МІНІСТЕРСТВО ОСВІТИ І НАУКИ УКРАЇНИ
УКРАЇНСЬКИЙ ДЕРЖАВНИЙ ХІМІКО-ТЕХНОЛОГІЧНИЙ УНІВЕРСИТЕТ
Кафедра ХТОВ
Курсова робота
На тему:
«Противірусні препарати»
Дніпропетровськ 2005

ЗМІСТ
ВСТУП .. 3
1. ЗАГАЛЬНІ ПОЛОЖЕННЯ .. 5
2. ІСТОРІЯ СТВОРЕННЯ Противірусні препарати .. 9
3. КЛАСИФІКАЦІЯ противірусних засобів .. 12
А) Інтерферон. 13
Індуктори інтерферону. 13
Б) Похідні амантадину та інших груп синтетичних сполук. 13
В) Нуклеозид .. 14
Г) Противірусні препарати рослинного походження. 14
4. МЕХАНІЗМ БІОЛОГІЧНОЇ АКТИВНОСТІ .. 15
4.1. Протигрипозні препарати [6] 15
4.2. Протигерпетичні і пртівоцітомегаловірусние препарати [6] 15
4.3. Ліки, що впливають на вірус імунодефіциту людини (ВІЛ) [6] (зідовузін, фосфоноформат) 16
4.4. Противірусні препарати широкого спектру дії (інтерферони) [6] 16
4.5. Аміксин - можливості і перспективи застосування в клінічній практиці 17
4.5.1. Назва та опис препарату Аміксин. 19
4.5.2. Противірусна активність і індукція клітин - продуцентів інтерферону. 19
4.5.3. Дія на імунну систему і запальний процес. 20
4.5.4. Фармакокінетика. 20
4.5.5. Доклінічні дослідження противірусна активність препарату 20
5. ОТРИМАННЯ противірусних ЛІКАРСЬКИХ ПРЕПАРАТІВ 21
5.1. Нові шляхи синтезу хлоргідрату тилорону [8, 9] 21
5.2. Отримання бонафтон (6-бром-1 ,2-нафтохінон) 22
5.3. Госипол .. 22
5.4. ОТРИМАННЯ лейкоцитарний альфа-ІНТЕРФЕРОНУ .. 24
7. ТАБЛИЦЯ противірусних препаратів .. 35
ЛІТЕРАТУРА .. 40
СЛОВНИК ТЕРМІНІВ .. 41

ВСТУП

Віруси [3] - неклітинні форми життя, що володіють власним геном і здатні до відтворення лише в клітинах більш високорозвинених істот. Для вірусів характерні дві форми існування: позаклітинна і внутрішньоклітинна (репродуцирующая). Віруси за складом розрізняються на дві великі групи: прості і складні. Перші складаються тільки з білка і нуклеїнової кислоти, тоді як віруси складні поряд з цими компонентами містять у своєму складі ліпіди, вуглеводи у вигляді глікопротеїдів. Для вірусів характерна велика різноманітність форм нуклеїнових кислот, в тому числі таких форм РНК і ДНК, які відсутні у клітинних форм життя.
Розмноження вірусів відбувається в клітці. Багато віруси поглинаються кліткою шляхом піноцитозу. Потрапивши в клітку, вони звільняються від оболонки. Перші етапи розвитку вірусів у клітині в загальних рисах полягають у тому, що будуються так звані ранні білки, тобто білки ферменти, необхідні вірусу для реплікації їх нуклеїнових кислот. Так звані пізні білки беруть участь в утворенні білкових оболонок дочірніх віроспор. З ферментів у вірусів містять ДНК, одним з перших синтезується полімераза РНК, яка будує на нитки ДНК інформаційну РНК. Ця РНК потрапляє на рибосоми нитки і відбувається синтез інших білків вірусної частки.
Віруси, що містять РНК, синтезують полімеразу, каталізують синтез нових частинок вірусної РНК; ця РНК переходить на рибосоми і контролює синтез білка капсида. Вірус, що містить РНК, не потребує ДНК для розмноження і передачі генетичної інформації.
Віруси викликають різні хвороби. Вірусні хвороби дуже різноманітні і залежать від природи вірусів, їх вірулентності, шляхів проникнення в організм і подолання природних захисних бар'єрів організму. Зараження може відбутися через повітря, їжу, молоко, воду, через різні предмети, через укус кровосисних членистоногих (комарів, москітів і кліщів). Один з чинників природного захисту клітини від вірусів - вироблення клітинами інтерферону - речовини, що створює резистентність клітини до вірусу, хоча це захисна дія і короткочасно.
Інтерферон [3] - низькомолекулярний білок з противірусними властивостями, що містить деяку кількість вуглеводів, включаючи глюкозамін. Відкритий в 1957р. Айзеком і Лінденманн [3]. Основна властивість інтерферону полягає в противірусному дії, що проявляється у придушенні розмноження інфекційних та онкогенних вірусів. Найактивнішим інтерфероном є інтерферон людини. Інтерферон не володіє виборчої противірусну активність і діє практично на всі віруси.
Інтерферон безпосередньо не інактивує віруси або їх нуклеїнові кислоти, не перешкоджає адсорбції і проникненню вірусу в клітину, а також його депротеїнізация. Інтерферон проявляє свою дію на внутрішньоклітинному етапі репродукції вірусу. Механізм взаємодії інтерферону з клітинами, в яких він індукує антивірусне стан, залишається неясним. За даними одних авторів, інтерферон може індукувати антивірусне стан в клітинах без виявлення втрати активності, за іншими захисну дію інтерферону пов'язано з інтенсивністю його поглинання.
Допускається дію інтерферону на рівні, як трансляції, так і транскрипції. На користь першого свідчать дані про те, що інтерферон, не впливаючи на синтез вірусоспецифічні РНК, інгібує синтез вірусних білків. Він не тільки зменшує кількість які виникають вірусоспецифічні поліпептидів в заражених клітинах, але призводить також до вкорочення поліпептидних ланцюгів. Припускають, що інтерферон може модифікувати вірусну РНК настільки, що вона втрачає здатність брати участь в утворенні полісом.
Прихильники дії інтерферону на рівні транскрипції спираються на дані про інгібіторної дії інтерферону на транскрипцію ранньої вірусної РНК. Ця інгібіція пов'язана з придушенням вірусіндуцірованном синтезу, зумовленого віріонів РНК - залежною полімеразою. Найбільш поширеним є припущення про те, що в результаті впливу інтерферону порушується трансляція, що обумовлює неможливість здійснення подальших етапів у репродукції вірусу.
Існує безліч агентів, які сприяють утворенню інтерферону в клітинах і тканинах. Їх називають індукторами інтерферону.

