Для лізину, гістидину, тирозину, серину, треоніну та цистеїну поряд з моно-похідними було характерне утворення ді-Z-(Dns)-похідних: ді-Z, (Dns)-лізину, ді-Z, (Dns)-гістидину, О, N-ді-Z, (Dns5)-тирозину, О, N-ді-Z, (Dns)-Сері, O, N-AH-Z, (Dns)-Tpeoніна та N, S-ді-Z, (Dns)-цистеїну (на схемі ці проізодние не показані). Крім цього, з аргініну синтезувався три-Z, (Dns)-аргінін.

Летючість Dns-і Z-похідних амінокислот при мас-спектрометричного аналізу підвищували за рахунок додаткової деріватізаціі по карбоксильної групи (етерифікації) діазометаном. Вибір діазометана в якості етеріфіцірующего реагенту був пов'язаний з необхідністю проведення реакції в м'яких умовах, що виключають зворотний ізотопний (HD-обмін в ароматичних амінокислотах. При використанні діазометана відбувалося додаткове N-метилювання по a-NH _2-rpynne амінокислот, в результаті чого в мас- спектрах метилових похідних амінокислот фіксувалися додаткові піки, відповідні з'єднанням з молекулярною масою на 14 масових одиниць більше вихідних.
Дослідження ступенів включення дейтерію в молекулу L-фенілаланіну В. methylicum, отриманого з середовищ з важкою водою. Як видно з даних таблиці 2, зростання даного штаму метилотрофних бактерій на середовищах із зростаючими концентраціями важкої води супроводжувався зниженням рівнів накопичення клітинної біомаси, збільшенням часу генерації бактерій і тривалості лаг-фази при збереженні здатності синтезувати і накопичувати L-фенілаланін в ростовий середовищі. Тому було цікаво вивчити, як змінюються ступеня включення дейтерію в молекулу L-фенілаланіну та інших амінокислот В. methylicum в цих умовах.
У всіх дослідах спостерігалося специфічне зростання рівнів ізотопного включення дейтерію в молекули амінокислот при ступінчастому збільшенні концентрацій важкої води в ростовий середовищі (табл. 5). Так, для індивідуальних амінокислот культуральної рідини В. melhylicum, кількість включених атомів дейтерію по скелету молекул варіює в межах 49%-ної концентрації D ₂ O і становить для Phe 27,5%, Ala - 37,5%, Val - 46,3 %, Leu / Ile - 47% (табл. 5). Аналогічне збільшення молекулярної маси амінокислот в залежності від концентрації важкої води в середовищі було зафіксовано у всіх експериментах.
Таблиця 5.
Ступені включення дейтерію-і ізотопу вуглецю ¹³ С в молекули секретується амінокислот В. melhylicum * і M. Flagellation **.

Амінокислоти	Зміст: Н 2 О в середовищі, про% 24,5 49,0 73,5 98,0				13 СН 3 ОН 1%
Gly	-	•	-	-	60,0
Ala	24,0	37,5	62,5	77,5	35,0
Val	20,0	46,3	43,8	58,8	50,0
Leu / Ile	15,0	47,0	46,0	51,0	38,0
Phe	15,0	27,5	51,3	75,0	95,0

* Дані по включенню дейтерію в амінокислоти наведені для В. methyticum при зростанні на середовищах, що містять 2 об.% СН ₃ ОН і 24,5; 49,5; 73,5; 98,0 об.% D ₂ O. "Дані по включенню ¹³ С наведені для М. flagellatum   при зростанні на середовищі, що містить 1 об.% ¹³ СН ₃ ОН і 99 об.% Н ₂ О.
Дослідження ступенів включення дейтерію в супутні амінокислоти В. meihylicum на середовищах з важкою водою. У мас-спектрах всіх досліджуваних зразків культуральної рідини Б. melhylicum крім основної секретируемой амінокислоти (фенілаланін) були виявлені домішки, метаболічно з нею пов'язаних аланіну, валіну та лейцину / ізолейцин {на рівні 3-5 мМ). У досвіді, де концентрація важкої води в середовищі склала 49 об.% (Таблиця 5, досвід 5), ізотопний склад фснілаланіна характеризувався збільшенням молекулярної маси на 4,1 одиницю, аланіну на 2,5 одиниці, валіну - 3,5 одиниці, а лейцину / ізолейцин - на 4,6 одиниць. Таким чином, на відміну від фенілаланіну, кількість включеного дейтерію в останніх трьох амінокислотах зберігає стабільне сталість у досить широкому інтервалі концентрацій екзогенної важкої води (від 49 об.% До 98 об.%).
