МІНІСТЕРСТВО ОСВІТИ
Пензенська ДЕРЖАВНИЙ ПЕДАГОГІЧНИЙ УНІВЕРСИТЕТ ім. В.Г. БЕЛІНСЬКА
Природно-географічний факультет
Кафедра біохімії
Курсова робота
ФЕРМЕНТИ КЛІНІЧНОЇ ДІАГНОСТИКИ
Виконала: студентка групи БХ-41
Рахматулліна Равіля Ільясовна
Перевірив: к.б.н., доцент
Соловйов Володимир Борисович
Пенза, 2009
Зміст
Введення
1.Ензімопатологія
2.Ензімодіагностіка
3.Основні ферменти, які використовуються в клінічній діагностиці
3.1.Аспартатаминотрансфераза (ACT)
3.2. Аланінамінотрансфераза (АЛТ)
3.3. Амілаза
3.4.у-глутамілтранспептидази (ГГТ)
3.5. Креатинкінази (КК)
3.6. Лактатдегідрогеназа (ЛДГ)
3.7. Лужна фосфатаза (ЛФ)
4.Ензімотерапія
Висновок
Література
Введення
Мета роботи: ознайомлення з основними ферментами, використовуваними при клінічної діагностики та оцінка їх інформативності.
Предметом дослідження є основні ферменти клінічної діагностики.
Досягнення ензимології знаходять все більше застосування в медицині, зокрема у профілактиці, діагностиці та лікуванні хвороб. Успішно розвивається новий напрямок ензимології-медична ензимологія, яка має свої цілі і завдання, специфічні методологічні підходи і методи дослідження.
Медична ензимологія розвивається за трьома головними напрямами, хоча можливості застосування наукових досягнень ензимології в медицині теоретично безмежні, зокрема в області ензімопатологіі, ензимодіагностики і ензимотерапії.
Ензимодіагностика, безумовно, є важливою і актуальною для сучасної медицини та науки, так як біохімічні дослідження, білкового спектру, активності ферментів в крові та інших біологічних рідин, які здійснюються в цій області, сприяють виявленню причин, що призводять до різних поталогіям, і допомагають запобігти або послабити їх несприятливу дію на організм.
1. Ензімопатологія
Область досліджень ензімопатологіі є теоретичною, фундаментальною частиною патології. Вона покликана вивчати молекулярні основи розвитку патологічного процесу, засновані на даних порушення механізмів регуляції активності або синтезу індивідуального ферменту або групи ферментів. Маючи високу каталітичну активність і вираженої органотропность, ферменти можуть бути використані в якості самих тонких і виборчих інструментів для спрямованого впливу на патологічний процес. Як відомо, з більш ніж 5000 спадкових хвороб людини молекулярний механізм розвитку з'ясований тільки у 2-3 десятків. Вважають, що розвиток хвороби частіше за все пов'язане із спадковою недостатністю або повною відсутністю синтезу одного-єдиного ферменту в організмі хворого. Іноді хвороби називають також ензимопатій. Так, галактоземія-спадкове захворювання, при якому спостерігається ненормально висока концентрація галактози в крові. Хвороба розвивається в результаті спадкового дефекту синтезу ферменту гексозо-1-фосфат-уріділтрансферази, каталізує перетворення галактози в легкометаболізіруемую глюкозу. Причиною іншого спадкового захворювання - фенілкетонурії, що супроводжується розладом психічної діяльності, є втрата клітинами печінки здатності синтезувати фермент, що каталізує перетворення фенілаланіну в тирозин.
Ензімопатологія успішно вирішує й проблеми патогенезу соматичних хвороб; ведуться роботи зі з'ясування молекулярних основ атеросклерозу, злоякісного росту, ревматоїдних артритів та ін Неважко уявити величезну роль ферментних систем або навіть окремих ферментів, порушення регуляції активності та синтезу яких призводить до формування або розвитку патологічного процесу.
2.Ензімодіагностіка
Ензимодіагностика полягає в постановці діагнозу захворювання (або синдрому) на основі визначення активності ферментів у біологічних рідинах людини. Ензимодіагностика-розвивається по двох шляхах.
Один шлях-використання ферментів як виборчих реагентів для відкриття та кількісного визначення нормальних чи аномальних хімічних речовин в сироватці крові, сечі, шлунковому соку та ін (наприклад, виявлення за допомогою ферментів глюкози, білка або інших речовин в сечі, в нормі не виявляються ).
Інший шлях-відкриття та кількісне визначення самих ферментів в біологічних рідинах при патології. Виявилося, що ряд ферментів з'являється в сироватці крові при розпаді клітин (звідси їх назва «некротичні ферменти»). Для діагностики органічних та функціональних уражень органів і тканин широко застосовуються окремі ферментні тести, вигідно відрізняються від інших хімічних діагностичних тестів, які використовуються в клініці, високою чутливістю і специфічністю. Відомо близько 20 тестів, заснованих на кількісному визначенні активності ферментів (і ізоферментів), головним чином в крові (рідше в сечі), а також у біоптатах (шматочки тканин, отримані при біопсії). Слід зазначити, що з величезної кількості ферментів (більше 3500), відкритих в природі (частково і в організмі людини), в діагностичній ензимології використовується лише обмежений набір ферментів і для дуже невеликого числа хвороб (гепатити, інфаркт міокарда, органічні ураження нирок, підшлункової залози , печінки та ін.) Доведено, що органи і тканини людини характеризуються специфічним ферментним і ізоферментному спектром, схильним не тільки індивідуальним, але і добовим коливанням. Існує великий градієнт концентрації ферментів між внутрішньоклітинними і позаклітинними частинами тіла. Тому будь-які, навіть незначні, пошкодження клітин (іноді функціональні розлади) призводять до виділення ферментів в позаклітинний простір, звідки вони надходять в кров. Механізм гіперферментаціі (підвищений вміст ферментів у крові) до кінця не розшифрований. Підвищення рівня внутрішньоклітинних ферментів у плазмі крові прямо залежить від природи шкідливого впливу, часу дії та ступеня пошкодження біомембран клітин і субклітинних структур органів. В оцінці ферментних тестів для діагностичних цілей особливе значення має знання періоду напівжиття (напіврозпаду) у плазмі крові кожного з діагностичних ферментів, що робить важливим вибір точного часу для ферментного аналізу крові. Дуже істотним є також знання особливостей розподілу (топографії) ферментів в індивідуальних органах і тканинах, а також їх внутрішньоклітинної локалізації.
3.Основні ферменти, які використовуються в клінічній діагностиці
3.1. Аспартатамінотрансфераза (ACT)
Амінотрансферази (трансамінази) - ферменти з групи трансфераз, що переносять групи атомів, що містять азот. До цієї групи ферментів відносяться такі важливі для клінічної лабораторної діагностики ферменти, як АСТ і АЛТ.
Аспартатамінотрансфераза (ACT; глутамат-оксалоанетат-тран-саміназа; GOT L-аспартат: 2-оксоглутаратаминотрансфераза, КФ 2-6.1.1) каталізує реакцію переамінування (трансамінування) між аспартат і α-кетоглутарату:
α-кетоглутарату + L-аспартат ↔ L-глутамат + оксалоацетата.
У ссавців найбільш висока активність і концентрація ACT відзначена в печінці, нервовій тканині, скелетних м'язах та міокарді. Незначна активність ACT визначена і в крові здорових людей. У більшості тканин існує як мінімум два ізоферменту ACT: мітохондріальний ізофермент (МАСТ), на всіх підтримують середовищах рухається до катода, і розчинний у цитозолі ізофермент ACT (ЦАСТ), мігруючий до аноду. ЦАСТ складається з двох ідентичних субодиниць; це димер з молекулярною масою 93 кДа. МАСТ - теж димер з молекулярною масою 91 кДа. Виділення ізоферментів виявило існування декількох ізоформ з подібною кінетикою, але вираженими імунологічними відмінностями. Ізоферменти ACT мають певну відмінність кінетичних характеристик: оптимум дії МАСТ нижчий, ніж ЦАСТ.
3.2. Аланінамінотрансфераза (АЛТ)
Аланінамінотрансфераза (АЛТ; глутамат-піруваттрансаміназа; GPT, L-аланін: 2-оксоглутаратаминотрансаминаза, КФ 2.6.1.2) каталізує реакцію переамінування між L-аланином і α-кетоглутарату:
L-аланін + α-кетоглутарат ↔ піруват + L-глутамат.
АЛТ - друга активна амінотрансфераза, виділена з тканин людини. АЛТ присутня в багатьох органах: печінці, нирках, скелетних м'язах, міокарді, підшлунковій залозі. Невисока активність АЛТ відзначена і в сироватці крові здорових людей. Як і ACT, АЛТ присутній в клітинах у формі двох ізоферментів - цитозольного та мітохондріального, але останній нестабільний, зміст його в клітці низька.
Клінічне значення визначення концентрації амінотрансфераз.
Підвищення активності амінотрансфераз відзначено при ряді патологічних процесів, в які залучена печінку. Активність ACT і АЛТ підвищена при гострому панкреатиті, холециститі, паразитарних захворюваннях, псоріазі, опіках, застосуванні пропіонлактона як противірусного засобу, перевантаження організму залізом, гепатобіліарної патології.
Збільшення активності амінотрансфераз можна відзначити і у здорових людей при дієті, багатої білком або яка містить 25-30% сахарози, а також у донорів.
Велике практичне значення має згадка лікарських
препаратів, що мають невираженим гепатотоксическим властивістю. До них на підставі накопиченого багатьма дослідниками досвіду відносять аспірин, індометацин, лінкоміцин, анаболічні стероїди, пероральні контрацептиви, тестостерон і інші андрогени, прогестерон, сульфаніламіди, піридоксин, барбітурати, препарати міді та заліза, антибіотики (гентаміцин, ампіцилін, тетрациклін).
Активність ACT в крові зростає при туберкульозі легень, септицемії, герпетичної інфекції, вірусному гепатиті, пухлинах. Активність ACT знижується при малярії і вагітності, не змінюється при емболії легеневої артерії, пневмоніях, абсцесах легені, ревматоїдному артриті. Збільшення активності АЛТ відзначено у пацієнтів при терапії деякими лікарськими засобами, особливо антибіотиками, гіполіпідемічними препаратами, кетоацидозі, азотемії.
Дослідження ставлення масті / загальна активність ACT також було запропоновано в якості діагностичного тесту. Ставлення масті / загальна активність ACT знижено при загальному гепатиті і не змінено при обтурації жовчних проток, алкогольному ураженні печінки, метастази в печінку. Поява в сироватці крові високої активності МАСТ свідчить про некротичних процесах у гепатоцитах. У гострому періоді інфаркту міокарда підвищення активності ACT - достовірний діагностичний тест. У той же час активність ACT підвищена в значно меншому ступені, ніж активність КК або ЛДГ. Клініко-морфологічні дослідження показали, що динаміку активності ACT можна використовувати для розрахунку обсягу ураження при інфаркті міокарда при невеликих осередках некрозу міоцитів настільки ж вірогідно, як і на підставі активності КК.
Запропоновано використовувати підвищення активності ACT в сироватці крові як прогностичний тест при гострому лейкозі.
3.3.Амілаза
α-Амілаза [α - (1,4)-глюкан-4-глюканогідролаза, КФ 3.2.1.1]-фермент, що гідролізують внутрішні 1,4 α-глікозидні зв'язку крохмалю, глікогену та інших полімерів глюкози. В організмі людини основні джерела α-амілази - підшлункова і слинні залози. Численні ізоформи, виділені з біологічних рідин і тканин людини, являють собою, ймовірно, гетерогенні продукти посттрансляційних змін двох сімейств ізоферментів амілази, синтез яких кодують два локусу гена Ату-1, слинної (С) тип амілази і Ату-2, панкреатичний (П) тип ферменту, тісно пов'язані в хромосомі 1. Ізоферменти С і П не мають великих відмінностей у амінокислотним складом. Гель-фільтрацією на сефадексе у фракції С-амілаз виділено дві ізоформи, одна з яких містить вуглеводи. Молекулярна маса ізоформ, що містять вуглеводи, 57 кДа, що не містять вуглеводи - 55 кДа. Ізоелектрична точки основних ізоформ С-ізоамілаз від 5,5 до 6,5. П-група ізоамілаз має меншу молекулярну масу (53 кДа) і не містить вуглеводів. Ізоелектрична точки цих білків варіюють від 5,7 до 7,0.
Переконливим доказом того, що П-тип амілази утворюється тільки в підшлунковій залозі, служить відсутність цього ізоферменту в осіб з тотальною панкреатектомія. З-ізофермент α-амілази, навпаки, може бути синтезований у різних органах і тканинах. Висока активність С-амілази зафіксована в тканини фаллопієвих труб та вмісті кісти яєчників. Специфічна група ізоамілаз, продукованих тканинами жіночих статевих органів, не виявляється в сироватці крові або сечі здорових людей; розподіл ізоамілаз ідентично у чоловіків і жінок. Ізоамілази, що належать до С-групі, виявлені і в жіночому молоці і рановий рідини.