1. ЗАГАЛЬНІ ПОЛОЖЕННЯ

Створення противірусних засобів [2] є однією з найбільш складних завдань хіміотерапії інфекцій. Пов'язано це з тим, що РНК-і ДНК-віруси є облігатними внутрішньоклітинними паразитами. У процесі розмноження віруси в основному використовують апарат біосинтезу клітин макроорганізму, певним чином модифікуючи його. У зв'язку з цим вкрай важко знаходити вибірково діють кошти, які вражали б віруси, не ушкоджуючи клітини «господаря». Тим не менше за останні роки з'явилися окремі противірусні препарати, які мають певну вибірковість дії відносно заражених вірусом клітин і пригнічують реплікативний цикл вірусу. У цьому відношенні привертають увагу деякі аналоги нуклеозидів, які мають відносно виборчою дією на віруси. Така можливість заснована на тому, що деякі віруси (наприклад, вірус простого герпесу, вірус оперізуючого лишаю) після проникнення в клітини індукують утворення своїх ферментів, які можуть відрізнятися по розпізнанню субстрату в порівнянні з аналогічними ферментами самої клітини.
До числа таких ферментів відносяться, наприклад, дезоксітілендінкінази і ДНК-полімерази. Так, напрмер, ацілогуанозін (ацикловір), проникаючи в клітину, фосфорилюється вірусної дезоксітімідінкіназой і у вигляді трифосфату пригнічує ДНК-полімеразу вірусу простого герпесу (більшою мірою, ніж ДНК-полімеразу клітини). Крім того, це з'єднання вбудовується в ДНК вірусу. Рибавірин діє за іншим принципом: у вигляді 5 - трифосфату, він специфічно пригнічує РНК-полімерну транскриптазу ДНК вірусів. Отримані дані дуже перспективні для створення нових вибірково діють противірусних засобів.
Спрямованість дії противірусних засобів може бути різною. Вона стосується різних стадій взаємодії вірусу з клітиною. Так відомі речовини, які діють наступним чином [2]:
1. Пригнічують адсорбцію вірусу на клітці і (або) проникнення його в клітку, а також процес вивільнення («депротеїнізация») вірусного генома (мідонтан, ремантадин).
2. Пригнічують синтез «ранніх» вірусних білків-ферментів (гуанидин).
3. Пригнічують синтез нуклеїнових кислот (зидовудин, ацикловір, відарабін, ідоксурідін).
4. Пригнічують «збірку» віріонів (метисазон).
5. Підвищують резистентність клітини до вірусу (інтерферони).
Одні препарати призначені для лікувальних цілей, інші - переважно для профілактики вірусних коштів.
Мідантан (адамантанаміна гідрохлорид, амантадин, вірегіт, сімметрел) впливає на мікровірусів, які відносяться до РНК-вмісних вірусів. Вважають, що мідантан ускладнює проходження вірусу в клітину «господаря», а також інгібує процес вивільнення у клітці вірусного геному. Добре всмоктується з шлунково-кишкового тракту. Виділяється в основному нирками.
Основне застосування Мідантан - профілактика грипу типу А2. В якості лікарського засобу він неефективний.
Мідантан може чинити негативний вплив на ЦНС (підвищена збудливість, сонливість, тремор, атаксія). Можливі диспепсичні порушення, шкірні ураження. Аналогічними властивостями і показаннями до застосування володіє ремантадин (ремантадина гідрохлорид), подібний за хімічною структурою з мідантаном.
Глобальною проблемою є лікування синдрому набутого імунодефіциту (СНІД). Викликається він спеціальним ретровірусом. Терапія СНІДу вимагає застосування протиретровірусної, імуномодулюючу, а також симптоматичної терапії. З пртівовірусних препаратів застосовується тільки азидотимидин (3-азидо-3-дезокситимидина). Комерційний препарат азидотимидина отримав назву зидовудин (азидотимидин, ретровір). Принцип дії зидовудину полягає в тому, що він, фосфоріліруясь в клітинах, гінгібірует зворотну транскриптазу ДНК вірусів. Препарат добре всмоктується. Біодоступність приблизно 65%. Добре проникає через гематоенцефалічний бар'єр. Близько 75% препарату метаболізується в печінці (утворюється глюкоронід азидотимидина). Частина зидовудину виділяється в незмінному вигляді нирками (за деякими даними 16 - 18%).
Застосування зидовудину слід починати якомога раніше. Терапевтичний ефект його проявляється в основному в перші 6-8 міс. від початку лікування. На жаль, зидовудин не виліковує хворих, а лише затримує розвиток захворювання. Крім того, до нього розвивається лікарська стійкість ретровірусу. В даний час ведуться широкі пошуки нових лікарських препаратів і вакцин, які гостро необхідні для зміни вкрай несприятливої епідеміологічної ситуації зі СНІДом. З побічних ефектів зидовудину на перше місце виступають гематологічні порушення: анемія, нейтропенія, тромбоцитопенія, панцітемія. Можливі голвная біль, безсоння, міалгія, пригнічення функцій нирок. Значним досягненням є створення високоефективного протигерпетичною кошти анцікловіра (зовіракс). Хімічно є похідним геданіна. У клітинах анцікловір фосфорилюється. У інфікованих клітинах анцікловіра трифосфат інгібує вплив на ДНК-полімеразу вірусу. Із шлунково-кишкового тракту всмоктується близько 1 / 5 введеного речовини. Максимальна концентрація накопичується через 1 - 2 години. Біодоступність близько 20%. З білками плазми зв'язується 12 - 15% речовини. Цілком задовільно проходить через гематоенцефалічний бар'єр.
Ефективним противірусним препаратом є також відоробін (аденін, арабінозід). Проникнувши в клітину, відоробін фосфорилюється. Пригнічує вірусну ДНК-полімеразу. При цьому пригнічується реплікація великих ДНК-вірусів. В організмі частково перетворюється в менш активний відносно вірусу гіпоксонтіна арабінозід.
З успіхом застосовується при герпетическом енцефаліті (вводять шляхом внутрішньовенної інфузії), знижуючи летальність пріетом захворюванні на 30 - 75%. Іноді використовують при ускладненому оперізуючий лишай. Ефективний при герпетическом піротокон'юктівіте.
Ідоксурідін (керіцід, ідурідін, офтон-УСІ), який є аналогом тимідину, вбудовується в молекулу ДНК. У зв'язку з цим він пригнічує реплікацію окремих ДНК-вірусів. Застосовують ідоксурідін местнопрі герпетичної інфекції очей (кератитах). Може викликати подразнення, набряк повік. Для резорбтивної дії мало придатний, оскільки токсичність у препарату значна.
Виражену противірусну активність має метисазон (мірборан). Він ефективний по відношенню до вірусу віспи. Механізм дії, очевидно, пов'язаний з тим, що метисазон порушує процес складання віріонів, пригнічуючи синтез вірусного структурного білка.
Препарат оксолін має помірну ефективністю при аденовірусної керітокон'юктівіте, герпетическом кератиті, деяких вірусних захворюваннях шкіри.
Для профілактики вірусних інфекцій використовують також інтерферони. Це група біогенних речовин, що відносяться до низькомолекулярних глікопротеїнів, що виробляються клітинами організму при впливі на них вірусів. Вони викликають стійкість клітин до поразки їх вірусами. Утворюються інтерферони в самому початку вірусної інфекції. Характеризуються широким спектром противірусною (специфічністю дії відносно окремих вірусів не мають). Однак вони мають виражену видову специфічність щодо клітин мікроорганізмів. Інтерферони іноді називають противірусними антибіотиками широкого спектру дії. Резистентність до інтерферонів у вірусів не виникає. Через кілька тижнів після одужання інтерферони в крові не виявляються. Для організму практично нешкідливі. Сенсибілізації, за наявними даними, як правило, не викликають. Інтерферони проникають у клітину і міцно з нею пов'язуються. Механізм їх противірусної дії, мабуть, обумовлений тим, що вони викликають утворення рибосомами клітин макроорганізму ряду ферментів, які інгібують та РНК і її трансляцію у вірусний білок. Це призводить до пригнічення репродукції вірусу. Через гематоенцефалічний бар'єр інтерферони практично не проходять. У клінічній практиці використовують людські лейкоцитарний (α-) і фібробластний (β-) інтерферони. Інтерферон отримано також методом генної інженерії. Місце інтерферону в лікуванні вірусних інфекцій точно не визначено. Відзначено більш-менш виражена ефективність інтерферонів при профілактиці грипу, при герпетичних кератитах, герпетичних ураженнях шкіри і статевих органів і т.д.

