А. Д. Тяпкіна, В. Д. Горічева
На живі організми впливають різні фактори зовнішнього середовища. При екстремальних впливах, до яких відносяться перегрівання та переохолодження організму, відбуваються зміни гомеостатичних констант, і перш за все відносяться до системи крові [1]. Лейкоцити, які мають високу реактивність, швидко включаються в реакції адаптації.
Метою проведеного дослідження було комплексне вивчення функціональних властивостей лейкоцитів при перегріванні й переохолодження організму.
Матеріал і методи дослідження
Досліди проведені на лабораторних білих щурах (90 тварин) з вихідною масою тіла 330-400 м. В експерименті було виділено 7 груп тварин: дві інтактні, служили контролем, і 5 експериментальних: 1 група - легкий ступінь теплової поразки, 2 - середня ступінь теплового поразки, 3 група - важкий ступінь теплової поразки, 4 група - переохолодження організму, 5 група - переохолодження організму в умовах алкогольної інтоксикації. Три перших групи тварин витримували в термокамері при t +400 С без доступу до води. Тварин 4-й і 5-ї груп піддавали охолодженню у воді температурою +15 ° С. Тваринам 5-ї групи додатково вводили в стравохід через еластичний зонд етиловий спирт (30%) у кількості 1 мл на 100 г маси тіла.
Змішану кров для дослідження брали шляхом декапітації у попередньо наркотизованих тварин. Для запобігання згортання використовували гепарин у кількості 10 од / мл. Отриману кров центрифугували 10 хв. при 1500 об / хв. Збирали лейкоцити. Домішка еритроцитів руйнували 0,83% розчином хлориду амонію. Клітини двічі відмивали ізотонічним буфером (розчин Дюльбекко). Відмиті клітини ресуспендували і підраховували їх концентрацію в камері Горяєва.
Фагоцитоз
Для дослідження поглинальної здатності нейтрофілів використовували частки латексу розміром 0,8 мкм. Суміш лейкоцитів з латексом в співвідношенні 1: 50 инкубировали в термостаті при 37 ° С протягом 30 хв., Струшуючи пробірку з лейкоконцентратом через кожні 5 хв. Потім у фіксованих метанолом і забарвлених АЗУР-еозином мазках підраховували відсоток фагоцитуючих клітин (фагоцитарна активність, ФА) і середнє число поглинених часток (фагоцитарний індекс, ФІ) [2].
Міграційна активність
Для постановки міграції під агарози використовували класичний варіант, описаний у численних монографіях та статтях. Агарози з додаванням культуральної клітинної середовища 199 нашаровувалися на предметні скла. Для оцінки спонтанної міграції в агаровому гелі за допомогою пробійника вирізали одну лунку, в яку поміщали суспензію лейкоцитів (7-10x105клеток). На другому склі ставили реакцію індукованої міграції. Для цього вирізали групу з двох розташованих на відстані, рівному діаметру пробійника (2,5 мм), лунок: одну - для клітинної суспензії, другу - для хемоаттрактантов. Як хемоаттрактантов використовувалася свіжа плазма крові. Скло поміщали у вологу камеру при 37 ° С в атмосфері повітря з 5% вмістом СО2 на 2 години, потім занурювали в 2% розчин глутарового альдегіду на 60 хв. Після фіксації та вилучення агарози клітини фарбували АЗУР-еозином за Романовським. В обох випадках для оцінки локомоціонной активності вимірювали площу поширення клітин і розраховували хемотоксичний диференціал - відношення змін площі індукованої міграції в порівнянні зі спонтанною до площі клітинного ареалу при мимовільної міграції (%) [3].
Адгезійна здатність
За основу проведених маніпуляцій була взята методика, описана Megе J.-L. з співавт. 40 мкл суспензії лейкоцитів поміщали в капіляр з внутрішнім діаметром 0,56 мм, попередньо оброблений аутоплазмой. Клітини інкубували у вологій камері при 370С протягом 60 хв. Подальші процедури були наступними. Клітинну суспензію обережно видаляли з капіляра при напрузі зсуву близько 0,1 Н/м2. Капіляр повторно заповнювали розчином Дюльбекко і звільняли від вмісту при напрузі зсуву 30 Н/м2. Вважали число клітин у вихідній суспензії, а також першому (неадгезіровавшіе і з малою силою зчеплення) і другому (з середньою силою зчеплення) змиві. З отриманих даних розраховували кількість клітин, що залишилися в капілярі (з великою силою зчеплення) [4].
Результати досліджень та їх обговорення
У ході досліджень були отримані наступні результати.
Зміни поглинальної здатності нейтрофілів в умовах гіпертермії виявили поетапне збільшення фагоцитарної активності і числа поглинених частинок (табл. 1). Приріст вивчених показників у порівнянні з контролем становив: 20 хвилин перегрівання - ФА - 8%, ФІ - 7%; 75 хвилин - ФА - 16%, ФІ - 37%; 120 хвилин - ФА - 24%, ФІ - 52%. При охолодженні тварин до стану холодної наркозу фагоцитарна активність змінювалася незначно (1%), а число поглинених частинок зростала (збільшення ФМ - 19%). Охолодження в умовах алкогольної інтоксикації негативно позначалося на функціональній активності нейтрофілів: достовірно знижувалися обидва показники ФА - 10%, ФІ - 37% (табл. 2).
Таблиця 1
Показники фагоцитарної активності у тварин, що піддавалися перегрівання
Група | Фагоцитарна активність (%) | Фагоцитарний індекс (отн. од.) |
Контроль | 75 ± 1,7 | 7,5 ± 0,4 |
I група тварин | 81 ± 0,8 * | 8,0 ± 0,2 * |
II група тварин | 87 ± 1,1 * | 10,3 ± 0,3 * |
III група тварин | 93 ± 0,7 * | 11,4 ± 0,4 * |
Примітка: * - вірогідність відмінностей порівняно з контролем (p