У зв'язку з тим, що штам - продуцент фенілалапіна В. methylicum був ауксотрофом по лейцину, цю амінокислоту у немічених вигляді додавали в ростовую середу, що містить 98 об.% важкої води. Як показали наші дослідження по включенню дейтерію до молекули екзогенних амінокислот, в умовах ауксотрофності по лейцину ступінь ізотопного збагачення лейцину, а також метаболічно пов'язаних з ним амінокислот трохи нижче, ніж для інших амінокислот. Так, при зростанні В. methylicum на середовищі, що містить 98 об.% важкої води і немічених L-Leu, ступеня включення дейтерію в Leu склали 51,0%, Ala -77,5%, Val - 58,8% (табл. 5). Підсумовуючи отримані дані, можна зробити висновок про збереження мінорних шляхів метаболізму, пов'язаних з біосинтезом лейцину de novo. Іншим логічним поясненням спостережуваного ефекту може бути асиміляція клітиною немічених лейцину з середи на тлі біосинтезу міченого изолейцина de novo.
Дослідження ступенів включення дейтерію в L - Phe В. methylicum в максимально дейтерированного середовищі. Ми припустили, що за рахунок ауксотрофності штаму В. methylicum по лейцину, рівні включення дейтерію в секретіруемиі фенілаланін на тлі максимальних концентрацій важкої води можуть бути нижче теоретично допустимих внаслідок функціонування в клітині ряду біохімічних реакцій, пов'язаних з асиміляцією протоновану лейцину ззовні. Як ми і очікували, зазначена особливість найкраще виявлялася при біосинтезі фенілаланіну на дейтерированного середовищі, в якій єдиним протоновані з'єднанням, крім метанолу, був лейцин (див. табл. 5, досвід 9). У цьому досвіді ступінь дейтерірованності L-фенілаланіну склала 75%, тобто тільки шість атомів (з восьми в вуглецевому кістяку) в молекулі "фенілаланіну біосинтетичних заміщені на дейтерій. Згідно з даними мас-спектрометричного аналізу, атоми дейтерію розподілені по положеннях З _{1-З 6} ароматичної частини фенілаланіну і суміжні положенню b, причому, як мініум чотири з них можуть бути локалізовані в самому бензольному кільці молекули фенілаланіну. Результат по отриманню L-Phe з даними характером включення мітки дуже важливий для біотехнологічного використання і має суттєві переваги по-порівнянні з хімічним (Н-D)-обміном (Griffiths D. V., 1986).
Дослідження ступеня включення дейтерію в молекулу фенілаланіну за рахунок конверсії дейтерометанола CD ₃ OD у В. methylicum.
Контроль за включенням дейтерію в молекулу L-Phe за рахунок конверсії дейтерометанола CD ₃ OD при зростанні бактерій на середовищі, що містить звичайну воду і 2 об.% Дейтерометанол CD ₃ OD (відповідають досвіду 2, табл. 1) показав незначне кількість дейтерію, яке надходить в молекулу L-фенілаланіну разом з вуглецем CD ₃ OD, Відсоток дейтерірованія фенілаланіну був обчислений за величиною піка з m / z 413 за вирахуванням вкладу піку домішки природного ізотопу (не більше 4%). Отриманий результат може бути пояснений розбавленням дейтерієво мітки за рахунок протікання як біохімічних процесів, пов'язаних з розпадом дейтерометанола CD ₃ OD при його асиміляції клітиною, так і реакціями ізотопного обміну і дисоціації у важкій воді. Так, із чотирьох атомів дейтерію, наявних у молекулі СDзOD, лише один атом дейтерію при гідроксильної групи-OD самий рухливий і тому легко дисоціює у водному середовищі з утворенням СDзОН. Три залишилися атома дейтерію в складі СDзОН входять до циклу ферментативного окислення метанолу, який, у свою чергу, міг призвести до втрати дейтерієво мітки за рахунок утворення сполук більш окислених, ніж метанол. Зокрема, таке включення дейтерію в молекулу L-фенілаланіну підтверджує класичну схему ферментативного окислення метанолу до формальдегіду в клітинах метілотрофов, який лише після цього асимілюється у даного штаму метилотрофних бактерій РМФ-шляхом фіксації вуглецю (Nesvera J., 1991).
