерію Фішера F Ф і бали експериментальних (тимчасових) підгруп).

Тканина

Ф F Ф

Тимчасові підгрупи



норма

0,5 ч.

4

ч.

24

ч.

72

ч.

1 сут.

3 діб.

Гіпофіз

2,36 *

2

1,5

1,5

1,5

1

1,5

1,5

Гіпоталамус

1,34

-

-

-

-

-

-

-

Четверохолміе

1,22

-

-

-

-

-

-

-

Мозочок

6,83 ***

1

1

1

1

1

1

2

Стріатум

1,77

-

-

-

-

-

-

-

Гіпокамп

3,03 **

2

2

1,5

1,5

2

1,5

1

Великі півкулі

1,80

-

-

-

-

-

-

-

Наднирники

3,93 ***

1,5

1

1,5

1

1

1

2

Насінники

8,99 ***

1,5

1,5

1,5

1

1

2

3

Підвищення активності КП Н в мозочку відбувалося лише через 3 доби після хронічного введення галоперидолу. У гіпокампі невелике зниження активності ферменту спостерігалося через 4 години після ін'єкції препарату, яке зберігалося до 24 годин; до 72 години активність КП Н підвищувалася до значень інтактних тварин. Хронічне введення діазепаму викликало зниження активності карбоксипептидази Н в гіпокампі, причому через три доби зміна була більш виражено. У наднирниках активність ферменту трохи знижувалася через 0,5 години, через 4 години поверталася до значень норми, через 24 години знову знижувалася і залишалася такою до 72 годин після одноразового введення діазепаму. Хронічний вплив викликало зниження активності КП Н в наднирниках через добу і підвищення через 3 доби. У сім'яниках невелике зниження активності карбоксипептидази Н відбувалося тільки через 24 години після одноразової ін'єкції галоперидолу і зберігалося до 72 годин. Після хронічного введення препарату активність ферменту в наднирниках підвищувалася, причому через три доби підвищення було більше, ніж через добу.

Таким чином, найбільш значущі зміни активності карбоксипептидази Н щодо інтактних тварин спостерігалися при хронічному введенні галоперидолу.

3.2. Активність ФМСФ-інгібіруемой карбоксипептидази в тканинах щурів у нормі і при дії психолептиків

3.2.1. Розподіл активності ФМСФ-інгібіруемой карбоксипептидази в тканинах інтактних щурів

Отримані дані про розподіл активності ФМСФ-інгібіруемой КП представлені в таблиці 5.

Таблиця 5. Активність ФМСФ-інгібіруемой КП у інтактних тварин (нмоль продукту, що утворився за 1 хв інкубації на 1 мг білка, М ± m, n = 7-8)

Відділи мозку, органи

ФМСФ - інгібіруемая КП, M ± m

Гіпофіз

0,44 ± 0,05

Гіпоталамус

0,15 ± 0,01

Четверохолміе

0,13 ± 0,01

Мозочок

0,16 ± 0,01

Стріатум

0,14 ± 0,01

Гіпокамп

0,13 ± 0,01

Великі півкулі

0,16 ± 0,01

Наднирники

0,77 ± 0,06

Насінники

0,11 ± 0,01

Максимальна активність ФМСФ-інгібіруемой КП зареєстрована в наднирниках, в гіпофізі активність нижче на 42%. У цих відділах синтезуються нейропептиди і гормони пептидної природи. Активність в інших відділах мозку приблизно однакова і становить 20% від активності в наднирниках. У сім'яниках активність досліджуваного ферменту в 4 разів нижче, ніж у гіпофізі.

3.2.2. Активність ФМСФ-інгібіруемой КП в тканинах щурів при введенні фізіологічного розчину

3.2.2.1. Вплив одноразового введення фізрозчину на активність ФМСФ-інгібіруемой КП в тканинах щурів. Ін'єкція фізіологічного розчину викликала підвищення активності ФМСФ-інгібіруемой КП у всіх вивчених тканинах і відділах мозку (рис. 3). У гіпофізі активність досліджуваного ферменту збільшувалася через 0,5 години на 41%, через 24 години на 48% і через 72 години на 52% в порівнянні з інтактною групою. Введення фізрозчину викликало підвищення активності ФМСФ-інгібіруемой КП в четверохолміе через усі досліджувані проміжки часу приблизно в 1,5 рази відносно норми. Активність ферменту в гіпоталамусі зросла через 0,5, 4, 24 і 72 години на 47, 40, 67 і 93% відповідно в порівнянні з нормою. У мозочку активність ФМСФ-інгібіруемой КП підвищувалася через усі досліджувані проміжки часу на 31, 37, 44 і 62% щодо інтактних тварин. Через 4 і 24 години після ін'єкції фізрозчину спостерігалося підвищення активності досліджуваного ферменту в гіпокампі на 46 і через 72 години на 69% по відношенню до норми. У наднирниках активність ФМСФ-інгібіруемой КП підвищувалася через 4, 24 і 72 години на 30, 44 і 60% відповідно. У стріатумі активність ферменту через 0,5 і 4 години була на 36%, через 24 години на 57%, через 72 години на 93% більше, ніж у інтактної групи. Ін'єкція фізіологічного розчину викликала підвищення активності ФМСФ-інгібіруемой КП у великих півкулях через всі проміжки часу на 31, 37, 50 і 94% відносно норми. У сім'яниках активність ферменту була вищою через 0,5, 4 і 72 години після введення фізрозчину на 73, 45 і 36% відповідно, ніж у інтактних тварин. Якщо розглядати ін'єкцію фізрозчину як короткочасний стрес, то підвищення активності ФМСФ-інгібіруемой КП може бути пов'язано з підвищенням рівня синтезу енкефалінів і ендорфінів при дії стресу [51].

Рис. 3. – активность фермента в нмоль субстрата образовавшегося за 1 мин инкубации в пересчете на 1 мг белка) ( M ± m ; n = 5÷6; * – р < 0,05, ** – р < 0,01, *** – р < 0,001 относительно нормы; + – р < 0,05, ++ – р < 0,01, +++ – р < 0,001 относительно контроля). Активність ФМСФ-інгібіруемой КП в тканинах щурів при введенні діазепаму (по осі Y - активність ферменту в нмоль субстрату утворився за 1 хв інкубації в перерахунку на 1 мг білка) (M ± m; n = 5 ÷ 6; * - р <0, 05, ** - р <0,01, *** - р <0,001 відносно норми; + - р <0,05, + + - р <0,01, + + + - р <0,001 щодо контролю).

Рис. 3 (продовження). Активність ФМСФ-інгібіруемой КП в тканинах щурів при введенні діазепаму.

Рис. 3 (продовження). Активність ФМСФ-інгібіруемой КП в тканинах щурів при введенні діазепаму.

3.2.2.2. Вплив хронічного введення фізіологічного розчину на активність ФМСФ-інгібіруемой КП в тканинах щурів. Хронічне введення фізрозчину призводило до підвищення активності ФМСФ-КП через добу після дії в гіпофізі на 66%, в четверохолміе - на 61%, у мозочку - в 2,7 рази, в гіпокампі - в 3,5 рази, у великих півкулях - на 87%, в сім'яниках - в 2 рази (рис. 3). У стріатумі і наднирниках через добу після впливу спостерігалося зниження активності ферменту в 2 і 1,6 рази відповідно щодо інтактних тварин. У гіпоталамусі статистично значущих відмінностей не виявлено.

Через три доби після хронічного введення фізіологічного розчину спостерігалося підвищення активності ФМСФ-інгібіруемой КП в гіпофізі в 2,2 рази, в мозочку - в 3 рази, в стріатумі - в 4,5 рази, в гіпокампі - в 2,3 рази, в сім'яниках - в 4 рази щодо інтактних тварин. У наднирниках активність ферменту знижувалася на 40% в порівнянні з нормою. У гіпоталамусі, четверохолміе і великих півкулях через три доби після впливу активність ФМСФ-КП не відрізнялася від такої у інтактної групи.

Таким чином, хронічне введення фізіологічного розчину викликало зміни активності ФМСФ-інгібіруемой КП практично у всіх досліджуваних відділах мозку і тканинах, що узгоджується з даними про участь ФМСФ-КП у відповіді організму на стрес [5]. Статистично значуща тимчасова динаміка зміни активності ФМСФ-інгібіруемой КП спостерігалася в усіх досліджуваних тканинах і відділах мозку (табл. 6).

У гіпофізі спостерігалося невелике підвищення активності ФМСФ-інгібіруемой КП через 0,5 години, зниження через 4 години і підвищення до колишнього рівня через 24 години, яке зберігалося до 72 годин після гострого введення фізіологічного розчину. Хронічний вплив викликало поступове підвищення активності ферменту в гіпофізі протягом трьох діб. Активність ФМСФ-КП в гіпоталамусі, четверохолміе, великих півкулях, мозочку, стріатумі і наднирниках поступово підвищувалася до 72 годин після одноразової ін'єкції фізрозчину. Через добу після хронічного введення в гіпоталамусі спостерігалося невелике зниження, а через три доби підвищення активності відносно норми. У четверохолміе хронічний вплив фізіологічного розчину викликало підвищення активності ФМСФ-КП, причому найбільш виражений через добу. Активність ферменту в мозочку значно підвищувалася відносно норми після хронічного введення фізрозчину. У стріатумі введення фізрозчину протягом 10 днів призводило до невеликого зниження активності ФМСФ-інгібіруемой КП через добу і підвищенню через три доби. Однократна ін'єкція фізіологічного розчину викликала невелике підвищення активності ФМСФ-КП в гіпокампі через 4 години, яке зберігалося до 72 годин. Хронічний вплив призводило до підвищення активності ферменту в гіпокампі і великих півкулях через 1 і 3 доби.

Таблиця 6. Ф и баллы экспериментальных (временных) подгрупп). Дисперсійний аналіз впливу часу після ін'єкції фізіологічного розчину на активність ФМСФ-інгібіруемой КП в тканинах самців щурів (значення критерію Фішера F Ф і бали експериментальних (тимчасових) підгруп).

Тканина

Ф F Ф

Тимчасові підгрупи



норма

0,5

ч.

4

ч.

24

ч.

72

ч.

1 сут.

3 діб.

Гіпофіз

,11** 4, 11 **

1

1,5

1

1,5

1,5

1,5

2

Гіпоталамус

6,55 ***

1,5

2,5

2,5-3,5

1; 3,5

4

1

1,5-2,5

Четверохолміе

8,48 ***

1

2

2

2,5

3

1,5-2,5

1,5

Мозочок

16,60 ***

1

1,5

1,5

1,5

2

3

3

Стріатум

21,75 ***

1,5

1,5-2,5

1,5-2,5

2,5

3

1

4

Гіпокамп

7,40 ***

1

1

1,5

1,5

1,5

3

2,5

Великі півкулі

5,72 ***

1

1,5

1,5

1,5-2,5

3

2,5

1,5-2,5

Наднирники

12,74 ***

1,5

2,5

2,5-3,5

3,5

4

1

1

Насінники

4,66 **

1

1

1

1

1

1,5

2

У наднирниках хронічне введення фізрозчину призводило до невеликого зниження активності ФМСФ-інгібіруемой КП щодо норми. Поступове підвищення активності ферменту протягом трьох діб відбувалося в сім'яниках після хронічного впливу фізрозчину.

Таким чином, однократна ін'єкція фізіологічного розчину призводила до підвищення активності ФМСФ-інгібіруемой КП, яке зберігалося протягом 72 годин. Значне підвищення активності ферменту спостерігалося і при хронічному введенні фізіологічного розчину.

3.2.3. Активність ФМСФ-інгібіруемой КП в тканинах щурів при введенні діазепаму

3.2.3.1. Вплив одноразового введення діазепаму на активність ФМСФ-інгібіруемой КП в тканинах щурів. Введення діазепаму викликало вірогідні зміни активності ФМСФ-інгібіруемой КП у всіх вивчених тканинах (рис. 3). У гіпофізі через 4 і 72 години активність ферменту була нижчою на 24 і 49% відповідно, ніж у контролю. Через 24 і 72 години в гіпоталамусі спостерігалося зниження активності ФМСФ-інгібіруемой КП на 32 і 55% щодо відповідних значень контрольних тварин. Через 24 і 72 години спостерігалося зниження активності порівняно з контролем в мозочку на 13 і 31% відповідно. У стріатумі активність ФМСФ-інгібіруемой КП через 24 години була нижче на 23% і через 72 години - на 37%. Відомо, що введення діазепаму викликає зниження рівня мет-енкефаліну в стріатумі [237]. У наших дослідженнях зміни активності ВПП у стріатумі не були виявлені, але сталося зниження активності ФМСФ-КП. Звідси можна припустити, що ФМСФ-інгібіруемая КП бере участь в обміні енкефалінів в стріатумі, попередники яких є переважаючими субстратами для ФМСФ-інгібіруемой КП [9, 26].

У великих півкулях через 24 і 72 години спостерігалося зниження активності ФМСФ-інгібіруемой КП на 25 і 35%. Відповідно на 15, 19 і 43% була нижче активність ферменту в четверохолміе через 4, 24 і 72 години після ін'єкції діазепаму. У наднирниках зафіксовано зниження активності ФМСФ-інгібіруемой КП через 4, 24 і 72 години на 25, 19 і 33% щодо відповідних значень контролю. У гіпокампі зниження досліджуваного параметра в порівнянні з контрольними тваринами спостерігалося через 4 і 24 години на 21% і через 72 години на 27%.

Зниження активності ферменту в сім'яниках через 0,5 години після впливу на 63% і через 72 години на 33% може бути пов'язане зі збільшенням рівня тестостерону під дією діазепаму [48, 123].

Таким чином, зниження активності даного ферменту може бути одним з механізмів зниження рівня ряду регуляторних пептидів при введенні діазепаму.

3.2.3.2. Вплив хронічного введення діазепаму на активність ФМСФ-інгібіруемой КП в тканинах щурів. Через добу після хронічне введення діазепаму спостерігалося зниження активності ФМСФ-інгібіруемой КП в гіпофізі на 45%, у мозочку на 58%, в гіпокампі в 2,5 рази, у великих півкулях на 30% в порівнянні з контрольною групою (рис. 3). У стріатумі активність ферменту через добу після впливу підвищувалася в 2,4 рази, в наднирниках - на 67%, в сім'яниках - в 2,7 рази по відношенню до контролю. У гіпоталамусі і четверохолміе статистично значущих змін не виявлено.

Хронічне введення діазепаму призводило до зниження активності ФМСФ-КП через три доби після впливу в гіпофізі на 53%, у мозочку на 45%, в стріатумі в 3 рази, в гіпокампі в 1,5 рази відносно контрольних тварин (рис. 3). Підвищення активності ферменту зафіксовано в гіпоталамусі на 70%, четверохолміе на 56% і наднирниках на 65% в порівнянні з контролем.

Таким чином, введення діазепаму протягом 10 днів викликало різноспрямовані зміни активності ФМСФ-інгібіруемой КП у всіх досліджуваних відділах мозку і тканинах відносно контрольних тварин. Отримані дані дозволяють припустити, що фермент бере участь в обміні регуляторних пептидів при хронічному введенні діазепаму.

Дисперсійний аналіз впливу часу після ін'єкції діазепаму на активність ФМСФ-інгібіруемой КП показав, що статистично значуща динаміка зміни активності ферменту спостерігалась у гіпофізі, гіпоталамусі, четверохолміе, мозочку, гіпокампі і сім'яниках (табл. 7).

Таблиця 7. Ф и баллы экспериментальных (временных) подгрупп). Дисперсійний аналіз впливу часу після ін'єкції діазепаму на активність ФМСФ-інгібіруемой КП в тканинах самців щурів (значення критерію Фішера F Ф і бали експериментальних (тимчасових) підгруп).

Тканина

Ф F Ф

Тимчасові підгрупи



норма

0,5 ч.

4

ч.

24

ч.

72

ч.

1 сут.

3 діб.

Гіпофіз

4,12 **

1,5-2,5

3

1,5

1,5

1

1,5

2,5

Гіпоталамус

8,44 ***

1

1

1

1

1

1

2

Четверохолміе

11,49 ***

1

3,5

1,5

1,5

1,5

2,5

4

Мозочок

5,07 ***

1

2,5

1,5

1,5

1,5

1,5

3

Стріатум

1,57

-

-

-

-

-

-

-

Гіпокамп

2,27 *

1

1,5

1,5

1,5

1,5

1,5

2

Великі півкулі

2,57

-

-

-

-

-

-

-

Наднирники

0,89

-

-

-

-

-

-

-

Насінники

6,09 ***

1

1

1

1

1

2

2

У гіпофізі спостерігалося підвищення активності ФМСФ-інгібіруемой КП через 0,5 години, і поступове зниження до 72 годин після одноразової ін'єкції діазепаму. Хронічне введення препарату викликало підвищення активності ферменту в гіпоталамусі лише через 3 доби. У четверохолміе активність ФМСФ-КП підвищувалася через 0,5 години, через 4 години знижувалася і зберігалася на цьому рівні до 72 годин після одноразової ін'єкції діазепаму. Хронічне введення препарату призводило до підвищення активності ферменту в четверохолміе, при цьому найбільш виражені зміни виявлені через 3 доби. У мозочку активність ФМСФ-КП підвищувалася через 0,5 години, трохи знижувалася до 4 годин і залишалася такою до 72 годин після одноразової ін'єкції діазепаму. Хронічне введення діазепаму викликало підвищення активності ферменту протягом трьох діб. У гіпокампі спостерігалося невелике підвищення активності ФМСФ-інгібіруемой КП через всі проміжки часу після одноразового введення діазепаму і через добу після хронічного. Через 3 доби активність ферменту в гіпокампі була вищою, ніж через добу після хронічного введення препарату. У сім'яниках активність ФМСФ-КП підвищувалася через 1 і 3 доби після хронічного впливу.

Таким чином, як одноразове, так і хронічне введення діазепаму викликало підвищення активності ФМСФ-інгібіруемой КП щодо норми.

3.2.4. Активність ФМСФ-інгібіруемой КП в тканинах щурів при введенні галоперидолу

3.2.4.1. Вплив одноразового введення галоперидолу на активність ФМСФ-інгібіруемой КП в тканинах щурів. Введення галоперидолу не впливало на активність ФМСФ-інгібіруемой КП тільки в сім'яниках (рис. 4). У гіпофізі, гіпоталамусі і мозочку активність знижувалася через 4 години після ін'єкції на 26, 24 і 14% відповідно відносно контролю. Підвищення активності ФМСФ-інгібіруемой КП через 0,5 години на 29% і зниження через 4 і 72 години на 20 і 29% відповідно спостерігалося в четверохолмія. У гіпокампі активність ферменту підвищувалася через 0,5 години і знижувалася через 4 години на 37% в порівнянні з контрольною групою. Відомо, що при введенні галоперидолу в гіпокампі і великих півкулях підвищується рівень холецистокініну і речовини Р [324]. Не виключено, що ФМСФ-КП бере участь в обміні цих пептидів при введенні галоперидолу. У стріатумі активність ФМСФ-інгібіруемой КП через 0,5 години була в 1,5 рази вище, ніж у контролю, а через 4 і 24 години нижче на 26 і 18% відповідно. Відомо, що однократна ін'єкція галоперидолу призводить до збільшення рівня мет-енкефаліну й нейротензин в стріатумі [211, 232, 261]. Крім того, рівень нейротензин у хворих на шизофренію зменшений, але відновлюється після лікування галоперидолом [59, 92, 292]. Оскільки зміна активності ВПП у цьому відділі мозку не виявлені, то можна припустити, що в процесинг регуляторних пептидів, синтезованих в стріатумі при введенні галоперидолу, залучена ФМСФ-КП.

Активність ФМСФ-інгібіруемой КП через 0,5 години підвищувалася у великих півкулях на 43%, в наднирниках на 63%, а через 24 години знизилася на 21% щодо контрольних тварин в обох випадках. У наднирниках синтезується велика кількість мет-енкефаліну, попередники якого є переважаючими субстратами для ФМСФ-КП [26], тому можна припустити, що цей фермент залучений в обмін енкефалінів в наднирниках при введенні галоперидолу.

Рис. 4. – активность фермента в нмоль субстрата образовавшегося за 1 мин инкубации в пересчете на 1 мг белка) ( M ± m ; n = 5÷6; * – р < 0,05, ** – р < 0,01, *** – р < 0,001 относительно нормы; + – р < 0,05, ++ – р < 0,01, +++ – р < 0,001 относительно контроля). Активність ФМСФ-інгібіруемой КП в тканинах щурів при введенні галоперидолу (по осі Y - активність ферменту в нмоль субстрату утворився за 1 хв інкубації в перерахунку на 1 мг білка) (M ± m; n = 5 ÷ 6; * - р <0, 05, ** - р <0,01, *** - р <0,001 відносно норми; + - р <0,05, + + - р <0,01, + + + - р <0,001 щодо контролю).

Рис. 4 (продовження). Активність ФМСФ-інгібіруемой КП в тканинах щурів при введенні галоперидолу.

3.2.4.2. Вплив хронічного введення галоперидолу на активність ФМСФ-інгібіруемой КП в тканинах щурів. Хронічне введення галоперидолу викликало зниження активності ФМСФ-інгібіруемой КП через добу після дії в гіпофізі на 44%, в четверохолміе на 38%, у мозочку на 39%, в гіпокампі в 5 разів, у великих півкулях в 3,7 рази, в наднирниках в 2,5 рази щодо контролю (рис. 4).

Через три доби після введення галоперидолу активність ферменту знижувалася в гіпофізі на 42% і стріатумі на 22% в порівнянні з контрольною групою (рис. 4). Підвищення активності ФМСФ-КП спостерігалося в гіпоталамусі у 2,3 рази, в четверохолміе в 2 рази, в гіпокампі на 47%, в наднирниках в 2 рази щодо контролю через три доби після впливу.

Таким чином, хронічне введення галоперидолу призводило до зниження активності ФМСФ-інгібіруемой КП через добу після впливу і різноспрямованим змінам через три доби. Можна припустити, що зниження активності ферменту через добу після дії пов'язано зі зменшенням числа активних молекул.