Клінічне значення визначення активності амілази в сироватці крові.
Визначення активності α-амілази в сироватці крові - найбільш поширений тест діагностики гострого панкреатиту. При гострому панкреатиті активність ферменту в сироватці крові зростає через 3-12 год після больового нападу, досягає максимуму через 20-30 годин і повертається до норми за сприятливого перебігу в межах чотирьох днів. Активність α-амілази (діастази) в сечі зростає через 6-10 годин після підйому активності в сироватці і повертається до норми найчастіше через три дні після підйому.
В даний час широко відомо, що збільшення загальної активності α-амілази неспецифічно для панкреатиту та інших захворювань підшлункової залози. Клінічні дослідження показали, що підвищення активності α-амілази відбувається при ряді захворювань, до яких відносять кишкову непрохідність, захворювання жовчних шляхів, апендицит, паротит, позаматкову вагітність. Чутливість і специфічність визначення α-амілази при діагностиці гострого панкреатиту зростають при зміні кордонів нормальних значень (дискримінаційний рівень норми і патології - актівность1 ,5-2 рази перевищує верхні межі норми). У цьому випадку визначення активності α-амілази найбільш інформативні добу розвитку гострого панкреатиту. На думку ряду авторів, визначення активності α-амілази в сироватці крові при хронічному панкреатиті не має діагностичного значення.
У людини α-амілазу, вільно проходить через фільтраційний бар'єр ниркових тілець, реабсорбируют клітини епітелію ниркових канальців так само, як і інші низькомолекулярні білки сироватки крові. Збільшення активності амілази в сироватці крові може бути викликане порушенням елімінації ферменту. Приклад - стан, який називається макроамілаземіей, коли фермент пов'язаний з імуноглобулінами сироватки крові і утворює макромолекулярний комплекс. Такий комплекс не фільтрується в сечу і не може бути вилучений за допомогою якихось інших механізмів, що веде до значного і деколи тривалого збільшення активності α-амілази в сироватці крові. Макроамілаземія зустрічається у здорових людей з частотою 1%, в осіб з гіперамілаземіей - з частотою 2,5%. Макроамілаземія може бути діагностована методом ультрацентрифугування, ЕФ, гельхроматографіі, запропонований також простий тест преципітації комплексу поліетиленгліколем.
Активність α-амілази в сироватці крові часто збільшена при нирковій недостатності, проте не зовсім ясно, що є причиною такого збільшення - зростання освіти ферменту або зниження його елімінації. У таких випадках додаткову інформацію може дати визначення швидкості екскреції α-амілази або розрахунок кліренсу ферменту.
За даними багатьох авторів, найбільш чутливим і специфічним тестом для діагностики панкреатиту служить рівень активності П-ізоферменту α-амілази. Особливе значення цей тест набуває, якщо у хворого з передбачуваним діагнозом панкреатиту виявлена нормальна загальна активність амілази. За зниженою активності П-амілази може бути діагностований хронічний панкреатит. Частка П-ізоамілаз в загальній активності α-амілази значно вище в сечі, ніж у сироватці крові, можливо, внаслідок відмінностей у екскреції ізоферментів нирками. Тим не менше діагностичне значення визначення активності ізоферментів α-амілази в сечі поступається такому в крові.
3.4. у-глутамілтранспептидаза
В останні роки в клінічній хімії належне місце зайняло визначення активності у-глутамілтрансферази (ГГТ; у-глутаміл-транспептидази, КФ 2.3.2.2).
ГГТ каталізує перенесення у-глутаміл на амінокислоту або пептид, на іншу молекулу субстрату або воду. ГГТ - білок, що складається з однієї поліпептидного ланцюга з молекулярною масою 90 кДа. Фермент містить гідрофільний і гідрофобний фрагменти. Активний центр розташований на гідрофільному ділянці поліпептидного ланцюга. Гідрофобна область - частина ланцюга, яким фермент прикріплений до мембрани. Якщо екстракцію ферменту з тканин провести з використанням як детергенту жовчних кислот або тритона \ Х-100, ГГТ разом з гідрофобним ділянкою може бути переведена в розчин. Якщо в екстрагують суміш включені тільки протеази (папаїн або трипсин), гідрофобний фрагмент ГГТ залишається на мембрані, а в розчині виявляється гідрофільна частина поліпептиду ГГТ.
Пензенська ДЕРЖАВНИЙ ПЕДАГОГІЧНИЙ УНІВЕРСИТЕТ ім. В.Г. БЕЛІНСЬКА
Природно-географічний факультет
Кафедра біохімії
Курсова робота
ФЕРМЕНТИ КЛІНІЧНОЇ ДІАГНОСТИКИ
Виконала: студентка групи БХ-41
Рахматулліна Равіля Ільясовна
Перевірив: к.б.н., доцент
Соловйов Володимир Борисович
Пенза, 2009
Зміст
Введення
1.Ензімопатологія
2.Ензімодіагностіка
3.Основні ферменти, які використовуються в клінічній діагностиці
3.1.Аспартатаминотрансфераза (ACT)
3.2. Аланінамінотрансфераза (АЛТ)
3.3. Амілаза
3.4.у-глутамілтранспептидази (ГГТ)
3.5. Креатинкінази (КК)
3.6. Лактатдегідрогеназа (ЛДГ)
3.7. Лужна фосфатаза (ЛФ)
4.Ензімотерапія
Висновок
Література
Введення
Мета роботи: ознайомлення з основними ферментами, використовуваними при клінічної діагностики та оцінка їх інформативності.
Предметом дослідження є основні ферменти клінічної діагностики.
Досягнення ензимології знаходять все більше застосування в медицині, зокрема у профілактиці, діагностиці та лікуванні хвороб. Успішно розвивається новий напрямок ензимології-медична ензимологія, яка має свої цілі і завдання, специфічні методологічні підходи і методи дослідження.
Медична ензимологія розвивається за трьома головними напрямами, хоча можливості застосування наукових досягнень ензимології в медицині теоретично безмежні, зокрема в області ензімопатологіі, ензимодіагностики і ензимотерапії.
Ензимодіагностика, безумовно, є важливою і актуальною для сучасної медицини та науки, так як біохімічні дослідження, білкового спектру, активності ферментів в крові та інших біологічних рідин, які здійснюються в цій області, сприяють виявленню причин, що призводять до різних поталогіям, і допомагають запобігти або послабити їх несприятливу дію на організм.
1. Ензімопатологія
Область досліджень ензімопатологіі є теоретичною, фундаментальною частиною патології. Вона покликана вивчати молекулярні основи розвитку патологічного процесу, засновані на даних порушення механізмів регуляції активності або синтезу індивідуального ферменту або групи ферментів. Маючи високу каталітичну активність і вираженої органотропность, ферменти можуть бути використані в якості самих тонких і виборчих інструментів для спрямованого впливу на патологічний процес. Як відомо, з більш ніж 5000 спадкових хвороб людини молекулярний механізм розвитку з'ясований тільки у 2-3 десятків. Вважають, що розвиток хвороби частіше за все пов'язане із спадковою недостатністю або повною відсутністю синтезу одного-єдиного ферменту в організмі хворого. Іноді хвороби називають також ензимопатій. Так, галактоземія-спадкове захворювання, при якому спостерігається ненормально висока концентрація галактози в крові. Хвороба розвивається в результаті спадкового дефекту синтезу ферменту гексозо-1-фосфат-уріділтрансферази, каталізує перетворення галактози в легкометаболізіруемую глюкозу. Причиною іншого спадкового захворювання - фенілкетонурії, що супроводжується розладом психічної діяльності, є втрата клітинами печінки здатності синтезувати фермент, що каталізує перетворення фенілаланіну в тирозин.
Ензімопатологія успішно вирішує й проблеми патогенезу соматичних хвороб; ведуться роботи зі з'ясування молекулярних основ атеросклерозу, злоякісного росту, ревматоїдних артритів та ін Неважко уявити величезну роль ферментних систем або навіть окремих ферментів, порушення регуляції активності та синтезу яких призводить до формування або розвитку патологічного процесу.
2.Ензімодіагностіка
Ензимодіагностика полягає в постановці діагнозу захворювання (або синдрому) на основі визначення активності ферментів у біологічних рідинах людини. Ензимодіагностика-розвивається по двох шляхах.
Один шлях-використання ферментів як виборчих реагентів для відкриття та кількісного визначення нормальних чи аномальних хімічних речовин в сироватці крові, сечі, шлунковому соку та ін (наприклад, виявлення за допомогою ферментів глюкози, білка або інших речовин в сечі, в нормі не виявляються ).
Інший шлях-відкриття та кількісне визначення самих ферментів в біологічних рідинах при патології. Виявилося, що ряд ферментів з'являється в сироватці крові при розпаді клітин (звідси їх назва «некротичні ферменти»). Для діагностики органічних та функціональних уражень органів і тканин широко застосовуються окремі ферментні тести, вигідно відрізняються від інших хімічних діагностичних тестів, які використовуються в клініці, високою чутливістю і специфічністю. Відомо близько 20 тестів, заснованих на кількісному визначенні активності ферментів (і ізоферментів), головним чином в крові (рідше в сечі), а також у біоптатах (шматочки тканин, отримані при біопсії). Слід зазначити, що з величезної кількості ферментів (більше 3500), відкритих в природі (частково і в організмі людини), в діагностичній ензимології використовується лише обмежений набір ферментів і для дуже невеликого числа хвороб (гепатити, інфаркт міокарда, органічні ураження нирок, підшлункової залози , печінки та ін.) Доведено, що органи і тканини людини характеризуються специфічним ферментним і ізоферментному спектром, схильним не тільки індивідуальним, але і добовим коливанням. Існує великий градієнт концентрації ферментів між внутрішньоклітинними і позаклітинними частинами тіла. Тому будь-які, навіть незначні, пошкодження клітин (іноді функціональні розлади) призводять до виділення ферментів в позаклітинний простір, звідки вони надходять в кров. Механізм гіперферментаціі (підвищений вміст ферментів у крові) до кінця не розшифрований. Підвищення рівня внутрішньоклітинних ферментів у плазмі крові прямо залежить від природи шкідливого впливу, часу дії та ступеня пошкодження біомембран клітин і субклітинних структур органів. В оцінці ферментних тестів для діагностичних цілей особливе значення має знання періоду напівжиття (напіврозпаду) у плазмі крові кожного з діагностичних ферментів, що робить важливим вибір точного часу для ферментного аналізу крові. Дуже істотним є також знання особливостей розподілу (топографії) ферментів в індивідуальних органах і тканинах, а також їх внутрішньоклітинної локалізації.
3.Основні ферменти, які використовуються в клінічній діагностиці
3.1. Аспартатамінотрансфераза (ACT)
Амінотрансферази (трансамінази) - ферменти з групи трансфераз, що переносять групи атомів, що містять азот. До цієї групи ферментів відносяться такі важливі для клінічної лабораторної діагностики ферменти, як АСТ і АЛТ.
Аспартатамінотрансфераза (ACT; глутамат-оксалоанетат-тран-саміназа; GOT L-аспартат: 2-оксоглутаратаминотрансфераза, КФ 2-6.1.1) каталізує реакцію переамінування (трансамінування) між аспартат і α-кетоглутарату:
α-кетоглутарату + L-аспартат ↔ L-глутамат + оксалоацетата.
У ссавців найбільш висока активність і концентрація ACT відзначена в печінці, нервовій тканині, скелетних м'язах та міокарді. Незначна активність ACT визначена і в крові здорових людей. У більшості тканин існує як мінімум два ізоферменту ACT: мітохондріальний ізофермент (МАСТ), на всіх підтримують середовищах рухається до катода, і розчинний у цитозолі ізофермент ACT (ЦАСТ), мігруючий до аноду. ЦАСТ складається з двох ідентичних субодиниць; це димер з молекулярною масою 93 кДа. МАСТ - теж димер з молекулярною масою 91 кДа. Виділення ізоферментів виявило існування декількох ізоформ з подібною кінетикою, але вираженими імунологічними відмінностями. Ізоферменти ACT мають певну відмінність кінетичних характеристик: оптимум дії МАСТ нижчий, ніж ЦАСТ.
3.2. Аланінамінотрансфераза (АЛТ)
Аланінамінотрансфераза (АЛТ; глутамат-піруваттрансаміназа; GPT, L-аланін: 2-оксоглутаратаминотрансаминаза, КФ 2.6.1.2) каталізує реакцію переамінування між L-аланином і α-кетоглутарату:
L-аланін + α-кетоглутарат ↔ піруват + L-глутамат.