2. ІСТОРІЯ СТВОРЕННЯ Противірусні препарати

Першим препаратом, запропонованим як специфічного противірусного засобу, був Тіосемікарбазон, вірулоцідное дія якого описав Г. Домагк (1946) [1]. Препарат цієї групи тіоцетозон володіє деякою противірусну активність, але недостатньо ефективний; його використовують як протитуберкульозного кошти. Похідні цієї групи 1, 4-бензохинон-Гуан-гідразінотіо-семикарбазонів під назвою «фарингосепт» (faringosept, Румунія) застосовують у вигляді «перлінгвальних» (розсмоктувати в порожнині рота) таблеток для лікування інфекційних захворювань верхніх дихальних шляхів (тонзиліт, стоматит та ін .)
Надалі був синтезований метисазон, ефективно пригнічує репродукцію вірусів віспи, а в 1959 р . [1] - нуклеозид ідоксурідін, що виявився ефективним антивірусним засобом, що пригнічує вірус простого герпесу і вакцин (вакцинальна хвороба). Побічні ефекти при системному застосуванні обмежили можливість широкого використання ідоксурідіна, але він зберігся як ефективний засіб для місцевого застосування в офтальмологічній практиці при герпетичних керотітах. Слідом за ідоксурідіном стали отримувати інші нуклеозиди, серед яких виявлено високоефективні противірусні препарати, в тому числі ацикловір, рібамідін (рібовірін) та інші. У 1964р. [1] був синтезований амантадин (мідантін), потім ремантадин і інші похідні адамантану опинилися ефективними противірусними засобами. Видатним відкриттям стало відкриття ендогенного інтерферону і встановлення його противірусної активності. Сучасна технологія рекомбінації ДНК (генетичної інженерії) відкрила можливість широкого використання інтерферонів для лікування та профілактики вірусних та інших захворювань.

Визначною подією стало відкриття ендогенного інтерферону і встановлення його противірусної активності. До 1957 року інтерферони розглядали як цікавий біологічний феномен. Період 1957 - 1967 рр. був присвячений дослідженню загальних закономірностей продукції і дії інтерферону. У процесі цієї роботи встановлено універсальність феномену освіти цього білка клітинами всіх хребетних (від риб до людини) та розроблено основні методи його отримання та очищення.
У 1967 році була доведена провідна роль високомолекулярних двунітевих РНК в індукції інтерферону і розпочато пошук найбільш активних препаратів, що мають перспективу клінічного використання [14].
У перебігу наступних тринадцяти років (1967 - 1980 роки) був вивчений антітулюрогенний ефект інтерферону та його індукторів, експериментально обгрунтовані принципи суперіндукціі інтерферону. У цей же період було теоретично обгрунтовано існування складного багатокомпонентного механізму продукції і дія інтерферону, що надалі завершилося виявленням генів та інформаційних РНК для інтерферону і ферментів, що здійснюють його дію. 80 - і роки ознаменувалися такими великими подіями у вивченні інтерферону та його індукторів:
1) остаточно оформилося вчення про систему інтерферону;
2) за допомогою методів генної інженерії отримані перспективні для клінічного використання препарати інтерферону;
3) доведено множинність генів інтерферону (у людини їх число наближається до 30);
4) визначено показання та протипоказання для клінічного використання інтерферонів та їх індукторів.
У 80 - 90 роки встановлено, що дія ряду імуностимулюючих та противірусних засобів (продігнозан, полудан, арбідол та ін) пов'язана з їх інтерферогенной активністю, тобто здатністю стимулювати утворення ендогенного інтерферону [14].
Вітчизняними дослідниками розроблено ряд синтетичних і природних (рослинного походження) препаратів для системного і місцевого застосування при вірусних захворюваннях (бонафтон, арбідол, оксолін, дейтіформін, теброфен, алпізарін та ін.) В даний час встановлено, що дія ряду імуностимулюючих та противірусних засобів пов'язане з їх інтерферонів активністю, тобто здатністю стимулювати утворення ендогенного інтерферону.

Хронологічна таблиця противірусних подій

Рік	Подія
1946	Запропоновано в якості противірусного засобу Тіосемікарбазон. Дія описав Г. Домагк
50-ті р.	Відкрито метисазон
1957	Відкрито інтерферон Айзекс і Лінденманн
1957-1967	Досліджено загальні закономірності продукції і дії інтерферону. Встановлено універсальність феномену освіти цього білка клітинами всіх хребетних (від риб до людини) та розроблено основні методи його отримання та очищення
1959	Відкрито ідоксурідін, що діє проти вірусу простого герпесу
1964	Синтезовано адамантан, потім ремантадин і інші похідні адамантану
1970	Відкрито тилорон, індуктор інтерферону
1967-1980 роки	Було вивчено антітулюрогенний ефект інтерферону та його індукторів, експериментально обгрунтовані принципи суперіндукціі інтерферону
80-90 роки	Встановлено, що дія ряду імуностимулюючих та противірусних засобів (продігнозан, полудан, арбідол та ін) пов'язана з їх інтерферогенной активністю, тобто здатністю стимулювати утворення ендогенного інтерферону [14]