Через три доби, тобто в період скасування препарату, відбувається відновлення ферментативної системи і спостерігається підвищення активності ФМСФ-КП.

Згідно дисперсійного аналізу (табл. 8) достовірні зміни динаміки активності ФМСФ-інгібіруемой КП після введення галоперидолу спостерігалися у всіх вивчених відділах мозку і тканинах.

У гіпофізі активність ФМСФ-інгібіруемой КП підвищувалася через 0,5 год, потім поверталася до значень інтактних тварин, незначно збільшувалася до 24г і залишалася на цьому рівні до 72 годин. Галоперидол, який вводиться протягом 10 днів, викликав невелике підвищення активності ферменту в гіпофізі тільки через три доби після впливу.

Табл. 8. Ф , баллы Дисперсійний аналіз впливу часу після ін'єкції галоперидолу на активність ФМСФ-інгібіруемой КП в тканинах самців щурів (значення критерію Фішера F Ф, бали експериментальних (тимчасових) підгруп).

Тканина

Ф F Ф

Тимчасові підгрупи



норма

0,5 ч.

4 ч.

24 ч.

72 ч.

1 сут.

3 діб.

Гіпофіз

3,69 ***

1

2

1

1,5

1,5

1

1,5

Гіпоталамус

11,49 ***

1

1,5

1,5

1,5

2

1,5

3

Четверохолміе

16,15 ***

1,5

4

1,5-2,5

1,5-2,5

3

1

4

Мозочок

11,44 ***

1

2

1,5

2

2

2

3

Стріатум

29,95 ***

1,5

4

1,5

2,5

3,5

1

5

Гіпокамп

14,41 ***

1,5

2

1,5

1,5

2

1

3

Великі півкулі

6,38 ***

1

3

1,5

1,5

2,5

1

1,5-2,5

Наднирники

9,47 ***

2

3

2

2

2,5

1

2,5

Насінники

4,46 ***

1

1

1

1

1

1,5

2

У гіпоталамусі через 0,5 години після ін'єкції галоперидолу активність ФМСФ-КП трохи підвищувалася і зберігалася до 24 годин, до 72 години спостерігалося подальше підвищення активності. При хронічному введенні препарату активність ферменту підвищувалася, при цьому підвищення активності через три доби було більш вираженим. Одноразове введення галоперидолу призводило до підвищення активності ФМСФ-інгібіруемой КП в четверохолміе через 0,5 години, зниження через 4 години і поступового підвищення до 72 годин. При гострому введенні галоперидолу активність ФМСФ-КП в стріатумі значно збільшувалася через 0,5 години, через 4 години знижувалась до значень норми і до 72 годин поступово підвищувалася. У гіпокампі і наднирниках через 0,5 години після одноразової ін'єкції галоперидолу активність ФМСФ-КП підвищувалася, потім знижувалася до значень норми і залишалася такою до 24 годин; до 72 години спостерігалося підвищення активності ферменту. Хронічний вплив призводило до невеликого зниження активності ферменту в гіпокампі, стріатумі, четверохолміе і наднирниках через добу і підвищенню через три доби відносно норми. У мозочку активність ФМСФ-інгібіруемой КП збільшувалася через 0,5 години після ін'єкції галоперидолу, трохи знижувалася до 4 годин, а до 24 години поверталася до рівня, зафіксованого через 0,5 години, і залишалася такою до 72 годин, а також через добу після хронічного введення. Через три доби після хронічного впливу препарату підвищення активності було більше, ніж через добу. У великих півкулях активність ФМСФ-інгібіруемой КП підвищувалася через 0,5 години після ін'єкції галоперидолу, знижувалася до 4 годин і підвищувалася через 72 години. Хронічний вплив призводило до підвищення активності ферменту тільки через три доби після впливу. Активність ФМСФ-інгібіруемой КП в сім'яниках підвищувалася тільки після хронічного введення галоперидолу, при цьому через три доби зміни були більш виражені. Таким чином, одноразове введення галоперидолу призводило до підвищення активності ФМСФ-інгібіруемой КП у всіх відділах мозку, гіпофізі та надниркових в порівнянні з інтактними тваринами. Хронічний вплив призводило до підвищення активності ферменту в гіпофізі, гіпоталамусі, мозочку, великих півкулях і сім'яниках і різноспрямованим змінам в четверохолміе, стріатумі, гіпокампі і наднирниках відносно норми.

3.3. Активність карбоксипептидази М в тканинах щурів у нормі і при введенні психолептиків

3.3.1. Розподіл активності карбоксипептидази М в тканинах інтактних тварин

Дані про розподіл активності КП М в тканинах самців щурів представлені в таблиці 9.

Таблиця 9. Активність КП М у інтактних тварин (нмоль продукту, що утворився за 1 хв інкубації на 1 мг білка, М ± m, n = 7-8)

Відділи мозку, органи

КП М M ± m

Гіпоталамус

0,08 ± 0,005

Четверохолміе

0,11 ± 0,007

Мозочок

0,08 ± 0,007

Стріатум

0,06 ± 0,006

Гіпокамп

0,05 ± 0,005

Великі півкулі

0,096 ± 0,009

КП М виявляла максимальну активність в четверохолміе і великих півкулях. Активність в гіпоталамусі і мозочку становила 73% від активності в четверохолмія. У цих відділах мозку синтезується велика кількість регуляторних пептидів, в обміні яких можливо бере участь КП М. У стріатумі і гіпокампі активність в 1,2 і 2 рази відповідно нижче, ніж у гіпоталамусі.

3.3.2. Активність карбоксипептидази М в тканинах щурів при введенні фізіологічного розчину

3.3.2.1. Вплив одноразового введення фізрозчину на активність карбоксипептидази М в тканинах щурів. У гіпокампі активність карбоксипептидази М підвищувалася через 0,5 і 72 години після одноразової ін'єкції фізіологічного розчину на 45 і 63% в порівнянні з інтактними тваринами (рис. 5). Активність ферменту в гіпоталамусі і мозочку через 72 години була вище на 48 і 23% відповідно відносно норми. Оскільки у відповідь на стресовий вплив в організмі тварин виробляється велика кількість регуляторних пептидів [51], то не виключено, що підвищення активності карбоксипептидази М пов'язано з її участю в інактивації нейропептидів, синтезованих у відповідь на дане вплив. Ін'єкція фізіологічного розчину викликала зниження активності КП М в стріатумі через 24 години на 54%. Відомо, що α-неоендорфін, динорфин 1-13, широко представлені в стріатумі, в якості С-кінцевої амінокислоти містять лізин [28], отже, вони можуть виступати в якості субстратів для КПМ [268]. Виявлене зменшення активності КПМ, можливо призводить до уповільнення деградації цих пептидів, що володіють здатністю виявляти седативну дію [28].

Рис. 5. – активность фермента в нмоль субстрата образовавшегося за 1 мин инкубации в пересчете на 1 мг белка) ( M ± m ; n = 5÷6; * – р < 0,05, ** – р < 0,01, *** – р < 0,001 относительно нормы; + – р < 0,05, ++ – р < 0,01, +++ – р < 0,001 относительно контроля). Активність карбоксипептидази М в тканинах щурів при введенні діазепаму (по осі Y - активність ферменту в нмоль субстрату утворився за 1 хв інкубації в перерахунку на 1 мг білка) (M ± m; n = 5 ÷ 6; * - р <0,05, ** - р <0,01, *** - р <0,001 відносно норми; + - р <0,05, + + - р <0,01, + + + - р <0,001 щодо контролю).

Рис. 5 (продовження). Активність карбоксипептидази М в тканинах щурів при введенні діазепаму.

3.3.2.2. Вплив хронічного введення фізіологічного розчину на активність карбоксипептидази М в тканинах щурів. Хронічне введення фізіологічного розчину викликало підвищення активності карбоксипептидази М у всіх досліджуваних відділах мозку через 1 і 3 доби після впливу (рис. 5).

Через добу після введення найбільші зміни виявлені в гіпокампі - в 5,9 рази, в четверохолміе - в 4,7 рази, в стріатумі і великих півкулях - в 3 рази в порівнянні з інтактними тваринами. У гіпоталамусі і мозочку спостерігалося підвищення активності ферменту на 79% і 56% відповідно відносно норми.

Через три доби після хронічного введення фізрозчину виявлено підвищення активності КП М в гіпоталамусі - на 51%, в четверохолміе - на 12%, у мозочку - в 2,8 рази, в стріатумі - в 3,4 рази, в гіпокампі - в 3, 2 рази, у великих півкулях - на 71% в порівнянні з інтактною групою.

Таким чином, хронічне введення фізіологічного розчину викликало підвищення активності карбоксипептидази М у відділах мозку, що може бути пов'язано з необхідністю деградації біологічно активних пептидів, що секретуються у відповідь на тривалий стрес.

Згідно дисперсійного аналізу (табл. 10) достовірні зміни динаміки активності КП М після введення фізрозчину виявлені у всіх досліджених тканинах.

Таблиця 10. Ф и баллы экспериментальных (временных) подгрупп). Дисперсійний аналіз впливу часу після ін'єкції фізіологічного розчину на активність КП М в тканинах самців щурів (значення критерію Фішера F Ф і бали експериментальних (тимчасових) підгруп).

Тканина

Ф F Ф

Тимчасові підгрупи



норма

0,5 ч.

4 ч.

24 ч.

72 ч.

1 сут.

3 діб.

Гіпоталамус

3,46 ***

1,5

1,5

1

1,5

1,5

2

1,5

Четверохолміе

19,99 ***

1

1

1

1

1

2

1

Мозочок

10,35 ***

1

1

1

1

1

1

2

Стріатум

10,11 ***

1

1

1

1

1

2

2

Гіпокамп

19,30 ***

1

1

1

1

1,5

3

2

Великі півкулі

11,32 ***

1,5

1

1,5

1

1,5

3

2

У гіпоталамусі до 4 годин після ін'єкції фізіологічного розчину спостерігалося невелике зниження активності карбоксипептидази М; через 24 години активність ферменту підвищувалася до рівня норми. Після хронічного введення фізрозчину активність КП М підвищувалася через добу після дії в четверохолміе і гіпоталамусі, через три доби в мозочку і через 1 і 3 доби в стріатумі. У гіпокампі підвищення активності ферменту спостерігалося через 72 години після ін'єкції фізіологічного розчину. Активність КП М у великих півкулях знижувалася через 0,5 години, через 4 години підвищувалась до рівня норми, знижувалася через 24 години і до 72 години знову підвищувалася. Хронічне введення фізрозчину призводило до підвищення активності ферменту в гіпокампі і великих півкулях, при цьому через добу зміни були більш виражені.

Таким чином, однократна ін'єкція фізіологічного розчину викликала зміни активності карбоксипептидази М в гіпоталамусі, гіпокампі і великих півкулях. При хронічному впливі активність ферменту підвищувалася у всіх вивчених відділах мозку.

3.3.3. Активність карбоксипептидази М в тканинах щурів при введенні діазепаму

3.3.3.1. Вплив одноразового введення діазепаму на активність карбоксипептидази М в тканинах щурів. На активність КП М в четверохолміе і великих півкулях введення діазепаму не вплинуло (рис. 5). Активність карбоксипептидази М в мозочку через 72 години складала 80% від контролю. У гіпоталамусі через 4 години після впливу активність досліджуваного ферменту збільшувалася на 49%, а через 72 години зменшувалася на 25% в порівнянні з контрольними тваринами. Виявлене зниження активності ферменту через 72 години в мозочку і гіпоталамусі може бути обумовлено зменшенням числа активних молекул ферменту. Зниження активності КП М в стріатумі спостерігалося через 4 години на 53% і збільшення через 24 години в 2,3 рази по відношенню до контролю. У гіпокампі активність була достовірно вище, ніж у контрольної групи, на 42% через 4 години після одноразової ін'єкції діазепаму. Таким чином, зміна активності КПМ виявлено в тих відділах мозку, де ендогенний ліганд бензодіазепінових рецепторів - інгібітор зв'язування діазепаму (DBI) і бензодіазепінових рецепторів присутні у високих концентраціях [2, 113]. Відомо, що на С-кінці DBI і його похідних присутній лізин [112]. З огляду на специфічність дії КПМ, можна припустити, що фермент, локалізований на зовнішній стороні плазматичної мембрани [118], бере участь в інактивації ендозепінов шляхом відщеплення лізину. DBI є анксіогенним пептидом, який підвищує агресивність тварин [8, 118]. Виявлене збільшення активності КПМ може призвести до зниження рівня цього пептиду шляхом його інактивації. Отже, седативну дію діазепаму може проявлятися через збільшення рівня седативних пептидів і зниження рівня проконфліктних за рахунок дії КПМ.

3.3.3.2. в тканях крыс. Вплив хронічного введення діазепаму на активність карбоксипептидази M в тканинах щурів. Хронічне введення діазепаму викликало зниження активності КП М у всіх досліджуваних відділах мозку через добу після дії (рис. 5). Найбільші зміни активності ферменту зафіксовані в четверохолміе (в 5,9 рази) і стріатумі (в 3,6 рази). У гіпоталамусі активність карбоксипептидази М через добу після хронічного введення діазепаму знижувалася на 57%, у мозочку - на 36%, в гіпокампі - на 62%, у великих півкулях - на 48% відносно контролю.

Через три доби після введення діазепаму активність ферменту знижувалася тільки в мозочку і стріатумі в 2,2 і 2,4 рази відповідно в порівнянні з контрольними тваринами.

У відповідь на хронічне введення діазепаму з клітки секретуються як пептиди так і ферменти їх обміну. Можливо, що зниження активності карбоксипептидази М через добу після хронічного впливу може бути пов'язано зі зменшенням кількості активних молекул ферменту у зв'язку з переважанням процесів їх деградації над синтезом. Через три доби зниження активності КП М спостерігалося тільки у відділах з високим вмістом регуляторних пептидів. Можна припустити, що для відновлення пептідергіческой системи мозочка і стріатума необхідний більш тривалий проміжок часу.

Достовірні відмінності впливу часу на активність КП М при введенні діазепаму виявлені в гіпоталамусі і гіпокампі (табл. 11). У цих відділах спостерігалося невелике підвищення активності карбоксипептидази М протягом 72 годин після одноразової ін'єкції діазепаму. При хронічному введенні препарату активність ферменту підвищувалася в гіпоталамусі через три доби, в гіпокампі через 1 і 3 добу після дії в порівнянні з інтактною групою.

Таблиця 11. Ф и баллы экспериментальных (временных) подгрупп). Дисперсійний аналіз впливу часу після ін'єкції діазепаму на активність КП М в тканинах самців щурів (значення критерію Фішера F Ф і бали експериментальних (тимчасових) підгруп).

Тканина

Ф F Ф

Тимчасові підгрупи



норма

0,5 ч.

4 ч.

24 ч.

72 ч.

1 сут.

3 діб.

Гіпоталамус

3,03 **

1

1,5

1,5

1,5

1,5

1

2

Четверохолміе

1,56

-

-

-

-

-

-

-

Мозочок

0,74

-

-

-

-

-

-

-

Стріатум

1,75

-

-

-

-

-

-

-

Гіпокамп

2,71 *

1

1,5

1,5

1,5

1,5

2

1,5

Великі півкулі

2,99

-

-

-

-

-

-

-

3.3.4. Активність карбоксипептидази М в тканинах щурів при введенні галоперидолу

3.3.4.1. Вплив одноразового введення галоперидолу на активність карбоксипептидази М в тканинах щурів. Введення галоперидолу збільшувало активність КП М в гіпоталамусі через 4 години після впливу на 97%, через 24 години на 51% відносно контрольної групи (рис. 6). У четверохолміе і гіпокампі активність через 4 години була вище, ніж у контролю, на 97 і 86% відповідно. Збільшення активності ферменту в 2,3 рази в порівнянні з контрольними тваринами спостерігалося в стріатумі через 24 години після ін'єкції. У великих півкулях активність КП М була вище, ніж у контролю, через 0,5 години на 58% і через 24 години на 44%. Підвищення активності ферменту в мозочку спостерігалося через 4 і 72 години після введення галоперидолу на 30 і 20% відповідно. Ці дані узгоджуються з відомостями про те, що під впливом галоперидолу збільшується рівень багатьох нейропептидів [69, 117, 129, 314]. Ймовірно, збільшення активності КП М пов'язано з інактивацією великої кількості пептидів, що секретуються з клітини у відповідь на дане вплив.

Рис. 6. – активность фермента в нмоль субстрата образовавшегося за 1 мин инкубации в пересчете на 1 мг белка) ( M ± m ; n = 5÷6; * – р < 0,05, ** – р < 0,01, *** – р < 0,001 относительно нормы; + – р < 0,05, ++ – р < 0,01, +++ – р < 0,001 относительно контроля). Активність карбоксипептидази М в тканинах щурів при введенні галоперидолу (по осі Y - активність ферменту в нмоль субстрату утворився за 1 хв інкубації в перерахунку на 1 мг білка) (M ± m; n = 5 ÷ 6; * - р <0,05, ** - р <0,01, *** - р <0,001 відносно норми; + - р <0,05, + + - р <0,01, + + + - р <0,001 щодо контролю).

Рис. 6 (продовження). Активність карбоксипептидази М в тканинах щурів при введенні галоперидолу.

3.3.4.2. Вплив хронічного введення галоперидолу на активність карбоксипептидази М в тканинах щурів. Через добу після хронічного введення галоперидолу активність карбоксипептидази М знижувалася в гіпокампі - в 2,8 рази, у великих півкулях - в 2 рази, в стріатумі - в 1,8 рази відносно контролю (рис. 6).

Хронічне введення галоперидолу викликало підвищення активності ферменту через три доби після впливу в четверохолміе - в 3,8 рази, в гіпоталамусі - в 2,3 рази, в стріатумі - в 1,9 рази в порівнянні з контролем (рис. 6). У гіпокампі активність КП М знижувалася в 2,2 рази щодо контрольної групи.

Тривала дія могло призвести до зменшення числа активних молекул ферменту, чим і пояснюється зниження активності КП М у відділах з високою концентрацією дофамінових рецепторів. Відновлення і навіть підвищення активності ферменту через три доби після впливу може бути пов'язано з відновленням ферментативної системи після відміни препарату.

Дисперсійний аналіз впливу часу після ін'єкції галоперидолу на активність КП М показав, що статистично значуща динаміка зміни активності ферменту спостерігається у всіх досліджених відділах мозку (табл. 12).

Таблиця 12. Ф , баллы Дисперсійний аналіз впливу часу після ін'єкції галоперидолу на активність КП М в тканинах самців щурів (значення критерію Фішера F Ф, бали експериментальних (тимчасових) підгруп).

Тканина

Ф F Ф

Тимчасові підгрупи



норма

0,5 ч.

4 ч.

24 ч.

72 ч.

1 сут.

3 діб.

Гіпоталамус

12,33 ***

1

1,5

2

1,5

1,5

2

3

Четверохолміе

42,21 ***

1

1,5

2

1,5

1,5

3

4

Мозочок

7,26 ***

1

1

1

1

1

1

2

Стріатум

31,11 ***

1

1

1

1

1

1

2

Гіпокамп

2,41 **

1

1,5

1,5

1,5

2

1,5

1,5

Великі півкулі

2,40 **

1

1,5

1,5

1,5

1,5

1,5

2

У гіпоталамусі і четверохолміе через 0,5 години після одноразової ін'єкції галоперидолу активність КП М трохи підвищувалася, через 4 години вона була достовірно вище, ніж у інтактних тварин, а через 24 години поверталася до рівня, зафіксованого через 0,5 години, і зберігалася на цьому рівні до 72 годин. Галоперидол, який вводиться протягом 10 днів, викликав підвищення активності ферменту в гіпоталамусі і четверохолміе, через добу зміни були більш вираженими. У мозочку і стріатумі зміна активності спостерігалося лише через 3 доби після хронічного введення препарату. Однократна ін'єкція галоперидолу трохи підвищувала активність КП М в гіпокампі протягом 24 годин. Таке ж підвищення активності спостерігалося в гіпокампі і при хронічному впливі. Через 72 години активність КП М в цьому відділі мозку була достовірно вище, ніж у інтактної групи. У великих півкулях невелике підвищення активності ферменту спостерігалося протягом 72 годин після одноразової ін'єкції галоперидолу і через добу після хронічного впливу. Через три доби активність карбоксипептидази М у великих півкулях була достовірно вище відносно норми.

Таким чином, введення галоперидолу, особливо протягом 10 днів, викликало підвищення активності карбоксипептидази М у всіх вивчених отеленнях мозку.

3.4. при действии психолептиков Активність основних карбоксипептидази in vitro при дії психолептиків

Для з'ясування механізму дії психолептиків на активність основних карбоксипептидази у відділах мозку та органах самців щурів in vivo було досліджено вплив даних препаратів in vitro (таблиці 13-15).

Виходячи з отриманих даних, можна зробити висновок, що жоден з препаратів не впливає на активність досліджуваних ферментів. Іншими словами, прямий вплив діазепаму і галоперидолу на молекули КП Н, КП М і ФМСФ-інгібіруемой КП, мабуть, виключено.

Разом з тим, в дослідах in vivo активність ферментів змінювалась при введенні психолептиків. Отже, вплив галоперидолу та діазепаму in vivo на активність КП Н, КП М і ФМСФ-інгібіруемой КП опосередковується якимись внутрішньоклітинними механізмами.

Табл. 13. в отделах мозга и органах самцов крыс при введении психолептиков ( M ± m ; n = 6÷7). Активність ФМСФ-інгібіруемой КП in vitro у відділах мозку та органах самців щурів при введенні психолептиків (M ± m; n = 6 ÷ 7).