АЛТ - друга активна амінотрансфераза, виділена з тканин людини. АЛТ присутня в багатьох органах: печінці, нирках, скелетних м'язах, міокарді, підшлунковій залозі. Невисока активність АЛТ відзначена і в сироватці крові здорових людей. Як і ACT, АЛТ присутній в клітинах у формі двох ізоферментів - цитозольного та мітохондріального, але останній нестабільний, зміст його в клітці низька.
Клінічне значення визначення концентрації амінотрансфераз.
Підвищення активності амінотрансфераз відзначено при ряді патологічних процесів, в які залучена печінку. Активність ACT і АЛТ підвищена при гострому панкреатиті, холециститі, паразитарних захворюваннях, псоріазі, опіках, застосуванні пропіонлактона як противірусного засобу, перевантаження організму залізом, гепатобіліарної патології.
Збільшення активності амінотрансфераз можна відзначити і у здорових людей при дієті, багатої білком або яка містить 25-30% сахарози, а також у донорів.
Велике практичне значення має згадка лікарських
препаратів, що мають невираженим гепатотоксическим властивістю. До них на підставі накопиченого багатьма дослідниками досвіду відносять аспірин, індометацин, лінкоміцин, анаболічні стероїди, пероральні контрацептиви, тестостерон і інші андрогени, прогестерон, сульфаніламіди, піридоксин, барбітурати, препарати міді та заліза, антибіотики (гентаміцин, ампіцилін, тетрациклін).
Активність ACT в крові зростає при туберкульозі легень, септицемії, герпетичної інфекції, вірусному гепатиті, пухлинах. Активність ACT знижується при малярії і вагітності, не змінюється при емболії легеневої артерії, пневмоніях, абсцесах легені, ревматоїдному артриті. Збільшення активності АЛТ відзначено у пацієнтів при терапії деякими лікарськими засобами, особливо антибіотиками, гіполіпідемічними препаратами, кетоацидозі, азотемії.
Дослідження ставлення масті / загальна активність ACT також було запропоновано в якості діагностичного тесту. Ставлення масті / загальна активність ACT знижено при загальному гепатиті і не змінено при обтурації жовчних проток, алкогольному ураженні печінки, метастази в печінку. Поява в сироватці крові високої активності МАСТ свідчить про некротичних процесах у гепатоцитах. У гострому періоді інфаркту міокарда підвищення активності ACT - достовірний діагностичний тест. У той же час активність ACT підвищена в значно меншому ступені, ніж активність КК або ЛДГ. Клініко-морфологічні дослідження показали, що динаміку активності ACT можна використовувати для розрахунку обсягу ураження при інфаркті міокарда при невеликих осередках некрозу міоцитів настільки ж вірогідно, як і на підставі активності КК.
Запропоновано використовувати підвищення активності ACT в сироватці крові як прогностичний тест при гострому лейкозі.
3.3.Амілаза
α-Амілаза [α - (1,4)-глюкан-4-глюканогідролаза, КФ 3.2.1.1]-фермент, що гідролізують внутрішні 1,4 α-глікозидні зв'язку крохмалю, глікогену та інших полімерів глюкози. В організмі людини основні джерела α-амілази - підшлункова і слинні залози. Численні ізоформи, виділені з біологічних рідин і тканин людини, являють собою, ймовірно, гетерогенні продукти посттрансляційних змін двох сімейств ізоферментів амілази, синтез яких кодують два локусу гена Ату-1, слинної (С) тип амілази і Ату-2, панкреатичний (П) тип ферменту, тісно пов'язані в хромосомі 1. Ізоферменти С і П не мають великих відмінностей у амінокислотним складом. Гель-фільтрацією на сефадексе у фракції С-амілаз виділено дві ізоформи, одна з яких містить вуглеводи. Молекулярна маса ізоформ, що містять вуглеводи, 57 кДа, що не містять вуглеводи - 55 кДа. Ізоелектрична точки основних ізоформ С-ізоамілаз від 5,5 до 6,5. П-група ізоамілаз має меншу молекулярну масу (53 кДа) і не містить вуглеводів. Ізоелектрична точки цих білків варіюють від 5,7 до 7,0.
Переконливим доказом того, що П-тип амілази утворюється тільки в підшлунковій залозі, служить відсутність цього ізоферменту в осіб з тотальною панкреатектомія. З-ізофермент α-амілази, навпаки, може бути синтезований у різних органах і тканинах. Висока активність С-амілази зафіксована в тканини фаллопієвих труб та вмісті кісти яєчників. Специфічна група ізоамілаз, продукованих тканинами жіночих статевих органів, не виявляється в сироватці крові або сечі здорових людей; розподіл ізоамілаз ідентично у чоловіків і жінок. Ізоамілази, що належать до С-групі, виявлені і в жіночому молоці і рановий рідини.
Клінічне значення визначення активності амілази в сироватці крові.
Визначення активності α-амілази в сироватці крові - найбільш поширений тест діагностики гострого панкреатиту. При гострому панкреатиті активність ферменту в сироватці крові зростає через 3-12 год після больового нападу, досягає максимуму через 20-30 годин і повертається до норми за сприятливого перебігу в межах чотирьох днів. Активність α-амілази (діастази) в сечі зростає через 6-10 годин після підйому активності в сироватці і повертається до норми найчастіше через три дні після підйому.
В даний час широко відомо, що збільшення загальної активності α-амілази неспецифічно для панкреатиту та інших захворювань підшлункової залози. Клінічні дослідження показали, що підвищення активності α-амілази відбувається при ряді захворювань, до яких відносять кишкову непрохідність, захворювання жовчних шляхів, апендицит, паротит, позаматкову вагітність. Чутливість і специфічність визначення α-амілази при діагностиці гострого панкреатиту зростають при зміні кордонів нормальних значень (дискримінаційний рівень норми і патології - актівность1 ,5-2 рази перевищує верхні межі норми). У цьому випадку визначення активності α-амілази найбільш інформативні добу розвитку гострого панкреатиту. На думку ряду авторів, визначення активності α-амілази в сироватці крові при хронічному панкреатиті не має діагностичного значення.
У людини α-амілазу, вільно проходить через фільтраційний бар'єр ниркових тілець, реабсорбируют клітини епітелію ниркових канальців так само, як і інші низькомолекулярні білки сироватки крові. Збільшення активності амілази в сироватці крові може бути викликане порушенням елімінації ферменту. Приклад - стан, який називається макроамілаземіей, коли фермент пов'язаний з імуноглобулінами сироватки крові і утворює макромолекулярний комплекс. Такий комплекс не фільтрується в сечу і не може бути вилучений за допомогою якихось інших механізмів, що веде до значного і деколи тривалого збільшення активності α-амілази в сироватці крові. Макроамілаземія зустрічається у здорових людей з частотою 1%, в осіб з гіперамілаземіей - з частотою 2,5%. Макроамілаземія може бути діагностована методом ультрацентрифугування, ЕФ, гельхроматографіі, запропонований також простий тест преципітації комплексу поліетиленгліколем.
Активність α-амілази в сироватці крові часто збільшена при нирковій недостатності, проте не зовсім ясно, що є причиною такого збільшення - зростання освіти ферменту або зниження його елімінації. У таких випадках додаткову інформацію може дати визначення швидкості екскреції α-амілази або розрахунок кліренсу ферменту.
За даними багатьох авторів, найбільш чутливим і специфічним тестом для діагностики панкреатиту служить рівень активності П-ізоферменту α-амілази. Особливе значення цей тест набуває, якщо у хворого з передбачуваним діагнозом панкреатиту виявлена нормальна загальна активність амілази. За зниженою активності П-амілази може бути діагностований хронічний панкреатит. Частка П-ізоамілаз в загальній активності α-амілази значно вище в сечі, ніж у сироватці крові, можливо, внаслідок відмінностей у екскреції ізоферментів нирками. Тим не менше діагностичне значення визначення активності ізоферментів α-амілази в сечі поступається такому в крові.
3.4. у-глутамілтранспептидаза
В останні роки в клінічній хімії належне місце зайняло визначення активності у-глутамілтрансферази (ГГТ; у-глутаміл-транспептидази, КФ 2.3.2.2).
ГГТ каталізує перенесення у-глутаміл на амінокислоту або пептид, на іншу молекулу субстрату або воду. ГГТ - білок, що складається з однієї поліпептидного ланцюга з молекулярною масою 90 кДа. Фермент містить гідрофільний і гідрофобний фрагменти. Активний центр розташований на гідрофільному ділянці поліпептидного ланцюга. Гідрофобна область - частина ланцюга, яким фермент прикріплений до мембрани. Якщо екстракцію ферменту з тканин провести з використанням як детергенту жовчних кислот або тритона \ Х-100, ГГТ разом з гідрофобним ділянкою може бути переведена в розчин. Якщо в екстрагують суміш включені тільки протеази (папаїн або трипсин), гідрофобний фрагмент ГГТ залишається на мембрані, а в розчині виявляється гідрофільна частина поліпептиду ГГТ.
Гідрофільні фрагменти ГГТ, ізольовані з печінки або нирок, імунологічно подібні, так само як і гідрофобні фрагменти ГГТ, ізольовані з різних органів.
ГГТ займає важливе місце у метаболізмі амінокислот. Комплекс біохімічних реакцій реабсорбції амінокислот з первинної сечі, профільтрованої фільтраційний бар'єр ниркових тілець, названий глутаміловим циклом. Цей процес починається з дії ГГТ, яка розташована на зовнішній поверхні клітинної мембрани і пов'язує амінокислоту первинної сечі з клітиною епітелію канальців за участю природного субстрату глутатіону, утворюючи потрійний комплекс: амінокислота-ГГТ-глутатіон. Відзначено інгібування реакції високими концентраціями субстратів. Як наслідок скріплення двох субстратів в активному центрі ферменту відбувається перенесення глутаміловой кислоти від глутатіону до амінокислоті. У цій фазі циклу амінокислоту переносять у клітку, де відбуваються наступні реакції, в яких глутаміловая цикло-трансфераза розщеплює зв'язок між аміно-і глутаміловой кислотою, споживаючи молекулу АТФ. Присутність ГГТ на мембрані клітин інших органів (тонка кишка, хоріоідальною сплетіння і ін) дає підставу припустити, що і в цих органах фермент бере участь у транспорті амінокислот. Роль ГГТ печінки повністю не з'ясована; імовірно фермент пов'язує молекули речовин, які необхідно екскретуватися.
Біологічна роль ферменту пов'язана також з регулюванням рівня глутатіону в тканинах. Саме цим можна пояснити високий рівень глутатіону в плазмі крові і сечі пацієнтів з генетично детермінованим відсутністю синтезу ГГТ. Регулюючи рівень глутатіону, ГГТ може впливати на синтез білка, що пояснює підвищену питому активність ферменту в тканинах з високою швидкістю метаболізму. Це ж може бути причиною підвищеного рівня ферменту в тканинах і крові новонароджених.
ГГТ міститься в основному в мембрані клітин, що володіють високою секреторною або адсорбційну здатність: епітеліальних клітинах, що вистилають жовчні шляхи, печінкових канальцях, проксимальних канальцях нефрона, панкреатичної екзокринної тканини і вивідних протоках, ворсинчастий клітинах тонкої кишки. У порядку зниження питомої активності ГГТ тканини розташовуються в такій послідовності: нирки, печінка, підшлункова залоза, Щіткова облямівка клітин тонкої кишки. Активність ГГТ не виявлена в скелетних м'язах та міокарді.
Клінічне значення визначення концентрації ГГТ у сироватці крові
Найбільш часта причина підвищення активності ГГТ у сироватці крові - патологія печінки. Слабке токсичну дію на печінку, що викликає жирову інфільтрацію, прийом алкоголю і лікарських препаратів супроводжуються помірним збільшенням активності ГГТ. Більш виражене підвищення активності ферменту пов'язано з позапечінкові і внутрішньопечінкової обструкцією, вторинним залученням печінки в онкологічні процеси організму шляхом метастазування. Найвища активність ГГТ у сироватці крові відмічена при закупорці жовчної протоки або злоякісних пухлинах, прямо або опосередковано вражаючих печінку.
При відсутності жовтяниці визначення ГГТ - чутливий тест для виявлення патології печінки; клінічна чутливість вище, ніж у таких ферментів, як ЩФ і 5-нуклеотидази. При онкологічних захворюваннях нормальна активність ГГТ у сироватці крові свідчить про відсутність метастазів у печінці, тоді як висока активність ГГТ (у 12 разів і більше вище норми) служить індикатором ураження печінки метастазами. При гострому вірусному гепатиті багаторазове дослідження активності ГГТ дозволяє стежити за перебігом хвороби: постійно збільшена активність ГГТ вказує на розвиток хронічної форми захворювання. При збільшенні активності ЛФ і труднощі визначення її ізоферментів корисно визначати активність ГГТ для ідентифікації можливого джерела гіперферментемії: активність ГГТ залишається в межах норми, якщо збільшення активності ЛФ викликано кістковим ізоферментом, і збільшена, коли фермент утворюється в печінці. У педіатрії визначення активності ГГТ краще, ніж визначення ЩФ, так як активність ГГТ не змінюється з віком і отримані результати легше інтерпретувати.