3. КЛАСИФІКАЦІЯ противірусних засобів

Противірусні засоби, як протигрибкові, протипаразитні кошти, відносять до антиінфекційні засобів. [2]
Віруси - внутрішньоклітинні паразити. Надати на них вплив за допомогою ліків, не пошкодить при цьому клітини макроорганізму, практично неможливо. У більшості випадків застосування противірусних препаратів малоефективно, а небезпека виникнення небажаних ефектів дуже велика. Противірусні засоби - препарати з малою широтою терапевтичної дії. Максимальної ефективності можна досягти при їх використанні з профілактичною метою або місцево, коли вдається створити високу концентрацію.
Спрямованість дії противірусних засобів може бути різною. Вона стосується різних стадій взаємодії вірусу з клітиною. Так, відомі речовини, які діють наступним чином:
1. пригнічують адсорбцію вірусу на клітці і проникнення його в клітку, а також процес вивільнення вірусного генома. До них можна віднести такі препарати як мідантан і ремантадин;
2. пригнічують синтез ранніх білків вірусу. Наприклад, гуанидин;
3. пригнічують синтез нуклеїнових кислот (зидовудин, ацикловір, відарабін, ідоксурідін);
4. пригнічують «збірку» віріонів (метисазон);
5. підвищують резистентність клітини до вірусу (інтерферони) [2]
Це була представлена класифікація противірусних засобів за механізмом дії.
За будовою противірусні засоби можна розділити на:
1. Похідні адамантану (мідантан, ремантадин)
2. Аналоги нуклеозидів (зидовудин, ацикловір, відарабін, ідоксурідін)
3. Похідні тиосемикарбазона - метисазон
4. Біологічні речовини подуціруемие клітинами макроорганізму (інтерфірони) [2]
Але більш доступно для розуміння противірусні препарати можна розділити, в залежності від роду захворювання, на групи:
1. Протигрипозні препарати (ремантадин, оксолін і т.д.)
2. Протигерпетичні і протівоцітомегаловірусние (теброфен, ріодоксон і т.д.)
3. Ліки впливають на вірус імунодефіциту людини (азидотимидин, фосфаноформат)
4. Препарати широкого спектру дії (інтерферони і інтерфероногени) [2]
Машковский М.Д. [5] створив таку класифікацію противірусних препаратів:

А) Інтерферон

1. інтерферон. Лейкоцитарний інтерферон з донорської крові людини.
2. інтерлок. Очищений α-інтерферон, отриманий з донорської крові.
3. реаферон. Рекомбінантний α _{2-інтерферон,} продукується бактеріальним штамом псевдомонади, в генетичний апарат якого вбудовано ген людського лейкоцитарного α _{2-інтерферону.}
4. Інтрон А. Рекомбінантний інтерферон альфа-2в.
5. Бетаферон. Рекомбінантний людський β _{1-інтерферон.}

Індуктори інтерферону

1. полудан. Порошок або пориста маса білого кольору, має імуностимулюючої активністю, тобто здатністю стимулювати вироблення ендогенного інтерферону і має противірусну дію.
2. неовір. Дія таке як і у Полудан.

Б) Похідні амантадину та інших груп синтетичних сполук

1. Ремантадин. Застосовується як антипаркінсонічна засіб, вказує профілактичну дію щодо гріпозной інфекції, викликаної певними штамами вірусів.
2. Адапромін. Близький до ремантадіну.
3. Дейтіфорін. Схожий з ремантадином.
4. Арбідол. Противірусний препарат, який надає інгібуючу дію на віруси грипу А і В.
5. Бонафтон. Має противірусну активність відносно вірусу простого герпесу і деяких аденовірусів.
6. Оксолін. Володіє віруцидну активністю, ефективний при вірусних захворюваннях очей, шкіри, вірусних ринітах; надає профілактичну дію при грипі.
7. Теброфен. Застосовують у вигляді мазі при вірусних захворюваннях очей, а також при захворюваннях шкіри вірусної або передбачуваної вірусної етіологіі.Может приминаючи також для лікування плоских бородавок у дітей.
8. Ріодоксол. Має противірусну оптимальністю і має протигрибкову дію.
9. Флореналь. Відкриває що нейтралізує дію в отнашении вірусів.
10 метисазон. Пригнічує репродукцію вірусу основної групи: має профілактичної активністю в отнашении вірусу віспи і полегшує перебіг поствакцинальних ускладнень, затримує поширення шкірного процесу, сприяє більш швидкому підсихання еффеорацій. Є дані про ефективність метисазон при лікуванні рецидивуючого генітального герпесу.

В) Нуклеозид

1. Ідоксурідін. Застосовують при кератитах в офтальмології.
2. Ацикловір. Ефективний щодо вірусів простого герпесу та оперізувального герпесу. Надає імуностимулюючу дію.
3. Ганцикловір. У порівнянні з ацикловіром ганцикловір більш ефективний і, крім того, діє не тільки на вірус герпесу, але і на цитомегаловірус.
4. Фамцікловір. Має такі ж функції, як і ганцикловір.
5. Рібаміділ. Рібаміділ, подібно ацикловіру, має противірусну активність. Інгібує синтез вірусних ДНК і РНК.
6. Зидовудин. Противірусний препарат, що інгібує реплікацію ретровірусів, включаючи вірус імунодефіциту людини (ВІЛ).

Г) Противірусні препарати рослинного походження

1. 1.Флакозід. Отримують з листя оксамиту амурського сімейства рутових. Препарат ефективний відносно ДНК-вірусів.
2. Алпідарін. Отримано з трави Koneermena альпійського і копійочник жовтіючого, сімейства бобових. Ефективний щодо ДНК-вмісних вірусів групи герпесу. Інгібуючу дію на репродукцію вірусу простого герпесу виявляється переважно на ранніх стадіях розвитку вірусу.
3. Холепін. Очищений екстракт з частини рослини мепедеці копеечковой, сімейства бобових. Має противірусну активність щодо ДНК-вмісних вірусів групи герпесу.
4. Лігосін. Застосовують при герпетичних захворюваннях шкіри.
5. Госипол. Продукт одержується при переробці насіння бавовни або з коріння бавовника, сімейства мальвових. Препарат має активністю щодо різних штамів вірусів, в тому числі дерматотропних штамів вірусу герпесу. Виявляє слабку дію на грампозитивні бактерії.

4. МЕХАНІЗМ БІОЛОГІЧНОЇ АКТИВНОСТІ

4.1. Протигрипозні препарати [6]

Всі препарати це групи захищають клітини людини від проникнення в них вірусу грипу, тому що блокують місця зв'язування вірусу з поверхнею клітинної мембрани. На віруси, які проникли всередину клітини, вони не впливають, тому їх застосовують для індивідуального або масової профілактики грипу в осіб, що перебувають у контакті з хворими або в період епідемії. Всі препарати (крім оксоліну) призначають всередину. Із шлунково-кишкового тракту вони непогано всмоктуються. У дуже невеликому відсотку вони зв'язуються з білками плазми крові, добре проникають у всі тканини і рідини, в тому числі і в ліквор. Елімінація здійснюється частково печінкою, а в основному нирками (90%). Тому у хворих з порушенням функції нирок повторні прийоми препаратів можуть привести до кумуляції і супроводжуватися небажаними ефектами.