Відділи мозку і органи

Інтактні тварини

Діазепам

Галоперидол

Гіпофіз

0,24 ± 0,03

0,28 ± 0,09

0,37 ± 0,08

Гіпоталамус

0,18 ± 0,01

0,15 ± 0,02

0,19 ± 0,02

Четверохолміе

0,21 ± 0,02

0,18 ± 0,01

0,19 ± 0,01

Мозочок

0,24 ± 0,01

0,24 ± 0,01

0,21 ± 0,01

Стріатум

0,15 ± 0,02

0,16 ± 0,01

0,14 ± 0,01

Гіпокамп

0,17 ± 0,01

0,19 ± 0,01

0,20 ± 0,01

Великі півкулі

0,22 ± 0,02

0,22 ± 0,01

0,22 ± 0,02

Наднирники

0,65 ± 0,09

0,53 ± 0,06

0,64 ± 0,08

Насінники

0,07 ± 0,01

0,10 ± 0,01

0,08 ± 0,01

Табл. 14. в отделах мозга и органах самцов крыс при введении психолептиков ( M ± m ; n = 6÷7). Активність карбоксипептидази Н in vitro у відділах мозку та органах самців щурів при введенні психолептиків (M ± m; n = 6 ÷ 7).

Відділи мозку і органи

Інтактні тварини

Діазепам

Галоперидол

Гіпофіз

0,76 ± 0,11

0,86 ± 0,16

0,81 ± 0,09

Гіпоталамус

0,23 ± 0,01

0,18 ± 0,02

0,18 ± 0,02

Четверохолміе

0,21 ± 0,01

0,20 ± 0,01

0,21 ± 0,01

Мозочок

0,12 ± 0,01

0,12 ± 0,01

0,12 ± 0,01

Стріатум

0,16 ± 0,01

0,15 ± 0,01

0,12 ± 0,01

Гіпокамп

0,20 ± 0,01

0,18 ± 0,02

0,22 ± 0,01

Великі півкулі

0,19 ± 0,01

0,17 ± 0,01

0,19 ± 0,01

Наднирники

0,10 ± 0,01

0,05 ± 0,02

0,09 ± 0,01

Насінники

0,03 ± 0,01

0,03 ± 0,01

0,03 ± 0,01

Табл. 15. в отделах мозга и органах самцов крыс при введении психолептиков ( M ± m ; n = 6÷7). Активність карбоксипептидази М in vitro у відділах мозку та органах самців щурів при введенні психолептиків (M ± m; n = 6 ÷ 7).

Відділи мозку і органи

Інтактні тварини

Діазепам

Галоперидол

Гіпоталамус

0,084 ± 0,019

0,111 ± 0,012

0,104 ± 0,015

Четверохолміе

0,113 ± 0,007

0,112 ± 0,007

0,110 ± 0,006

Мозочок

0,088 ± 0,010

0,069 ± 0,006

0,080 ± 0,010

Стріатум

0,087 ± 0,015

0,073 ± 0,013

0,066 ± 0,013

Гіпокамп

0,082 ± 0,010

0,069 ± 0,009

0,068 ± 0,007

Великі півкулі

0,136 ± 0,012

0,115 ± 0,008

0,139 ± 0,011

ГЛАВА 4. ОБГОВОРЕННЯ РЕЗУЛЬТАТІВ

В даний час однією з найбільш актуальних проблем у сучасній медицині є профілактика та лікування психічних захворювань. Успішне вирішення даної проблеми можливе лише у поєднанні з вивченням молекулярно-біохімічних механізмів, що лежать в основі розвитку патології нервової системи.

Відомо, що розвиток патологічних процесів відбувається у зв'язку з порушенням процесів передачі інформації між клітинами [2, 4, 8, 40, 50], тому в психофармакології використовують препарати, що діють на медіаторні системи, зокрема, галоперидол - антагоніст дофаминергической і діазепам - агоніст ГАМК-ергіческой систем [39, 163, 310]. Встановлено при цьому, що введення психолептиків істотно змінює рівень ряду біологічно активних пептидів [67, 95, 164, 193, 243, 228, 263, 324]. Проте механізми взаємодії медіаторних і пептідергіческіх систем до сих пір залишаються невивченими.

Вміст біологічно активних пептидів залежить від активності ферментів, що беруть участь в їх обміні [21, 30]. Вивчення вмісту рівня того чи іншого нейропептида в тканинах не дає достатньо точних уявлень про динамічні процеси, що відбуваються в пептідергіческой системі при введенні психолептиків. Більш інформативним є вивчення процесів синтезу та утилізації нейропептидів [12, 21]. Тому вивчення активності КП Н, ФМСФ-КП та КП М при впливі галоперидолу та діазепаму становить значний інтерес, як для уточнення біологічної ролі самих ферментів, так і для розуміння ролі регуляторних пептидів у механізмах дії психолептиків.

Максимальна активність КП Н виявлена ​​у відділах мозку і тканинах з високим рівнем нейропептидів, а саме, в гіпофізі, де синтезуються пептидні гормони, а також у гіпоталамусі, четверохолміе, стріатумі - відділах лімбічної системи, в яких виявлено високий вміст ендорфінів і речовини Р [55 , 84, 201, 278, 279]. Низька активність ферменту виявлена ​​у надниркових і гонадах. Отримані нами дані про рівень і розподіл активності КП H в мозку і тканинах щурів відповідають літературним даним [137, 148, 149].

Регіональне та тканинне розподіл ферменту відповідає літературним даним про зміст регуляторних пептидів в нервовій системі [201], що добре узгоджується з даними про залучення КП Н в процесинг нейропептидів [149, 175, 181, 247, 259, 282, 283].

Найбільша активність ФМСФ-інгібіруемой КП виявлена ​​в гіпофізі і наднирниках, тобто в органах, пов'язаних з утворенням регуляторних пептидів та гормонів пептидної природи. Потрібно відзначити, що в гіпофізі активність ферменту значно вище, ніж у відділах центральної нервової системи. Оскільки в гіпофізі синтезуються пептидні гормони, то, не виключено, що ФМСФ-інгібіруемая КП може брати участь у процессингу попередників цих гормонів. Однак, в гіпоталамусі і стріатумі, відділах мозку з найвищим рівнем нейропептидів [201], активність ФМСФ-інгібіруемой КП не висока.

Виявлено, що в гіпофізі активність КП Н істотно вища за активність ФМСФ-інгібіруемой КП, тоді як в наднирниках, в яких синтезуються переважно енкефаліни, спостерігається зворотне співвідношення. Можливо, це відмінність пов'язана з різною субстратної специфічністю даних ферментів [9]. Так, в гіпофізі синтезуються в основному пептидні гормони, в проформах яких перед залишком основний амінокислоти знаходиться залишок амінокислоти з коротким алифатическим радикалом (аланін, гліцин) [55]. У наднирниках ж синтезуються переважно енкефаліни, в яких передостанніми є залишки лейцину та метіоніну [55]. Зіставляючи субстратне специфічність і амінокислотну послідовність регуляторних пептидів можна прийти до висновку, що кращим субстратом для КП Н будуть попередники пептидних гормонів, а для ФМСФ-інгібіруемой КП попередники лей-і мет-енкефалінів, з чим, можливо, і пов'язаний більш високий рівень активності ФМСФ-інгібіруемой КП в наднирниках.

Максимальний рівень активності КП М у інтактних тварин спостерігався в четверохолміе, великих півкулях, мозочку і гіпоталамусі. У цих відділах мозку синтезується велика кількість регуляторних пептидів, в обміні яких можливо бере участь цей фермент.

Одноразове введення фізіологічного розчину викликало зменшення активності КП Н в гіпофізі через усі досліджувані проміжки часу. Активність досліджуваного ферменту знижувалася через 0,5 години в гіпоталамусі, стріатумі і мозочку. Ймовірно, це пов'язано з особливостями впливу внутрішньочеревно ін'єкції фізрозчину, при якій в організм поступає додаткова кількість рідини. Зниження активності КП Н може сприяти прискоренню вивільнення рідини з організму завдяки зменшенню утворення вазопресину [41].

Ін'єкція фізіологічного розчину викликала достовірне підвищення активності ФМСФ-інгібіруемой КП у всіх вивчених тканинах і відділах мозку: у гіпофізі - через 0,5, 24 і 72 години; в четверохолміе, мозочку, стріатумі, великих півкулях і гіпоталамусі - через усі досліджувані проміжки часу; у надниркових і гіпокампі - через 4, 24 і 72 години; в сім'яниках - через 0,5, 4 і 72 години після впливу. Якщо розглядати ін'єкцію фізрозчину як короткочасний стрес, то підвищення активності ФМСФ-інгібіруемой КП може бути пов'язано з підвищенням рівня синтезу енкефалінів і ендорфінів при дії стресу [51].

Активність карбоксипептидази М в гіпокампі підвищувалася через 0,5 і 72 години після одноразової ін'єкції фізіологічного розчину в порівнянні з інтактними тваринами. Активність ферменту в гіпоталамусі і мозочку через 72 години була вище, ніж у нормі. Оскільки у відповідь на стресовий вплив в організмі тварин виробляється велика кількість регуляторних пептидів [51], то не виключено, що підвищення активності карбоксипептидази М пов'язано з її участю в інактивації нейропептидів, синтезованих у відповідь на дане вплив. Введення фізрозчину призводило до зниження активності КП М в стріатумі через 24 години після впливу. -неоэндорфин, динорфин 1-13, широко представленные в стриатуме, в качестве С-концевой аминокислоты содержат лизин [55], следовательно, они могут выступать в качестве субстратов для КП М [118, 271, 301]. Відомо, що α-неоендорфін, динорфин 1-13, широко представлені в стріатумі, в якості С-кінцевої амінокислоти містять лізин [55], отже, вони можуть виступати в якості субстратів для КП М [118, 271, 301]. Виявлене зменшення активності КП М, можливо, призводить до уповільнення руйнування цих пептидів, що володіють здатністю виявляти седативну дію [41, 55].

При хронічному введенні фізіологічного розчину активність КП Н збільшувалася через добу після дії в гіпоталамусі, четверохолміе, мозочку, стріатумі, надниркових і сім'яниках щодо інтактних тварин. Через три доби після хронічного впливу спостерігалося зниження активності досліджуваного ферменту в гіпоталамусі і підвищення активності в мозочку, гіпокампі і сім'яниках у порівнянні з нормою.

Хронічне введення фізрозчину призводило до підвищення активності ФМСФ-КП через добу після дії в гіпофізі, четверохолміе, мозочку, гіпокампі, великих півкулях і насінниках. У стріатумі і наднирниках через добу після впливу спостерігалося зниження активності ферменту щодо інтактних тварин. Через три доби після хронічного введення фізіологічного розчину спостерігалося підвищення активності ФМСФ-інгібіруемой КП в гіпофізі, мозочку, стріатумі, гіпокампі і сім'яниках щодо інтактних тварин. У наднирниках активність ферменту знижувалася в порівнянні з нормою.

Підвищення активності карбоксипептидази М у всіх досліджуваних відділах мозку спостерігалося через 1 і 3 доби після хронічного впливу фізіологічного розчину. Через добу після введення найбільші зміни виявлені в гіпокампі, четверохолміе, стріатумі і великих півкулях, а також у гіпоталамусі і мозочку в порівнянні з інтактними тваринами. Через три доби після хронічного введення фізрозчину виявлено підвищення активності КП М в гіпоталамусі, четверохолміе, мозочку, стріатумі, гіпокампі і великих півкулях в порівнянні з інтактною групою.

Таким чином, введення фізіологічного розчину протягом 10 днів можна розглядати в якості стресу для тварин. У зв'язку з цим виявлене зміна активності основних карбоксипептидази узгоджується з даними про участь досліджуваних ферментів у відповіді організму на стрес [5].

Вивчення активності КП Н, ФМСФ-інгібіруемой КП та КП М у самців щурів при одноразовому введенні діазепаму показало, що активність ФМСФ-інгібіруемой КП достовірно змінювалася у всіх досліджуваних органах і тканинах, у той час як активність КП Н не змінювалася тільки в стріатумі. Зміни активності КП М були виявлені в гіпоталамусі, мозочку, стріатумі і гіпокампі.

Введення діазепаму призводило до значного зменшення активності КП Н в гіпофізі через 24 і 72 години, гіпоталамусі через 4, 24 і 72часа і наднирниках через 72 години, що узгоджується з уявленнями про стрес-протективного дії діазепаму [51] шляхом інгібування гіпоталамо-гіпофізарно-наднирковозалозної системи і зменшення секреції і освіти АКТГ при його введенні [263, 290]. При цьому необхідно відзначити, що зміни в гіпоталамусі наступали раніше, ніж у гіпофізі.

Ін'єкція діазепаму знижувала активність КП Н в четверохолміе, великих півкулях, мозочку і гіпокампі через 4, 24 і 72 години щодо відповідних значень контролю. При цьому найбільші зміни зафіксовані у великих півкулях і гіпокампі (в 1,3-1,4 рази), у відділах з високим вмістом холецистокинином і залучаються у розвиток емоційних реакцій і невротичних станів [24]. На основі отриманих даних можна припустити, що зменшення рівня холецистокинином під дією бензодіазепінів [24] викликано зниженням активності ВПП. Крім того, за даними низки науковців [126, 285] речовина Р залучається до модуляцію стресу і його рівень підвищений у пацієнтів з депресивними розладами. Зниження рівня цього пептиду в гіпокампі при введенні діазепаму [95] можна бути пов'язано зі зниженням активності ВПП. У сім'яниках активність КП Н знижувалася через 72 години після ін'єкції діазепаму. У статевих залозах самців синтезуються енкефаліни, холецистокінін і інші біологічно активні пептиди [195, 260], в обміні яких бере участь карбоксипептидаза Н, тому зниження активності ферменту може впливати на рівень пептидів у насінниках.

Активність ФМСФ-інгібіруемой КП після ін'єкції діазепаму змінювалася подібно активності КП Н: зменшувалася в гіпофізі через 4 і 72 години; в гіпоталамусі, мозочку, стріатумі і великих півкулях через 24 і 72часа; в гіпокампі, четверохолміе і наднирниках через 4, 24 і 72 години після впливу. Виявлене нами зниження активності ФМСФ-інгібіруемой КП дозволяє припустити її участь в обміні регуляторних пептидів при введенні діазепаму.

Є дані про зниження рівня мет-енкефаліну в стріатумі при одноразовому введенні діазепаму [237]. У наших дослідженнях зміни активності КП Н в цьому відділі мозку не були виявлені, але сталося зниження активності ФМСФ-інгібіруемой КП. Звідси можна припустити, що ФМСФ-інгібіруемая КП бере участь в обміні енкефалінів в стріатумі, попередники яких є переважаючими субстратами для ФМСФ-інгібіруемой КП [9, 26].

Зниження активності ферменту в сім'яниках через 0,5 і 72 години після впливу може бути пов'язано зі збільшенням рівня тестостерону під дією діазепаму [48, 123].

Активність карбоксипептидази М знижувалася в мозочку через 72 години після гострого впливу діазепаму. У гіпоталамусі через 4 години після впливу активність досліджуваного ферменту збільшувалася, а через 72 години зменшувалася в порівнянні з контрольними тваринами. Виявлене зниження активності ферменту через 72 години в мозочку і гіпоталамусі може бути обумовлено зменшенням числа активних молекул ферменту. Зниження активності КП М в стріатумі спостерігалося через 4 години і збільшення через 24 години по відношенню до контролю. У гіпокампі активність ферменту була достовірно вище, ніж у контрольної групи, через 4 години після одноразової ін'єкції діазепаму. Таким чином, зміна активності КПМ виявлено в тих відділах мозку, де ендогенний ліганд бензодіазепінових рецепторів - інгібітор зв'язування діазепаму (DBI) і бензодіазепінових рецепторів присутні у високих концентраціях [2, 113]. Відомо, що на С-кінці DBI і його похідних присутній лізин [112]. З огляду на специфічність дії КПМ, можна припустити, що фермент, локалізований на зовнішній стороні плазматичної мембрани [118], бере участь в інактивації ендозепінов шляхом відщеплення лізину. DBI є анксіогенним пептидом, який підвищує агресивність тварин [8, 118]. Виявлене збільшення активності КПМ може призвести до зниження рівня цього пептиду шляхом його інактивації. Отже, седативну дію діазепаму може проявлятися через збільшення рівня седативних пептидів і зниження рівня проконфліктних за рахунок дії КПМ.

Хронічне введення діазепаму призводило до зниження активності КП Н і КП М і різноспрямованим змінам ФМСФ-КП у вивчених відділах мозку і периферичних органах щурів.

Введення діазепаму протягом 10 днів викликало зниження активності КП Н в гіпофізі, гіпоталамусі, четверохолміе, мозочку, стріатумі через добу після впливу. Найбільше зниження активності ферменту в цей період виявлено у периферичних тканинах: у надниркових і сім'яниках щодо контрольної групи. Таким чином, хронічне введення діазепаму призводило до таких же змін активності КП Н, як і при гострій дії препарату. Діазепам, який вводиться протягом 10 днів, викликав інгібування гіпоталамо-гіпофізарно-надниркової та гіпоталамо-гіпофізарно-гонадної систем, а також відділів, що відповідають за рухову активність тварин. Через три доби після хронічного введення діазепаму зниження активності КП Н виявлено у відділах з високим вмістом опіоїдних пептидів: в гіпокампі і наднирниках. Отже, хронічне введення діазепаму викликало найбільші зміни активності карбоксипептидази Н через добу після впливу.

Зниження активності ФМСФ-інгібіруемой КП через добу після хронічне введення діазепаму спостерігалося в гіпофізі, мозочку, гіпокампі і великих півкулях в порівнянні з контрольною групою. Активність ферменту через добу після впливу підвищувалася в стріатумі, надниркових і насінниках.

Хронічне введення діазепаму призводило до зниження активності ФМСФ-КП через три доби після впливу в гіпофізі, мозочку, стріатумі і гіпокампі щодо контрольних тварин. Підвищення активності ферменту зафіксовано в гіпоталамусі, четверохолміе і наднирниках в порівнянні з контролем.

Таким чином, на відміну від дії однократної ін'єкції діазепаму хронічне введення препарату приводило до різноспрямованим змінам активності ФМСФ-інгібіруемой КП у всіх досліджуваних відділах мозку і тканинах відносно контрольних тварин. Крім того, діазепам, який вводиться протягом 10 днів, викликав зниження активності КП Н і різноспрямовані зміни активності ФМСФ-КП. Можливо, що подібне відмінність у зміні активності цих ферментів пов'язане з різною роллю досліджуваних карбоксипептидази в різних відділах мозку і периферичних органах, що узгоджується з даними, отриманими іншими дослідниками [26].

Хронічне введення діазепаму викликало зниження активності КП М у всіх досліджуваних відділах мозку через добу після впливу. Найбільші зміни активності ферменту зафіксовані в четверохолміе і стріатумі. Через три доби після введення діазепаму активність ферменту знижувалася тільки в мозочку і стріатумі в порівнянні з контрольними тваринами.

У відповідь на хронічне введення діазепаму з клітки секретуються як пептиди, так і ферменти їх обміну. Можливо, що зниження активності карбоксипептидази М через добу після хронічного впливу може бути пов'язано зі зменшенням кількості активних молекул ферменту у зв'язку з переважанням процесів їх деградації над синтезом. Через три доби зниження активності КП М спостерігалося тільки у відділах з високим вмістом регуляторних пептидів. Можна припустити, що для відновлення пептідергіческой системи мозочка і стріатума необхідний більш тривалий проміжок часу.

Підсумовуючи все вищевикладене можна запропонувати, що активація ГАМК-ергіческой системи при введенні діазепаму призводить до зміни рівня регуляторних пептидів шляхом зміни активності вивчених карбоксипептидази.

Одноразове введення галоперидолу викликала зниження активності КП Н, підвищення КП М і різноспрямовані зміни ФМСФ-інгібіруемой КП.

Галоперидол в дозі 2 мг / кг викликав достовірні зміни активності КП Н у відділах гіпоталамо-гіпофізарно-надниркової системи. При цьому підвищення ферментативної активності в гіпоталамусі спостерігалося вже через 0,5 години, в гіпофізі - через 0,5 і 4 години, в наднирниках - через 4 і 72 години після ін'єкції. При введенні галоперидолу відзначалося підвищення рівня ПОМК в проміжній частці гіпофіза [103] і посилення секреції гормонів гіпофізу [50, 198, 273, 287]. Зіставлення цих даних з результатами нашої роботи дозволяє припустити, що КП Н бере участь у реалізації ефекту галоперидолу.

У мозочку активність ферменту через 0,5 години була вище, ніж у контрольної групи. Відомо, що при введенні галоперидолу щури стають млявими, особливо протягом 30 хвилин після ін'єкції [36]. Цей ефект може бути викликаний підвищенням швидкості утворення динорфінів, володіє седативною дією, за участю КП Н.

Достовірне зниження активності КП Н по відношенню до контролю спостерігалося в сім'яниках через 24 і 72 години після впливу. Ін'єкція галоперидолу викликає підвищення секреції гонадотропіну [273, 276], що впливає на рівень статевих стероїдів, які в свою чергу знижують активність карбоксипептидази Н [47].

Активність ФМСФ-інгібіруемой КП значно підвищувалася у стріатумі через 0,5 години після впливу. Згідно з даними ряду дослідників [211, 232, 261] однократна ін'єкція галоперидолу призводить до збільшення рівня мет-енкефаліну й нейротензин в стріатумі. Крім того, рівень нейротензин у хворих на шизофренію зменшений, але відновлюється після лікування галоперидолом [59, 92, 292]. Оскільки зміна активності ВПП у цьому відділі мозку не виявлені, то можна припустити, що в процесинг регуляторних пептидів, синтезованих в стріатумі при введенні галоперидолу, залучена ФМСФ-інгібіруемая КП. Проте через 4 і 24 години після внутрішньочеревно введення галоперидолу спостерігалося невелике, але достовірне зниження активності ферменту по відношенню до контрольної групи тварин, що, можливо, є результатом дії компенсаторних механізмів, спрямованих на нормалізацію функціонального стану пептідергіческіх систем стріатума. Підвищення активності ФМСФ-інгібіруемой КП через 0,5 години і зниження через 4 і 72 години спостерігалося в четверохолмія. Односпрямовані зміни (підвищення активності ферменту через 0,5 і зниження через 4 або 24 години) спостерігалися в емоціогенних структурах: гіпокампі і великих півкулях. Відомо, що при введенні галоперидолу в гіпокампі і великих півкулях підвищується рівень холецистокініну і речовини Р [294, 334]. Не виключено, що ФМСФ-інгібіруемая КП бере участь в обміні цих пептидів. На відміну від КП Н активність ФМСФ-інгібіруемой КП знижувалася в гіпофізі, гіпоталамусі і мозочку через 4 години після впливу. Зазначене зниження активності ФМСФ-КП у відділах мозку через 4 і 24 години після введення галоперидолу може бути обумовлено зменшенням числа активних молекул ферменту. Активність ферменту через 0,5 години після введення галоперидолу підвищувалася в наднирниках, а через 24 години знизилася. У наднирниках синтезується велика кількість мет-енкефалінів, попередники яких є переважаючими субстратами для ФМСФ-КП, тому можна припустити, що цей фермент залучений в обмін енкефалінів в наднирниках.