Висока активність ГГТ присутній в крові людей, що зловживають алкоголем. У 74% алкоголіків, які страждають гістологічно підтвердженим ураженням печінки, збільшення активності ГГТ було постійним навіть у періоди абстиненції. Існують певні відмінності між активністю ГГТ в крові алкоголіка і людини, що прийняла значну дозу алкоголю. У перших настає збільшення активності ГГТ до 140% від нормальних значень з піком активності через 18 год, у других навіть після важкого сп'яніння збільшення активності ГГТ не перевищує 15% протягом 12 год
Розвиток інфаркту міокарда супроводжується змінами активності ферментів сироватки крові (КК, ЛДГ, ACT) і ГГТ, активність якої після нападу стенокардії залишається підвищеною протягом тривалого часу. Підвищення активності ГГТ відмічено у 50% хворих на стенокардію і у частини пацієнтів з іншими захворюваннями (коронарна недостатність, недостатність кровообігу). При інфаркті міокарда залишаються неясними механізми збільшення активності ГГТ, оскільки вона відсутня у серцевому м'язі.
Активність ГГТ в сечі вищі, ніж у сироватці крові. Присутня в сечі ГГТ має ниркове походження: фермент виділяється в сечу із зруйнованих клітин проксимальних відділів канальців, які містять ГГТ у високій концентрації.
3.5.Креатінкіназа (КК)
Креатинкінази-АТФ: креатин-1 ,4-фосфотрансфераз (КФ 2.7.3.2) - каталізує оборотний перенесення фосфатного залишку між АТФ і креатин з утворенням АДФ і креатинфосфату. Загальноприйнято скорочена назва ферменту - креатинкінази (КК). КК - цитозольний і мітохондріальний фермент, який функціонує в клітинах багатьох тканин. Продукт реакції фосфокреатин - макроергічних сполук, що забезпечує енергією скорочення м'язи, її розслаблення і транспорт метаболітів у миоцит. У перший час активність КК у крові цікавила клінічних хіміків як тест для виявлення ураження поперечнополосатой мускулатури. В даний час активність КК - провідний тест в діагностиці інфаркту міокарда.
Найбільший вміст КК зазначено в міокарді і скелетних м'язах, високий вміст - у мові, м'язі діафрагми, низьке - в нирках, легенів, печінки. КК - димер; в цитозолі клітин тканин людини присутні 2 субодиниці: М - м'язовий тип і В - мозковий тип. Субодиниці представляють собою білки з молекулярною масою 41кДа з активним центром у кожної субодиниці. Відповідно двома формами субодиниць димерной форма молекули КК має такі варіанти: м'язовий тип КК-ММ, гібридний димер КК-МВ, характерний для міокарда, і ізофермент КК-ВВ, локалізований переважно в мозковій тканині.
Активність ферменту і розподіл його ізоферментів органоспеціфічни, тому ідентифікація та кількісне визначення ізоферментів КК у сироватці крові не тільки корисно для встановлення збільшення проникності мембран або пошкодження специфічного органу, але й дає можливість встановлення діагнозу, спостереження клінічного перебігу та оцінки прогнозу захворювання. В електричному полі найбільшою рухливістю володіє КК-ВВ, найменшою - КК-ММ, гібридна форма КК-МВ займає проміжне становище. Відповідно до цього в класифікації Міжнародного союзу теоретичної та прикладної хімії КК-ВВ позначена ізоферментом I КК, КК-МВ - II, КК-ММ - III. Для розуміння джерел появи в крові активності КК-МВ слід зазначити, що у плода до 16-тижневого віку в м'язовій тканині домінує зародкова форма КК, а саме КК-МВ, яка пізніше заміщається КК-ММ. Певна перебудова ізоферментного складу КК відбувається і при гіпертрофії міокарда: підвищується процентний вміст КК-МВ та КК-ВВ, а частка КК-ММ виявляється зниженою. Міоцити в умовах тривалої гіперфункції підвищують синтез ізоформи КК-ВВ.
Клінічне значення визначення активності КК та її ізоферментів.
Підвищення активності КК у крові може бути наслідком травми, переохолодження або перегрівання, голодування і бактеріальної інтоксикації, дегідратації, ураження електричним струмом. Підвищена активність КК-МВ відзначена при м'язової дистрофії різної етіології, ішемічному рабдоміолізі з міоглобінурією, отруєння чадним газом. Активність КК-МВ підвищувалася, більш ніж на порядок перевищуючи норму, у хворих на гострий перикардитом.
Досвід застосування ізоферментному діагностики в блоці інтенсивної терапії показав, що підвищення в крові активності КК-МВ може відбуватися при вираженій недостатності кровообігу, катетеризації серця, набряку легень, аритміях, кардіогенному шоці, алкогольної інтоксикації, кровотечі з шлунково-кишкового тракту, травматичної епілепсії, травмі грудної клітки. Активність КК-МВ підвищена в крові пацієнтів при синдромі шоку, розвиненому при анемії, гіперкапнії, гіпоксемії, молочнокислом ацидозі, вираженої гіпотонії. Однак тільки в рідкісних випадках у зазначених ситуаціях активність КК-МВ на 6% перевищувала активність КК. Враховуючи можливості неспецифічного підвищення активності КК-МВ, треба пам'ятати і про можливість пропустити невеликий інфаркт міокарда. У хворих з гіпертрофією міокарда активність КК-МВ у період інфаркту може досягати 1 / 3 активності КК.
Підвищення активності КК у сироватці крові може бути обумовлено збільшенням активності ізоферменту КК-ММ. Активність КК-ММ в сироватці крові підвищується при прогресуючій м'язовій дистрофії, дерматомиозите, поліміозиті, інфаркті міокарда, гіпотиреозі, деяких захворюваннях нервової системи. Активність КК-ММ збільшується також після фізичного навантаження, внутрішньом'язових ін'єкцій, хірургічних операцій. При м'язової дистрофії типу Дюшенна (спадковому, пов'язаних зі статтю рецессивном захворюванні) активність КК-ММ збільшується в 8-90 разів у порівнянні з нормою, активність ізоферменту збільшена також у носіїв цього гена.
Активність КК-ВР у крові відзначали під час аортокоронарного шунтування. Вважають, що активність КК-ВВ може бути тестом аноксії тканин. Активність КК-ВР у крові може також бути наслідком гіпоксичного пошкодження мозку, особливо в умовах перинатальної гіпоксії. Активність КК-ВВ збільшена у 53% новонароджених з асфіксією. КК-ВВ присутній у гладкій мускулатурі, але не визначається в сироватці крові осіб з доброякісними захворюваннями цих тканин. Одним з можливих пояснень підвищення активності КК-ВР у крові при судинних операціях служить припущення, що стінки вен, як, втім, і аорти, містять тільки одну ізоформу КК, а саме КК-ВВ. Активність ізоферменту КК-ВВ може бути підвищена в крові при раку передміхурової залози, дрібноклітинному раку легені, аденокарцинома шлунка, лейкозах, хронічної ниркової недостатності, передозуванні міорелаксантів. Метастазування раку передміхурової залози супроводжується особливо високими цифрами активності КК-ВР у крові. Дослідники сходяться на думці, що активність КК-ВВ може бути використана як неспецифічний маркер пухлинного процесу.
У ряді випадків при інфаркті міокарда, а іноді і в його відсутність висока активність КК зберігається невизначено довго. Спостережувані явища обумовлені циркуляцією в крові незвичайних форм КК і її ізоферментів. Після поділу при ЕФ фракцій КК на електрофореграмме стають видимими смуги, що не відповідають положенню смуг КК-ММ, КК-МВ та КК-ВВ, і можна відзначити наявність ізоформ КК, що рухаються до катода, що з білків сироватки крові властиво імуноглобулінів. Відомо, що окиснення сульфгідрильних груп КК змінює електрофоретична рухливість молекул, проте при цьому вони як і раніше рухаються до аноду. У хворих метастатичним раком передміхурової залози виділено ізофермент КК, мігруючий між КК-МВ та КК-ВВ.
3.6. Лактатдегідрогеназа (ЛДГ)
Лактатдегідрогеназа (ЛДГ, L-лактат-НАД-оксидоредуктаз, КФ 1.1.1.27) - цінксодержашій фермент, каталізує оборотну реакцію відновлення піровиноградної кислоти на молочну кислоту за участю НАД-Н 2.
Фермент в кристалічній формі був отриманий з м'яза серця. Подібним же чином були отримані кристалічні ферментні препарати з скелетних м'язів і печінки. При рН 7,0 рівновагу реакції зміщена в бік утворення лактату, в лужному середовищі реакція проходить у зворотному напрямку. ЛДГ може також реагувати з НАДФ як кофермент, але значно повільніше, ніж з НАД.
ЛДГ - тетрамер, два локусу генів кодують синтез двох олігомерів - М-і Н-субодиниць. М-субодиниця синтезується головним чином в тканинах з анаеробним метаболізмом, в той час як Н-субодиниця присутня в тканинах з переважанням аеробних процесів. Молекулярна маса кожної субодиниці складає 35 кДа, кожного тетрамера - 140 кДа. Поліпептидний ланцюг обох субодиниць містить 330 амінокислотних залишків; відмінності в їх послідовності в субодиниця виявлені протягом більш ніж 25% довжини поліпептидного ланцюга. У тетрамерной структурі ЛДГ субодиниці пов'язані силами іонних і водневих взаємодій. На кожній субодиниці розташований каталітичний центр; дисоціація тетрамера на димери або мономери призводить до втрати ферментативної активності.
У цитоплазмі клітин та сироватці крові ЛДГ має 5 ізоферментів, що позначаються відповідно до їх рухливістю до анода в електричному полі: ЛДГ 1 (НННН), ЛДГ 2 (НННМ), ЛДГ 3, (ННММ), ЛДГ 4 (НМММ) і ЛДГ 5 (мммм). ЛДГ, бере участь в окисленні лактату в піруват в тканинах з аеробним типом метаболізму (міокард, мозок, нирки, еритроцити, тромбоцити). ЛДГ 5 оптимізована природою для перетворення пірувату в лактат у тканинах з високим рівнем гліколізу (скелетні м'язи, печінка). Не всі ізоферменти ЛДГ гомогенні: при електрофоретичному поділі ізоферментів ЛДГ сироватки та еритроцитів у поліакриламідному гелі виявлено розщеплення ЛДГ 3 на дві смуги, що дозволяє припустити синтез двох форм ЛДГ 3 в тканинах. Наявність молекулярних структур двох форм, підтверджене в реакції з антисироватки, пояснюють відмінностями просторового (цис і транс) розташування Н-субодиниць і М-субодиниць в тетрамер.
У тканинах людини активність ЛДГ на 1 г сухої маси зменшується в послідовності: нирки - скелетний м'яз - підшлункова залоза - селезінка - печінка - плацента. Ізоферменти ЛДГ, і ЛДГ 2 переважають в еритроцитах, лейкоцитах, міокарді, нирках, ЛДГ 4 і ЛДГ 5 - у печінці, скелетних м'язах, неопластичних тканинах, найбільш високий вміст ЛДГ 3 зазначають у лімфоїдної тканини, тромбоцитах і пухлинах.
Властивості ізоферментів ЛДГ визначені особливостями входять до них субодиниць. Ізоферментів ЛДГ притаманні різні кінетичні характеристики: рН, при якому вони проявляють максимальну активність, спорідненість до субстрату і кофакторів.
Клінічне значення визначення активності ЛДГ
Активність ЛДГ у сироватці крові підвищується при багатьох патологічних станах, тому для диференціальної діагностики захворювань більш доцільно дослідити зміни спектру ізоферментів ЛДГ. В даний час накопичено велику кількість даних про розподіл ізоферментів ЛДГ у тканинах і про зміну спектру ізоферментів ЛДГ у сироватці крові при різних захворюваннях. Ізоферментний спектр скелетної мускулатури показує переважання ЛДГ 5. При м'язової дистрофії відзначені збільшення більш рухливих ізоферментів ЛДГ і зниження активності ЛДГ 5, що характерно і для багатьох нейром'язових захворювань. Причиною зміни спектру ізоферментів може бути швидке видалення малорухомих ізоферментів з циркуляції. Активність ЛДГ 5 в сироватці крові - чутливий індикатор гепатоцелюлярного поразки, збільшення його активності зазвичай спостерігають при гепатиті, гіпоксії печінки (включаючи застій крові в печінці внаслідок серцевої недостатності), лікарської інтоксикації, цирозі, пухлинах і травмі. Активність ЛДГ у сироватці крові не підвищується при хронічних захворюваннях нирок і уремії, але іноді зростає після гемодіалізу або плазмаферезу, що може бути пояснено видаленням з крові інгібіторів (сечовина, оксалати).