Дослідження ступенів включення ізотопу вуглецю ¹³ С в молекули екзогенних амінокислот М. flagellatum за рахунок біоконверсії ¹³ СНзОН.
Наші дослідження підтвердили, що для отримання ^{| 3} С-амінокислот за рахунок мікробної конверсії ¹³ СНзОН попередня адаптація не є лімітуючим етапом, оскільки цей., Субстрат не робить негативного біостатичні ефекту на ростові та біосинтетичні характеристики метілотрофов. При зростанні М. flagellatum на середовищі, що містить 99 об.% воду і 1 об.% ^{| 3} СНзОН клітина продукує лейцин, a також гліцин, фланін, валін і фенілаланін. Як видно з таблиці 5, рівні ізотопного включення ^{| 3} С у Gly, Ala, Val та Phe становлять 60, 35, 50 і 95% відповідно. При цьому низька ступінь включення ізотопу вуглецю ^{| 3} С у метаболічно пов'язані з ізолейцин амінокислоти обумовлена ​​ефектом ауксотрофіості бактерій в ізолейцин, який додавали в ростовую середу в немічених вигляді.
4. ВИВЧЕННЯ СТУПЕНІВ ВКЛЮЧЕННЯ ІЗОТОПІВ дейтерію та вуглецю ¹³ С в амінокислотні залишки сумарного білка M. Methylkiim і М. flagellatum.
Виділення дейтерій-і ^1} С-алшнокіслот з білкових гідролізатів. Оскільки при роботі з мікробною біомасою виникають проблеми, пов'язані з очищенням від супутніх компонентів, було необхідно застосовувати спеціальні підходи при виділенні фракції сумарних білків з бактеріальних джерел.
При виділенні фракції сумарних білків біомаси метилотрофних бактерій (В. methylicum, M. Flagellatum) враховувалася наявність у них вуглеводів. Ми використовували багаті по білку штами бактерій з порівняно невеликим вмістом вуглеводів в них, гідролізу в якості фракції сумарних білків піддавали залишок після вичерпного відділення пігментів і ліпідів екстракцією органічними розчинниками (метанол-хлороформ-ацетон}.
У всіх випадках гідроліз білків проводили в 6 н. розчині DC1 (3 мас.% фенолу в D ₂ O) або в 4 н. розчині Ва (ОН): для запобігання реакцій зворотного ізотопного обміну (HD) в ароматичних амінокислотах та їх руйнування.
Дейтерій-та ¹³ С-мічені амінокислоти у складі гідролізатів сумарного білка біомаси були розділені методом ОФ ВЕРХ зі ступенем хроматографічної чистоти 93-96% і виходами 75-89% в умовах, аналогічних таким для поділу секретується амінокислот (табл. 6). Хоча в таблиці 6 наведено дані тільки для 10 амінокислот, очевидно, що в інших амінокислотах рівні ізотопного включення порівнянні, хоча вони не детектируются даним методом. Це припущення підтверджується даними з розділення білкових гідролізатів метилотрофних бактерій методом іонообмінних хроматографії на колонці "Biotronic LC 5001 ", де детектується вже 15 амінокислот (див. рис. 4).
Дослідження ступенів включення дейтерію в амінокислотні залишки білка В. methylicum па середовищах з важкою водою.
Загальні принципи вивчення ступеня ізотопного збагачення молекул амінокислот при даному способі введення мітки продемонстровані на прикладі аналізу включення дейтерію в мультикомпонентного суміші амінокислот, отримані після гідролізу сумарних білків біомаси в 6 н. DCl і 4 н. Ва (ОН).
У всіх-експериментах з научіння вмісту дейтерію в амінокислотних залишках білка спостерігалася кореляція між ступенем ізотопного насичення середовища та рівнями включення дейтерію в амінокислоти (табл. 6), Наприклад, для індивідуальних амінокислот білкових гідролізатів кількість включених атомів дейтерію по скелету молекули варіює незначно в межах 49 %-ної концентрації важкої води і становить для Ala 45%, Val - 36,3%, Leu / Ile - 42%, Phe -37,5%.
Таблиця 6.
Ступені включення D і ¹³ С в амінокислотні залишки загальних білків біомаси В. melhyiicum * і М. flagellatum **.