Введення галоперидолу збільшувало активність КП М в гіпоталамусі через 4 і 24 години після впливу. У четверохолміе і гіпокампі через 4 години після ін'єкції, в мозочку - через 4 і 72 години, а у великих півкулях - через 0,5 і 24 години активність ферменту була вищою, ніж у контролю. Збільшення активності ферменту в стріатумі спостерігалося тільки через 24 години після ін'єкції. Оскільки під впливом галоперидолу збільшується рівень багатьох нейропептидів [69, 117, 129, 314], то не виключено, що підвищення активності ферменту пов'язано з участю його в деградації великої кількості нейропептидів, синтезованих у відповідь на дане вплив.

Таким чином, інгібування дофаминергической системи галоперидолом викликало підвищення активності КП Н в гіпоталамо-гіпофізарно-надниркової та гіпоталамо-гіпофізарно-гонадної системи та мозочку. Активність ФМСФ-інгібіруемой КП підвищувалася через 0,5 і знижувалася через 4, 24 і 72 години у всіх тканинах (іскл. насінники). Підвищення активності КП М спостерігалося у всіх вивчених відділах. Цікаво відзначити, що через 0,5 години після ін'єкції галоперидолу активність ферментів синтезу регуляторних пептидів (КП Н і ФМСФ-інгібіруемой КП) збільшилася, а через 4 години спостерігалися різноспрямовані зміни активності вивчених карбоксипептидази. Це явище може бути наслідком розходження в субстратної специфічності КП Н і ФМСФ-інгібіруемой КП [26].

Хронічний вплив галоперидолу викликало зниження активності досліджуваних ферментів через добу після впливу і різноспрямовані зміни через три доби.

Також як і при одноразовому введенні галоперидолу хронічний вплив викликало зниження активності КП Н через добу після дії, але дана зміна зафіксовано у всіх досліджених відділах мозку і тканинах за винятком великих півкуль. Через три доби після хронічного впливу зафіксовано зменшення активності КП Н у відділах мозку (четверохолміе і гіпокампі) і підвищення в периферичних тканинах (надниркових і сім'яниках). Таким чином, хронічне введення галоперидолу призводило до більш виражених змін активності ферменту, які зберігалися протягом трьох діб у відділах з високим вмістом регуляторних пептидів і дофамінових рецепторів [70, 101].

На відміну від однократної ін'єкції галоперидолу хронічне введення препарату викликало зниження активності ФМСФ-інгібіруемой КП через добу після дії в гіпофізі, четверохолміе, мозочку, гіпокампі, великих півкулях і наднирниках щодо контролю. Через три доби після введення галоперидолу активність ферменту знижувалася в гіпофізі і стріатумі в порівнянні з контрольною групою. Підвищення активності ФМСФ-КП спостерігалося в гіпоталамусі, четверохолміе, гіпокампі і наднирниках щодо контролю через три доби після впливу. Таким чином, зміни ФМСФ-інгібіруемой КП носили більш тривалий характер порівняно з ФМСФ-інгібіруемой КП. Отже, можна припустити, що ФМСФ-КП грає більш важливу роль у забезпеченні довгострокових ефектів галоперидолу і його побічних дій.

Через добу після хронічного введення галоперидолу активність карбоксипептидази М знижувалася в гіпокампі, великих півкулях і стріатумі щодо контролю. Хронічне введення галоперидолу викликало підвищення активності ферменту через три доби після впливу в четверохолміе, гіпоталамусі, стріатумі і підвищення в гіпокампі в порівнянні з контролем.

Таким чином, хронічне введення галоперидолу викликало подібні зміни активності ФМСФ-інгібіруемой КП, КП М і КП Н: зниження через добу після впливу і різноспрямовані зміни через три доби. Можна припустити, що зниження активності ферментів через добу після дії пов'язано зі зменшенням числа активних молекул. Через три доби, тобто в період скасування препарату, відбувається відновлення ферментативної системи і спостерігається підвищення активності досліджуваних карбоксипептидази.

Для більш повного розуміння біологічної ролі ФМСФ-інгібіруемой КП, яка є менш вивченим ферментом в порівнянні з карбоксипептидази Н і М, був проведений кореляційний аналіз (табл. 16-19).

Згідно з даними кореляційного аналізу при одноразовому введенні діазепаму спостерігалася достовірна позитивна кореляція між ФМСФ-інгібіруемой КП та КП М в гіпоталамусі і четверохолміе, між КП Н і КП М у великих півкулях (табл. 16). Можливо, що зміна інтенсивності синтезу нейропептидів під дією КП Н і ФМСФ-інгібіруемой КП тягне за собою відповідну зміну швидкості їх інактивації за участю КП М.

Таблиця 16. Коефіцієнти кореляції між активністю основних КП в тканинах і відділах мозку самців щурів при одноразовому введенні діазепаму (* - р <0,05, ** - р <0,01, *** - р <0,001).


ФМСФ-КП і

КП Н

ФМСФ-КП і

КП М

КП Н і КП М

Гіпофіз

0,14 (25)



Гіпоталамус

0,16 (25)

0,56 ** (25)

0,13 (25)

Четверохолміе

0,05 (25)

0,72 *** (25)

0,15 (25)

Мозочок

0,14 (25)

0,35 (25)

0,20 (25)

Стріатум

0,25 (25)

0,16 (25)

0,17 (25)

Гіпокамп

0,26 (30)

0,33 (30)

-0,14 (32)

Великі півкулі

0,22 (31)

0,34 (33)

0,42 * (31)

Наднирники

-0,13 (30)



Насінники

0,08 (27)



Позитивна кореляція активності ферментів при хронічному введенні діазепаму спостерігалася в більшій кількості досліджуваних відділів у порівнянні з одноразовою ін'єкцією (табл. 17). Так, позитивна кореляція між карбоксипептидази Н і ФМСФ-інгібіруемой КП спостерігалася в мозочку, гіпокампі і сім'яниках; між ФМСФ-КП та КП М - в гіпоталамусі, мозочку, стріатумі; між КП Н і КП М - в четверохолміе і мозочку.

У цих відділах виявлена ​​висока концентрація ендозепінов [113]. и его производных, уровень которых изменяется при введении диазепама. Позитивна кореляція зміни активності ферментів у даних відділах при введенні діазепаму може бути пов'язана з їх участю в обміні DBI і його похідних, рівень яких змінюється при введенні діазепаму.

Кореляційний аналіз активності ферментів при введенні галоперидолу показав статистично значуще схожість між КП Н, ФМСФ-інгібіруемой КП та КП М (табл. 18) у гіпоталамусі, мозочку і великих півкулях. Можливо, однонаправлений дію даних ферментів у відділах, що відповідають за рухову активність, викликає зміна рівня регуляторних пептидів і порушує виконання рухових програм при введенні галоперидолу.

Таблиця 17. Коефіцієнти кореляції між активністю основних КП в тканинах і відділах мозку самців щурів при хронічному введенні діазепаму (* - р <0,05, ** - р <0,01, *** - р <0,001).


ФМСФ-КП і

КП Н

ФМСФ-КП і

КП М

КП Н і КП М

Гіпофіз

0,37 (19)



Гіпоталамус

0,29 (21)

0,65 ** (20)

0,28 (20)

Четверохолміе

-0,11 (21)

0,26 (21)

0,50 * (21)

Мозочок

0,76 *** (21)

0,46 * (20)

0,68 *** (20)

Стріатум

0,34 (21)

0,49 * (20)

-0,01 (20)

Гіпокамп

0,52 * (20)

0,20 (20)

0,22 (20)

Великі півкулі

0,11 (18)

0,21 (19)

-0,42 (18)

Наднирники

-0,27 (19)



Насінники

0,53 * (15)



Таблиця 18. Коефіцієнти кореляції між активністю основних КП в тканинах і відділах мозку самців щурів при одноразовому введенні галоперидолу (* - р <0,05, ** - р <0,01, *** - р <0,001).


ФМСФ-КП і

КП Н

ФМСФ-КП і

КП М

КП Н і КП М

Гіпофіз

-0,21 (24)



Гіпоталамус

0,56 ** (29)

0,39 ** (28)

0,37 (28)

Четверохолміе

0,19 (29)

0,27 (29)

0,30 (30)

Мозочок

0,52 ** (28)

0,66 *** (28)

0,38 * (28)

Стріатум

0,12 (29)

-0,05 (28)

0,22 (29)

Гіпокамп

0,33 (29)

0,33 (29)

0,33 (29)

Великі півкулі

0,38 * (29)

0,49 ** (30)

0,38 * (29)

Наднирники

-0,09 (25)



Насінники

0,38 (25)



При хронічному введенні галоперидолу спостерігалася позитивна кореляція між КП Н, КП М і ФМСФ-інгібіруемой КП в мозочку і стріатумі (табл. 19) - відділах з високим вмістом регуляторних пептидів і дофамінових рецепторів. У гіпоталамусі, четверохолміе, мозочку і стріатумі виявлена ​​кореляція між ФМСФ-КП і карбоксипептидази М. Так як КП М бере участь у деградації пептидів, то можна припустити, що ФМСФ-інгібіруемая КП бере участь у синтезі пептидів, що секретуються з клітин при введенні галоперидолу. Можливо, що порушення діяльності пептідергіческой системи при хронічному введенні галоперидолу пов'язано з односпрямованими змінами активності досліджуваних карбоксипептидази.

Таблиця 19. Коефіцієнти кореляції між активністю основних КП в тканинах і відділах мозку самців щурів при хронічному введенні галоперидолу (* - р <0,05, ** - р <0,01, *** - р <0,001).


ФМСФ-КП і

КП Н

ФМСФ-КП і

КП М

КП Н і КП М

Гіпофіз

0,41 (12)



Гіпоталамус

0,05 (13)

0,84 ** (11)

-0,15 (14)

Четверохолміе

0,03 (15)

0,59 * (14)

-0,44 (14)

Мозочок

0,86 *** (15)

0,89 *** (14)

0,69 ** (15)

Стріатум

0,60 * (15)

0,82 *** (15)

0,42 (14)

Гіпокамп

-0,41 (14)

0,49 (12)

-0,14 (13)

Великі півкулі

0,07 (14)

0,50 (14)

-0,34 (14)

Наднирники

0,41 (11)



Насінники

0,42 (13)



Таким чином, введення психолептиків призводило до зміни активності ФМСФ-інгібіруемой КП, КП Н і КП М в більшості вивчених органах і відділах мозку.

Відомо, що карбоксипептидаза Н бере участь в процессингу попередників АКТГ, енкефалінів, холецистокініну, речовини Р, нейротензин і багатьох інших біологічно активних пептидів [103, 128, 147, 175]. Аналіз амінокислотної послідовності даних пептидів і субстратної специфічності ФМСФ-інгібіруемой КП дозволяє припустити, що дана карбоксипептидаза поряд з КП Н може залучатися до процесинг попередників цих регуляторних пептидів [26]. Карбоксипептидаза М, будучи мембранозв'язаних ектоферментом, може приймати участь в інактивації біологічно активних пептидів [118]. Таким чином, одним з механізмів зміни рівня біологічно активних пептидів психолептиків може бути зміна активності ферментів їх обміну - КП Н, ФМСФ-КП та КП М.

Останнім часом широко обговорюються питання участі нейропептидів у розвитку ендогенних психічних захворювань [120, 173, 174]. Крім того, біологічно активні пептиди беруть участь у процесах формування пам'яті, справляютьседативну, анксіогенним, анальгетичну, гіпотермічну і ряд інших дій [41]. У зв'язку з цим дані пептиди можуть брати участь у прояві основних та побічні дії транквілізаторів і антипсихотиков. Хронічне введення обох психолептиків призводило до більш виражених змін активності досліджуваних карбоксипептидази в порівнянні з гострим. У клінічній практиці при лікуванні психічних захворювань застосовують тривалу терапію психолептиків. Тому можна припустити, що тільки тривалий вплив психолептиків призводить до значної зміни функціонування пептідергіческой системи мозку та реалізації лікувального ефекту препаратів. Незважаючи на різний механізм дії препаратів, найбільш сильний вплив обох психолептиків на активність КП Н спостерігалося в залозах (гіпофізі, гіпоталамусі, наднирниках і сім'яниках), а ФМСФ-інгібіруемой КП - у відділах мозку. Виходячи з розподілу досліджуваних ферментів в тканинах щурів, можна припустити, що в залозах провідну роль в обміні регуляторних пептидів грає КП Н, а у відділах мозку - ФМСФ-КП. При цьому необхідно відзначити, що зміни активності ФМСФ-КП та КП М спостерігалися у всіх досліджуваних тканинах при введенні обох психолептиків. Зміни активності КП Н при введенні діазепаму виявлені в більшому числі відділів у порівнянні з галоперидолом. Іншими словами, в регіональному відношенні відмінності між диазепамом і галоперидолом спостерігалися тільки для КП Н. Отримані результати узгоджуються з уявленнями про антистрессорного дії діазепаму та залученні КП Н в розвиток стрессорной реакції [5, 50].

Дуже важливим є питання про механізми зміни активності основних карбоксипептидази під впливом психолептиків. У структурі гена КП Н виявлено цілий ряд тканеспеціфічних регуляторних ділянок, через які здійснюється регулювання швидкості транскрипції гена ферменту [190, 191, 304]. У структурі генів різних ферментів обміну нейропептидів, виявлено, наприклад, ділянки зв'язування тиреоїдних гормонів [304], стероїдних гормонів [157], ділянки зв'язування цАМФ - внутрішньоклітинного посередника, що відповідає за швидке включення / вимикання генів [324], ділянки зв'язування ініціюють та інших регуляторних білків [190]. Можливо, що активність КП Н при введенні психолептиків регулюється на рівні експресії гена. Підтвердженням цього можна вважати здатність стероїдів, таких як глюкокортикоїди, андрогени і прогестини, впливати на рівень експресії генів. Відомо, що введення екзогенних глюкокортикоїдів змінює рівень адренокортикотропіну, β-ендорфіну, енкефалінів та інших секретується пептидів гіпофіза [275], в утворенні яких бере участь карбоксипептидаза Н [149, 175, 247]. Додавання глюкокортикоїдів в культуру AtT-20 клітин гіпофіза знижує рівень мРНК прокарбоксіпептідази Н [277]. Зниження активності ферменту при введенні дексаметазону і гідрокортизону in vivo відбувається, мабуть, за рахунок зниження синтезу мРНК прокарбоксіпептідази Н, а не за рахунок зміни активності вже існуючих активних молекул ферменту. Оскільки введення діазепаму призводить до зниження рівня кортикостероїдів [263], а синтез мРНК ВПП може регулюватися стероїдними гормонами, то можна припустити, що активність ферменту регулюється на рівні експресії гена.

Аналогічні механізми регуляції можна припустити для ФМСФ-КП та КП М.

Галоперидол може інгібувати обумовлену глюкокортикоїдами транскрипцію генів. Цей ефект залежить від зменшення припливу Са 2 + та / або інгібування деяких Са 2 +-залежних ферментів, наприклад, фосфоліпази С [75]. Оскільки синтез мРНК ВПП може регулюватися глюкокортикоїдами, то антипсихотичні препарати можуть пригнічувати транскрипцію гена ферменту.

-белков в тканях крыс. Відомо також, що зміна діяльності дофаминергической системи впливає на рівень G-білків у тканинах щурів. - и G O -белков и уменьшает уровень мРНК G S -белка; блокада этих рецепторов галоперидолом приводит к обратному эффекту: увеличению G S - и уменьшению G I - и G O -белков в промежуточной доле гипофиза [276]. Так, активація Д 2-рецепторів бромокриптином збільшує рівень мРНК G I - і G O-білків і зменшує рівень мРНК G S-білка; блокада цих рецепторів галоперидолом призводить до зворотного ефекту: збільшення G S - і зменшення G I - і G O - білків у проміжній частці гіпофіза [276]. - и G I -белков в гиппокампе и уменьшение G O - и G I -белков в стриатуме крыс [296]. Хронічне споживання галоперидолу викликає збільшення рівня G S - і G I-білків в гіпокампі і зменшення G O - і G I-білків у стріатумі щурів [296].

Існують дані про підвищення концентрації каталітичної субодиниці цАМФ-залежної кінази в стріатумі мишей після одноразової ін'єкції галоперидолу [321]. Тому, не виключено, що у впливі нейролептиків на активність досліджуваних карбоксипептидази можуть бути задіяні цАМФ-залежні механізми.

2+ [34, 317]. Ca 2+ оказывает влияние на выброс содержимого секреторных везикул [80]. Як вже було сказано, активація дофаминовой системи призводить до зниження внутрішньоклітинного рівня Ca 2 + [34, 317]. Ca 2 + впливає на викид вмісту секреторних везикул [80]. 2+ непосредственно не влияют на активность КП Н [123, 242], но в ее составе имеется участок для связывания данных ионов, которые способствуют агрегации КП Н и связыванию ее с мембраной [305]. Іони Ca 2 + безпосередньо не впливають на активність КП Н [123, 242], але в її складі є ділянка для зв'язування даних іонів, які сприяють агрегації КП Н і зв'язування її з мембраною [305]. Можливо, що біологічна роль розчинної і мембранозв'язаних КП Н різна [14, 19]. Припускають, що обидві форми беруть участь у процессингу, але мембранозв'язаних, поряд з цим, здатна приймати участь у сортуванні пептидів [293]. 2+ [144]. Крім того, є відомості про те, що активність прогормонконвертази - ферменту, що у процессингу проКП Н, регулюється іонами Ca 2 + [144]. 2+ . Викладене вище дозволяє припустити, що вплив галоперидолу на активність КП Н може бути опосередковано змінами внутрішньоклітинної концентрації іонів Ca 2 +. Це може призводити як до зміни рівня активності ферменту, так і до зміни співвідношення розчинної і мембранозв'язаних форм, що в свою чергу впливає на процесинг і сортування біологічно активних пептидів. Можливо, що аналогічний механізм буде діяти і щодо ФМСФ-КП, тому що для неї також виявлена ​​мембранозв'язаних форма.

Крім того, синтез мРНК КП Н і прогормонконвертаз стимулюється інсуліном [146], фактором росту нервів [204]. Таким чином, активність КП Н може регулюватися на рівні експресії гена різними ендогенними речовинами, вміст яких при введенні психолептиків змінюється.

психолептики в концентрациях, соответствующих дозам при введении in vivo не влияли на активность КП Н, ФМСФ-КП и КП М. Діазепам і галоперидол безпосередньо не впливають на активність досліджуваних карбоксипептидази, так як у проведених нами дослідах in vitro психолептиків у концентраціях, відповідних доз при введенні in vivo не впливали на активність КП Н, ФМСФ-КП та КП М.

Таким чином, ймовірно, активність КП Н, ФМСФ-КП та КП М регулюється на рівні експресії гена. Однак наявність істотних змін в активності досліджуваних ферментів вже через 0,5 години після впливу вказує на можливість і інших способів регуляції активності ферменту: на рівні процесингу проформи ферментів, який здійснюється активуються іонами Са 2 + ендопептидаз, а також регуляція активності зрілої форми ферменту за рахунок конформаційних змін молекули, і як наслідок, зміна властивостей активного центру ферменту.

Таким чином, отримані нами дані свідчать про те, що активність основних карбоксипептидази регулюється психолептиків. Зміна активності КП Н, ФМСФ-КП та КП М може впливати на рівень регуляторних пептидів в мозку і плазмі крові, а через них - на функціонування інших систем організму і залучатися до механізми основного та побічної дії психолептиків на організм.

ВИСНОВКИ

1. Зміна активності ФМСФ-інгібіруемой карбоксипептидази і карбоксипептидази М виявлені у всіх вивчених органах і відділах мозку при введенні галоперидолу та діазепаму. Активність карбоксипептидази Н змінювалася в більшому числі відділів при введенні діазепаму, ніж галоперидолу. Хронічний вплив призводило до більш виражених змін активності досліджуваних карбоксипептидази в порівнянні з гострим.

2. Найбільші зміни активності карбоксипептидази Н при введенні психолептиків виявлені в залозах, ФМСФ-інгібіруемой карбокси-пептидази - у відділах мозку.

3. Одноразове введення діазепаму призводило до зниження активності ФМСФ-інгібіруемой карбоксипептидази і карбоксипептидази Н (за винятком стріатума) у всіх вивчених тканинах. Різноспрямовані зміни активності карбоксипептидази М після ін'єкції діазепаму відзначені в гіпоталамусі, стріатумі, мозочку і гіпокампі.

4. Гостра дія галоперидолу підвищувало активність карбокси-пептидази Н в гіпоталамо-гіпофізарно-надниркової системи і мозочку і знижувало в насінниках. Різноспрямовані зміни активності ФМСФ-інгібіруемой карбоксипептидази після одноразової ін'єкції галоперидолу спостерігалися у всіх вивчених тканинах за винятком насінників. Введення галоперидолу збільшувало активність карбоксипептидази М у всіх відділах мозку.

5. Хронічне введення діазепаму призводило до зниження активності карбоксипептидази Н (виняток: великі півкулі) і карбокси-пептидази М і різноспрямованим змінам ФМСФ-інгібіруемой карбоксипептидази у всіх вивчених тканинах. Галоперидол викликав зниження активності карбоксипептидази Н, М і ФМСФ-інгібіруемой карбокси-пептидази через добу після хронічне впливу і різноспрямовані зміни через три доби у вивчених тканинах.