Загальна активність ЛДГ при інфаркті міокарда найбільш значно підвищується протягом перших 2 діб після нападу стенокардії і до вихідного рівня знижується повільно, протягом 14-16 днів, епізодичне підвищення ЛДГ можна відзначити і в більш пізні терміни.
Активність ЛДГ схильна гормонального впливу. Великі дози тироксину знижували синтез ферменту, при цьому в більшій мірі зазначено інгібування синтезу субодиниці М. Норадреналін і адреналін викликають збільшення загальної активності ЛДГ з переважанням активності ЛДГ 1, і ЛДГ 2. Активність ферменту в крові зростає при дії анаболічних стероїдів і етанолу, а також ряду медикаментозних препаратів - клофібрату, кофеїну, сульфаніламідів та ін
Спектр ізоферментів ЛДГ може мінятися при неопластичних процесах. У таких випадках його важко інтерпретувати, тому що джерелом ізоферментів ЛДГ служить не тільки неопластичних тканину, але й тканини, руйновані метастазами. Однак ізоферментний спектр транссудату при пухлинному ураженні схожий з таким сироватки крові, тоді як в запальних ексудатах переважає активність ЛДГ 1 і ЛДГ 2. Для ЛДГ, як і для інших ферментів, при пухлинному процесі характерний синтез ізоферментів, властивих ембріональним тканинам. Недиференційовані ембріональні тканини мають спектр ізоферментів ЛДГ, в якому переважають ЛДГ 2 і ЛДГ 3, а також ЛДГ 4. У злоякісних пухлинах виявлено три види розподілу ізоферментів ЛДГ. Збільшення вмісту ЛДГ 4 і ЛДГ 5 виявлено при пухлинах передміхурової залози, матки, молочних залоз, шлунка, товстої кишки, сечового міхура та деяких типах пухлин мозку. У хворих на лейкоз, злоякісної лімфомою, нейробластомою, феохромоцитомою, а також при пухлинах порожнини рота, раку бронхів і деяких типах пухлин мозку збільшена активність ЛДГ 2, ЛДГ 3, ЛДГ 4. Збільшення активності ЛДГ, зазначено у сироватці крові хворих з деякими типами пухлин мозку та різними типами пухлин статевих органів.
Можливість підвищення активності ЛДГ, при пухлинному процесі слід враховувати при діагностиці інфаркту міокарда. Іноді при пухлинах мозку, раку пішевода, нейробластомі відзначають незвичайну додаткову смугу при ЕФ сироватки крові і тканини пухлини. Визначення спектру ізоферментів ЛДГ у сироватці крові при онкологічних захворюваннях корисно не тільки для діагностики, а й для контролю ефективності лікування. Виявлено, що нормалізація спектру ізоферментів ЛДГ корелює з успішністю відповіді хворого на лікування.
Наявність ускладнень при інфаркті міокарда та супутні захворювання можуть змінити спектр ЛДГ та активність ЛДГ. Виявлення спектру ізоферментів, характерного для інфаркту міокарда, можливо при застої крові в печінці та нирках внаслідок серцевої недостатності, при ішемічному ураженні деяких органів із-за різкого зниження серцевого викиду. При емболії легеневої артерії, яку у ряді випадків доводиться диференціювати з інфарктом міокарда, збільшення в крові активності ЛДГ 2 і ЛДГ 3 може бути пояснено виходом ферментів з тромбоцитів, патологією печінки, викликаної венозної гіпертензією, анемією коркового шару наднирників та нирок. Оскільки ці порушення не завжди вдається розрізнити, зміна спектру ізоферментів ЛДГ інтерпретувати непросто.
У сироватці крові тяжкохворих (як правило, в термінальному стані) методом ЕФ на ацетат целюлози виявляється додаткова смуга, ближча до катода, ніж ЛДГ 5, названа ЛДГ 6. У всіх спостереженнях в тканинах печінки, скелетних м'язах, нирці, селезінці і наднирниках а також присутністю ЛДГ 6; в ряді випадків поява цієї фракції носило транзиторний характер, ЛДГ 6 не виявлена в тканинах міокарда. Вважають, що немає нозологічної форми захворювання, для якої характерна ЛДГ 6, але є важкі клінічні стани, що зумовлюють її появу, до яких слід віднести виражений ацидоз, гіпотонію і сепсис.
3.7.Щелочная фосфатаза (ЛФ)
Лужна фосфатаза (ЛФ) - фосфогідролаза моноефіри орто-фосфорної кислоти (КФ 3.1.3.1) - гідролізує різні синтетичні субстрати при оптимумі рН, рівному 10,0; субстрат ферменту in vivo точно не відомий. ЩФ - глікопротеїн; за структурою це димер з здавалося значною варіацією молекулярної маси ферменту в різних тканинах. ЩФ - метало-фермент, до складу активного центру ферменту входить атом цинку. Вважають, що атом цинку підвищує активність ферменту, забезпечуючи конформаційні зміни і гідроліз моноефіри ортофосфорної кислоти. Кожен мономер ЩФ містить три металлосвязивающіх центру. Позбавлений іонів цинку фермент втрачає активність, але відновлює її після додавання металу. Активність ферменту зростає в присутності іонів магнію, для оптимальної активності необхідно певне співвідношення іонів магнію і цинку.
ЩФ присутня у всіх органах людини; найбільш висока питома активність ферменту виявлена в епітелії тонкої кишки, епітелії канальців нирок, остеобластів, гепатоцитах і плаценті-фермент щільно пов'язаний з клітинної мембраною гідрофобним карбоксильних кінцем поліпептидного ланцюга; гідрофобний кінець ланцюга ідентичний у всіх ізоферментів ЩФ. ЩФ прикріплена до плазматичної мембрани за допомогою фосфатидилинозитолгликанового якоря. Молекули ЩФ на поверхні плазматичної мембрани розташовуються нерівномірно.
Молекулярна маса ЩФ становить 130-220 кДа. Асоціація ЩФ з глікозаміногліканами (нейрамінової кислотою) може змінити не тільки молекулярну масу ферменту, але і заряд молекули та її рухливість в електричному полі. Ступінь глікозилювання ЩФ в тканинах може впливати на її термолабільність.
В організмі людини біосинтез ферменту кодують три гени: один - печінковий, кістковий і нирковий ізоферменти, інший - кишковий ізофермент і третій - плацентарну ЩФ. Вважають, що існує і 4-й ген, який кодує синтез зародкової ЩФ. Остання локалізована в тонкій кишці плоду приблизно до 30 тижнів вагітності. Ембріональні і зрілі форми ЩФ подібні за каталітичної активності. Виділення ЩФ з тканини печінки за допомогою фосфатидилинозитолспецифической фосфоліпази призводить до утворення форм, схожих з присутніми в сироватці крові. Ці дані дозволяють вважати, що форми ЩФ сироватки крові утворюються шляхом ферментативного гідролізу тканинних форм.
Клінічне значення визначення активності ЛФ.
Підвищення активності лужної фосфатази у сироватці крові не завжди дозволяє з достатнім ступенем достовірності скласти уявлення про органотопіческой патології.
У клінічній біохімії активність ЛФ найбільш часто використовують в діагностиці патології гепатобіліарної системи та кісткової тканини. Активність ЛФ сироватки крові часто підвищена при обструктивних захворюваннях печінки, холестаз, гепатит, явищах гепатотоксичності, хвороби Педжета, остеомаляції, новоутвореннях, які втягли в патологічний процес печінка і кісткову тканину.
Низька або навіть невизначуване активність ЛФ відзначена при гепатолентикулярной дегенерації. Механізм цього феномена неясний, припускають, що іон міді конкурує з цинком за місце в активному центрі лужної фосфатази, що веде до різкого падіння активності ферменту. Застосування гіполіпідемічних препаратів, зокрема клофібрату, також інгібує фермент.
У недоношених дітей з метою ранньої діагностики рахіту рекомендовано визначати активність ЛФ.
Дослідження активності ЛФ у хворих з синдромом гіпофосфатазіі вказує на важливу роль ЩФ у мінералізації кісткової тканини. Синдром гіпофосфатазіі - вроджене захворювання кісткової тканини, що характеризується виборчої недостатністю синтезу ЩФ. У пацієнтів з подібною патологією в тканинах та сироватці крові значно знижена активність печінкового, кісткового та ниркового ізоферментів ЩФ при нормальній активності плацентарного і кишкового ізоферментів. Інша особливість захворювання - накопичення в крові та сечі фосфоровмісних комплексів, службовців ендогенним субстратом ЩФ. До них відносять фосфоетаноламін, пірофосфат, П-5-Ф і т. д. Захворювання викликане точковими мутаціями гена, що кодує синтез ферменту.
Підвищення активності ЛФ відбувається не тільки в умовах активного зростання кісткової тканини, але і при її руйнуванні - остеопорозі і подальшої остеомаляції. При важкому остеопорозі і остеомаляції активність ЛФ в сироватці крові може бути нормальною або слабо підвищеної (в 2-3 рази). Остеомаляція, верифіковані гістологічно, може протікати при нормальній активності ЛФ.
Активність ЛФ в сироватці крові може бути підвищена при остеоміодістрофіі, що розвивається як ускладнення тривалого гемодіалізу. При введенні циклоспорину після трансплантації підвищена активність ЛФ в більшій мірі залежить від токсичного впливу препарату на гепатоцити і в меншій мірі пов'язана з патологією остеобластів. У пацієнтів з гіперпаратиреозом активність ЛФ сироватки крові звичайно в межах норми, але при розвитку остеопорозу, особливо остеонекроза, може бути значно збільшена.
Дослідження активності ЛФ виявляється корисним і в диференціальної діагностики внутрішньо-і внепеченочного холестазу. У разі екстрагепатобіліарной обструкції при каменях жовчного протоку і жовчного міхура, а також при новоутвореннях в цих органах активність ЛФ підвищується в 10 разів і більше. Внутрішньопечінкових обструкція жовчних шляхів при гепатиті також супроводжується підвищенням активності ЛФ, але ступінь гіперферментемії не перевищує 2-3-кратного значення. Гострі некротичні зміни гепатоцитів можуть не супроводжуватися підвищенням активності ЛФ до тих пір, поки в патологічний процес не будуть залучені жовчні канальці і не відбудеться затримка жовчовиділення. У той же час далеко не у всіх випадках ураження паренхіми печінки існує чітка кореляційна залежність між активністю ЛФ сироватки крові та вмістом у ній білірубіну. На початку розвитку внутрішньопечінкового холестазу збільшення активності ЛФ може бути наслідком підвищення синтезу білка в гепатоцитах; подальше підвищення активності лужної фосфатази у сироватці крові, особливо у формі макро-ЩФ, пов'язане з порушенням цілісності клітин жовчних канальців.
4. Ензимотерапія
Ензимотерапія, тобто використання ферментів і модуляторів (активаторів та інгібіторів) дії ферментів як лікарських засобів. До цих пір роботи в цьому напрямку майже не виходять за рамки експерименту. Виняток становлять деякі протеїнази: пепсин, трипсин, хімотрипсин і їх суміші (абомін, хімопсін), які застосовують для лікування ряду хвороб травного тракту. Крім протеїназ, ряд інших ферментів, зокрема РНКаза, ДНКаза, гіалуронідаза, колагенази, еластази, окремо або в суміші з протеиназа використовуються при опіках, для обробки ран, запальних вогнищ, усунення набряків, гематом, келоїдних рубців, кавернозних процесів при туберкульозі легень і ін Ферменти застосовуються також для лікування серцево-судинних захворювань, розчинення згустків крові. У нашій країні розроблено перший у світі препарат иммобилизованной стрептокінази, рекомендований для лікування інфаркту міокарда. Калікреїн-ферменти кінінової системи використовуються для зниження кров'яного тиску.
Важливою і багатообіцяючою областю ензимотерапії є застосування інгібіторів ферментів. Так, природні інгібітори протеїназ (α 1-трипсин, α 2-хімотрипсин, α-макроглобулін) знайшли застосування в терапії гострих панкреатитів, артритів, алергійних захворювань, при яких відзначається активація протеолізу та фібринолізу, що супроводжується утворенням вазоактивних кінінів.
Останнім часом набуло визнання застосування в онкологічній клініці ферментів бактеріальної природи в якості лікарських засобів.