Амінокислоти	Зміст D 2 O в середовищі, про% 24,5 49,5 73,5 98,0				13 СНзОН 1 об%
Gly	15,0	35,0	50,0	90,0	90,0
Ala	20,0	45,0	62,5	97,5	95,0
Val	15,0	36,3	50,0	50,0	50,0
Leu / lie	10,0	42,0	45,0	49,0	49,0
Phe	24,5	37,5	50,0	95,0	80,5
Туr	20,0	48,8	68,8	92,8	53,5
Ser	15,0	36,7	47,6	86,6	73,3
Asp	20,0	36,7	60,0	66,6	33,3
Glu	20,0	40,0	53,4	70,0	40,0
Lys	10,0	21,1	40,0	58,9	54,4

'Дані по включенню дейтерію в амінокислоти наведені для В. melhyiicum при зростанні на середовищах, що містять 2 об.% СН ₃ ОН і 24,5; 49,5; 73,5; 98,0 об.% D ₂ O. ** Дані по включенню ¹³ С наведені для М. flagellatum   при зростанні на середовищі, що містить 1 об.% ¹³ СН ₃ ОН і 99 об.% Н ₂ О.
Дослідження ступенів включення дейтерію в амінокислотні залишки білка В. melhyiicum на максимально дейтерированного середовищі. Отримані дані свідчать про можливість досягнення максимальних рівнів включення дейтерію в амінокислотні залишки білків за рахунок адаптації культури В. melhyiicum до зростання і біосинтезу на середовищі з максимальною концентрацією важкої води. Як видно з таблиці 6, при зростанні В. methylicum на середовищі, що містить 98 об.% важкої води, ступеня включення дейтерію в залишки Gly, Ala і Phe становлять 90, 97,5 і 95%, тобто рівень мічення можна вважати уніформним. Низькі ступеня включення дейтерію в молекули лейцину (49%), а також у метаболічно пов'язаних амінокислотах в цих умовах можуть бути пояснені за рахунок ауксотрофності штаму в лейцин, який додавали в середовище культивування в протоновану формі. Отриманий результат за розбавленню дейтерієво мітки в лейцин може бути пояснений збереженням частки мінорних реакцій у біосинтезі лейцину de novo.
Дослідження ступенів включення ізотопу вуглецю ^{I 3} C в амінокислотні залишки білка М.
flagellation за рахунок біоконверсії ¹³ С H ₃ ОН.
В експериментах по включенню ізотопу вуглецю ^{| 3} З в молекули білків за рахунок біоконверсії ¹³ С H ₃ ОН метилотрофних бактерій М. flagellalum була показана ефективність мічення амінокислот ізотопом вуглецю ¹³ С. Так, в Phe детектувати 80,5% мітки, в Ala - 95%, в Gly - 90% (див. табл. 6).
У всіх експериментах ступеня включення дейтерію і ізотопу вуглецю ¹³ С в метаболічно пов'язаних амінокислотах виявили певну коррелляцію. Так, ступеня ізотопного збагачення валіну та лейцину (сімейство пірувату), фснілаланіна і тирозину (сімейство ароматичних амінокислот} збігаються (табл. 6). Ступені ізотопного включення гліцину і серину (сімейство серину), аспарагіповой кислоті і лізину (сімейство аспарагіну) також мають близькі величини. Порівнюючи дані таблиці 5 і 6, можна зробити висновок, що ступеня ізотопного збагачення екзогенних амінокислот та відповідних амінокислотних залишків сумарного білка, в цілому, також корелюють.
Як і у випадку з екзогенними амінокислотами, низькі ступеня включення ізотопу вуглецю ¹³ С в залишки Leu при зростанні на 1 об.% ¹³ СНзОН обумовлені ауксотрофностью бактерій в цій амінокислоті.
Таким чином, нам вдалося досягти максимальних рівнів включення стабільних ізотопів в сумарні білки біомаси метилотрофних бактерій. Саме тому ми вважали за можливе використовувати гідролізати їх біомаси для біосинтезу інших ізотопно - мічених БАС.