6. при действии психолептиков. Активність досліджуваних карбоксипептидази не змінювалася in vitro при дії психолептиків.

7. Отримані в роботі дані розширюють наші уявлення про роль пептідергіческіх систем організму в механізмах дії психолептиків.

ЛІТЕРАТУРА

Андрєєва Ю.А., Кудрін В.С., Раєвський К.С. Вивчення впливу 17 β-естрадіолу на ефекти галоперидолу у щурів лінії Вістар / / Експ. і клин. фарм. - 2002. - Т. 65, № 6. - С. 10-13.

Анічков С.В. Нейрофармакология: (Керівництво) / АМН СРСР. - Л.: Медицина, 1982. - 384 с.

Арашунян Е.Б., Щетинін Є.В. Стріатние дофамінергіческін механізми і специфічна активність антидепресантів / / Експ. і клин. фарм. - 1994. - Т. 57, № 3. - С. 60-64.

Балашов А.М. Перспективи психофармакології: наукові розробки фармацевтичних компаній (аналіз відкритих публікацій) / / Психіатрія і психофармакотерапия. - 2005. - Т. 7, № 1. - С. 35-36.

Бардінова Ж.С. Вплив стресу на активність карбоксипептидази в тканинах самок щурів на різних стадіях естрального циклу: Автореф. дис. ... Канд. біол. наук. - СПб., 2004. - 20 с.

Бєляєв Н.А., Генгін М.Т., Година С.В., Каліхевіч В.М., Панченко Л.Ф. Активність енкефалінконвертази у відділах мозку щурів при алкогольної інтоксикації / / Зап. мед. хімії. - 1988. - Т. 34, № 4. - С. 118-122.

Бондоренко Н.А. Виборче вплив нейролептиків на дофамінзавісімое порушення поведінки щурів в тесті екстраполяціонного позбавлення / / Бюл. екс. біол. - 1990. - № 11. - С. 506-508.

Вакуліна О.П. Ендогенні пептидні ліганди бензодіазепінових рецепторів / / Успіхи сучасної біології. - 1992. - Т. 112, № 4. - С. 591-599.

Вернигора О.М., Генгін М.Т. Виділення, часткове очищення, характеристика і тканинне розподіл фенілметілсульфонілфторід-інгібіруемой карбоксипептидази кішки / / Біохімія. - 2003. - Т.68, вип 1. - С. 96-102.

Вернигора О.М., Генгін М.Т. Механізми регуляції активності та біологічна роль карбоксипептидази Н - ферменту процесингу нейропептидів / / Біохімія. - 1995. - Т. 60, № 12. - С. 1491-1497.

Вернигора О.М., Генгін М.Т. Основні (відщеплюють залишки аргініну і лізину) металлокарбоксіпептідази тканин ссавців: структура, властивості та функції / / Укр. биохим. журн. - 1998. - Т. 70, № 4. - С. 16-24.

Вернигора О.М., Генгін М.Т. Протеолітичні ферменти: субклітинних локалізація, властивості і роль в обміні нейропептидів / / Біохімія. - 1996. - Т. 61, № 5. - С. 771-785.

Вернигора О.М., Генгін М.Т., Нікішин М.М. в норме и при стрессе // Вопр. Вплив етанолу, діазепаму і резерпіну на активність ангіотензинперетворюючого ферменту і карбоксипептидази N в нормі і при стресі / / Зап. мед. хімії. - 1996. - Т. 42, № 2. - С. 127-130.

Вернигора О.М., Генгін М.Т., Нікішин М.М. Множинність молеку-лярних форм розчинних карбоксипептидази-В-подібних ферментів головного мозку кішки / / Укр. биохим. журн. - 1993. - Т. 65, № 4. - С. 17-21.

Вернигора О.М., Генгін М.Т., Нікішин М.М. Очищення і фізико-хімічні властивості розчинної карбоксипептидази Н із сірої речовини головного мозку кішки / / Біохімія. - 1992. - Т. 57, № 11. - С. 1712-1719.

Вернигора О.М., Генгін М.Т., Салдан Д.А., Щетиніна Н.В. Розподіл активності фенилметилсульфонилфторидингибируемой карбоксипептидази в нервовій тканині котів / / Нейрохімія - 1997. - Т. 14, № 4. - С. 423-425.

Вернигора О.М., Мухіна Є.С., Баликова Н.В., Генгін М.Т. Вплив хронічного споживання етанолу на активність основних карбоксипептидази у відділах мозку пренатально алкоголізірованних щурів / / Нейрохімія. - 2003. - Т. 20, № 1. - С. 56-59.

Вернигора О.М., Нікішин М.М., Генгін М.Т. Вплив внутрішньочеревно введення фізіологічного розчину на поведінку щурів у тесті "відкрите поле" і активність ферментів обміну нейропептидів / / фізіолого. журн. - 1995. - Т. 81, № 12. - С. 121-125.

Вернигора О.М., Нікішин М.М., Генгін М.Т. Вплив глюкокортикоїдів на активність розчинної і мембранозв'язаних форм карбоксипептидази Н in vivo / / Укр. биохим. журн. - 1995. - Т. 67, № 6. - С. 99-104.

Вернигора О.М., Нікішин М.М., Генгін М.Т. Вплив діазепаму на активність карбоксипептидази Н і ангіотензинперетворюючого ферменту у відділах мозку щурів з різною емоційністю в нормі і при стресі / / фізіолого. журн. ім. Сєченова. - 1994. - Т. 80, № 12. - С. 108-113.

Вернигора А.Н, Нікішин М.М., Генгін М.Т. Протеолітичні ферменти та регуляція рівня активності нейропептидів / / Біохімія. - 1995. - Т. 60, № 10. - С.1575-1579.

Вернигора О.М., Нікішин М.М., Генгін М.Т. Часткова характеристика фенилметилсульфонилфторидингибируемой карбокси-пептидази з головного мозку кішки / / Біохімія. - 1995. - Т. 60, № 11. - С. 1860-1866.

Вернигора О.М., Щетініна Н.В., Генгін М.Т. ) // Укр. Розподіл активності ФМСФ-інгібіруемой карбоксипептидази в тканинах і відділах головного мозку їжака європейського (Erinaceus europaeus) / / Укр. биохим. журн. - 1996. - Т. 68, № 5. - С. 118-121.

Вороніна Т.А., Середенін С.Б. Перспективи пошуку нових анксіолітиків / / Експ. і клин. фармакологія - 2002. - Т. 65, № 5. - С. 4-17.

Генгін М.Т. Нова КП нервової тканини. Регіональний розподіл і деякі фізико-хімічні властивості / / Нервова система. - Л. - ЛДУ. - 1991 .- С. 29-30.

Генгін М.Т. Особливості структурно-функціональної організації та фізико-хімічні властивості нелізосомальних пептідгідролаз мозку тварин: Дис. ... Д-ра біол. наук. - М., 2002. - 330 с.

Генгін М.Т., Вернигора О.М. Ферменти процесингу опіоїдних пептидів і методи визначення їх активності / / Укр. биохим. журн. - 1994. - Т.66. - № 2. - С.3-17.

Генгін М.Т., Вернигора О.М., Нікішин М.М., Керімов В.Ю. Ефект емоційного стресу на активність карбоксипептидази Н у відділах головного мозку щурів з різною до нього стійкістю / / Зап. мед. хімії .- 1995 .- Т.41, № 4 .- С.8-9.

Генгін М.Т., Вернигора О.М., Нікішин М.М., Щетиніна Н.В. Активність карбоксипептидази N і ангіотензинперетворюючого ферменту в сироватці крові щурів в нормі і при емоційному стресі / / Укр. биохим. журн. - 1994. - Т. 66, № 2. - С. 139-142.

Гомазков О.А. Функціональна біохімія регуляторних пептидів. - М.: Наука, 1993. - 160с.

Гомазков О.А., Панфілов А.Д., Коміссарова Н.В., Ростовцев А.П. Вплив тривалого споживання етанолу на фізіологічний стан і зміни активності пептидаз мозку у муріцідних (агресивних) щурів / / Журн. вищ. нервн. деят. - 1992. - Т. 42, № 4. - С. 771-778.

Гомазков О.А., Панфілов А.Д., Ростовцев А.П., Коміссарова Н.В., Фомін В.В., Грігорьянц О.О. Регіонарна активність енкефалінів-і ангіотензин II-утворюючих пептидаз мозку у щурів з різним потягом до етанолу / / Зап. мед. хімії. - 1991. - Т. 37, № 4. - С. 33-37.

Єрошенко Т.М. Фізіологічні властивості регуляторних пептидів / / Підсумки науки і техн. ВІНІТІ. Сер. физиол. чол. живий. - 1989. - № 51. - С. 1-164.

Івков М.М. Вивчення механізмів нейролептичного дії похідних фенотіазинового ряду: Автореф. дис. ... Д-ра мед. наук. - М., 1995.

Колосова Н.Г., Петракова Г.М. Вплив галоперидолу на трансмембранний потенціал і в'язкість ліпідів мембран тимоцитів / / Експ. і клин. фармакологія. - 2001. - Т. 64, № 5. - С. 60-62.

Коста Є., Фратто В., Хонг Дж.С., Мороні Ф., Янг Х.-Ю.Т. Взаємодія між енкефалінергічного та іншими нейронними системами / / Ендорфіни / Коста Е., Трабуккі М. - М.: Світ, 1981. - С.217-227.

Лакин Г.Ф. Біометрія. - М.: Вищ. шк., 1990. - 352 с.

Малин Д.І. Побічна дія психотропних засобів. - М.: Вузівська книга, 2000. - 208 с.

Машковский М.Д. Лікарські засоби: У 2 т. Т.1. - 14-е изд., Перераб., Испр. і доп. - М.: ТОВ «Видавництво Нова хвиля»: Видавець С.Б. Дівов, 2002. - 540 с.

Механізм дії анксіолітичних, протисудомних і снодійних засобів / Андронаті С.А., Яворський А.С., Чепелів В.М. та ін - Київ: Наук. думка, 1988. - 256 с.

Нейрохімія / Под ред. Ашмаріна І.П., Стукалова П.В. - М.: Изд-во Інституту Біомед. хімії РАМН, 1996. - 470 с.

Новицький В.В., Рязанцева Н.В. Структурно-метаболічної особливості мембрани еритроцитів у хворих параноїдальною шизофренією в умовах психофармакотерапії / / Експ. і клин. фармакологія. - 2002. - Т. 65, № 6. - С. 19-22.

Оболенська Н.Є. Деякі особливості утворення нейропептидів / / Успіхи сучас. біол. - 1989. - Т. 108, № 3 (5). - С. 337-341.

Позднев В.Ф., Варламов О.Л., Грігорьянц О.О., Гомазков О.А. – о-кумароил-фенилаланил-аланил-аргинин // Биоорган. Новий флюорогенний субстрат карбоксипептидази H - о-кумароіл-фенілаланіл-аланіл-аргінін / / Біоорган. хімія. - 1994. - Т. 20, № 4. - С. 406-412.

Полтавченко Г.М. -циклогексиладенозина на уровень диазепамсвязывающего ингибитора в структурах гиппокампа на фоне иммобилизационного стресса // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. Вплив діазепаму і 6 N-ціклогексіладенозіна на рівень діазепамсвязивающего інгібітора в структурах гіпокампа на тлі іммобілізаційного стресу / / Бюлетень експериментальної біології і медицини. - 1990. - Т. 110, № 8. - С. 166-167.

Ростовцев А.П., Грігорьянц О.О., Гомазков О.А. Субстрати для дослідження енкефалінобразующей карбоксипептидази в мозку і наднирниках щури / / Зап. мед. хімії. - 1988. - Т. 34, № 1. - С. 126-129.

Салдана Д.А. Активність основних карбоксипептидази в тканинах мишей при введенні тестостерону і прогестерону: Автореф. дис. ... Канд. біол. наук - СПб., 2001. - 20 с.

Салієва Р.М., Яновський К., Ратсак Р. та ін Пептид, викликає дельта-сон, як фактор, що підвищує вміст речовини Р в гіпоталамусі і стійкість щурів до емоційного стресу / / Ж. вищ. нервн. діяльність. - 1991. - Т. 41, № 3. - С. 558 - 563.

Сергєєв П.В., Шимановський Н.Л. Рецептори фізіологічно активних речовин. - М.: Медицина, 1987. - 400 с.

Середенін С.Б., Бледнов Ю.А. Вплив феназепаму на утримання АКТГ у плазмі крові інбредних мишей при стресових впливах / / Бюлл. експертів. біол. і мед. - 1986. - Т. 102, № 12. - С. 724 - 726.

Слепушкин В.Д., Золоєв Г.К., Виноградов В.А., Тітов М.І. Нейропептиди, їх роль у фізіології та патології / Томськ .- Изд-во Томського ун-та. - 1988. - 143с.

Смулевич А.Б., Іванов С.В., Дробіжев М.Ю. Бензодіазепіни: історія та сучасний стан проблеми / / Журнал неврології і психіатрії. - 1998. № 8. - С. 4-13.

Щетиніна Н.В., Вернигора О.М., Генгін М.Т. Активність основних карбоксипептидази у щурів різної статі / / Укр. биохим. журн. - 1997. - Т. 70, № 3. - С. 110-113.

Щетиніна Н.В., Вернигора О.М., Генгін М.Т., Фірстова Н.В. Тканинне і регіональний розподіл активності фенілметілсульфоніл-фторідінігібіруемой карбоксипептидази та інших карбоксипептидази у щурів / / Укр. биохим. журн. - 1997. - Т. 70, № 3. - С. 23-28.

Фізіологічно активні пептиди. Довідкове керівництво. Сост. Гомазков О.А. - М.: ІПГМ .- 1995 .- 143 с.

Янг Х.-Ю.Т., Хонг Дж.С., Фратто В., Коста Є. Енкефаліни мозку щурів. Розподіл і біосинтез / / Ендорфіни / Коста Е., Трабуккі М. - М.: Світ, 1981. - С.155-164.

Abood ME, Eberwine JH, Erdelyi E., Evans CJ Brain. Regulation of both preproenkephalin mRNA and its derived opioids by haloperidol-a method for measurement of peptides and mRNA in the same tissue extract / / Res. Mol. Brain. Res. - 1990. - V. 8, № 3. Р . - Р. 243-248.

Adams MR, Brandon EP, Chartoff EH, Idzerda RL, Dorsa DM, McKnight GS Loss of haloperidol induced gene expression and catalepsy in protein kinase A-deficient mice / / Neurobiology. - 1997. - V. 94. Р . - Р. 12157-12161.

Adams MR, Dobie DJ, Merchant KM, Unis A., Dorsa DM EEDQ reduces the striatal neurotensin mRNA response to haloperidol / / Peptides. - 1997. - V. 18, № 4. Р . - Р. 527-535.

Alcalde L., Tonacchera M., Costagliola S., Jaraquemada D., Pujol Borrell R., Ludgate M. Cloning of candidate autoantigen carboxypeptidase H from a human islet library: sequence identity with human brain CPH / / J. Autoimmunity. - 1996. - V. 9, № 4. - P. 525-528.

Alho H., Bovolin P., Jenkins D., Guidotti A., Costa E. Cellular and subcellular localization of an octadecaneuropeptide derived from diazepam binding inhibitor: immunohistochemical studies in the rat brain / / J. Chem. Neuroanat. - 1989. - V. 2, № 6. Р . - Р. 301-318.

Alho H., Fremeau RT, Tiedge H., Wilcox J., Bovolin P., Brosius J., Roberts JL, Costa E. Diazepam binding inhibitor gene expression: location in brain and peripheral tissues of rat / / Proc. Natl. Acad. . USA. Sci. USA. - 1988. - V. 85, № 18. Р . - Р. 7018-7022.

Alho H., Harjuntausta T., Schultz R., Peltohuikko M. Immunohistochemistry of Diazepam Binding Inhibitor (Dbi) in the Central-Nervous-System and Peripheral Organs - Its Possible Role as an Endogenous Regulator of Different Types of Benzodiazepine Receptors / / Neuropharmacology. - 1991. - V. 30, № 12B. Р . - Р. 1381-1382.

Andreassen OA, Finsen B., Ostergaard K., Sorensen JC, West MJ, Jorgensen HA The relationship between oral dyskinesias produced by long-term haloperidol treatment, the density of striatal preproenkephalin messenger RNA and enkephalin peptide, and the number of striatal neurons expressing preproenkephalin messenger RNA in rats / / Neuroscience. - 1999. - V. 88, № 1. Р . - Р. 27-35.

Andreassen OA, Finsen B., Ostergaard K., West MJ, Jorgensen HA. Reduced number of striatal neurons expressing preprosomatostatin mRNA in rats with oral dyskinesias after long-term haloperidol administration / / Neurosci. Lett. - 2000. - V. 279, № 1. Р. 21- 2 4. - Р. 21 - 2 4.

Angulo JA Involvement of dopamine D1 and D2 receptors in the regulation of proenkephalin mRNA abundance in the striatum and accumbens of the rat brain / / J. Neurochem. - 1992. - № 58. Р . - Р. 1104-1109.

Angulo JA, Christoph GR, Manning RW, Burkhart BA, Davis LG Reduction of dopamine receptor activity differentially alters striatal neuropeptide mRNA levels / / Adv. Exp. Med. Biol. - 1987. - № 221. Р . - Р. 385-391.

Apiquian R., Fresan A., De La Fuente-Sandoval C., Ulloa RE, Nicolini H. Survey on schizophrenia treatment in Mexico: perception and antipsychotic prescription patterns. / / BMC Psychiatry. - 2004. - V. 4, № 1. Р . - Р. 12.

Autelitano DJ, Clements JA, Nikolaidis I., Canny BJ, Funder JW Concomitant dopaminergic and glucocorticoid control of pituitary proopiomelanocortin messenger ribonucleic acid and beta-endorphin levels / / Endocrinology. - 1987. - V. 121, № 5. Р . - Р. 1689-1696.

Autelitano DJ, Snyder L., Sealfon SC, Roberts JL Dopamine D2-receptor messenger RNA is differentially regulated by dopaminergic agents in rat anterior and neurointermediate pituitary / / Mol. Cell. Endocrinol. - 1989. - V. 67, № 1. Р. 101- 10 5. - Р. 101 - 10 5.

Azaryan AV, Hook VYH Distinct properties of prohormone thiol protease compared to cathepsin B, cathepsin L, and cathepsin H - evidence for Ptp as a novel cysteine ​​protease / / Arch. Biochem. Biophys. - 1994. - V. 314, № 1. - P. 171-177.

Ball JA, Ghatei MA, Sekiya K., Krausz T., Bloom SR Diazepam binding inhibitor-like immunoreactivity (51-70): distribution in human brain, spinal cord and peripheral tissues / / Brain. Res. - 1989. - V. 479, № 2. Р . - Р. 300-305.

Bannon M., Lee J.-M., Giraud P., Young A., Affolter H.-U., Bonner T. Dopamine antagonist haloperidol decreases substance P, substance K, and preprotachykinin mRNAs in rat striatonigral neurons / / J. Biol. Chem. - 1986. - V. 261, № 15. - P. 6640-6642.

Barnard EA, Skolnick P., Olsen RW Subtypes of gamma-aminobutyric acid (A) receptors: classification on the basis of subunit structure and receptor function / / Pharmacological Reviews. - 1998. - № 50. Р . - Р. 291-313.

Basta-Kaim A., Budziszewska B., Jaworska-Feil L., Tetich M., Leskiewicz M., Kubera M., Lason W. Chlorpromazine inhibits the glucocorticoid receptor-mediated gene transcription in a calcium-dependent manner / / Neuropharmacology. - 2002. - V. 43, № 6. Р . - Р. 1035-1043.

Beatty DM, Morris SJ, Chronwall BM Heterogeneity in POMC expression among explanted melanotropes decreases with time in culture and bromocriptine treatment / / Peptides. - 1998. - V. 19, № 4. Р . - Р. 659-665.

Berkovich A., McPhie P., Campagnone M., Guidotti A., Hensley P. A natural processing product of rat diazepam binding inhibitor, triakontatetraneuropeptide (diazepam binding inhibitor 17-50) contains an alpha-helix, which allows discrimination between benzodiazepine binding site subtypes / / Mol. Pharmacol. - 1990. - V. 37, № 2. Р . - Р. 164-172.

Berrettini WH, Rubinow DR, Nurnberger JI Jr., Simmons-Alling S., Post RM, Gershon ES CSF substance P immunoreactivity in affective disorders / / Biol. Psychiatry. - 1985. - V. - 20, № 9. - Р. 965-970.

Binder EB, Kinkead B., Owens MJ, Nemeroff1 CB Neurotensin and Dopamine Interactions / / Pharmacological reviews. - 2001. - V. 53, № 4. Р . - Р. 453-486.

Biologically active peptides: design, synthesis and utilization / WVWilliams, DBWeiner, Eds. - Lancaster: Technomic, 1993. - 360 p.

Birch NP, Rodriguez C., Dixon JE, Mezey E. Distribution of carboxypeptidase H messenger RNA in rat brain using in situ hybridization histochemistry: implications for neuropeptide biosynthesis / / Brain Res. Mol. Brain Res. - 1990. - V. 7, № 1. - P. 53-59.

Blanc D., Cupo A., Castanas E., Bourhim N., Giraud P., Bannon MJ, Eiden LE Influence of acute, subchronic and chronic treatment with neuroleptic (haloperidol) on enkephalins and their precursors in the striatum of rat brain / / Neuropeptides. - 1985. - V. 5, № 4-6. Р . - Р. 567-570.

Blasquez C., Jegou S., Feuilloley M., Rosier A., Vandesande F., Vaudry H. Visualization of gamma-aminobutyric acid A receptors on proopiomelanocortin-producing neurons in the rat hypothalamus / / Endocrinology. - 1994. - V. 135, № 6. Р . - Р. 2759-2764.

Blum AI Interactions of ligands with the opiate receptors of brain membrans regulations by ions and nucleotids / / Proc. Nat. Acad. Sci. US. - 1978. - V.75. - P.1713-1717.