Висновок
Специфічну сферу застосування ферментів у медицині становить Ензимодіагностика. Деякі ферменти, проферменту та їх субстрати в нормі циркулюють в крові. У крові присутні також нефункціональні ферменти, концентрація яких у плазмі на декілька порядків нижче, ніж у тканинах і органах. Поява цих ферментів у плазмі у підвищених концентраціях, як правило, пов'язані з патологією. Зазвичай захворювання того або іншого органу, що супроводжується руйнуванням його клітин, призводить до виходу з них ферментів в плазму крові, в якій і тестується збільшення ферментативної активності. Так, підвищення активності фруктозо-1 ,6-діфосфатальдолази в сироватці крові спостерігається при інфекційному гепатиті, раку печінки та інфаркті міокарда. Симптомом м'язової дистрофії є підвищення в плазмі крові активності креатинкінази-найважливішого ферменту, що забезпечує освіту необхідного для підтримки м'язової діяльності.
Відомо, що активність аспартатамінотрансферази (АСТ) зростає в сироватці крові при хворобах серця, а аланінамінотрансферази (АЛТ)-при хворобах печінки. Нерідко в Ензимодіагностика використовують аналіз співвідношення активності декількох ферментів. Так, при гострому гепатиті спостерігається підвищений співвідношення активності амілаза / ліпаза; при зловживанні алкоголем і пов'язаним з цим ризиком виникнення захворювань серця і печінки спостерігається співвідношення активності АСТ / АЛТ, що перевищує 2.
Широко використовується в Ензимодіагностика аналіз множинних форм (ізозімов) ферментів. Наприклад, при інфаркті міокарда в крові різко зростає активність бистромігріруюшіх при електрофорезі (анодних) форм лактатдегідрогенази, а при інфекційному гепатиті, навпаки, зростає активність катодних ізозімов цього ферменту.
Крім лактатдегідрогенази, на практиці використовується аналіз ізоферментів кислої фосфатази (при раку передміхурової залози), лужної фосфатази (хвороби кісток, рахіт і ін), креатинкінази (хвороби серця). У тестуванні ракових захворювань використовуються ізоферменти гексокінази (за їх співвідношенню вдається навіть визначити стадію розвитку ракового ураження при гепатома Морріса), піруваткінази (пухлини печінки, мозку і рабдосаркома), альдолази (пухлини мозку і печінки), фосфофруктокінази (гепатоми), енолази (рак мозку ), лактатдегідрогенази (пухлини шлунка, щитовидної залози, нирок, яєчників, матки, молочної залози).
Для інтерпретації отриманих результатів дослідження важливо знати нормальні величини активності досліджуваного ферменту. Крім того, іноді необхідно враховувати вік, стать, характер харчування, інтенсивність фізичного навантаження. Сироваткові ферменти можуть значно змінювати свою активність під впливом лікарських препаратів, ряду речовин (наприклад, алкоголю).
Таким чином, області застосування ферментів у медицині дійсно безмежні. Розглянуті приклади ясно показують, які чудові і багатообіцяючі перспективи вже сьогодні відкриває перед майбутніми лікарями медична ензимологія.
Список літератури
1. Березів Т.Т., Коровкін Б.Ф. Біологічна хімія: Підручник.-3-е изд., Перераб. і до .- М.: Медицина, 2004.-704с.: іл .- (Учеб. літ. Для студентів мед. вузів).
2.Біохімія: Підручник / За ред. Є.С. Северина .- 4-е вид., Испр .- М.: ГЕОТАР - Медіа, 2006.-784с.: Іл.
3.Біохіміческій основи життєдіяльності людини: навч. посібник для студентів / [Ю.Б. Пилипович, А.С. Конічев, Г.А. Севастьянова, Н.М. Кутузова] .- М.: Гуманит. вид. центр ВЛАДОС, 2005 .- 407С.: іл.
4.І.М.Рослий, С. В. Абрамов, В.І. Покровський. Ферментемии-адаптивний механізм або маркер цитолізу? / Вісник Російської Академії Медичних наук.М.: Медицина, 2002р. № 8.с3-8.
5.Клініческая біохімія: навчальний посібник / під ред. В.А.Ткачука-3-е вид., Ісп. і доп .- М.: ГЕОТАР-Медіа, 2008.-264с.: илл.
6.Клініческая ферментологія. Під ред. проф. д-ра Е. Щекліка. Польське державне медичне видавництво. Варшава 1966г.492с.
7. Нейрохімія. Підручник для біологічних і медичних вузів під ред. акад. РАМН І.П. Ашмаріна і проф. П.В. Стукалова. Москва: Видавництво Інституту біомедичної хімії РАМН. 1996 р. з. 401-406.
8.Циганенко А.Я., В.І.
Жуков, В.В. Мясоєдов, І.В. Завгородній. Клінічна біохімія (Навчальний посібник для студентів медичних вузів) - М.: Тріада-2002, 504с.
ГГТ займає важливе місце у метаболізмі амінокислот. Комплекс біохімічних реакцій реабсорбції амінокислот з первинної сечі, профільтрованої фільтраційний бар'єр ниркових тілець, названий глутаміловим циклом. Цей процес починається з дії ГГТ, яка розташована на зовнішній поверхні клітинної мембрани і пов'язує амінокислоту первинної сечі з клітиною епітелію канальців за участю природного субстрату глутатіону, утворюючи потрійний комплекс: амінокислота-ГГТ-глутатіон. Відзначено інгібування реакції високими концентраціями субстратів. Як наслідок скріплення двох субстратів в активному центрі ферменту відбувається перенесення глутаміловой кислоти від глутатіону до амінокислоті. У цій фазі циклу амінокислоту переносять у клітку, де відбуваються наступні реакції, в яких глутаміловая цикло-трансфераза розщеплює зв'язок між аміно-і глутаміловой кислотою, споживаючи молекулу АТФ. Присутність ГГТ на мембрані клітин інших органів (тонка кишка, хоріоідальною сплетіння і ін) дає підставу припустити, що і в цих органах фермент бере участь у транспорті амінокислот. Роль ГГТ печінки повністю не з'ясована; імовірно фермент пов'язує молекули речовин, які необхідно екскретуватися.
Біологічна роль ферменту пов'язана також з регулюванням рівня глутатіону в тканинах. Саме цим можна пояснити високий рівень глутатіону в плазмі крові і сечі пацієнтів з генетично детермінованим відсутністю синтезу ГГТ. Регулюючи рівень глутатіону, ГГТ може впливати на синтез білка, що пояснює підвищену питому активність ферменту в тканинах з високою швидкістю метаболізму. Це ж може бути причиною підвищеного рівня ферменту в тканинах і крові новонароджених.
ГГТ міститься в основному в мембрані клітин, що володіють високою секреторною або адсорбційну здатність: епітеліальних клітинах, що вистилають жовчні шляхи, печінкових канальцях, проксимальних канальцях нефрона, панкреатичної екзокринної тканини і вивідних протоках, ворсинчастий клітинах тонкої кишки. У порядку зниження питомої активності ГГТ тканини розташовуються в такій послідовності: нирки, печінка, підшлункова залоза, Щіткова облямівка клітин тонкої кишки. Активність ГГТ не виявлена в скелетних м'язах та міокарді.
Клінічне значення визначення концентрації ГГТ у сироватці крові
Найбільш часта причина підвищення активності ГГТ у сироватці крові - патологія печінки. Слабке токсичну дію на печінку, що викликає жирову інфільтрацію, прийом алкоголю і лікарських препаратів супроводжуються помірним збільшенням активності ГГТ. Більш виражене підвищення активності ферменту пов'язано з позапечінкові і внутрішньопечінкової обструкцією, вторинним залученням печінки в онкологічні процеси організму шляхом метастазування. Найвища активність ГГТ у сироватці крові відмічена при закупорці жовчної протоки або злоякісних пухлинах, прямо або опосередковано вражаючих печінку.
При відсутності жовтяниці визначення ГГТ - чутливий тест для виявлення патології печінки; клінічна чутливість вище, ніж у таких ферментів, як ЩФ і 5-нуклеотидази. При онкологічних захворюваннях нормальна активність ГГТ у сироватці крові свідчить про відсутність метастазів у печінці, тоді як висока активність ГГТ (у 12 разів і більше вище норми) служить індикатором ураження печінки метастазами. При гострому вірусному гепатиті багаторазове дослідження активності ГГТ дозволяє стежити за перебігом хвороби: постійно збільшена активність ГГТ вказує на розвиток хронічної форми захворювання. При збільшенні активності ЛФ і труднощі визначення її ізоферментів корисно визначати активність ГГТ для ідентифікації можливого джерела гіперферментемії: активність ГГТ залишається в межах норми, якщо збільшення активності ЛФ викликано кістковим ізоферментом, і збільшена, коли фермент утворюється в печінці. У педіатрії визначення активності ГГТ краще, ніж визначення ЩФ, так як активність ГГТ не змінюється з віком і отримані результати легше інтерпретувати.
Висока активність ГГТ присутній в крові людей, що зловживають алкоголем. У 74% алкоголіків, які страждають гістологічно підтвердженим ураженням печінки, збільшення активності ГГТ було постійним навіть у періоди абстиненції. Існують певні відмінності між активністю ГГТ в крові алкоголіка і людини, що прийняла значну дозу алкоголю. У перших настає збільшення активності ГГТ до 140% від нормальних значень з піком активності через 18 год, у других навіть після важкого сп'яніння збільшення активності ГГТ не перевищує 15% протягом 12 год
Розвиток інфаркту міокарда супроводжується змінами активності ферментів сироватки крові (КК, ЛДГ, ACT) і ГГТ, активність якої після нападу стенокардії залишається підвищеною протягом тривалого часу. Підвищення активності ГГТ відмічено у 50% хворих на стенокардію і у частини пацієнтів з іншими захворюваннями (коронарна недостатність, недостатність кровообігу). При інфаркті міокарда залишаються неясними механізми збільшення активності ГГТ, оскільки вона відсутня у серцевому м'язі.
Активність ГГТ в сечі вищі, ніж у сироватці крові. Присутня в сечі ГГТ має ниркове походження: фермент виділяється в сечу із зруйнованих клітин проксимальних відділів канальців, які містять ГГТ у високій концентрації.
3.5.Креатінкіназа (КК)
Креатинкінази-АТФ: креатин-1 ,4-фосфотрансфераз (КФ 2.7.3.2) - каталізує оборотний перенесення фосфатного залишку між АТФ і креатин з утворенням АДФ і креатинфосфату. Загальноприйнято скорочена назва ферменту - креатинкінази (КК). КК - цитозольний і мітохондріальний фермент, який функціонує в клітинах багатьох тканин. Продукт реакції фосфокреатин - макроергічних сполук, що забезпечує енергією скорочення м'язи, її розслаблення і транспорт метаболітів у миоцит. У перший час активність КК у крові цікавила клінічних хіміків як тест для виявлення ураження поперечнополосатой мускулатури. В даний час активність КК - провідний тест в діагностиці інфаркту міокарда.
Найбільший вміст КК зазначено в міокарді і скелетних м'язах, високий вміст - у мові, м'язі діафрагми, низьке - в нирках, легенів, печінки. КК - димер; в цитозолі клітин тканин людини присутні 2 субодиниці: М - м'язовий тип і В - мозковий тип. Субодиниці представляють собою білки з молекулярною масою 41кДа з активним центром у кожної субодиниці. Відповідно двома формами субодиниць димерной форма молекули КК має такі варіанти: м'язовий тип КК-ММ, гібридний димер КК-МВ, характерний для міокарда, і ізофермент КК-ВВ, локалізований переважно в мозковій тканині.
Активність ферменту і розподіл його ізоферментів органоспеціфічни, тому ідентифікація та кількісне визначення ізоферментів КК у сироватці крові не тільки корисно для встановлення збільшення проникності мембран або пошкодження специфічного органу, але й дає можливість встановлення діагнозу, спостереження клінічного перебігу та оцінки прогнозу захворювання. В електричному полі найбільшою рухливістю володіє КК-ВВ, найменшою - КК-ММ, гібридна форма КК-МВ займає проміжне становище. Відповідно до цього в класифікації Міжнародного союзу теоретичної та прикладної хімії КК-ВВ позначена ізоферментом I КК, КК-МВ - II, КК-ММ - III. Для розуміння джерел появи в крові активності КК-МВ слід зазначити, що у плода до 16-тижневого віку в м'язовій тканині домінує зародкова форма КК, а саме КК-МВ, яка пізніше заміщається КК-ММ. Певна перебудова ізоферментного складу КК відбувається і при гіпертрофії міокарда: підвищується процентний вміст КК-МВ та КК-ВВ, а частка КК-ММ виявляється зниженою. Міоцити в умовах тривалої гіперфункції підвищують синтез ізоформи КК-ВВ.
Клінічне значення визначення активності КК та її ізоферментів.