4.2. Протигерпетичні і пртівоцітомегаловірусние препарати [6]

Протигерпетичні (теброфен, ріодоксол, ідонеурідін, відарабін, оцікловір, валацикловір). Протівоцітомегаловірусние (ганцикловір, фосфоноформат).
Всі ці препарати блокують реплікацію, тобто порушують синтез нуклеїнових кислот вірусу. Відарабін застосовують місцево, а при дісімінірованной герпетичної інфекції (енцефаліт) вводять внутрішньовенно крапельно. Але препарат погано розчиняється, тому його інфузія у великій кількості рідини триває близько 12 годин, що небажано для хворого з енцефалітом, набряком мозку. Застосування відарабін через гематоенцефалічний бар'єр становить приблизно 30% від концентрації препарату в плазмі крові.
У печінці відбувається перетворення препарату в арабінозін гіпоксантин, цей метаболіт зберігає активність і швидко розподіляється в тканинах. Елімінація відбувається з сечею (50%) і калом. Ацикловір, валацикловір, ганцикловір - призначають внутрішньо під час їжі, а також вводять внутрішньом'язово і внутрішньовенно.
Біозасвоєння з шлунково-кишкового тракту дорівнює 15 - 20%, проте цього достатньо для надання ефекту. У препаратів висока активність, і вони мають здатність вибірково накопичуватися в клітинах, інфікованих вірусом, але не в інтактних клітинах. Зв'язування з білками плазми крові всього 9 - 30%, тому препарати добре проникають у різні тканини і рідини. В організмі людини валацикловір швидко і майже повністю перетворюється в ацикловір і валін під дією ферменту валацикловіргідролази. 10 - 15% ацикловіру і ганцикловіру піддається біотрансформації в печінці. Велика частина препаратів (80 - 90%) у незмінному вигляді та у вигляді метаболіту 9-карбоксиметоксиметилгуаніну виводиться нирками.

4.3. Ліки, що впливають на вірус імунодефіциту людини (ВІЛ) [6] (зідовузін, фосфоноформат)

Після проникнення лімфотропної ВІЛ в лімфоцит відбувається синтез вірусної ДНК на матриці (вірусної РНК) під впливом зворотної транскриптази (ревертази), що і призводить до пошкодження лімфоцитів. Механізм дії аредотімідіна і фосфоноформіта полягає в блокаді названого ферменту. В основному препарати ефективні у носіїв вірусу до появи ознак захворювання. Крім названих препаратів зараз з'явилися нові протиретровірусні засоби: дідеоксіміцетін і дідеоксіцідін. Азідовудін призначають усередину або вводять внутрішньовенно. Біозасвоюваність з шлунково-кишкового тракту 60%. Зв'язок з білками плазми крові 35%. Азидотимидин легко проникає в різні тканини і рідини, включаючи ліквор. Він піддається біотрансформації в печінці, його головний метаболіт 5 ^{|-о-глюкуронід.} Екскреція - за допомогою нирок в незмінному вигляді (90%) і у вигляді метаболітів.

4.4. Противірусні препарати широкого спектру дії (інтерферони) [6]

Під впливом індукторів інтерферону (численних синтетичних і природних агентів) здійснюється індукція, підсумком якої є депресія генів інтерферону, які локалізуються в 2-й, 9-й і, можливо, у 5-й і 13-й хромосомах людини. У відповідь на індукцію відбувається формування, синтез інтерферону в клітинах людського організму.
Основним показником активності індукторів інтерферону є продукція так званого «сироваток точного» інтерферону в крові.
При ентеральному способі введення індукторів в організм, інтерфероновий відповідь забезпечується лімфоцитами (еритроцитами) системи GALT лімфоцітной тканини шлунково-кишкового тракту, сконцентрованої у вигляді вальдеерова кільця, пеерових бляшок, підслизових Мононитка-клеаров і мемфоцітов тонкої кишки і апендикса, куди вони можуть бути доставлені популяцією спеціалізованих мембранних клітин, здатних транспортувати макромолекули із стінки тонкої кишки через епітеліальний бар'єр. Більша частина виділяється при цьому інтерферону може бути утилізована оточуючими клітинами кишечника локально і не досягає циркулюючої крові (паракрінний тип). Інша частина продукованого інтерферону потрапляє в кров або безпосередньо з тканинної рідини (ендокринний тип), або через мігруючі лімфомоноціти і макрофаги. Продукція інтерферону в кишечнику випереджає і перевершує рівень його освіти в інших органах [12].
При пероральному введенні високомолекулярних індукторів інтерферону, укладених в ліпосоми (полігуаціл, ларіфан), переважним місцем утворення інтерферону стає печінку, а саме - гепатоцити і купферови клітини. Хоча і в цьому випадку першою лінією взаємодії індуктора з організмом є кишечник, в ньому синтезується значна кількість інтерферону, але у складі ліпосом більше 80% індуктора транспортування-ється в печінку, тому рівень продукції інтерферону в цьому органі в 2-4 рази вище, ніж в кишечнику [12].
Таким чином, при надходженні індукторів інтерферону в організм разом з продукцією сироваткового інтерферону в організмі відбувається автономна, локальна продукція інтерферону органами. При цьому провідна роль у продукції інтерферону тим чи іншим органом визначається в рівній мірі як шляхами індукції інтерферону, так і складом індуктора, а , отже, і чутливістю інтерферонокомпетентних клітин до використан-ванному індуктора.
Після утворення інтерферону в органах, він надходить у кров і приєднується до так званого «сироваткового» інтерферону (синтезувався в крові, сироватці під впливом індукторів). Подальше противірусну дію інтерферону може бути представлено у вигляді схеми [13].

4.5. Аміксин - можливості і перспективи застосування в клінічній практиці

Вишукування і вивчення нових фармакологічних засобів є однією з найважливіших проблем сучасної медицини. Успіх у виробництві нового лікарського препарату - це результат глобальної довгострокової стратегії. При цьому шанси на успішне завершення робіт зі створення нових ліків досить незначні, приблизно 1 до 5000 - 10000, а процес розробки та просування на ринок нового препарату займає 12-15 років.
Розробка нових лікарських засобів боротьби з захворюваннями 21 століття є пріоритетним напрямком діяльності компанії «Ленс-Фарм». Особливий інтерес викликають препарати, що підвищують опірність організму до інфекційних факторів. Одним з таких препаратів є Аміксин.
СХЕМА ФУНКЦІОНУВАННЯ СИСТЕМИ ІНТЕРФЕРОН

Шлях Аміксину в клінічну практику включав в себе ряд послідовних етапів проходження дозвільних інстанцій. Всі параметри ефективності і безпеки підтверджені документально, починаючи з початкового стану до вимірів, проведених у процесі експериментального лікування (форма дозування, спосіб застосування, режим прийому, план добору дози, термін лікування). До теперішнього часу сформувалося уявлення про потенційно ефективних курсах лікування аміксину і потреби в ньому в першу чергу при захворюваннях, для лікування і профілактики яких не існує задовільних методів. При цьому уточнювалися вплив обраних захворювань на пацієнтів і суспільство в цілому, недоліки, які притаманні існуючим способам лікування, характеристики, якими володіє Аміксин для поліпшення будь-якого з наявних способів лікування. Економічна оцінка грунтувалася на даних порівняння з альтернативними діями. Особлива увага приділялася відповідям на питання, у що обходиться пацієнтові і (або) товариству отримання бажаного результату. Докази ефективності та економічної доцільності лікувально-профілактичних можливостей Аміксину стали підставою для включення препарату в стандарти лікування та профілактики, а також компенсації вартості лікування амиксином при таких захворюваннях, як вірусні гепатити, грип та інші гострі респіраторні інфекції, геморагічні лихоманки.
Дуже важливим було створення за результатами досліджень інформаційно-аналітичного збірника. При узагальненні досвіду застосування Аміксину визначальна роль відводилася формалізованих методами, що дозволило виробити найбільш послідовні рекомендації для реальної практики. Цінність представленої в цьому збірнику інформації визначається з одного боку - науковою обгрунтованістю, визнаній провідними вченими та фахівцями, з іншого - зв'язком з вирішенням питань цілеспрямованого і раціонального використання Аміксину в реальній практиці.