Bolden-Watson C., Watson MA, Murray KD, Isackson PJ, Richelson EJ Haloperidol but not clozapine increases neurotensin receptor mRNA levels in rat substantia nigra / / Neurochem. - 1993. - V. 61, № 3. Р . - Р. 1141-1143.

Bondy CA, Whitnall MH, Brady LS Regulation of carboxypeptidase H gene expression in magnocellular neurons: response to osmotic stimulation / / Mol. Endocrinol. - 1989. - V. 3, № 12. - P. 2086-2092.

Bormann J. Electrophysiological characterization of diazepam binding inhibitor (DBI) on GABAA receptors / / Neuropharmacology. - 1991. - № 12B. Р . - Р. 1387-1389.

Boudarine M., Yegorov O., Sterling-Dubrovsky A., Devi LA, Berman Y. Developmental changes in opioid peptides and their receptors in Cpe (fat) / Cpe (fat) mice lacking peptide processing enzyme carboxypeptidase E / / J. Pharmacol. Exp. Ther. - 2002. - V. 303, № 3. Р . - Р. 1317-1324.

Bouras C., Schulz P., Constantinidis J., Tissot R. Differential effects of acute and chronic administration of haloperidol on substance P and enkephalins in diverse rat brain areas / / Neuropsychobiology. - 1986. - V. 16, № 4. Р . - Р. 169-174.

Bourgoin S., Artaud F., Cesselin F., Glowinski J., Hamon M. Local and remote effects of intra-caudate administration of GABA-related drugs on Met-enkephalin release in the basal ganglia / / Brain. Res. - 1985. - V. 361, № 1-2. Р . - Р. 361-372.

Bovolin P., Schlichting J., Miyata M., Ferrarese C., Guidotti A., Alho H. Distribution and characterization of diazepam binding inhibitor (DBI) in peripheral tissues of rat / / Regul. Pept. - 1990. - V. 29, № 2-3. Р . - Р. 267-281.

Breslin NA, Suddath RL, Bissette G., Nemeroff CB, Lowrimore P., Weinberger DR CSF concentrations of neurotensin in schizophrenia: an investigation of clinical and biochemical correlates / / Schizophr. Res. - 1994. - V. 12. Р. 35-41 . - Р. 35-41.

Britton KT, Akwa Y., Spina MG, Koob GF Neuropeptide Y blocks anxiogenic-like behavioral action of corticotropin-releasing factor in an operant conflict test and elevated plus maze / / Peptides. - 2000. - V. 21, № 1. Р . - Р. 37-44.

Britton KT, Southerland S. Naloxone blocks 'anxiolytic' effects of neuropeptide Y / / Peptides. - 2001. - V. 22, № 4. Р . - Р. 607-612.

Brodin E., Rosen A., Schott E., Brodin K. Effects of Sequential Removal of Rats from a Group Cage, and of Individual Housing of Rats, on Substance P, Cholecystokinin and Somatostatin Levels in the Periaqueductal Gray and Limbic Regions / / NEUROPEPTIDES. - 1994. - V. 26, № 4. Р . - Р. 253-260.

Burgi B., Lichtensteiger W., Schlumpf M. J Diazepam-binding inhibitor / acyl-CoA-binding protein mRNA and peripheral benzodiazepine receptor mRNA in endocrine and immune tissues after prenatal diazepam exposure of male and female rats / / Endocrinol. - 2000. - V. 166, № 1. Р . - Р. 163-171.

Caboche J., Vernier P., Rogard M., Besson MJ Haloperidol increases PPE mRNA levels in the caudal part of the nucleus accumbens in the rat / / Neuroreport. - 1993. - V. 4, № 5. Р . - Р. 551-554.

Canonico PL, Valdenegro CA, Macleod RM The inhibition of phosphatidylinositol turnover: a possible postreceptor mechanism for the prolactin secretion-inhibiting effect of dopamine / / Endocrinology. - 1983. - № 113. Р . - Р. 7-14.

Carter RB Differentiating Analgesic and Non-Analgesic Drug Activities on Rat Hot Plate - Effect of Behavioral End-Point / / PAIN. - 1991. - V. 47, № 2. Р . - Р. 211-220.

Cavallaro S., Korneyev A., Guidotti A., Costa E. Diazepam binding inhibitor (DBI) - processing product, acting at the mitochondrial DBI receptor, mediate adrenocorticotropic hormone-induced steroidogenesis in rat adrenal gland / / Proc. Nat. Acad. Sci. USA. - 1992. - V. 89, № 22. - P. 10598-10602.

Cavallotti C., Frati A., Cavallotti D., Tranquilli Leali FM Dopaminergic receptors in rat dura mater: pharmacological characteristics / / Clin. Exp. Pharmacol. Physiol. - 2004. - V. 31, № 3. Р . - Р. 190-194.

Che FY, Yan L., Li H., Mzhavia N., Devi LA, Fricker LD Identification of peptides from brain and pituitary of Cpe (fat) / Cpe (fat) mice / / Proc. Natl. Acad. Sci. USA. - 2001. - V. 98, № 17. Р . - Р. 9971-9976.

Chen CL, Dionne FT, Roberts JL Regulation of the pro-opiomelanocortin mRNA levels in rat pituitary by dopaminergic compounds / / Proc. Natl. Acad. Sci. USA. - 1983. - V. 80, № 8. Р . - Р. 2211-2215.

Chesselet MF, Hook VY Carboxypeptidase H-like immunoreactivity in the striatum of cats and monkeys / / Regul. Pept. - 1988. - V. 20, № 2. - P. 151-159.

Chowdrey HS, Larsen PJ, Harbuz MS, Lightman SL, Jessop DS Endogenous substance P inhibits the expression of corticotropin-releasing hormone during a chronic inflammatory stress / / Life Sci. - 1995. - V. 57, № 22. Р . - Р. 2021-2029.

Chretien M., Seidah NG Precursor polyproteins in endocrine and neuroendo-crine systems / / Int. J. Peptide Protein Res. - 1984. - N 23. - P. 335-341.

Christopoulos A. Allosteric binding sites on cell-surface receptors: Novel target for drug discovery / / Nat. Rev. Drug. Discov. - 2002. - V. 1. - P. 198-210.

Compere V., Li S., Leprince J., Tonon MC, Vaudry H., Pelletier G. Effect of intracerebroventricular administration of the octadecaneuropeptide on the expression of pro-opiomelanocortin, neuropeptide Y and corticotropin-releasing hormone mRNAs in rat hypothalamus / / J. Neuroendocrinol. - 2003. - V. 15, № 2. Р . - Р. 197-203.

Compere V., Li S., Leprince J., Tonon MC, Vaudry H., Pelletier G. In vivo action of a new octadecaneuropeptide (ODN) antagonist on gonadotropin-releasing hormone gene expression in the male rat brain / / Neuroscience. - 2004. - V. 125, № 2. Р . - Р. 411-415.

Cool DR, Normant E., Shen FS, Chen HC, Pannell L., Zhang Y., Loh YP Carboxypeptidase E is a regulated secretory pathway sorting receptor: genetic obliteration leads to endocrine disorders in Cpe (Fat) mice / / Cell. - 1997. - V. 88, № 1. P. 73-83.

Copland AM, Balfour DJ The effects of diazepam on brain 5-HT and 5-HIAA in stressed and unstressed rats / / Pharmacol. Biochem. Behav. - 1987. - № 27. Р . - Р. 619-624.

Corda MG, Ferrari M., Guidotti A., Konkel D., Costa E. Isolation, purification and partial sequence of a neuropeptide (diazepam-binding inhibitor) precursor of an anxiogenic putative ligand for benzodiazepine recognition site / / Neurosci. Lett. - 1984. - № 47. Р . - Р. 310-324.

Costa E., Guidotti A. Diazepam binding inhibitor (DBI): - a peptide with multiple biological actions / / Life Sci. - 1991. - V. 49, № 5. - P. 325-344.

Davidson HW, Hutton JC The insulin-secretory-granule carboxypeptidase H. Purification and demonstration of involvement in proinsulin processing / / Biochem. J. - 1987. - V. 245, № 2. - P. 575-582.

De Gandarias JM, Ramirez M., Zulaica J., Casis L. Aminopeptidase (arylamidase) activity in discrete areas of the rat brain: sex differences / / Horm. Metab. Res. - 1989. - V. 5, № 21. - P. 285-286.

De Saint-Vis B., Cupillard L., Pandrau-Garcia D., Ho S., Renard N., Grouard G., Duvert V., Thomas X., Galizzi J., Banchereau J. et al. Distribution of carboxypeptidase M on lymphoid and myeloid cells parallels the other zinc-dependent proteases CD10 and CD13. / / Blood - 1995. - V. 86, № 3. Р . - Р. 1098-1105.

Decker KP, Roy-Byrne PP, Merchant KM Effect of muscimol on haloperidol-induced alteration of neurotensin gene expression in the striatum and nucleus accumbens in the rat / / Brain. Res. - 1995. - V. 691, № 1-2. Р . - Р. 9-17.

Deddish PA, Skidgel RA, Kriho VB, Li XY, Becker RP, Erdos EG Carboxypeptidase M in Madin-Darby canine kidney cells. Evidence that carboxypeptidase M has a phosphatidylinositol glycan anchor / / J. Biol. Chem. - 1990. - V. № 25. 265, № 25. - P. 15083-15089.

Delfs JM, Yu L., Ellison GD, Reisine T., Chesselet MF Regulation of mu-opioid receptor mRNA in rat globus pallidus: effects of enkephalin increases induced by short-and long-term haloperidol administration / / J. Neurochem. - 1994. - V. 63, № 2. Р . - Р. 777-780.

De Wied D., Sigling HO Neuropeptides involved in the pathophysiology of schizophrenia and major depression / / Neurotox. Res. - 2002. - V. 4, № 5-6. - Р. 453-468.

Doble A. New insights into the mechanism of action of hypnotics / / Journal of Psychopharmacology. - 1999. - V. 13, № 1. Р . - Р. 11-20.

Dochetry K., Hutton JC Carboxypeptidase activity in the insulin secretory granule / / FEBS Lett. - 1983. - V. 162, № 1. - P. 137-141.

Dong E., Matsumoto K., Watanabe H. Diazepam binding inhibitor (DBI) reduces testosterone and estradiol levels in vivo / / Life Sci. - 2002. - V. 70, № 11. Р . - Р. 1317-1323.

Do-Rego JL, Mensah-Nyagan AG, Beaujean D., Leprince J., Tonon MC, Luu-The V., Pelletier G., Vaudry H. The octadecaneuropeptide ODN stimulates neurosteroid biosynthesis through activation of central-type benzodiazepine receptors / / J. Neurochem. - 2001. - V. 76, № 1. Р . - Р. 128-138.

Duka T., Wuster M., Herz A. Rapid changes in enkephalin levels in rat striatum and hypothalamus induced by diazepam / / Naunyn. Schmiedebergs. Arch. Pharmacol. - 1979. - V. 309, № 1. Р . - Р. 1-5.

Ebner K., Rupniak N.М., Saria A., Singewald N. Substance P in the medial amygdala: Emotional stress-sensitive release and modulation of anxiety-related behavior in rats / / PNAS. - 2004. - V. 101, № 12. - Р. 4280-4285.

Eipper BA, Green CB, Mains RE Expression of prohormone processing enzymes in neuroendocrine and non neuroendocrine cells / / Monogr. Natl. Cancer. Inst. - 1992. - № 13, P. 163-168.

Fan X., Olson SJ, Johnson MD Immunohistochemical localization and comparison of carboxypeptidases D, E and Z, -MSH, ACTH and MIB-1 between human anterior and corticotroph cell "basophil invasion" of the posterior pituitary / / J. Histochem. Cytochem. - 2001. - № 49. Р . - Р. 783-790.

Farah JM, Malcolm DS, Mueller GP Dopaminergic inhibition of pituitary beta-endorphin-like immunoreactivity secretion in the rat / / Endocrinology. - 1982. - V. 110, № 2. Р . - Р. 657-659.

Fass DM, Takimoto K., Mains RE, Levitan ES Tonic Dopamine Inhibition of L-Type Ca2 + Channel Activity Reduces 1D Ca2 + Channel Gene Expression / / The Journal of Neuroscience. - 1999. - V. 19, № 9. Р . - Р. 3345-3352.

Ferrarese C., Mennini T., Pecora N., Pierpaoli C., Frigo M., Marzorati C., Gobbi M., Bizzi A., Codegoni A., Garattini S., Frattola L. Diazepam binding inhibitor (DBI) increases after acute stress in rat / / Neuropharmacology. - 1991. - № 30. Р . - Р. 1445-1452.

Ferrarese C., Vaccarino F., Alho H., Mellstrom B., Costa E., Guidotti A. Subcellular location and neuronal release of diazepam binding inhibitor / / J. Neurochem. - 1987. - V. 48, № 4. Р . - Р. 1093-1102.

Ferrero P., Costa E., Conti-Tronconi B., Guidotti A. A diazepam binding inhibitor (DBI)-like neuropeptide is detected in human brain / / Brain. Res. - 1986. - V. 399, № 1. Р . - Р. 136-142.

Fiedorek FT, Parkinson D. Carboxypeptidase H processing and secretion in rat clonal beta-cell lines / / Endocrinology. - 1992. -V. 131, № 3. - P. 1054-1062.

Fox CA, Mansour A., Watson SJ The effects of haloperidol on dopamine receptor gene expression / / Jr. Exp. Neurol. - 1994. - V. 130, № 2. Р . - Р. 288-303.

Fricker LD Activation and membrane binding of carboxypeptidase E / / J. Cell. Biochem. - 1988. - № 38. - P. 279-289.

Fricker LD Carboxypeptidase E / / Ann. Rev. Physiol. - 1988. - № 50. - P. 309-321.

Fricker LD, Adelman JP, Douglass J., Thompson RC, Strandmann RP, Hutton J. Isolation and sequence analysis of cDNA for rat carboxypeptidase E [EC 3.4.17.10], a neuropeptide processing enzyme / / Mol. Endocrinol. - 1989. - V. 3, № 4. - P. 666-673.

Fricker LD, Berman YL, Leiter EH, Devi LA Carboxypeptidase E activity is deficient in mice with the fat mutation. Effect on peptide processing / / J. Biol. Chem. - 1996. - V. 271, № 48. Р . - Р. 30619-30624.

Fricker LD, Das B., Angeletti RH Identification of the pH-dependent membrane anchor of carboxypeptidase E (EC 3.4.17.10) / / J. Biol. Chem. - 1990. - V. 265, № 5. - P. 2476-2482.

Fricker LD, Das B., Klein RS, Greene D., Jung YK Regulation of carboxypeptidase E (enkephalin convertase) / / NIDA Res. Monogr. - 1991. - № 111. - P. 171-187.

Fricker LD, Devi L. Comparison of a spectrophotometric, a fluorometric, and a novel radiometric assay for carboxypeptidase E (EC 3.4.17.10) and other carboxypeptidase B-like enzymes / / Anal. Biochem. - 1990. - V. 184, № 1. Р . - Р. 21-27.

Fricker LD, Herwert E. Comparision of a carboxypeptidase E-like enzyme in human, mouse, Xenopus, shark and Aplysia neural tissue / / Brain Res. - 1988. - V. 453, № 1-2. - P. 281-286.

Fricker LD, Plummer THJr., Snyder SH Enkephalin convertase: potent, selective and irreversible inhibitors / / Biochem. Biophys. Res. Commun. - 1983. - V. 11, № 3. - P. 994-1000.

Fricker LD, Reaves BJ, Das B., Dannies PS Comparison of the regulation of carboxypeptidase E and prolactin in GH 4 C1 cells, a rat pituitary cell line / / Neuroendocrinology. - 1990. - V. 51, № 6. - P. 658-663.

Fricker LD, Rigual RJ, Diliberto EJJr., Viveros OH Reflex splanchnic nerve stimulation increases levels of carboxypeptidase E mRNA and enzy-matic activity in the rat adrenal medulla / / J. Neurochem. - 1990. - V. 55, N 2. - P. 461-467.

Fricker LD, Snyder SH Enkephalin convertase: purification and charasterization of a specific enkephalin-synthesizing carboxypeptidase localized to adrenall chromaffin granules / / Proc. Natl. Acad. Sci. USA. - 1982. - № 79. - P. 3886-3890.

Fricker LD, Snyder SH Purification and characterization of enkephalin convertase, an enkephaline-synthesizing carboxypeptidase / / J. Biol. Chem. - 1983. - V. 258, № 18. - P. 10950-10955.

Fricker LD, Supattapone S., Snyder SH Enkephalin convertase: a specific enkephalin synthesizing carboxypeptidase in adrenal chromaffin granules, brain and pituitary gland / / Life Sci. - 1982. - № 31. - P. 1841 - 1844.

Gandolfo P., Patte C., Thoumas JL, Leprince J., Vaudry H., Tonon MC The endozepine ODN stimulates [3H] thymidine incorporation in cultured rat astrocytes / / Neuropharmacology. - 1999. - V. 38, № 5. Р . - Р. 725-732.

Garcia de Yebenes E., Li S., Pelletier G. Regulation of proopiomelanocortin gene expression by endogenous ligands of the GABAA receptor complex as evaluated by in situ hybridization in the rat pars intermedia / / Brain. Res. - 1997. - V. 750, № 1-2. Р . - Р. 277-284.

Gavish M., Bachman I., Shoukrun R., Katz Y., Veenman L., Weisinger G., Weizman A. Enigma of the Peripheral Benzodiazepine Receptor / / PHARMACOLOGICAL REVIEWS. - 1999. - V. 51, № 4. Р . - Р. 629-650.

George SR, Kertesz M. Dopamine receptors regulate Met-enkephalin content in pituitary / / Brain. Res. - 1985. - V. 334, № 1. Р . - Р. 187-189.

George SR, Kertesz M. Met-enkephalin concentrations in striatum respond reciprocally to alterations in dopamine neurotransmission / / Peptides. - 1987. - V. 8, № 3. Р . - Р. 487-492.

Givalois L., Grinevich V., Li S., Garcia-De-Yebenes E., Pelletier G. The octadecaneuropeptide-induced response of corticotropin-releasing hormone messenger RNA levels is mediated by GABA (A) receptors and modulated by endogenous steroids / / Neuroscience. - 1998. - V. 85, № 2. Р . - Р. 557-567.

Givalois L., Li S., Pelletier G. Differential involvement of adrenal and gonadal steroids in anterior and intermediate pituitary pro-opiomelanocortin mRNA expression induced by the endogenous benzodiazepine, octadecaneuropeptide, in adult male rats / / J. Endocrinol. - 1999. - V. 161, № 2. Р . - Р. 307-316.

Gregg D., Goedken E., Gaikin M., Wendell D., Gorski J. Decreased expression of carboxypeptidase E protein is correlated to estrogen-induction of rat pituitary tumors / / Mol. Cell. Endocrinol. - 1996. - V. 117, N 2. - P. 219-225.

Grigoriants O., Devi L., Fricker LD Dopamine antagonist haloperidol increases carboxypeptidase E mRNA in rat neurointermediate pituitary but not in various other rat tissues. / / Molecular brain research. - 1993. - V. 19, № 1-2. Р . - Р. 161-164.

Guest PC, Arden SD, Rutherford NG, Hutton JC The posttranslational processing and intracellular sorting of carboxypeptidase H in the islets of Langerhans / / Mol. Cell. Endocrinol. - 1995. - 113, № 1, P. 99-108.

Guest PC, Ravazzola M., Davidson HW, Orci L., Hutton JC Molecular heterogeneity and cellular localization of carboxypeptidase H in the islets of Langerhans / / Endocrinology. - 1991. - V. 129, № 2. - P. 734-740.

Guest PC, Rhodes CJ, Hutton JC Regulation of the biosynthesis of insulin secretory granule proteins. Coordinate translational control is exerted on some, but not all, granule К. matrix constituents / / Biochem. J. - 1989. № 2. - 257, № 2. - P. 431-437.

Guimaraes VM, Zuardi AW, Del Bel EA, Guimaraes FS Cannabidiol increases Fos expression in the nucleus accumbens but not in the dorsal striatum / / Life Sci. - 2004. - V. 75, № 5. Р . - Р. 633-638.

Haefely WE Central action of benzodiazepines: general introduction / / British Journal of Psychiatry. - 1978. - № 133. Р . - Р. 231-238.

Hagino Y., Okuwa M., Moroji T. Effects of ceruletide and haloperidol on the hypothalamo-pituitary beta-endorphin system and brain beta-endorphin contents in the rat: with special reference to effects of ceruletide in chronically haloperidol-treated rats / / Neuropeptides. - 1991. - V. 18, № 1. Р . - Р. 1-14.

Ham J., Smyth DG Beta-endorphin processing in pituitary and brain is sensitive to haloperidol stimulation / / Neuropeptides. - 1985. - V. 5, № 4-6. Р . - Р. 497-500.

Harmar AJ Neuropeptides / / Transm. Mol. In the brain. - 1987. - N 2. - P. 17-26.

Heimer L., Alheid GF, Zaborsky L. Basal ganglia / Paxinos G, ed / / The rat nervous system, V. 1, Forebrain and midbrain. - New York, 1985. Р . - Р. 37-86.

Herman ZS, Huzarska M., Kmieciak-Kolada K., Kowalski J. Chronic treatment with chlorpromazine, thioridazine or haloperidol increases striatal enkephalins and their release from rat brain / / Psychopharmacology (Berl). - 1991. - V. 104, № 1. Р . - Р. 106-112.

Herpfer I, Lieb K. Substance P and Substance P receptor antagonists in the pathogenesis and treatment of affective disorders / / World J. Biol. Psychiatry. - 2003. - V. 4, № 2. - P. 56-63.

Holloway CD, Kenyon CJ, Dowie LJ, Corrie JE, Gray CE, Fraser R. Effect of the benzodiazepines diazepam, des-N-methyldiazepam and midazolam on corticosteroid biosynthesis in bovine adrenocortical cells in vitro: Location of site of action / / J. Steroid. Biochem. - 1989. - № 33. Р . - Р. 219-225.