Підвищення активності КК у крові може бути наслідком травми, переохолодження або перегрівання, голодування і бактеріальної інтоксикації, дегідратації, ураження електричним струмом. Підвищена активність КК-МВ відзначена при м'язової дистрофії різної етіології, ішемічному рабдоміолізі з міоглобінурією, отруєння чадним газом. Активність КК-МВ підвищувалася, більш ніж на порядок перевищуючи норму, у хворих на гострий перикардитом.
Досвід застосування ізоферментному діагностики в блоці інтенсивної терапії показав, що підвищення в крові активності КК-МВ може відбуватися при вираженій недостатності кровообігу, катетеризації серця, набряку легень, аритміях, кардіогенному шоці, алкогольної інтоксикації, кровотечі з шлунково-кишкового тракту, травматичної епілепсії, травмі грудної клітки. Активність КК-МВ підвищена в крові пацієнтів при синдромі шоку, розвиненому при анемії, гіперкапнії, гіпоксемії, молочнокислом ацидозі, вираженої гіпотонії. Однак тільки в рідкісних випадках у зазначених ситуаціях активність КК-МВ на 6% перевищувала активність КК. Враховуючи можливості неспецифічного підвищення активності КК-МВ, треба пам'ятати і про можливість пропустити невеликий інфаркт міокарда. У хворих з гіпертрофією міокарда активність КК-МВ у період інфаркту може досягати 1 / 3 активності КК.
Підвищення активності КК у сироватці крові може бути обумовлено збільшенням активності ізоферменту КК-ММ. Активність КК-ММ в сироватці крові підвищується при прогресуючій м'язовій дистрофії, дерматомиозите, поліміозиті, інфаркті міокарда, гіпотиреозі, деяких захворюваннях нервової системи. Активність КК-ММ збільшується також після фізичного навантаження, внутрішньом'язових ін'єкцій, хірургічних операцій. При м'язової дистрофії типу Дюшенна (спадковому, пов'язаних зі статтю рецессивном захворюванні) активність КК-ММ збільшується в 8-90 разів у порівнянні з нормою, активність ізоферменту збільшена також у носіїв цього гена.
Активність КК-ВР у крові відзначали під час аортокоронарного шунтування. Вважають, що активність КК-ВВ може бути тестом аноксії тканин. Активність КК-ВР у крові може також бути наслідком гіпоксичного пошкодження мозку, особливо в умовах перинатальної гіпоксії. Активність КК-ВВ збільшена у 53% новонароджених з асфіксією. КК-ВВ присутній у гладкій мускулатурі, але не визначається в сироватці крові осіб з доброякісними захворюваннями цих тканин. Одним з можливих пояснень підвищення активності КК-ВР у крові при судинних операціях служить припущення, що стінки вен, як, втім, і аорти, містять тільки одну ізоформу КК, а саме КК-ВВ. Активність ізоферменту КК-ВВ може бути підвищена в крові при раку передміхурової залози, дрібноклітинному раку легені, аденокарцинома шлунка, лейкозах, хронічної ниркової недостатності, передозуванні міорелаксантів. Метастазування раку передміхурової залози супроводжується особливо високими цифрами активності КК-ВР у крові. Дослідники сходяться на думці, що активність КК-ВВ може бути використана як неспецифічний маркер пухлинного процесу.
У ряді випадків при інфаркті міокарда, а іноді і в його відсутність висока активність КК зберігається невизначено довго. Спостережувані явища обумовлені циркуляцією в крові незвичайних форм КК і її ізоферментів. Після поділу при ЕФ фракцій КК на електрофореграмме стають видимими смуги, що не відповідають положенню смуг КК-ММ, КК-МВ та КК-ВВ, і можна відзначити наявність ізоформ КК, що рухаються до катода, що з білків сироватки крові властиво імуноглобулінів. Відомо, що окиснення сульфгідрильних груп КК змінює електрофоретична рухливість молекул, проте при цьому вони як і раніше рухаються до аноду. У хворих метастатичним раком передміхурової залози виділено ізофермент КК, мігруючий між КК-МВ та КК-ВВ.
3.6. Лактатдегідрогеназа (ЛДГ)
Лактатдегідрогеназа (ЛДГ, L-лактат-НАД-оксидоредуктаз, КФ 1.1.1.27) - цінксодержашій фермент, каталізує оборотну реакцію відновлення піровиноградної кислоти на молочну кислоту за участю НАД-Н 2.
Фермент в кристалічній формі був отриманий з м'яза серця. Подібним же чином були отримані кристалічні ферментні препарати з скелетних м'язів і печінки. При рН 7,0 рівновагу реакції зміщена в бік утворення лактату, в лужному середовищі реакція проходить у зворотному напрямку. ЛДГ може також реагувати з НАДФ як кофермент, але значно повільніше, ніж з НАД.
ЛДГ - тетрамер, два локусу генів кодують синтез двох олігомерів - М-і Н-субодиниць. М-субодиниця синтезується головним чином в тканинах з анаеробним метаболізмом, в той час як Н-субодиниця присутня в тканинах з переважанням аеробних процесів. Молекулярна маса кожної субодиниці складає 35 кДа, кожного тетрамера - 140 кДа. Поліпептидний ланцюг обох субодиниць містить 330 амінокислотних залишків; відмінності в їх послідовності в субодиниця виявлені протягом більш ніж 25% довжини поліпептидного ланцюга. У тетрамерной структурі ЛДГ субодиниці пов'язані силами іонних і водневих взаємодій. На кожній субодиниці розташований каталітичний центр; дисоціація тетрамера на димери або мономери призводить до втрати ферментативної активності.
У цитоплазмі клітин та сироватці крові ЛДГ має 5 ізоферментів, що позначаються відповідно до їх рухливістю до анода в електричному полі: ЛДГ 1 (НННН), ЛДГ 2 (НННМ), ЛДГ 3, (ННММ), ЛДГ 4 (НМММ) і ЛДГ 5 (мммм). ЛДГ, бере участь в окисленні лактату в піруват в тканинах з аеробним типом метаболізму (міокард, мозок, нирки, еритроцити, тромбоцити). ЛДГ 5 оптимізована природою для перетворення пірувату в лактат у тканинах з високим рівнем гліколізу (скелетні м'язи, печінка). Не всі ізоферменти ЛДГ гомогенні: при електрофоретичному поділі ізоферментів ЛДГ сироватки та еритроцитів у поліакриламідному гелі виявлено розщеплення ЛДГ 3 на дві смуги, що дозволяє припустити синтез двох форм ЛДГ 3 в тканинах. Наявність молекулярних структур двох форм, підтверджене в реакції з антисироватки, пояснюють відмінностями просторового (цис і транс) розташування Н-субодиниць і М-субодиниць в тетрамер.
У тканинах людини активність ЛДГ на 1 г сухої маси зменшується в послідовності: нирки - скелетний м'яз - підшлункова залоза - селезінка - печінка - плацента. Ізоферменти ЛДГ, і ЛДГ 2 переважають в еритроцитах, лейкоцитах, міокарді, нирках, ЛДГ 4 і ЛДГ 5 - у печінці, скелетних м'язах, неопластичних тканинах, найбільш високий вміст ЛДГ 3 зазначають у лімфоїдної тканини, тромбоцитах і пухлинах.
Властивості ізоферментів ЛДГ визначені особливостями входять до них субодиниць. Ізоферментів ЛДГ притаманні різні кінетичні характеристики: рН, при якому вони проявляють максимальну активність, спорідненість до субстрату і кофакторів.
Клінічне значення визначення активності ЛДГ
Активність ЛДГ у сироватці крові підвищується при багатьох патологічних станах, тому для диференціальної діагностики захворювань більш доцільно дослідити зміни спектру ізоферментів ЛДГ. В даний час накопичено велику кількість даних про розподіл ізоферментів ЛДГ у тканинах і про зміну спектру ізоферментів ЛДГ у сироватці крові при різних захворюваннях. Ізоферментний спектр скелетної мускулатури показує переважання ЛДГ 5. При м'язової дистрофії відзначені збільшення більш рухливих ізоферментів ЛДГ і зниження активності ЛДГ 5, що характерно і для багатьох нейром'язових захворювань. Причиною зміни спектру ізоферментів може бути швидке видалення малорухомих ізоферментів з циркуляції. Активність ЛДГ 5 в сироватці крові - чутливий індикатор гепатоцелюлярного поразки, збільшення його активності зазвичай спостерігають при гепатиті, гіпоксії печінки (включаючи застій крові в печінці внаслідок серцевої недостатності), лікарської інтоксикації, цирозі, пухлинах і травмі. Активність ЛДГ у сироватці крові не підвищується при хронічних захворюваннях нирок і уремії, але іноді зростає після гемодіалізу або плазмаферезу, що може бути пояснено видаленням з крові інгібіторів (сечовина, оксалати).
Загальна активність ЛДГ при інфаркті міокарда найбільш значно підвищується протягом перших 2 діб після нападу стенокардії і до вихідного рівня знижується повільно, протягом 14-16 днів, епізодичне підвищення ЛДГ можна відзначити і в більш пізні терміни.
Активність ЛДГ схильна гормонального впливу. Великі дози тироксину знижували синтез ферменту, при цьому в більшій мірі зазначено інгібування синтезу субодиниці М. Норадреналін і адреналін викликають збільшення загальної активності ЛДГ з переважанням активності ЛДГ 1, і ЛДГ 2. Активність ферменту в крові зростає при дії анаболічних стероїдів і етанолу, а також ряду медикаментозних препаратів - клофібрату, кофеїну, сульфаніламідів та ін
Спектр ізоферментів ЛДГ може мінятися при неопластичних процесах. У таких випадках його важко інтерпретувати, тому що джерелом ізоферментів ЛДГ служить не тільки неопластичних тканину, але й тканини, руйновані метастазами. Однак ізоферментний спектр транссудату при пухлинному ураженні схожий з таким сироватки крові, тоді як в запальних ексудатах переважає активність ЛДГ 1 і ЛДГ 2. Для ЛДГ, як і для інших ферментів, при пухлинному процесі характерний синтез ізоферментів, властивих ембріональним тканинам. Недиференційовані ембріональні тканини мають спектр ізоферментів ЛДГ, в якому переважають ЛДГ 2 і ЛДГ 3, а також ЛДГ 4. У злоякісних пухлинах виявлено три види розподілу ізоферментів ЛДГ. Збільшення вмісту ЛДГ 4 і ЛДГ 5 виявлено при пухлинах передміхурової залози, матки, молочних залоз, шлунка, товстої кишки, сечового міхура та деяких типах пухлин мозку. У хворих на лейкоз, злоякісної лімфомою, нейробластомою, феохромоцитомою, а також при пухлинах порожнини рота, раку бронхів і деяких типах пухлин мозку збільшена активність ЛДГ 2, ЛДГ 3, ЛДГ 4. Збільшення активності ЛДГ, зазначено у сироватці крові хворих з деякими типами пухлин мозку та різними типами пухлин статевих органів.
Можливість підвищення активності ЛДГ, при пухлинному процесі слід враховувати при діагностиці інфаркту міокарда. Іноді при пухлинах мозку, раку пішевода, нейробластомі відзначають незвичайну додаткову смугу при ЕФ сироватки крові і тканини пухлини. Визначення спектру ізоферментів ЛДГ у сироватці крові при онкологічних захворюваннях корисно не тільки для діагностики, а й для контролю ефективності лікування. Виявлено, що нормалізація спектру ізоферментів ЛДГ корелює з успішністю відповіді хворого на лікування.
Наявність ускладнень при інфаркті міокарда та супутні захворювання можуть змінити спектр ЛДГ та активність ЛДГ. Виявлення спектру ізоферментів, характерного для інфаркту міокарда, можливо при застої крові в печінці та нирках внаслідок серцевої недостатності, при ішемічному ураженні деяких органів із-за різкого зниження серцевого викиду. При емболії легеневої артерії, яку у ряді випадків доводиться диференціювати з інфарктом міокарда, збільшення в крові активності ЛДГ 2 і ЛДГ 3 може бути пояснено виходом ферментів з тромбоцитів, патологією печінки, викликаної венозної гіпертензією, анемією коркового шару наднирників та нирок. Оскільки ці порушення не завжди вдається розрізнити, зміна спектру ізоферментів ЛДГ інтерпретувати непросто.
У сироватці крові тяжкохворих (як правило, в термінальному стані) методом ЕФ на ацетат целюлози виявляється додаткова смуга, ближча до катода, ніж ЛДГ 5, названа ЛДГ 6. У всіх спостереженнях в тканинах печінки, скелетних м'язах, нирці, селезінці і наднирниках а також присутністю ЛДГ 6; в ряді випадків поява цієї фракції носило транзиторний характер, ЛДГ 6 не виявлена в тканинах міокарда. Вважають, що немає нозологічної форми захворювання, для якої характерна ЛДГ 6, але є важкі клінічні стани, що зумовлюють її появу, до яких слід віднести виражений ацидоз, гіпотонію і сепсис.
