Апопротеїни

Апопротеїни виконують декілька функцій:

• формують структуру ліпопротеїнів;

• взаємодіють з рецепторами на поверхні клітин і таким чином визначають, якими тканинами буде захоплюватися даний тип ліпопротеїнів;

• служать ферментами або активаторами ферментів, які діють на ліпопротеїни.

Ліпопротеїни

В організмі синтезуються наступні типи ліпопротеїнів:

1. хіломікрони (ХМ),

2. ліпопротеїни дуже низької щільності (ЛПДНЩ)

3. ліпопротеїни проміжної щільності (ЛППЩ)

4. ліпопротеїни низької щільності (ЛПНЩ)

5. ліпопротеїни високої щільності (ЛПВЩ).

• Фактори ризику атеросклерозу та ІХС (збільшення ЛПНЩ на 10% веде до підвищення ризику ІХС на 20%)
• Рівень ЛПНЩ збільшується при:
• низькому вмісту ЛПВЩ
• табакокурінні
• артеріальній гіпертензії
• цукровому діабеті

Захворювання і ускладнення при порушені обміну холестерину

• Ішемічний інсульт.
• Облітеруючий ендартеріїт та ішемічна гангрена нижніх кінцівок.
• Двосторонній стеноз ниркових артерій з подальшою нирковою недостатністю.
• Ішемічна хвороба кишечника.

Методи досліджень показників ліпідного обміну.

• 1) Встановлення факту гіперліпідемії, ступеню її вираженості.
• 2) Визначення типу гіперліпідемії (фенотипування її). Ці данні необхідні для призначення обгрунтованих дієтичних рекомендацій та адекватної гіполіпідемічної терапії.

Ферментативний метод аналізу

• Висока специфічність методу.
• Ферментативні реакції зазвичай протікають у водневому середовищі, при рН, близькій до нейтральної.
• Немає необхідності в застосуванні агресивних реагентів, що дозволяє застосовувати ці методики на сучасних біохімічних аналізаторах.
• Покращуються умови лаборантів із-за відсутності шкідливих для здоров’я реактивів.

Оксидазно – пероксидазний метод.

• Окиснення субстрату, який визначається, специфічною оксидазою.
• Субстрат окиснюється з утворенням Н2О2 , вміст якої еквівалентний концентрації речовини, яка визначається.
• Також використовуються додаткові ферменти, які забезпечують проведення основної, специфічної реакції (холестеролестераза, ТГліпаза та ін.)

Визначення ліпопротеїдів.

• В теперішній час використовуються реагенти фірм (Рош, Хьюман), які дозволяють визначати Х-ЛПВЩ безпосередньо в пробах сировотки без попереднього осадження.
• Також проводиться пряме визначення Х-ЛПНЩ, а не по вмісту холестерина.

Формула Фрідвальда.

• Х-ЛПНЩ = ЗХ - (Х-ЛПВЩ + Х-ЛПДНЩ)

або докладніше:

• Х-ЛПНЩ = ЗХ - (Х-ЛПВЩ + Тгммоль/л /2,22)
• Для застосування цієї формули нам потрібно визначити: ЗХ, Х-ЛПВЩ, ТГ.
• Формула може бути застосована, якщо ТГ не перевищують 5,5 ммоль/л.

ЛПНЩ приблизна оцінка розрахунковим методом.

• Загального холестерина
• Холестерина ЛПВЩ
• Тригліцеридів

Кожен показник піддається біологічним та аналітичним варіаціям

Показники ліпідів з позиції атерогенного ризику.

Ліпідограма II рівня.

• Заг. Холестерин
• Х-ЛПВЩ
• Х-ЛПНЩ
• Х-ЛПДНЩ
• ФЛ
• ТГ
• Апо(А-I)
• Апо(В)
• КА
• Апо(А-I)/Апо(В)
• З.Х/ФЛ

Визначення АпоЛП.

• Іммунотурбодиметричний метод або метод нефелометрії.
• По вимірюванню ступеня (інтенсивності) помутніння імунних комплексів, які утворюються, при взаємодії досліджуваної сироватки з специфічними антитілами до апо-ліпопротеїнам.
• Реакція відбувається у середовищі фосфатного буферу при нейтральному рН, який містить от 2 – 4% ПЕГ, який служить для преципітації імунних комплексів – реакція імунопреципітації в рідкій фазі.
• Помутніння вимірюють на фотометрі при 340 нм або на нефелометрі по ступеню відхилення променя від імунохімічного комплексу, який проходить через коллоїдне середовище, що відповідає концентрації апо-ЛП.

Де ще визначаються ліпіди?

• В сечі – поява ТГ в сечі (ліпурія) при великих розтрощеннях кісткової та м’язової тканин. Тест використовується в травматології для діагностики можливої жирової емболії. Також при ліпоїдному нефрозі, ліпіди надходять із ниркової тканини;
• В жовчі – для діагностики холестеринової жовчно-кам’яної хвороби. Холато/холестериновий коефіцієнт, тобто відношення жовчних кислот до холестерину - в нормі більше 10;

Зниження його свідчить про схильність до холелітіазу – випадають кристали холестерину, які є основою жовчних каменів.

• I етап Скринінг діагностика

Рівень загального холестерина, тригліцеридів (визначення в стані ситості, натщесерце)

• II етап При відхиленні рівня ХС і ТГ від N в ту чи ін. сторону.

Ліпідний спектр — ліпідограма I рівня

ЗХ, ТГ, ХС-ЛПВЩ, ХС-ЛПНЩ, ХС-ЛПОНЩ,

Розрахунок КА ( норма < 3,5)

• III етап В залежності від типу ліпідограми

З’ясування механізмів первинної чи вторинної ГЛП

1 Ліпідограма II рівня або додатково до ЛГ I рівня визначення Аро-А, Аро-В, фосфоліпіди, Аро-А/ Аро-В ( норма >1,1) ЗХ/Фл ( норма <2)

2 Виявлення факторів спадкового характеру

3 Рівень Lp ( a).

• IV етап При нормальному і підвищеному рівні ЗХ

1. Виявлення факторів хронічного ураження ендотелія судин.

2. Виключення супутніх захворювань ( ЦД, ушкодження паренхіми нирок, печінки з явищем холестазу, запальний процес, ожиріння, гіперпродукція глюкокортикоїдів, гіпо- і гіпертиреоз).

3. Рівень СРБ, гомоцистеїна, гострофазні показники.

Преаналітична підготовка.

• Кров для досліджень беруть вранці, натщесерце після 12-14 г. голодування.
• Проби крові потрібно брати в одному положенні пацієнтів (краще сидячі).
• Не допускати стаз крові (більш 1 хв. пережимати судини)
• Працювати з одним типом проби крові (капілярна кров, сировотка, плазма)
• Використовувати один тип антикоагулянта (краще ЕДТА)
• Зберігати проби при 0 – 4 градусах не більше 5 діб, - 20ти > 3міс.
• Змінюють параметри: прийом алкоголю (підвищення), дієта, фаза менструального циклу, гепарин, гемоліз.
• Визначення проводиться в динаміці з огляду на індивідуальні особливості.