Ім'я файлу: біотехнологія.docx
Розширення: docx
Розмір: 19кб.
Дата: 23.01.2020
скачати

Міністерство освіти і науки України
Львівський національний університет імені Івана Франка


Реферат на тему: »Приклади застосування ПЛР»

Підготувала
студентка IVкурсу, групи

БЛБ — 31з
Гандз Людмила

Використання методу в медичні практиці :

1. Діагностика інфекційних захворювань

ПЛР використовується для діагностики ВІЛ, вірусних гепатитів, герпетичної інфекції, цитомегаловірусу, вірусу Епштейна-Барр, папіломавірусної інфекції, хламідіозної, мікоплазменої і хелікобактерної інфекцій та ін. Основними перевагами ПЛР як методу діагностики інфекційних захворювань є його висока специфічність і чутливість, пряме визначення наявності збудника, висока швидкість отримання результату, можливість діагностики не тільки гострих, а й латентних інфекцій.

Застосування ПЛР для діагностики туберкульозу дозволяє в короткі терміни (до 48 годин) виявити мікобактерії в будь-якому біологічному матеріалі. Аналітична чутливість комерційних тест-систем дозволяє ідентифікувати поодинокі колонії (до 10 клітин). Це особливо важливо, тому що мікобактерії відрізняються уповільненим ростом при культивуванні на поживних середовищах.

2. Онкологічні захворювання

ПЛР є найбільш прийнятним способом точно і швидко визначати аномальну ДНК. Висока чутливість методу дає змогу визначати аномальну ДНК в мізерно малих кількостях, що дозволяє виявляти неопластичні клітини на доклінічній стадії пухлинного процесу. Основні напрямки використання ПЛР у онкологічної патології включають: ДНК-діагностику спадкових форм раку; ДНК-діагностику спорадичних форм раку; визначення мікрометастазів; ДНК-діагностику біологічних канцерогенів (HPV 16-го і 18-го типів, ВЕБ-інфекції, HBV і HCV, ретровіруси тощо); доклінічну діагностику пухлин (визначення протоонкогенів і антионкогенів); прогноз захворювання, успішності призначеної терапії, ефективність проведеного лікування на основі діагностики функціональної активності онкогенів; дослідження "архівних" біоптатів з встановленим клініко-гістологічним діагнозом.

3. Трансплантологія

Сучасна трансплантаційна хірургія неможлива без використання методу ПЛР, який гарантовано показує ступінь тотожності гомотрансплантатів за антигенами головного комплексу гістосумісності (HLA) класу I і II, відповідальних за реакцію відторгнення. Використовуючи ПЛР для зіставлення генетичної сумісності донора і реципієнта, результати дослідження можна отримати в максимально короткий час.


4. Судово-медична практика

За останні кілька років метод ПЛР став основним методом експертної оцінки. Для досліджень можуть використовуватися висушені плями крові, обривки або шматочки органічної тканини (наприклад, кісткової), змиви з носоглотки, зіскрібки з слизової геніталій, і, що найдивніше, фіксовані гістологічні препарати. Генетичні відмінності і збіги визначають, досліджуючи високополіморфні ділянки молекул нуклеїнових кислот, зокрема, ділянки зі змінною кількістю коротких повторів (variable number of tandem repeats, VNTR). Аналіз алельних варіантів кількох поліморфних VNTR-локусів дозволяє простежити родинні зв'язки індивідуума чи встановити причетність тієї чи іншої особи до злочину. В даний час в криміналістиці і судовій медицині метод ПЛР використовується для визначення батьківства; ідентифікації особистості невпізнаних трупів; доказу причетності особи до вчинення злочину.

5. Персоналізована медицина (фармакогенетика)

Існують індивідуальні відмінності у дії лікарських препаратів на організм людини. Ці відмінності пов’язані з активністю ферментних систем і детермінуються на генетичному рівні. Проведення попереднього генотипування дає змогу встановити індивідуальну дозу препарату для кожного пацієнта.


Використання методу ПЛР у сільському господарстві

1. Виявлення збудників інфекційних захворювань в організмі тварин, кормах, навколишньому середовищі

2. Селекція рослин
ПЛР дозволяє оцінити генетичну різноманітність вихідного матеріалу, класифікувати селекційні форми, маркувати гени важливих для господарства ознак, картувати геноми.

3. Виявлення ГМО
ПЛР дозволяє виявити наявність і кількість ГМО у досліджуваних зразках

4. Контроль якості сільськогосподарської сировини і продуктів харчування

Використання методу ПЛР у наукових дослідженнях

1. Ізоляція генетичного матеріалу

ПЛР дозволяє легко ізолювати специфічні регіони послідовності ДНК з матеріалу цілого геному з наступним їх використанням в інших генетичних методах.

2. Секвенування ДНК

ПЛР є невід'ємною складовою методу секвенування з використанням мічених флуоресцентною міткою або радіоактивним ізотопом дидезоксинуклеотидів, оскільки в ході полімеризації в ланцюг ДНК вбудовуються похідні нуклеотидів, мічені міткою. Приєднання дидезоксинуклеотиду до ланцюга, що синтезується, призводить до припинення синтезу, дозволяючи визначити положення специфічних нуклеотидів після розділення в гелі.

3. Клонування генів

Клонування гена – це процес виділення гена і, в результаті генно-інженерних маніпуляцій, отримання великої кількості продукту даного гена. ПЛР використовується для того, щоб ампліфікувати ген, який потім вбудовується у вектор – фрагмент ДНК, який переносить чужорідний ген в той самий чи інший організм, зручний для вирощування. Як вектори, використовують, наприклад, плазміди або вірусну ДНК. Вставку генів у чужорідний організм зазвичай здійснюють для отримання продукту цього гена – РНК або, найчастіше, білка. Таким чином у промислових кількостях отримують багато білків для використання в сільському господарстві, медицині та ін.

4. Вимірювання кількості ДНК

Деякі види ПЛР (наприклад, Real-time PCR) дозволяють визначати кількість ДНК у зразку. Що особливо важливо, метод може використовуватися для аналізу надзвичайно невеликих кількостей зразку.

5. Визначення експресії генів

У клітинах кожен ген експресується через виробництво матричної, рибосомної або транспортної РНК; мРНК потім використовується для трансляції – синтезу певного білка. Кількість РНК в клітині для даного гена показує, наскільки ген зараз активний. Використовуючи зворотну транскрипцію для отримання ДНК, комплементарної мРНК (кДНК), а потім ПЛР для ампліфікації цих молекул, можна визначити рівень експресії гена.
скачати

© Усі права захищені
написати до нас