5. ДОСЛІДЖЕННЯ МОЖЛИВОСТІ ВИКОРИСТАННЯ Гідролізати БІОМАСИ метилотрофних бактерій В. methylkum в якості субстрату ДЛЯ ОТРИМАННЯ [1 ', 3', 4 ', 2,8 - D _{5]-інозину.}
Отримання [1 ', 3', 4 ', 2,8 - D 5] - інозину. У наступних експериментах було апробовано використання дейтерій-компонентів біомаси метилотрофних бактерій, отриманих в умовах ступеневої адаптації до важкої воді для синтезу високодейтерірованних нуклеозидів (на прикладі інозину ). [1,3 ', 4' ,2,8-D5]-інозин був отриманий біосинтетичних за рахунок використання штаму-продуцента В. subtilis та виділено з культуральної рідини за методикою, що включає адсорбцію інозину на активованому вугіллі, десорбцію спиртово-аміачним розчином і перекристалізації з метанолу. ТШХ інозину, з детекцией при 249 нм показала наявність в аналізованому зразку єдиного плями з Rf = 0,55,-відповідного по рухливості чистому інозину.
Особливості розробленого методу отримання [1,3 ', 4' ,2,8-D5]-інозину полягають у таких аспектах:
1. У здатності високоактивного штаму В. subtilis до зростання і біосинтезу інозину на середовищах, що містять максимальні концентрації важкої води;
2. Заміні глюкози і амінокислот, необхідних для росту цього штаму-ауксотрофа на гідролізати дейтерій-біомаси В. methylicutn. При наступних ферментація в якості джерела ростових факторів можна використовувати ту ж дсйтеро-біомасу метилотрофних бактерій, або біомасу самого штаму-продуцента, що містить у своєму складі з'єднання, які можуть служити джерелами вуглецю і ростових факторів;
3. У практично повній відсутності відходів: згідно зі схемою, дейтерій-біомаса базового штаму, після гідролізу в 6 н. DC1 повертається в цикл в якості ростових факторів;
4. У високого рівня ізотопного збагачення дейтерій-мсченного інозину (62,5% атомів водню в молекулі заміщені на дейтерій);
5. У високих виходах (3,9 г / л) міченого продукту.
Дослідження рівня дейтерірованності інозину. Місця локалізації дейтерію в молекулі інозину, були досліджені за допомогою мас-спектрометрії FAB та спектроскопії ПМР (див. схему).

При аналізі ступеня дейтерірованності інозину враховувалися наступні аспекти. По-перше, внаслідок того, що протони в C _1-C 's положеннях рібозной частини молекули інозину могли походити з глюкози, ми припустили, що характер биосинтетического включення дейтерію в рібозную частина молекули інозину визначається, в основному, функціонуванням ряду процесів гексозо-моно-фосфатного (ГМФ) шунта, пов'язаних безпосередньо з асиміляцією глюкози та інших цукрів. По-друге, численні обмінні процеси і внутрімолекулярні перегрупування, що відбуваються за участю важкої води могли також призвести до специфічного включенню мітки за певними позиціями в молекулі інозину. Такими доступними позиціями в молекулі інозину визнані, перш за все, гідроксильні протони-ОН і протони при гетероатома-NH (останні можуть обмінюватися на дейтерій у важкій воді за рахунок кето-енольної таутомерії). Три атома дейтерію в рібозном залишку молекули інозину могли відбуватися за рахунок функціонування численних реакцій ГМФ-шунта, два атоми дейтерію а гіпоксантінс також могли синтезуватися de novo (схема).
6. РОЗРОБКА СПОСОБІВ Біосинтетичними ОТРИМАННЯ Дейтерій-мічених HOI Про Бактеріородопсин
Отримання дейтерії-міченого бактериородопсина.
Як інша модельної системи для введення стабільної ізотопної мітки в білки, використовували бактеріородопсин (bR), який синтезується в клітинній мембрані H. halobium ET 1 QOL (рис.6). Для включення дейтерієво мітки в bR використовували два принципово відмінних підходи: сайт-специфічне введення окремих амінокислот: L-[2,3,4,5,6-D _5]-Phe, L-[3 ,5-D2]-Tyr і L-[2,4,5,6,7-D _5]-Trp в bR і уніформное мічення бактериородопсина дейтерієм шляхом вирощування П. halobium ET 1001 на середовищі, що містить 99,9 ат.% Важку воду і дейтерію-гідролізати В. methylicum.
Бактеріородопсин виділяли з пурпурових мембран Н. halobium ET 1001 солюбілізаціі в 0,5%-ном розчині додецилсульфату натрію (ДСН) з наступним осадженням білка метанолом. Гомогенність очищеного bR була потверджений електрофорезом в 12,5%-ном поліакриламідному гелі в присутності 0,1% ДСН.