4.5.1. Назва та опис препарату Аміксин

· Реєстраційний номер 96/252/1; 96/252/3.
· Міжнародна назва - Тилорон (2,7,-bis [2 - (diethylamino) ethoxy]-9h-fluoren-9-one-dihydrochloride).
· Низькомолекулярні синтетичні з'єднання ароматичного ряду, що відноситься до класу флуоренонов.
· Таблетки, вкриті оболонкою по 6 і 10 штук в упаковці в дозі 0.125 г (Доросла форма) та 0.06 г (Дитяча форма)

4.5.2. Противірусна активність і індукція клітин - продуцентів інтерферону.

Аміксин має противірусну дію щодо широкого кола вірусів.
Аміксин індукує утворення інтерферону як першого (альфа, бета), так і другого (гамма) типів.
Аміксин «включає» синтез інтерферону на відміну від поликлональной індукції в певних популяціях клітин.
Індукція інтерферону здійснюється без допоміжних клітин, що доведено в експериментах з чистою культурою, зокрема - Т клітин.
За інтенсивністю та тривалістю дії Аміксин проявляє кращі якості індукторів: «вироблення» пізнього інтерферону, час максимального відповіді 10 - 18 годин.

4.5.3. Дія на імунну систему і запальний процес.

· Експресія на мембранах клітин молекул HLA 1 класу, антигенів HLA-DR 2 класу.
· Ріст і активація NK-клітин.
· Відновлення функціональної повноцінності антитіл.
·

Цілеспрямована поляризація Th0 Th1.
· Моделювання запальної реакції в залежності від фази запалення.

4.5.4. Фармакокінетика

· Всмоктування. Після прийому внутрішньо Аміксин швидко абсорбується з шлунково-кишкового тракту.
· Розподіл. Біодоступність становить 60%, близько 80% препарату зв'язується з білками плазми.
· Виведення. 99% препарату виводиться в незміненому вигляді, період напіввиведення становить 48 годин.

4.5.5. Доклінічні дослідження противірусна активність препарату

Противірусна активність Аміксину оцінювалася на лабораторних тварин, інфікованих збудником геморагічної лихоманки з нирковим синдромом (ГЛПС) - вірусом Хантаан. Використовувалися профілактична, лікувально-профілактична і лікувальна схеми введення препарату білим мишам. Встановлено найбільша противірусна активність Аміксину при використанні лікувально-профілактичної схеми перорального введення в дозі 10 мг / кг.
Противірусна активність Аміксину і його вплив на інтерфероновий статус при гепатиті досліджувалися на самцях білих нелінійних мишей масою 16 - 18 г . Вірус (штам Мещеріна) пасерувати шляхом внутрішньочеревно зараження білих мишей. Для відтворення ентерального гепатиту мишам перорально вводили по 0,2-0,3 мл 30-40% суспензії печінки заражених тварин на фізіологічному розчині. За 1-7 днів до зараження тварин дослідної групи перорально вводили Аміксин в дозі 4 мг. За тваринами спостерігали 14 днів. Одноразове введення аміксину 4 мг забезпечувало 40-50% захист тварин від ентерального зараження мишей протягом 72 годин після введення препарату.
Вивчено профілактичну і лікувальну дію Аміксину в концентрації 0,25 г на кг ваги проти вірусу лихоманки Західного Нілу в дослідах на білих мишах. Профілактичне введення Аміксину призводило до зниження летальності у дослідній групі в середньому на 23,4%.

5. ОТРИМАННЯ противірусних ЛІКАРСЬКИХ ПРЕПАРАТІВ

5.1. Нові шляхи синтезу хлоргідрату тилорону [8, 9]

(2,7-біс-[2 - (діетиламіно) етокси]-флуорен-9-він
Синтезовано двома способами тилорон-2 ,7-біс [(діетиламіно) етокси] флуоренон-9 (I)
Нитрованием флуоренона-9 (II) HNO ₃ отримано 2,7 - (O ₂ N) _2-II (Т. пл. 289 - 91є), відновлений ZnCl ₂ в HCl і AcOH до 2,7 - (H ₂ N) ₂ -II (Т. пл. 287 - 9є), діазотуванням якого NaNO ₂ в 50%-ної HBF ₄ отримано відповідно біс-диазосоединение (III) перекладене дією 50%-ної H ₂ SO ₄ в 2,7 - (HO) ₂ -III (IV, т. пл. 320 - 2є). Ацетилюванням флуорен (V) AcCl і AlCl ₃ синтезований 2,7-Ac _2-V (т. пл. 180 - 2є), перетворений дією 3-ClC ₆ H ₄ COOOH у присутності F ₃ CCOOH в 2,7 - (AcO) _2-V (VI), який окислен Na ₂ Cr ₂ O ₇ в AcOH до 2,7 - (AcO) _2-II (VII). Взаємодією IV або VII з KOH і Et ₂ NCH ₂ CH ₂ Cl * HCl отриманий I.
0,099 моля 85%-ної 3-ClC ₆ H ₄ COOOH додають до охолодженої суміші 0,037 моля 2,7-Ас _2-V, 400мл ХЛФ і 0,3 мл F ₃ CCOOH, захищають від світла, нагрівають до 20єС, витримують три дні, хлороформний розчин промивають насиченим розчином Na ₂ CO ₃ та насиченим розчином NaCl, органічний шар сушать безводним MgSO _4, фільтрат упарюють, отримують IV, вихід 62%, т. пл. 165 - 7єС (Меон - хлф1).
0,034 моля VI, 0,01 моля Na ₂ Cr ₂ O ₇ * 2H ₂ O, 30мл АсОН кип'ятять 45 хвилин, розчин охолоджують, додають 50мл води, виділяють VII, вихід 53%, т.пл. 224,5-6,5 є (СП).
0,04 моля Et ₂ NCH ₂ CH ₂ Cl * HCl, 0,08 моля KOH, 0,01 моля IV або VII 0,5 г PhCH ₂ NMe ₃ Br, 200мл толуолу і 50мл води кип'ятять 24 години, після охолодження відокремлюють органічний шар , промивають водою, насиченим розчином NaCl і висушують безводним MgSO _4, толуол упарюють у вакуумі, масло розчиняють в 5мл Меон додають до 50 мл ефірні. ненасиченого HCl. Виділяють ді-ХГ (I) 50%, т.пл. 232 - 4є (з-PrOH-MeOH, 3:1).