Hollt V., Bergmann M. Effects of acute and chronic haloperidol treatment on the concentrations of immunoreactive beta-endorphin in plasma, pituitary and brain of rats / / Neuropharmacology. - 1982. - V. 21, № 2. Р . - Р. 147-154.

Hollt V., Haarmann I., Seizinger BR, Herz A. Chronic haloperidol treatment increases the level of in vitro translatable messenger ribonucleic acid coding for the beta-endorphin/adrenocorticotropin precursor proopiomelanocortin in the pars intermedia of the rat pituitary / / Endocrinology. - 1982. - V. 110, № 6. Р . - Р. 1885-1891.

Holmes A., Heilig M., Rupniak NM, Steckler T., Griebel G. Neuropeptide systems as novel therapeutic targets for depression and anxiety disorders / / Trends. Pharmacol. Sci. - 2003. - V. 24, № 11. - Р. 580-588.

Holsboer F. The role of peptides in treatment of psychiatric disorders / / J. Neural. Transm. Suppl. - 2003. - V. 64. - P. 17-34.

Hook VYH Carboxypeptidase B-like activity for the processing of enkephalin precursors in the membrane component of bovine adrenomedullary chromaffin granules / / Neuropeptides. - 1984. - V. 4, № 2. - P. 117-126.

Hook VYH, Affolter HU Identification of zymogen and mature forms of human carboxypeptidase H. A processing enzyme for the synthesis of peptide hormones / / FEBS Lett. - 1988. -V. 238, № 2. - P. 338-342.

Hook VYH, Affolter HU, Palkovits M. Carboxypeptidase H in the hypothalamo-neurohypophysal system: evidence for processing of a prohormone-processing enzyme during axonal transport / / J. Neurosci. - 1990. - V. 10, № 10. - P. 3219-3226.

Hook VYH, Eiden LE (Met)-enkephalin and carboxypeptidase processing enzyme are co-released from chromaffin cells by cholinergic stimulation / / Biochem. Biophys. Res. Commun. - 1985. - № 128. - P. 563-570.

Hook VYH, Eiden LE Two peptidases that convert 125 J-Lys-Arg-(Met)-enkephalin and 125 J-enkephalin-Arg 6, respectively, to 125 J-(Met)-enkephalin in bovine adrenal medullary chromaffin granules / / FEBS Lett - 1984. - V. 172, № 2. - P. 212-218.

Hook VYH, LaGamma EF Product inhibit of carboxypeptidase H / / J. Biol. Chem. - 1987. - V. 262, № 26. - P. 12583-12588.

Hook VYH, Loh YP Carboxypeptidase B-like converting enzyme activity in secretory granules of rat pituitary / / Proc. Natl. Acad. Sci. USA. - 1984. - N 81. - P. 2776-2780.

Hooper NM Angiotensin converting enzyme: implications from molecular biology for its physiological functions / / Int. J. Biochem. - 1991. - V. 23, № 7-8. - P. 641-647.

Houdi AA, Van Loon GR Haloperidol-induced increase in striatal concentration of the tripeptide, Tyr-Gly-Gly, provides an index of increased enkephalin release in vivo / / J. Neurochem. - 1990. - V. 54, № 4. Р . - Р. 1360-1366.

Hsueh WA Proteases in hormon production and metabolism / / Int. Symp. "Proteases: Potent Role in Health and Disease" (Wursburg, 1982): Proc. - New York, London, 1984. - P. 141-151

Inoue A., Seto M., Sugita S., Hide I., Hirose T., Koga N., Kikuchi T., Nakata Y. Differential effects on D2 dopamine receptor and prolactin gene expression by haloperidol and aripiprazole in the rat pituitary / / Brain. Res. Mol. Brain. Res. - 1998. - V. 55, № 2. Р . - Р. 285-292.

Irminger JC, Verchere CB, Halban PA Carboxypeptidase E is not a sorting receptor for proinsulin / / Mol. Biol. Cell. - 1997. - № 8. - P. 1786-1786.

Jaber M., Tison F., Fournier M., Bloch B. Differential influence of haloperidol and sulpiride on dopamine-receptors and peptide messenger-RNA levels in the rat striatum and pituitary / / Brain. Res. Mol. Brain Res. - 1994. - V. 23, № 1-2. - P. 14-20.

Jacobi JM, Lloyd HM, Meares JD Nuclear diameter in the anterior pituitary gland of the rat: effects of estrogen, bromocriptine, and haloperidol / / J. Histochem. Cytochem. - 1982. - V. 30, № 7. Р. 677- 6 81. - Р. 677 - 6 81.

Johansson GB, Skidgel RA Carboxypeptidase M (cpm) converts epidermal growthfactor (EGF) to Des-Arg53-EGF / / FASEB J. - 1994. - V. 8, № 5. - P. 930-935.

Jung YK, Kunczt CJ, Pearson RK, Dixon JE, Fricker LD Structural characterization of the rat carboxypeptidase-E gene / / Mol. Endocrinol. - 1991. - V. 5, № 9. Р . - Р. 1257-1268.

Jung YK, Kunczt CJ, Pearson RK, Fricker LD, Dixon JE Expression of the rat carboxypeptidase-E gene in neuroendocrine and nonneuroendocrine cell lines / / Mol. Endocrinol. - 1992. - V. 6, № 12. - P. 2027-2037.

Katsura M., Mohri Y., Shuto K., Tsujimura A., Ukai M., Ohkuma S. Psychological stress, but not physical stress, causes increase in diazepam binding inhibitor (DBI) mRNA expression in mouse brains / / Brain. Res. Mol. Brain. Res. - 2002. - V. 104, № 1. Р . - Р. 103-109.

Khalil RH, Soliman MR Diazepam alters caffeine-induced effects on beta-endorphin levels in specific rat brain regions / / Life Sci. - 1997. - V. 61, № 25. Р . - Р. 2485-2490.

Khan RM, Soliman MR Effects of benzodiazepine agonist, antagonist and inverse agonist on ethanol-induced changes in beta-endorphin levels in specific rat brain regions / / Pharmacology. - 1993. - V. 47, № 6. Р . - Р. 337-343.

Kilpatrick DL, Howells RD, Noe M., Bailey LC, Udenfriend S. Expression of preproenkephalin-like mRNA and its peptide products in mammalian testis and ovary / / Proc. Natl. Acad. Sci. USA. - 1985. - V. 82, № 21. - Р. 7467-7469.

Khanna AS, Waisman DM Metabolism and intracellular proces ¬ sing of pro-tein hormones / / Hormon. Act. - 1988. - N 1. - P. 117-132.

Klein RS, Das B., Fricker LD Secretion of carboxypeptidase E from cultured astrocytes and from AtT-20 cells, a neuroendocrine cell line: implications for neuropeptide biosynthesis / / J. Neurochem. - 1992 - V. 58, № 6. - P. 2011-2018.

Klein RS, Fricker LD Heterogeneous expression of carboxypeptidase E and proenkephalin mRNAs by cultured astrocytes / / Brain. Res. - 1992. - V. 569, № 2. Р. 300- 3 10. - Р. 300 - 3 10.

Konkoy CS, Oakes MG, Davis TP Chronic treatment with neuroleptics alters neutral endopeptidase 24.11 activity in rat brain regions / / Peptides. - 1993. - V. 14, № 5. Р . - Р. 1017-1020.

Konkoy CS, Waters SM, Davis TP Subchronic haloperidol administration decreases aminopeptidase N activity and [Met5] enkephalin metabolism in rat striatum and cortex / / Eur. J. Pharmacol. - 1996. - V. 297, № 1-2. Р . - Р. 47-51.

Krieger DT Brain peptides: what, where, and why? / / Science. - 1983. - V. 222, № 4627. - P. 971-985.

Krueger KE, Papadopoulos V. Peripheral-type benzodiazepine receptors mediate translocation of cholesterol from outer to inner mitochondrial membranes in adrenocortical cells / / J. Biol. Chem. - 1990. - № 265. Р . - Р. 15015-15022.

Lacourse KA, Friis-Hansen L., Samuelson LC, Rehfeld JF Altered processing of procholecystokinin in carboxypeptidase E-deficient fat mice: differential synthesis in neurons and endocrine cells / / FEBS Lett. - 1998. - V. 436, № 1. Р . - Р. 61-66.

Laslop A., Tschernitz C. Effects of nerve growth factor on the biosynthesis of chromogranin A and B, secretogranin II and carboxypeptidase H in rat PC12 cells / / Neuroscience. - 1992. - V. 49, N 2. - P. 443-450.

Law AJ, Hutchinson LJ, Burnet PW, Harrison PJ Antipsychotics increase microtubule-associated protein 2 mRNA but not spinophilin mRNA in rat hippocampus and cortex. / / J. Neurosci. Res. - 2004. - V. 76, № 3. Р . - Р. 376-382.

Leprince J., Oulyadi H., Vaudry D., Masmoudi O., Gandolfo P., Patte C., Costentin J., Fauchere JL, Davoust D., Vaudry H., Tonon MC Synthesis, conformational analysis and biological activity of cyclic analogs of the octadecaneuropeptide ODN. Design of a potent endozepine antagonist / / Eur. J. Biochem. - 2001. - V. 268, № 23. Р . - Р. 6045-6057.

Li S., Givalois L., Pelletier G. Involvement of neurosteroids in the effect of the endogenous benzodiazepine receptor ligand octadecaneuropeptide (ODN) on gonadotropin-releasing hormone gene expression in rat brain / / J. Neuroendocrinol. - 1997. - V. 9, № 3. Р . - Р. 229-233.

Li S., Pelletier G. Dopamine regulation of gonadotropin-releasing hormone (GnRH) gene expression in the female rat brain / / Neurosci. Lett. - 1992. - V. 146, № 2. Р . - Р. 207-210.

Lihrmann I., Plaquevent JC, Tostivint H., Raijmakers R., Tonon MC, Conlon JM, Vaudry H. Frog Diazepam-Binding Inhibitor - Peptide Sequence, cDNA Cloning, and Expression in the Brain / / Proceedings of the national academy of sciences of the USA. - 1994. - V. 91, № 15. Р . - Р. 6899-6903.

Lindefors N. Amphetamine and haloperidol modulate preprotachykinin A mRNA expression in rat nucleus accumbens and caudate-putamen / / Brain. Res. Mol. Brain. Res. - 1992. - V. Р . 151- 15 4. 13, № 1-2. Р. 151 - 15 4.

Llorens-Cortes C., Zini S., Gros C., Schwartz JC Dopaminergic regulation of enkephalin release / / J. Neurochem. - 1991. - V. 56, № 4. Р 1368-1375. - Р 1368-1375.

Loeffler JP, Demeneix BA, Kley NA, Hollt V. Dopamine inhibition of proopiomelanocortin gene expression in the intermediate lobe of the pituitary. Interactions with corticotropin-releasing factor and the beta-adrenergic receptors and the adenylate cyclase system / / Neuroendocrinology. - 1988. - V. 47, № 2. Р . - Р. 95-101.

Loeffler JP, Demeneix BA, Pittius CW, Kley N., Haegele KD, Hollt V. GABA differentially regulates the gene expression of proopiomelanocortin in rat intermediate and anterior pituitary / / Peptides. - 1986. - V. 7, № 2. Р . - Р. 253-258.

Loeffler JP, Kley N., Pittius CW, Almeida OF, Hollt V. In vivo and in vitro studies of GABAergic inhibition of prolactin biosynthesis / / Neuroendocrinology. - 1986. - V. 43, № 4. Р . - Р. 504-510.

Loh YP, Birch NP, Castro MG Pro-opiomelanocortin and pro-vasopressin converting enzyme in pituitary secretory vesicles / / Biochimie. - 1988. - V. 70, № 1. - P. 11-16.

Loh YP, Snell CR, Cool DR Receptor mediated targeting of hormones to secretory granules, role of carboxypeptidase E / / Trends Endocrinol. Met. - 1997. - V. № 4 . P. 8, № 4. P. 130-137.

Lowry OH, Rosebrought NJ, Farr AG, Randall RJ Protein measurement with Folin phenol reagent / / J. Chem. Biol. Chem. - 1951. 193, № 1. - V. 193, № 1. - P. 265-275.

Luddens H., Korpi ER Biological function of GABAA / benzodiazepine receptor heterogeneity / / J. Psychiatr. Res. - 1995. - V. 29, № 2. - P. 77-79.

Lynch DR, Braas KM, Hutton JC, Snyder SH Carboxypeptidase E (CPE) immunocytochemical localization in the rat central nervous system and pituitary gland / / J. Neurosci. - 1990. - V. 10, № 5. - P. 1592-1599.

Lynch DR, Venable JC, Snyder SH Enkephalin convertase in the heart: similar disposition to atrial natriuretic factor / / Endocrinology. - 1990. - V. 122, № 6. - P. 2683-2691.

MacCumber MW, Snyder SH, Ross CA Carboxypeptidase E (enkephalin convertase): mRNA distribution in rat brain by in situ hybridization / / J. Neurosci. - 1990. - V. 10, № 8. - P. 2850-2860.

Maddalena DJ, Johnston GA Prediction of receptor peoperties and binding affinity of ligands to benzodiazepine-GABAA receptors using artiticial neural networks / / J. Med. Chem. - 1995. - V. № 4. – P . 715-724. 38, № 4. - P. 715-724.

Mains RE, Eipper BA Secretion and regulation of two biosyntetic enzyme activities, peptidyl-glycine a-amidating monooxygenase and a carboxypeptidase, by mouse pituitary corticotropic tumor cells / / Endocrinology. - 1984. - V. 115, N 5. - P. 1683-1690.

Mannisto PT, Laakso ML, Jarvinen A., Rago L. Effects of Central and Peripheral Type Benzodiazepine Ligands on Growth-Hormone and Gonadotropin-Secretion in Male-Rats / / Pharmacology s toxicology. - 1992. - V. 71, № 1. Р . - Р. 75-80.

Manser E., Fernandez D., Loo L., Goh PY, Monfries C., Hall C., Lim L. Human carboxypeptidase E. Isolation and characterization of the cDNA, sequence conservation, expression and processing in vitro / / Biochem. J. - 1990. - V. 267, № 2. - P. 517-525.

Marcus MM, Nomikos GG, Malmerfelt A., Zachrisson O., Lindefors N., Svensson TH Effect of chronic antipsychotic drug treatment on preprosomatostatin and preprotachykinin A mRNA levels in the medial prefrontal cortex, the nucleus accumbens and the caudate putamen of the rat / / Brain. Res. Mol. Brain. Res. - 1997. - V. 45, № 2. Р . 275- 2 82. - Р. 275 - 2 82.

Marksteiner J., Saria A., Miller CH, Krause JE Differential increases of neurokinin B-and enkephalin-like immunoreactivities and their mRNAs after chronic haloperidol treatment in the rat / / Neurosci Lett. - 1992. - V. 148, № 1-2. Р . - Р. 55-59.

Matsumoto Y., Okamura H., Ichitani Y., Yanaihara N., Nakajima T., Ibata Y. Immunocytochemical Survey of Haloperidol-Induced Immunoreactive Changes of (Met) Enkephalin-Arg 6-Gly 7-Leu 8 in the Rat Forebrain / / Brain research bulletin. - 1992. - V. 28, № 5. Р . - Р. 683-695.

Meador-Woodruff JH, Pellerito B., Bronstein D., Lin HL, Ling N., Akil H. Differential effects of haloperidol on the rat pituitary: decreased biosynthesis, processing and release of anterior lobe pro-opiomelanocortin / / Neuroendocrinology. - 1990. - V. 51, № 3. Р . - Р. 294-303.

Merchant KM c-fos antisense oligonucleotide specifically attenuates haloperidol-induced increases in neurotensin / neuromedin N mRNA expression in rat dorsal striatum / / Mol. Cell. Neurosci. - 1994. - V. 5, № 4. Р . - Р. 336-344.

Merchant KM, Dobner PR, Dorsa DM Differential effects of haloperidol and clozapine on neurotensin gene transcription in rat neostriatum / / J. Neurosci. - 1992. - V. 12, № 2. Р . - Р. 652-663.

Merchant KM, Miller MA Coexpression of neurotensin and c-fos mRNAs in rat neostriatal neurons following acute haloperidol / / Brain. Res. Mol. Brain. Res. - 1994. - V. 23, № 3. Р . - Р. 271-277.

Merchant KM, Miller MA, Ashleigh EA, Dorsa DM Haloperidol rapidly increases the number of neurotensin mRNA-expressing neurons in neostriatum of the rat brain / / Brain. Res. - 1991. - V. 540, № 1-2. Р . - Р. 311-314.

Mijnster MJ, Schotte A., Docter GJ, Voorn P. Effects of risperidone and haloperidol on tachykinin and opioid precursor peptide mRNA levels in the caudate-putamen and nucleus accumbens of the rat / / Synapse. - 1998. - V. 28, № 4. Р . - Р. 302-312.

Mikkelsen JD The KCNQ channel activator retigabine blocks haloperidol-induced c-Fos expression in the striatum of the rat / / Neurosci. Lett. - 2004. - V. 362, № 3. Р. 240-243. - Р. 240-243.

Millington WR, O'Donohue TL, Mueller GP Dopaminergic agents selectively alter the post-translational processing of beta-endorphin in the intermediate pituitary of the rat / / J. Pharmacol. Exp. Ther. - 1987. - V. 243, № 1. Р . - Р. 160-170.

Mitchell V., Beauvillain JC, Mazzuca M. GABAergic afferents modulate proenkephalin mRNA expression in the guinea pig hypothalamic magnocellular dorsal nucleus / / Neurosci. Lett. - 1992. - V. 144, № 1-2. Р . - Р. 189-194.

Morl F., Groschel M., Leemhuis J., Meyer DK Intrinsic GABA neurons inhibit proenkephalin gene expression in slice cultures of rat neostriatum / / Eur. J. Neurosci. - 2002. - V. 15, № 7. Р . - Р. 1115-1124.

Morris B., Hollt V., Herz A. Dopaminergic regulation of striatal proenkephalin mRNA and prodynorphin mRNA: contrasting effects of D 1 and D 2 antagonists / / Neuroscience. - 1988. - № 25. Р . - Р. 525-532.

Morton DB The occurrence and function of proteolytic enzymes in the reproductive tract of mammals / / Proteinases in Mammalian Cells and Tissue / Barrett AJ (ed.). - Amsterdam: Elsevier / North Holland Biomedical Press, 1977. - P. 445-500.

Nagae A., Deddish PA, Becker RP, Anderson CH, Abe M., Tan F., Skidgel RA, Erdos EG Carboxypeptidase M in brain and peripheral nerves / / J. Neurochem. - 1992. - V. 59, № 6. - P. 2201-2212.

Nalamachu SR, Song LX, Fricker LD Regulation of carboxypeptidase E - effect of Ca 2 + on enzyme-activity and stability / / J. Biol. Chem. - 1994. - 269, № 15. - P. 11192-11195.

Nemeroff CB Neurotensin: perchance an endogenous neuroleptic? / / Biol. Psychiatry. - 1980. - V. 15. Р . - Р. 283-302.

Nemeroff CB, Kilts CD, Levant B., Bissette G. Campbell-A Baldessarini-RJ Effects of the Isomers of N-Normal-Propylnorapomorphine and Haloperidol on Regional Concentrations of Neurotensin in Rat-Brain / / Neuropsychopharmacology. - 1991. - V. 4, № 1. Р . - Р. 27-33.

Nickells RW, Schlamp CL, Newton AC, Williams DS Gene expression of the neuropeptide-processing enzyme carboxypeptidase E in rat photoreceptor cells / / J. Neurochem. - 1993. - V. 61, № 5. Р . - Р. 1891-1900.

Nillni EA, Xie W., Mulcahy L., Sanchez VC, Wetsel WC Deficiencies in pro-thyrotropin-releasing hormone processing and abnormalities in thermoregulation in Cpefat / fat mice / / J. Biol. Chem. – V . 277 , № 5 0. - 2002. - V. 277, № 5 0. 485 95. - Р. 48587 - 485 95.

Norenberg U., Richter D. Processing of the oxytocin precursor: isolation of an exopeptidase from neurosecretory granules of bovine pituitaries / / Biochem. Biophys. Res. Commun. - 1988. - V. № 2. 156, № 2. - P. 898-904.

Novas ML, Medina JH, Calvo D., De Robertis E. Increase of peripheral type benzodiazepine binding sites in kidney and olfactory bulb in acutely stressed rats / / Eur. J. Pharmacol. - 1987. - № 135. Р . - Р. 243-246.

Nutt DJ, Malizia AL New insights into the role of the GABAA-benzodiazepine receptor in psychiatric disorder / / The British Journal of Psychiatry. - 2001. - № 179. Р . - Р. 390-396.

Obuchowicz E., Turchan J. Influence of typical and atypical antipsychotics on neuropeptide Y-like immunoreactivity and NPY mRNA expression in rat striatum / / Neuropeptides. - 1998. - V. 32, № 5. Р . - Р. 473-480.

Ortego J., Escribano J., Crabb J., Coca Prados M. Identification of a neuropeptide and neuropeptide processing enzymes in aqueous humor confers neuroendocrine features to the human ocular ciliary epithelium / / J. Neurochem. - 1996. - V. 66, № 2. - P. 787-796.

Owens GP, Sinha AK, Sikela JM, Hahn WE Sequence and expression of the murine diazepam binding inhibitor / / Brain. Res. Mol. Brain. Res. - 1989. - V. 6, № 2-3. Р . - Р. 101-108.

Oyarce AM, Hand TA, Mains RE, Eipper BA Dopaminergic regulation of secretory granule associated proteins in rat intermediate pituitary / / J. Neurochem. - 1996. - V. 67, № 1. - P. 229-241.

Parikh V., Terry AV, Khan MM, Mahadik SP Modulation of nerve growth factor and choline acetyltransferase expression in rat hippocampus after chronic exposure to haloperidol, risperidone, and olanzapine / / Psychopharmacology (Berl). - 2004. - V. 172, № 4. Р . - Р. 365-374.

Parkinson D. Carboxypeptidase H in bovine pituitary gland: soluble forms are not processed at the C-terminus / / Mol. Cell. Endocrinol. - 1992. - V. № 3. 86, № 3. - P. 221-233.