ОФ ВЕРХ метилових ефірів Dns-, і Z-похідних амінокислот, отриманих після гідролізу bR в 4 н. Ва (ОН) 2 або 6 н. DCI (3 мас.% Фенолу, у важкій воді) показала високі ступені хроматографічної чистоти виділених амінокислот і відсутність домішок небілкової природи в гидролизатах bR. Згідно з даними по розділенню деріватізованних гідролізатів bR методом ОФ ВЕРХ, ступеня хроматографічної чистоти виділених дейтерій-мічених Dns-Phe-OMe, Dns-Tyr-OMe і Dns-Trp-OMe склали 96, 97 і 98% відповідно.
Дослідження ступеня дейтеріроваіності бактериородопсина. Обидва підходи показали хороші результати щодо введення дейтерієво мітки в молекулу bR. Наприклад, у мас-спектрі гідролізату електрофоретичної чистого bR, отриманого з селективною середовища, що містить L-[2,3,4,5,6-D5]-Phe, L-[3,5-D2]-Tyr і L-2 ,4,5,6,7-D5]-Trp, після прямої обробки реакційної суміші Dns-Cl і CN ₂ Н ₂ фіксуються піки, відповідні молекулярним іонів збагачених дейтерієм Dns-Phe-OMe з М +. при m / z 417 (замість m / z 412 в контролі), Dns-Tyr-OMe з М +. при m / z 429 (замість m / z 428) і Dns-Trp-OMe з М +. при m / z 456 {замість m / z 451).
У випадку з уніформним мічення bR, мітка включалася рівномірно по всіх положень вуглецевого скелета в амінокислотних залишках білка.
ВИСНОВКИ:
1. Підібрано умови для проведення адаптації штамів R. Melhylicum, H. Halobium, В. xubiilis і II. amyloliquefaciens до зростання на D ₂ О-середовищах. Селекційно відібрані штами, зберегли високі ростові і біосинтетичні характеристики на середовищах з максимальними концентраціями важкої води.
2. Показано принципову можливість використання суми хімічних компонентів дейтерій-біомаси факультативних метилотрофних бактерій В. methylicum в якості джерел ростових субстратів для синтезу дейтерій-мічених БАС.
3. Вивчено вплив мічених субстратів - D ₂ O, CD ₃ OD і ^{| 3} СН ₃ ОН на ростові і біосинтетичні параметри різних штамів-продуцентів БАС. Показано, що уніформние рівні включення дейтерію в молекули синтезованих БАС можна отримати, використовуючи високодейтерірованние середовища
(D ₂ О і СНзОН), а у випадку з ¹³ С-міченого того ж результату можна досягти за рахунок використання ^{| 3} СНзОН.
4. Запропоновано дамсільная модифікація препаратів культуральної рідини для вивчення ступенів ізотопного збагачення амінокислот методом мас-спектрометрії електронного удару. Метод дозволяє проводити аналіз ізотопного складу мультикомпонентного сумішей амінокислот, як вільних
амінокислот з культуральної рідини, так і амінокислот у складі гідролізатів сумарних білків біомаси.
5. Проведено порівняльне вивчення ступенів включення дейтерію і ізотопу вуглецю ¹³ С в молекули екзогенних амінокислот, так і в амінокислотні залишки сумарних білків штамів метилотрофних бактерій в умовах їх зростання на середовищах, що містять східчасто збільшують концентрації важкої води.
6. Визначена чітка кореляція між рівнем включення ізотопної мітки в молекули амінокислот і концентрації важкої води в ростових середовищах.
7. Розроблено схему отримання дейтерій-мічених БАС з високими ступенями ізотопного збагачення, заснована на використанні гетеротрофних мікроорганізмів - продуцентів відповідних БАС. Дана схема перевірена на прикладі отримання дейтерій-мічених інозину і бактериородопсина.
8. Досліджено методи сайт-специфічного і уніформного введення дейтерієво мітки в бактеріородопсин. Показано, що включення окремих дейтерій-мічених амінокислот у молекулу бактериородопсина носить селективний характер, а використання адаптованого до D2O Н. halobium ET 1001 на середовищах з міченими субстратами і 99,9% D2O дозволяє отримувати уніформно мічений бактеріородопсин.