3.7.Щелочная фосфатаза (ЛФ)
Лужна фосфатаза (ЛФ) - фосфогідролаза моноефіри орто-фосфорної кислоти (КФ 3.1.3.1) - гідролізує різні синтетичні субстрати при оптимумі рН, рівному 10,0; субстрат ферменту in vivo точно не відомий. ЩФ - глікопротеїн; за структурою це димер з здавалося значною варіацією молекулярної маси ферменту в різних тканинах. ЩФ - метало-фермент, до складу активного центру ферменту входить атом цинку. Вважають, що атом цинку підвищує активність ферменту, забезпечуючи конформаційні зміни і гідроліз моноефіри ортофосфорної кислоти. Кожен мономер ЩФ містить три металлосвязивающіх центру. Позбавлений іонів цинку фермент втрачає активність, але відновлює її після додавання металу. Активність ферменту зростає в присутності іонів магнію, для оптимальної активності необхідно певне співвідношення іонів магнію і цинку.
ЩФ присутня у всіх органах людини; найбільш висока питома активність ферменту виявлена в епітелії тонкої кишки, епітелії канальців нирок, остеобластів, гепатоцитах і плаценті-фермент щільно пов'язаний з клітинної мембраною гідрофобним карбоксильних кінцем поліпептидного ланцюга; гідрофобний кінець ланцюга ідентичний у всіх ізоферментів ЩФ. ЩФ прикріплена до плазматичної мембрани за допомогою фосфатидилинозитолгликанового якоря. Молекули ЩФ на поверхні плазматичної мембрани розташовуються нерівномірно.
Молекулярна маса ЩФ становить 130-220 кДа. Асоціація ЩФ з глікозаміногліканами (нейрамінової кислотою) може змінити не тільки молекулярну масу ферменту, але і заряд молекули та її рухливість в електричному полі. Ступінь глікозилювання ЩФ в тканинах може впливати на її термолабільність.
В організмі людини біосинтез ферменту кодують три гени: один - печінковий, кістковий і нирковий ізоферменти, інший - кишковий ізофермент і третій - плацентарну ЩФ. Вважають, що існує і 4-й ген, який кодує синтез зародкової ЩФ. Остання локалізована в тонкій кишці плоду приблизно до 30 тижнів вагітності. Ембріональні і зрілі форми ЩФ подібні за каталітичної активності. Виділення ЩФ з тканини печінки за допомогою фосфатидилинозитолспецифической фосфоліпази призводить до утворення форм, схожих з присутніми в сироватці крові. Ці дані дозволяють вважати, що форми ЩФ сироватки крові утворюються шляхом ферментативного гідролізу тканинних форм.
Клінічне значення визначення активності ЛФ.
Підвищення активності лужної фосфатази у сироватці крові не завжди дозволяє з достатнім ступенем достовірності скласти уявлення про органотопіческой патології.
У клінічній біохімії активність ЛФ найбільш часто використовують в діагностиці патології гепатобіліарної системи та кісткової тканини. Активність ЛФ сироватки крові часто підвищена при обструктивних захворюваннях печінки, холестаз, гепатит, явищах гепатотоксичності, хвороби Педжета, остеомаляції, новоутвореннях, які втягли в патологічний процес печінка і кісткову тканину.
Низька або навіть невизначуване активність ЛФ відзначена при гепатолентикулярной дегенерації. Механізм цього феномена неясний, припускають, що іон міді конкурує з цинком за місце в активному центрі лужної фосфатази, що веде до різкого падіння активності ферменту. Застосування гіполіпідемічних препаратів, зокрема клофібрату, також інгібує фермент.
У недоношених дітей з метою ранньої діагностики рахіту рекомендовано визначати активність ЛФ.
Дослідження активності ЛФ у хворих з синдромом гіпофосфатазіі вказує на важливу роль ЩФ у мінералізації кісткової тканини. Синдром гіпофосфатазіі - вроджене захворювання кісткової тканини, що характеризується виборчої недостатністю синтезу ЩФ. У пацієнтів з подібною патологією в тканинах та сироватці крові значно знижена активність печінкового, кісткового та ниркового ізоферментів ЩФ при нормальній активності плацентарного і кишкового ізоферментів. Інша особливість захворювання - накопичення в крові та сечі фосфоровмісних комплексів, службовців ендогенним субстратом ЩФ. До них відносять фосфоетаноламін, пірофосфат, П-5-Ф і т. д. Захворювання викликане точковими мутаціями гена, що кодує синтез ферменту.
Підвищення активності ЛФ відбувається не тільки в умовах активного зростання кісткової тканини, але і при її руйнуванні - остеопорозі і подальшої остеомаляції. При важкому остеопорозі і остеомаляції активність ЛФ в сироватці крові може бути нормальною або слабо підвищеної (в 2-3 рази). Остеомаляція, верифіковані гістологічно, може протікати при нормальній активності ЛФ.
Активність ЛФ в сироватці крові може бути підвищена при остеоміодістрофіі, що розвивається як ускладнення тривалого гемодіалізу. При введенні циклоспорину після трансплантації підвищена активність ЛФ в більшій мірі залежить від токсичного впливу препарату на гепатоцити і в меншій мірі пов'язана з патологією остеобластів. У пацієнтів з гіперпаратиреозом активність ЛФ сироватки крові звичайно в межах норми, але при розвитку остеопорозу, особливо остеонекроза, може бути значно збільшена.
Дослідження активності ЛФ виявляється корисним і в диференціальної діагностики внутрішньо-і внепеченочного холестазу. У разі екстрагепатобіліарной обструкції при каменях жовчного протоку і жовчного міхура, а також при новоутвореннях в цих органах активність ЛФ підвищується в 10 разів і більше. Внутрішньопечінкових обструкція жовчних шляхів при гепатиті також супроводжується підвищенням активності ЛФ, але ступінь гіперферментемії не перевищує 2-3-кратного значення. Гострі некротичні зміни гепатоцитів можуть не супроводжуватися підвищенням активності ЛФ до тих пір, поки в патологічний процес не будуть залучені жовчні канальці і не відбудеться затримка жовчовиділення. У той же час далеко не у всіх випадках ураження паренхіми печінки існує чітка кореляційна залежність між активністю ЛФ сироватки крові та вмістом у ній білірубіну. На початку розвитку внутрішньопечінкового холестазу збільшення активності ЛФ може бути наслідком підвищення синтезу білка в гепатоцитах; подальше підвищення активності лужної фосфатази у сироватці крові, особливо у формі макро-ЩФ, пов'язане з порушенням цілісності клітин жовчних канальців.
4. Ензимотерапія
Ензимотерапія, тобто використання ферментів і модуляторів (активаторів та інгібіторів) дії ферментів як лікарських засобів. До цих пір роботи в цьому напрямку майже не виходять за рамки експерименту. Виняток становлять деякі протеїнази: пепсин, трипсин, хімотрипсин і їх суміші (абомін, хімопсін), які застосовують для лікування ряду хвороб травного тракту. Крім протеїназ, ряд інших ферментів, зокрема РНКаза, ДНКаза, гіалуронідаза, колагенази, еластази, окремо або в суміші з протеиназа використовуються при опіках, для обробки ран, запальних вогнищ, усунення набряків, гематом, келоїдних рубців, кавернозних процесів при туберкульозі легень і ін Ферменти застосовуються також для лікування серцево-судинних захворювань, розчинення згустків крові. У нашій країні розроблено перший у світі препарат иммобилизованной стрептокінази, рекомендований для лікування інфаркту міокарда. Калікреїн-ферменти кінінової системи використовуються для зниження кров'яного тиску.
Важливою і багатообіцяючою областю ензимотерапії є застосування інгібіторів ферментів. Так, природні інгібітори протеїназ (α 1-трипсин, α 2-хімотрипсин, α-макроглобулін) знайшли застосування в терапії гострих панкреатитів, артритів, алергійних захворювань, при яких відзначається активація протеолізу та фібринолізу, що супроводжується утворенням вазоактивних кінінів.
Останнім часом набуло визнання застосування в онкологічній клініці ферментів бактеріальної природи в якості лікарських засобів.
Висновок
Специфічну сферу застосування ферментів у медицині становить Ензимодіагностика. Деякі ферменти, проферменту та їх субстрати в нормі циркулюють в крові. У крові присутні також нефункціональні ферменти, концентрація яких у плазмі на декілька порядків нижче, ніж у тканинах і органах. Поява цих ферментів у плазмі у підвищених концентраціях, як правило, пов'язані з патологією. Зазвичай захворювання того або іншого органу, що супроводжується руйнуванням його клітин, призводить до виходу з них ферментів в плазму крові, в якій і тестується збільшення ферментативної активності. Так, підвищення активності фруктозо-1 ,6-діфосфатальдолази в сироватці крові спостерігається при інфекційному гепатиті, раку печінки та інфаркті міокарда. Симптомом м'язової дистрофії є підвищення в плазмі крові активності креатинкінази-найважливішого ферменту, що забезпечує освіту необхідного для підтримки м'язової діяльності.
Відомо, що активність аспартатамінотрансферази (АСТ) зростає в сироватці крові при хворобах серця, а аланінамінотрансферази (АЛТ)-при хворобах печінки. Нерідко в Ензимодіагностика використовують аналіз співвідношення активності декількох ферментів. Так, при гострому гепатиті спостерігається підвищений співвідношення активності амілаза / ліпаза; при зловживанні алкоголем і пов'язаним з цим ризиком виникнення захворювань серця і печінки спостерігається співвідношення активності АСТ / АЛТ, що перевищує 2.
Широко використовується в Ензимодіагностика аналіз множинних форм (ізозімов) ферментів. Наприклад, при інфаркті міокарда в крові різко зростає активність бистромігріруюшіх при електрофорезі (анодних) форм лактатдегідрогенази, а при інфекційному гепатиті, навпаки, зростає активність катодних ізозімов цього ферменту.
Крім лактатдегідрогенази, на практиці використовується аналіз ізоферментів кислої фосфатази (при раку передміхурової залози), лужної фосфатази (хвороби кісток, рахіт і ін), креатинкінази (хвороби серця). У тестуванні ракових захворювань використовуються ізоферменти гексокінази (за їх співвідношенню вдається навіть визначити стадію розвитку ракового ураження при гепатома Морріса), піруваткінази (пухлини печінки, мозку і рабдосаркома), альдолази (пухлини мозку і печінки), фосфофруктокінази (гепатоми), енолази (рак мозку ), лактатдегідрогенази (пухлини шлунка, щитовидної залози, нирок, яєчників, матки, молочної залози).
Для інтерпретації отриманих результатів дослідження важливо знати нормальні величини активності досліджуваного ферменту. Крім того, іноді необхідно враховувати вік, стать, характер харчування, інтенсивність фізичного навантаження. Сироваткові ферменти можуть значно змінювати свою активність під впливом лікарських препаратів, ряду речовин (наприклад, алкоголю).
Таким чином, області застосування ферментів у медицині дійсно безмежні. Розглянуті приклади ясно показують, які чудові і багатообіцяючі перспективи вже сьогодні відкриває перед майбутніми лікарями медична ензимологія.
Список літератури
1. Березів Т.Т., Коровкін Б.Ф. Біологічна хімія: Підручник.-3-е изд., Перераб. і до .- М.: Медицина, 2004.-704с.: іл .- (Учеб. літ. Для студентів мед. вузів).
2.Біохімія: Підручник / За ред. Є.С. Северина .- 4-е вид., Испр .- М.: ГЕОТАР - Медіа, 2006.-784с.: Іл.
3.Біохіміческій основи життєдіяльності людини: навч. посібник для студентів / [Ю.Б. Пилипович, А.С. Конічев, Г.А. Севастьянова, Н.М. Кутузова] .- М.: Гуманит. вид. центр ВЛАДОС, 2005 .- 407С.: іл.
4.І.М.Рослий, С. В. Абрамов, В.І. Покровський. Ферментемии-адаптивний механізм або маркер цитолізу? / Вісник Російської Академії Медичних наук.М.: Медицина, 2002р. № 8.с3-8.
5.Клініческая біохімія: навчальний посібник / під ред. В.А.Ткачука-3-е вид., Ісп. і доп .- М.: ГЕОТАР-Медіа, 2008.-264с.: илл.
6.Клініческая ферментологія. Під ред. проф. д-ра Е. Щекліка. Польське державне медичне видавництво. Варшава 1966г.492с.
7. Нейрохімія. Підручник для біологічних і медичних вузів під ред. акад. РАМН І.П. Ашмаріна і проф. П.В. Стукалова. Москва: Видавництво Інституту біомедичної хімії РАМН. 1996 р. з. 401-406.
8.Циганенко А.Я., В.І.
Жуков, В.В. Мясоєдов, І.В. Завгородній. Клінічна біохімія (Навчальний посібник для студентів медичних вузів) - М.: Тріада-2002, 504с.