Parlow JL, Costache I., Avery N., Turner K. Single-dose haloperidol for the prophylaxis of postoperative nausea and vomiting after intrathecal morphine / / Anesth. Analg. - 2004. - V. 98, № 4. Р . - Р. 1072-1076.

Patterson TA, Schulteins G., Alvarado MC, Martinez JL-JR, Bennet EL, Rossenzweig MR, Hruby VY Influence of opioid peptides on learningand memory process in the chick / / Behav.-Neurosci. - 1989. - V. 103, № 2. - P. 429-437.

Pelletier G. Regulation of proopiomelanocortin gene expression in rat brain and pituitary as studied by in situ hybridization / / Ann NY Acad. Sci. - 1993. - № 680. Р . - Р. 246-259.

Perloff MD, Kream RM, Beinfeld MC Reduced levels of substance P in the brains of Cpe (Fat) / Cpe (Fat) Mice / / Peptides. - 1998. - V. 19, № 6. - P. 1115-1117.

Persson H., Rehfeld JF, Ericsson A., Schalling M., Pelto-Huikko M., Hökfelt T. Transient expressi on of the cholecystokinin gene in male germ cells and accumulation of the peptide in the acrosomal granule: possible role of cholecystokinin in fertilization / / Proc. Natl. Acad. Sci. USA. - 1989. - V. 86, № 16. - P. 6166-6170.

Pillot C., Ortiz J., Héron A., Ridray S., Schwartz JC, Arrang JM Ciproxifan, a Histamine H 3-receptor antagonist / inverse agonist, potentiates neurochemical and behavioral effects of haloperidol in the rat / / The Journal of Neuroscience . - 2002. - V. 22, № 16. - P. 7272-7280.

Pilowsky LS, Ring H., ​​Shine PJ, Battersby M., Lader M. Rapid Tranquilization - A Survey of Emergency Prescribing in a General Psychiatric-Hospital / / British journal of psychiatry. - 1992. - V. 160, № 6. Р . - Р. 831-835.

Pivac N., Fericic D. Inhibitory Effect of Diazepam on the Activity of the Hypothalamic-Pituitary-Adrenal Axis in Female Rats / / Journal of neural transmission-general section. - 1993. - V. 92, № 2-3. Р . - Р. 173-186.

Polc P. Involvement of endogenous benzodiazepine receptor ligands in brain disorders: therapeutic for benzodiazepine antagonists? / / Med. Hypotheses. - 1995. V. 44, № 6. - P. 439-446.

Porcelli G., Raffaelli R., Sacchi A., Volpe AR, Miani C. Localization and characterization of human salivary kininases / / Agents Actions Suppl. - 1992. - V. 38, № 1. - P. 401-406.

Powers CA Dopamine receptor blockade increases glandular kallikrein-like activity in the neurointermediate lobe of the rat pituitary / / Biochem. Biophys. Res. Commun. - 1985. - V. 127, № 2. Р. 668- 6 72. - Р. 668 - 6 72.

Prevett MC, Lammartsma AA, Brooks DJ, CunnighamV.I. et al. Benzodiazepine-GABAA receptor binding during absence seizures / / Epilepsia. - 1995. V. 36, № 6. - P. 592-599.

Pritchett DB, Roberts JL Dopamine regulates expression of the glandular-type kallikrein gene at the transcriptional level in the pituitary / / Proc. Natl. Acad. Sci. USA. - 1987. - V. 84, № 16. Р . - Р. 5545-5549.

Radke JM, Owens MJ, Ritchie JC, Nemeroff CB Atypical antipsychotic drugs selectively increase neurotensin efflux in dopamine terminal regions / / Neurobiology. - 1998. - V. 95, № 19. Р . - Р. 11462-11464.

Rago L., Adojaan A., Pokk P. The effect of stress on 3 benzodiazepine receptor in rat blood platelets and lymphocytes: The effect of non-benzodiazepine tranquilizers / / Molecular. Pharmacology of Receptors. - 1989. - V. 3. Р . - Р. 4-16.

Regoli D. Toward a new anti-inflammatory and analgesic agent / / PNAS. - 2000. - V. 97, № 14. Р . - Р. 7676-7677.

Reimer S., Hollt V. GABAergic regulation of striatal opioid gene expression / / Brain. Res. Mol. Brain. Res. - 1991. - № 1. Р . - Р. 49-54.

Reymond MJ, Speciale SG, Porter JC Dopamine in plasma of lateral and medial hypophysial portal vessels: evidence for regional variation in the release of hypothalamic dopamine into hypophysial portal blood / / Endocrinology. - 1983. - № 112. Р . - Р. 1958-1963.

С ., Lageb J., Frickerc L. Reznika S., Salafiaa С. Lageb J., Frickerc L. Localization of Carboxypeptidases E and D in the Human Placenta and Umbilical Cord / / Journal of Histochemistry and Cytochemistry. - 1998. - V. 46. Р . - Р. 1359-1368.

Rivier C., Rivier J., Vale W. Stress-induced inhibition of reproductive func-tions: role of endogenous CRF / / Science. - 1986. - N 231. - P. 607-610.

Rocca P., Bellone G., Benna P., Bergamaso B., Ravizza L., Ferrero P. Peripheral-type benzodiazepine receptor and diazepam binding inhibitor-like immunoreactivity distribution in human peripheral blood mononuclear cells / / Jmmunopharmacology. - 1993. - V. 25, № 2. - P. 163-178.

Rodriguez C., Brayton KA, Brownstein M., Dixon JE Rat preprocarboxypeptidase H. Cloning, characterization, and sequence of the cDNA and regulation of the mRNA by corticotropin releasing factor / / J. Biol. Chem. - 1989. - V. № 10. 264, № 10. - P. 5988-5995.

Rossier J., Barres E., Hutton JC, Ricknell RJ Radiometric assay for carboxypeptidase H (EC 3.4.17.10) and other carboxypeptidase B-like enzymes / / Anal. Biochem. - 1989. - V. 178, № 1. - P. 27-31.

Rossier J., Battenberg E., Piffman Q. et al. Hypothalamic enkephalin neurons may regulate the neurohypophysis / / Nature. - 1979. - V.277. - P.653-655.

Roth WW, Mackin RB, Spiess J., Goodman RH, Noe BD Primary structure and tissue distribution of anglerfish carboxypeptidase H / / Mol. Cell. Endocrinol. - 1991. - V. 78, № 3. - P. 171-178.

Roubert C., Spielewoy C., Soubrie P., Hamon M., Giros B., Betancur C. Altered neurotensin mrna expression in mice lacking the dopamine transporter / / Neuroscience. - 2004. - V. 123, № 2. Р . - Р. 537-546.

Rouille Y., Chauvet J., Acher R. Partial conversion of vasopressinyl-Gly-Lys-Arg into pharmacologically active vasopressin through secretory granule carboxypeptidase E and alpha-amidating processing enzymes / / Biochem. Int. - 1992. - V. № 4. 26, № 4. - P. 739-746.

Rovere C., Viale A., Nahon J., Kitabgi P. Impaired processing of brain proneurotensin and promelanin concentrating hormone in obese fat / fat mice / / Endocrinology. - 1996. - V. 137, № 7. - P. 2954-2958.

Sands SA, Dickerson DS, Morris SJ, Chronwall BM Dopamine D2 receptor stimulation alters G-protein expression in rat pituitary intermediate lobe melanotropes / / Endocrine. - 1997. - V. 6, № 3. Р . - Р. 325-333.

Santarelli L., Gobbi G., Debs PC, Sibille EL, Blier P., Hen R., Heath M. Genetic and pharmacological disruption of neurokinin 1 receptor function decreases anxiety-related behaviors and increases serotonergic function / / PNAS. - 2001. - V. 98, № 4. - Р. 1912-1917.

Schalling M., Friberg K., Riederert P. et al. Analysis of expression of cholecystokinin in dopamine cells in the ventral mesencephalon of several species and in humans with schizophrenia / / Neurobiology. - 1991. - V. 87. - P. 8427-8431.

Schettini G., Cronin MJ, Macleod RM Adenosine 3 ', 5'-monophosphate (cAMP) and calcium-calmodulin interrelation in the control of prolactin secretion: evidence for dopamine inhibition of cAMP accumulation and prolactin release after calcium mobilization / / Endocrinology. - 1983. - № 112. Р . - Р. 1801-1807.

Schlamp CL, Nickells RW Light and dark cause a shift in the spatial ex-pression of a neuropeptide processing enzyme in the rat retina / / J. Neurosci. - 1996. - V. 16, N 7. - P. 2164-2171.

Schremmerdanninger E., Offner A., Siebeck M., Roscher A. B1 Bradykinin Receptors and Carboxypeptidase-M Are Both Up-Regulated in the Aorta of Pigs After LPS Infusion / / Biochemical and biophysical research communications. - 1998. - V. 243, № 1. Р . - Р. 246-252.

Schuckit MA, Hauger R., Klein JL Adrenocorticotropin Hormone Response to Diazepam in Healthy-Young Men / / Biological psychiatry. - 1992. - V. 31, № 7. Р . - Р. 661-669.

Seidah NG, Chretien M. Proprotein and prohormone convertases of the subtilisin family - recent developments and future perspectives / / Trends Endocrinol. Met. - 1992. - 3, № 4. - P. 133-140.

Sharma RP, Janicak PG, Bissette G., Nemeroff CB CSF neurotensin concentrations and antipsychotic treatment in schizophrenia and schizoaffective disorders / / Am. J. Psychiatry. - 1997. - V. 154. Р . - Р. 1019-1021.

Shen FS, Loh YP Intracellular Misrouting and Abnormal Secretion of Adrenocorticotropin and Growth Hormone in Cpe (Fat) Mice Associated with a Carboxypeptidase E Mutation / / Proc. Nat. Acad. Sci. USA. - 1997. - V. 94, № 10. - P. 5314-5319.

Shibata K., Haverstick DM, Bannon MJ Tachykinin gene expression in rat limbic nuclei: modulation by dopamine antagonists / / J. Pharmacol. Exp. Ther. - 1990. - V. 255, № 1. Р. 388- 3 92. - Р. 388 - 3 92.

Shimamori Y., Kumagai Y., Watanabe Y., Fujimoto Y. Human placental carboxypeptidase M is anchored by a glycosyl-phosphatidylinositol moiety / / Biochem. Int. - 1990. - V. № 3. 20, № 3. - P. 607-613.

Shin CJ, Kim YS, Park JB, Juhnn YS Changes in G protein levels in the hippocampus and the striatum of rat brain after chronic treatment with haloperidol and sulpiride / / Neuropharmacology. - 1995. - V. 34, № 10. Р . - Р. 1335-1338.

Silberring J., Lason W., Przewlocka B., Przewlocki R. Enkephalin convertase in the rat spinal cord / / Neuropeptides. - 1986. - V. 8, № 4. - P. 367-376.

Sivam SP, Hong JS GABAergic regulation of enkephalin in rat striatum: alterations in Met5-enkephalin level, precursor content and preproenkephalin messenger RNA abundance / / J. Pharmacol. Exp. Ther. - 1986. - V. 237, № 1. Р . - Р. 326-331.

Sivam SP, Strunk C., Smith DR, Hong JS Proenkephalin-A gene regulation in the rat striatum: influence of lithium and haloperidol / / Mol. Pharmacol. - 1986. - V. 30, № 2. Р. 186- 1 91. - Р. 186 - 1 91.

Skidgel R., McGwire G., Li X. Membrane anchoring and release of carboxypeptidase M: implications for extracellular hydrolysis of peptide hormones. / / Immunopharmacology - 1996. - V. 32, № 1-3. Р . - Р. 48-52.

Skidgel RA, Davis RM, Tan F. Human carboxypeptidase M. Purification and characterization of a membrane-bound carboxypeptidase that cleaves peptide hormones / / J. Biol. Chem. - 1989. - V. № 4. 264, № 4. - P. 2236-2241.

Skidgel RA, Johnson AR, Erdos EG Hydrolisys of opioid hexapeptides by carboxypeptidase N. Presence of carboxypeptidase in cell membranes / / Biochem. Pharmacol. - 1984. - V. № 21. 33, № 21. - P. 3471-3478.

Skidgel RA, Tan FL, Deddish PA, Li XY Structure, function and membrane anchoring of carboxypeptidase M / / Biomed. Biochim. Acta. - 1991. - V. № 4-6. 50, № 4-6. - P. 815-820.

Smith DR, Pallen CJ, Murphy D., Lim L. Pituitary-specific transcriptional initiation sites of the rat carboxypeptidase-H gene and the influence of thyroid hormone status / / Mol. Endocrinol. - 1992. - V. 6, № 5. - P. 713-722.

Song LX, Fricker LD Calcium and pH dependent aggregation of carboxypeptidase E / / J. Biol. Chem. - 1995. - 270, № 14. - P. 7963-7967.

Song LX, Fricker LD The pro region is not required for the expression or intracellular routeing of carboxypeptidase E / / Biochemical Journal. - 1997. - V. 323, № 4. - P. 265-271.

Srinivasan S., Bunch DO, Feng Y., Rodriguiz RM, Li M., Ravenell RL, Luo GX, Arimura A., Fricker LD, Eddy EM, Wetsel WC Deficits in reproduction and pro-gonadotropin-releasing hormone processing in male Cpefat mice / / Endocrinology. - 2004. - V. 145, № 4. Р . - Р. 2023-2034.

Stack G., Fricker LD, Snyder SH A sensitive radiometric assay for enkephalin convertase and for carboxypeptidase B-like enzymes / / Life Sci. - 1984. - № 34. - P. 113-121.

CRC Press, Boca Raton, Florida, 1991. Steiner DF The biosynthesis of biologically active peptides: a perspective / / Peptide Biosynthesis and Processing (Fricker LD, ed.) .- CRC Press, Boca Raton, Florida, 1991. - P. 1-16.

Strange PG Pathology and drug action in schizophrenia: insights from molecular biology / / Essays Biochem. - 1998. - V. 33. - P. 105-116.

Supattapone S., Fricker LD, Snyder SH Purification and characterization of membrane-bound enkephalin-forming carboxypeptidase, "enkephalin convertase" / / J. Neurochem. - 1984. - V. 42, № 4. - P. 1017-1023.

Suzuki E., Shintani F., Kanba S., Asai M., Nakaki T. Induction of interleukin-1 beta and interleukin-1 receptor antagonist mRNA by chronic treatment with various psychotropics in widespread area of rat brain / / Neurosci. Lett. - 1996. - V. 215, № 3. Р . - Р. 201-204.

Svensson A., Carlsson ML, Carlsson A. Crucial role of the accumbens nucleus in the neurotransmitter interactions regulating motor control in mice / / J. Neural. Transm. Gen. Sect. - 1995. - № 101. Р . - Р. 127-148.

Sweep CG, Boersma CJ, Wiegant VM Effects of chronic treatment with haloperidol and bromocriptine on the processing of beta-endorphin to gamma-and alpha-endorphin in discrete regions of the rat pituitary gland and brain / / Neuropharmacology. - 1990. - V. 29, № 1. Р . - Р. 61-68.

Tan F., Chan SJ, Steiner DF, Schilling JW, Skidgel RA Molecular cloning and sequencing of the cDNA for human membrane-bound carboxypeptidase M. Comparison with carboxypeptidases A, B, H, and N / / J. Biol. Chem. - 1989. - V. 264, № 22. - P. 13165-13170.

Tanaka M., Tsuda A., Yokoo H., Yoshida M., Mizoguchi K., Shimizu T. Psychological stress-induced Increases in Noradrenaline Release in Rat-Brain Regions Are Attenuated by Diazepam, But Not by Morphine / / Pharmacology biochemistry and behavior. - 1991. - V. 39, № 1. Р . - Р. 191-195.

Tang F., Costa E., Schwartz JP Increase of proenkephalin mRNA and enkephalin content of rat striatum after daily injection of haloperidol for 2 to 3 weeks / / Proc. Natl. Acad. Sci. USA. - 1983. - V. 80, № 12. Р. 3841- 384 4. - Р. 3841 - 384 4.

Thiele EA, Eipper BA Effect of secretagogues on components of the secretory system in AtT 20 cells / / Endocrinology. - 1990. - V. 126, N 2. - P. 809-817.

Tong Y., Pelletier G. Role of dopamine in the regulation of proopiomelanocortin (POMC) mRNA levels in the arcuate nucleus and pituitary gland of the female rat as studied by in situ hybridization / / Brain. Res. Mol. Brain. Res. - 1992. - V. 15, № 1-2. Р . - Р. 27-32.

Tong Y., Toranzo D., Pelletier G. Localization of Diazepam-Binding Inhibitor (Dbi) Messenger-RNA in the Rat-Brain by High-Resolution Insitu Hybridization / / Neuropeptides. - 1991. - V. 20, № 1. Р . - Р. 33-40.

Turalba AV, Leite-Morris KA, Kaplan GB Antipsychotics regulate cyclic AMP-dependent protein kinase and phosphorylated cyclic AMP response element-binding protein in striatal and cortical brain regions in mice / / Neurosci. Lett. - 2004. - V. 357, № 1. Р . 53- 5 7. - Р. 53 - 5 7.

Vallar L., Meldolesi J. Mechanisms of signal transduction at the dopamine D2 receptor / / Trends. Pharmacol. Sci. - 1989. - V. 10, № 2. Р . - Р. 74-77.

Van Ree JM, Gaffori O., De Wied D. In rats, the behavioral profile of CCK-8 related peptides resembles that of antipsychotic agents / / Eur. J. Pharmacol. - 1983. - V. 93, № 1-2. Р . - Р. 63-78.18-21

Vargas MA, Bourdais J., Sanchez S., Uriostegui B., Moreno E., Josephbravo P., Charli JL Multiple hypothalamic factors regulate pyroglutamyl peptidase-II in Cultures of adenohypophyseal cells - role of the cAMP pathway / / J. Neuroendocrinol. - 1998. - V. 10, N 3. - P. 199-206.

Vetulani J. Pharmacological receptors: the membrane receptors for neurotransmitters and drugs / / Acta. Physiol. Pol. - 1988. - V. 39, № 2. Р . - Р. 81-97.

Wallace EF, Evans CJ, Jurik, SM, Mettord IN, Barchas JD Carboxypeptidase B activity from adrenal medulla - is it involved in the processing of proenkephalin / / Life Sci. - 1982. - 31, № 16-17. - P. 1793-1796.

Wang H., ​​Li S., Givalois L., Pelletier G. Influence of adrenal glands on the modulation of prolactin gene expression by the endogenous benzodiazepine ligand octadecaneuropeptide in the male rat pituitary gland / / J. Neuroendocrinol. - 1998. - V. 10, № 3. Р . - Р. 193-198.

Wang Y., Goldman-Rakic ​​PS D2 receptor regulation of synaptic burst firing in prefrontal cortical pyramidal neurons / / Proc. Natl. . Sci . USA . Acad. Sci. USA. - 2004. . - V. 101, № 14. - Р. 5093-5098.

Waters SM, Rounseville MP, Davis TP Effect of dopaminergic drugs on processing and degradative neuropeptidase mRNA in rat frontal cortex and caudate-putamen / / Brain. Res. - 1997. - V. 754, № 1-2. Р. 28-34. - Р. 28-34.

Wilson MA, Biscardi R., Smith MD, Wilson SP Effects of benzodiazepine agonist exposure on corticotropin-releasing factor content and hormonal stress responses: divergent responses in male and ovariectomized female rats / / J. Pharmacol. Exp. Ther. - 1996. - V. 278, № 3. Р . - Р. 1073-1082.

Xu JH, Liu HC, Zhang YP 4-Aminopyridine Induced Rage Reaction in Mice / / ACTA PHARMACOLOGICA SINICA. - 1991. - V. 12, № 2. Р . - Р. 155-159.

Yoshikawa K., Hong JS The enkephalin system in the rat anterior pituitary: regulation by gonadal steroid hormones and psychotropic drugs / / Endocrinology. - 1983. - V. 113, № 4. Р . - Р. 1218-1227.

Yoshioka S., Fujiwara H., Yamada S., Nakayma T., Higuchi T., Inoue T., Mori T., Maeda M. Membrane-Bound Carboxypeptidase-M Is Expressed on Human Ovarian Follicles and Corpora-Lutea of Menstrual-Cycle and Early-Pregnancy / / Molecular Human Reproduction. - 1998. - V. 4, № 7. - P. 709-717.

Zachrisson O., Nomikos GG, Marcus MM, Svensson TH, Lindefors N. Effects of antipsychotic drugs on cholecystokinin and preprotachykinin (substance P) mRNA expression in the rat hippocampal formation / / Eur. Neuropsychopharmacol. - 2000. - V. 10, № 5. Р. 355- 3 63. - Р. 355 - 3 63.

Zahm DS, Williams ES, Poulad D., Krause JE Temporal dissociation of neurotensin / neuromedin N mRNA expression in topographically separate subsets of rat striatal neurons following administration of haloperidol / / Brain. Res. Mol. Brain Res. - 1996. - V. 42, № 1. Р. 71- 7 8. - Р. 71 - 7 8.

Zetler G. Analgesia and ptosis caused by caerulein and cholecystokinin octapeptide (CCK-8) / / Neuropharmacology. - 1980. - V. 19, № 5. - Р. 415-422.

Додати в блог або на сайт

Цей текст може містити помилки.

Біологія | Дисертація
654кб. | скачати


Схожі роботи:
Вплив пирроксан на активність карбоксипептидази н і фмфс-інгібіруемой карбоксипептидази в нервовій
Вплив алкогольної інтоксикації на активність основних карбоксипептидази в тканинах самок щурів на різних
Вплив атропіну на активність карбоксипептидази H
Вплив пирроксан на активність карбоксипептидази н і фмфс інгібує
Активність карбоксипептидази N і ангіотензинперетворюючого ферменту в сироватці крові у онкологічних
Активність і продуктивність основних словотвірних моделей
Активність і продуктивність основних словотвірних моделей 2
Вплив алкогольної інтоксикації на активність основних карбоксіпе
Активність основних карбокміпептідаз в тканинах пренатально алкоголізірованних щурів
© Усі права захищені
написати до нас