5.2. Одержання бонафтон (6-бром-1 ,2-нафтохінон)

Отримання 6-бромнафтохінона-1, 2 з нітрозодісульфонатом калію [10]
Реакцією β-нафтол з Br _2, в лід АсОН отриманий з виходом 76% 6-бромнафтол-2 (I), т.кіп. 200 - 5є / 20 т.пл. 128єС. Взаємодією I c ON (SO ₃ K) ₂ в дистильованій воді при додаванні 1 / 6 н KH ₂ PO ₄ призводить до 6-бромнафтохінону-1, 2, т.пл. 170є (разл).
Бонафтон - ¹⁴ С [11]
Розроблено метод синтезу [8 - ¹⁴ С]-6-бром-1 ,2-нафтохінону (I, бонафтон), що володіє противірусною активністю, взаємодією 4-MeOC ₆ H ₄ CH ₂ CH ₂ CH ₂ Br з Mg і ¹⁴ CO ₂ отримують 4 - MeOC ₆ H ₄ CH ₂ CH ₂ CH ₂ - ¹⁴ COOH (II). Циклизация (II) ПФК дає [1 - ¹⁴ С]-7-метокси-1-тетралон (III), відновлення якого на Pd / С призводить до [1 - ¹⁴ С]-7-метоксітетраліну (IV). Дегидрирование IV за допомогою тетрахлор-1 ,2-бензохинона призводить до [1 - ¹⁴ С]-7-метоксінафталіну ^{(V-нероліну-14} С) з V і HBr отримують [8 - ¹⁴ С]-2-нафтол (VI), бромування якого дає [1 - ¹⁴ C] -3,8-дібром-7-оксінафталін (VII). З VII отримують [8 - ¹⁴ C]-6-бром-2-нафтол (VIII). Реакція VIII з ON (SO ₃ K) ₂ призводить до (I).

5.3. Госипол

2,2-біс-(1,6,7-тріоксі-3-метил-5-ізопропіл-8-альдегідонафтіл)

C ₃₀ H ₃₀ O ₈
Мовляв. маса 518.57
Т.пл. 180-181 ° C

Госипол являє собою кристалічний канарково-жовтий порошок без запаху.
Розчинний - в спирті, ефірі, ацетоні, хлороформі, піридині.
Не розчинний - воді.
Якісні реакції. Кристалик госипола з краплею конц. сірчаної кислоти на годинному склі дає пурпурно-червоне забарвлення.
Діоксо C ₃₀ H ₃₂ O ₈ N _2. У колбі із зворотним холодильником нагрівають на водяній бані 0.5 г госипола, 1 г гідроксиламіну гідрохлориду, 5 мл піридину та 5 мл абсолютного спирту. Розчинник концентрують під тягою, до залишку додають спирт. Випадають кристали; їх відокремлюють і перекрісталлізовивают із спирту. Т.пл. 312 ° C.
Госипол є одним з головних пігментів бавовнику, відомий в трьох таутомерних формах. Володіє властивостями антиоксиданту, лужні розчини поглинають вільний кисень повітря. Отруйний.
У ядрах насіння та інших частинах бавовнику зміст госиполу в середньому становить 1%. У процесі виробництва бавовняного масла він перетворюється на глибоко забарвлені не токсичні сполуки, що утрудняють рафінацію масла.
В даний час поряд з фармацевтичною галуззю застосовується для отримання полімерних матеріалів, переважно лаків.

ЛАБОРАТОРНИЙ СПОСІБ ОДЕРЖАННЯ
Сировина і реактиви.

Вихідна сировина	Кількість	Примітка
Кора коренів бавовнику	250 г	У корі коріння бавовника міститься більше госипола, ніж в інших частинах рослини. Відсутність у ній жирних речовин полегшує виділення та очищення.
Ефір	1000 мл	Для видалення перекисів ефір струшують з 5% розчином сірчанокислого заліза (II), підкисленого сірчаної кислотою.
Оцтова кислота	25 мл
Петролейний ефір	25 мл
Гідросульфіт натрію	1 г
Етиловий спирт	50 мл
Піридин	5 мл
Гідроксиламін гідрохлорид	1 г

1 Стадія. Виділення госипола у вигляді госсіполацетата.
Госсіполацетат - молекулярної комплекс складу C ₃₀ H ₃₀ O ₈ * CH ₃ COOH, легко гідролізуемое гарячою водою.
Грубоізмельченную повітряно-суху кору коренів бавовнику перколюючих при зниженій температурі 1 л ефіру, вільного від перекисів. Ефірний екстракт концентрують при невеликому розрідженні до обсягу 40-50 мл, додають 15 мл крижаної оцтової кислоти, добре перемішують і, не закриваючи колби, залишають у холодильнику для кристалізації. При повільному випаровуванні ефіру випадає госсіполацетат. Першу порцію зеленувато-жовтих кристалів фільтрують на скляному фільтрі і промивають 10 мл суміші ефіру і оцтової кислоти у співвідношенні 3:1.
Фільтрат і промивну суміш об'єднують і залишають у стакані при кімнатній температурі, поки не випарується половина обсягу. В цей час випадає друга половина госсіполацетата. Поєднавши разом отримані опади, їх розчиняють в 50 мл ефіру, додають 5 мл оцтової кислоти і залишають на добу. Випадає чистий госсіполацетат в кількості 3 гр.
2 Стадія. Отримання вільного госипола.
На холоду розчиняють 3 г госсіполацетата в 50 мл ефіру, вільного від перекисів, і переносять у конічну колбу, що містить рівний об'єм 0.4%-ного водного розчину дитіонітів натрію (невірно званий гідросульфітом натрію).
Ефір відгонять при температурі лазні близько 60 ° C під помірним вакуумом. У міру випаровування ефіру на поверхні води виділяється вільних госипол у вигляді скориночки. Для повноти гідролізу госсіполацетата цю операцію повторюють ще раз, тобто відфільтрований осад знову розчиняють в ефірі, додають рівний об'єм води, ефір відгонять. Отриманий таким чином госипол висушують на повітрі. Отримують 2 гр.
Для очищення всю порцію госипола розчиняють в 25 мл ефіру і додають петролейний ефір до помутніння розчину. Розчин залишають на кристалізацію. Кристалічний госипол - канарково-жовтий порошок, зберігають у пробірці з темного скла. Отримують чистого госипола 1 - 1.2 г , Що має т. пл. 180-181 ° C.