СПИСОК ПУБЛІКАЦІЙ за темою дисертаційної роботи.
1. Мосін О. В.. Карнаухова Є. Н., Пшеничникова О. Б., складні Д. А., Акімова О. Л. біосинтетичні отримання дсйтерій-мсченного L-фенілалаііна, секрстіруемого метилотрофних мутантом Brevibaclerium      methylicum      II Біотехнологія. 1993. № 9. С. 16-20,
2. Єгорова Т. А., Мосін О. В., Єрьомін С. В-, Карнаухова Є. Н., Звонкова Є. Н., Швець В. І. препаративні поділ амінокислот білкових гідролізатів у вигляді бензілоксікарбонільних похідних / / Біотехнологія. 1993. № 8. С. 21-25.
3. Беккер Г. Д., Мосін О. В.. Карнаухова Є. М. Амінокислоти, мічені стабільними ізотопами: отримання і мас-спектро метрично і контроль. (Тези доп. 4-й Всеросійській науковій конференції "Проблеми теоретичної та експериментальної хімії") - Єкатеринбург. 20-22 квітня 1994. С. 127-128.
4. Мосін О. В.. Карнаухова Є. Н., складні Д. А., Акімова О. Л., Циганков Д, Ю. Штам Brevibacterium    methylicum - продуцент уніформно міченої дейтерієм амінокислоти L-фенілаланіну. Заявка РФ № 93055824 від 15.12.1993.
5. Казарінова Л. А., Королькова Н. В., Миронов А. С., Мосін О. В.. Складне Д. А., Юркевич О. М. Спосіб отримання високодейтерірованних нуклеозидів і нуклеотидів. Заявка РФ № 95118778 від 14.11.1995.
6. Karnaukhova Є. N. Mosin О. V.. and Reshetova О. S. Biosynthetic production of stable isotope labeled ammo acids using methylotroph Methylobacillus JlageUattan / / Ammo Acids. 1993. V. 5. № 1. P. 125.
7. Mogin OV. Karnaukhova EN, Pshenichnikova А. В., Reshetova OS Electron impact spectrometry in bioanalysis of stable isotope labeled bacteriorhodopsin. 6th International Conference on Retinal Proteins. 19-24 June 1994. Leiden. The
Netherlands. P. 115.
8. Mosin O. V,. Karnaukhova E. N., Skladnev D. A. Application of methylotrophic bacteria for divparation of stable isotope labeled amino acids. 7 ^th International Symposium on the Genetics of Industrial Microorganisms. 26 June 1994. Quebec. Canada. P. 163.
9. Matveev AV, Mosin_O. V.. Skladnev DA, Yurkevich AM, and Shvcts V. Melhylolrophic adaptation to highly deuterated substrates. 8th International Symposium on Microbial Growth on Ci-Compounds. 27 August-l September 1995. San Diego. USAP 49.
10. Mosin O. V.. Karnaukhova E. N., Skladnev D. A., and Shvets V. I. Preparation of D-and ^L 'C-amino acids via bioconvertion of Ci-substrates, 8lh International Symposium on Microbial Growth on Сi-Compounds. 27 August-l September 1995. San Diego. USAP 80.
11.Shvets VI, Yurkevich AM, Mosin_O. V.. Skladnev DA Preparation of deuterated inosine suitable for biornedical application / / Karadeniz Journal of Medical Sciences. 1995. V. 8. № 4. P. 231-232.
12. Мосін О. В.. Складне Д. А., Єгорова Т. А., Юркевич О. М., Швець В. І. Дослідження біосинтезу амінокислот штамом Brevibacterium   methylicum   на середовищах, що містять важку воду. II Біотехнологія. № 3. 1996. С. 32-37.
13. Мосін О. В.. Єгорова Т. А., Чеботаєв Д. В., складні Д. А., Юркевич О. М., Швець В. І. Отримання бантеріородопсіна, міченого по залишках ароматичних амінокислот L-фенілаланіну, L -тирозину і L-триптофану / / Біотехнологія. № 3. 1996. С. 14-20.
14. Мосін _О.В. Казарінова Л. А., Преображенська Є. С., складні Д. А., Юркевич О. М., Швець В. І. Зростання бактерії Bacillus subtilis і біосинтез інозину на високодейтерірованной середовищі. / / Біотехнологія. № 4. 1996.