5.4. ОТРИМАННЯ лейкоцитарний альфа-ІНТЕРФЕРОНУ

Здатність лейкоцитів людини продукувати інтерферон була показана незабаром після відкриття системи інтерферону Айзекс / Франція /.
Методика полягає в наступному.
З периферичної крові донорів виділяють лейкоцитарну масу і піддають культивування в суспензії. Використовують середу № 1, в яку додають 0,0015 од / мл інсуліну і 100-200 од / мл нативного інтерферону. До лейкоцитам в концентрації (5-10) * 10 ⁶ клітин / мл в якості індуктора додають вірус хвороби Ньюкасла з інфекційним титром не нижче 10 ⁸ / мл ТЦД ₅₀ в культурі курячих фіброластов. Продукувати інтерферон відокремлюють від культурального середовища шляхом центрифугування.
ОТРИМАННЯ БЕТА-ІНТЕРФЕРОНУ
Ще в 60-і роки було показано, що інтерферон, що провокується клітинами амніону людини, а також шкірно-м'язовими фібробластами, за своїми властивостями відрізняється від лекоцітарного інтерферону. В даний час для отримання бета-інтерферону використовують диплоїдні клітини людини. Суперіндукцію здійснюють різними впливами - дихлоро-1-бета-D-рибафуранозилбенэимидазолом, хлороквіну, нейтральним червоним, УФ ~ радіацією і ін
ОТРИМАННЯ ГАММА-ІНТЕРФЕРОНУ
Гамма-інтерферон є продуктом Т-лімфоцитів людини. За останнє десятиліття завдяки посиленому вивченню імунної відповіді і властивостей іммуннокомпетентних клітин значно розширилися уявлення про функції Т-лифоцитов, а також про продукти, що виділяються Т-лімфоцитами - лімфокінів, що володіють властивостями біорегуляторів.
Гамма-інтерферон, або імунний інтерферон, також є одним з активних регуляторів імунної відповіді, тому що має супресорної активністю щодо продукції антитіл, викликає активацію природних кілерів.
Гамма-інтерферон продукують активовані Т-лімфоцити.
Для отримання великих кількостей гамма-інтерферону з периферичної крові виділяють Т-лімфоцити і обробляють мітогеном або антилімфоцитарної сироваткою. Наприклад, до культури з концентрацією лімфоцитів (I-2) * 10 ⁵ в 1 мл додають стафілококовий ентеротоксин в концентрації 0,02 мкг / мл.
Культури інкубують в середовищі з людським альбуміном. Інтерферон виділяють з культурального середовища. Можливо повторне стимулювання культури і повторне продукування інтерферону.
ЛЮДСЬКИЙ ЛЕЙКОЦИТАРНИЙ ІНТЕРФЕРОН
Характеристика готового продукту,
Людський лейкоцитарний інтерферон є видоспецифічними гликопротеидом, що синтезуються донорськими лейкоцитами у відповідь на вплив інтерфероногени.
Специфічність препарату визначається такими ознаками:
А) противірусну активність. У розведенні, відповідному титру активності, препарат повинен захищати культуру людських клітин від цитопатичної дії індикаторного вірусу, взятого в дозі 100 ТЦД ₅₀
Б) стійкістю активності до дії нуклеаз-РНК-ази і ДНК-ази;
В) чутливістю активності до дії трипсину - при концентрації ферменту 300 мкг / мл протягом I години при 37 ° С препарат повністю інактивується;
Г) чутливістю активності до дії специфічної антисироватки - антіінтерфероновая сироватка в розведенні, відповідному титру повинна знижувати захисну дію інтерферону, взятого я кількості 10 од, в реакції нейтралізації.
Основні вимоги до препарату.
Препарат повинен бути вірусологічних стерильним, нетоксичним і нешкідливим.
У розведенні, відповідному титру активності, препарат повинен захищати культуру людських клітин від цитопатичної дії індикаторного вірусу.
Сухий препарат - пористий порошок сірувато-коричневого кольору, легко розчинний в 2 мл дистильованої води. Залишкова вологість не повинна перевищувати 2%,
Розчин препарату повинен мати різні відтінки червоного кольору і жовтуватий відтінок.
ТЕХНОЛОГІЯ ОТРИМАННЯ ПРЕПАРАТУ
Кров заготовляють на станціях переливання крові відповідно до діючих інструкцій, у стерильні багатокамерні мішки або флакони, заповнені консервирующим розчином.
Пластикатну мішки центрифугують 4 хв при 4 ° С і з них вичавлюють послідовно - плазму, а потім 40 мл верхнього шару з поверхні клітинної фракції (еритромаси) або 40 мл верхнього шару клітинної фракції (лейкомасса), які використовують в подальшому в якості джерела лейкоцитів для біосинтезу препарату.
Зразок крові, плазми, еритромаси або лейкомасси від кожного донора, повинен контролюватися на відсутність інфікування сифілісом, гепатитом, СНІДом згідно з діючими інструкціями. При негативних результатах контролю еритромаси і лейкомасса можуть використовуватися для виробництва інтерферону не пізніше, ніж через добу після забору крові від донора. Зберігання їх допускається при температурі не вище 4 ° С.
Плазма або сироватка донорської крові входять до складу культуральної суміші на всіх стаціях біосинтезу інтерферону.
Культивування та контроль виробничотехнічного штамів вірусів, отримання культур курячих і людських фібробластів.
У виробництві інтерферону в якості інтерфероногени використовується вакцинний штам "Н" вірусу хвороби Ньюкасла. Це представник групи параміксовірусів, для яких характерна сферична форма вірусів, і спіральна структура нуклеокапсида. Вірус легко репродукується в курячих ембріонах і культурі курячих фібробластів, надаючи цітоплазтіческое дію. Вірус безпечний для людини, проте може викликати запальні явища при випадковому попаданні масивної дози в око.
Індикаторним вірусом служить штам "Індіана" вірусу везикулярного стоматиту.
Це представник групи рабдовірусів, що також мають спіральну структуру нуклеокапсул, але інфекційний віріон за формою нагадує кулю. Вірус добре репродукується в курячих ембріонах, а також в культурах курячих і людських фібробластів, надаючи цитопатична дію.
Необхідно дотримуватися обережності при роботі з цим вірусом.
Методи культивування вірусів
Вірус хвороби Ньюкасла культивують у 9-10-денних курячих ембріонах. Ембріони переглядають через овоскоп, полеглі відкладаються, а у життєздатних олівцем обводяться кордону повітряної порожнини.
При вихідному титрі вірусу 10 ⁸ -10 ⁹ ТЦД ₅₀ / мл заражає доза становить 0,2 мл розведення 10 ^-4. Ця доза вводиться в ембріон шприцом через повітряну порожнину з дотриманням умов стерильності. Місце проколу в шкаралупі заливається парафіном і ембріони инкубируются 2-і доби при 37 ° С.
Після інкубації ембріони охолоджують при 4 ° С протягом 3-4 годин, потім в строго стерильних умовах розкривають з боку повітряної порожнини і візуально оцінюють їх життєздатність. Полеглі - відбраковують, а з решти пастерівською піпеткою (за допомогою вакууму або груші) відсмоктують алантоісную рідина, яка і служить надалі джерелом вірусу.
Віруссодержащую аллантоісную рідина контролюють на бактеріологічну стерильність. Визначають інфекційний титр в культурі курячих фібробластів і титр гемаглютинінів.
Контроль на стерильність. здійснюють висівом I мл аллантоісной рідини з кожного флакона на поживні cpeди - цукровий бульйон і середовище Сабуро. Посіви інкубують протягом 7 діб, на цукровому бульйоні при 37 ° С, а на середовищі Сабуро - при кімнатній температурі.
Інфекційний титр визначають в культурі фібробластів. У 3-х добову культуру зі сформованим монослоем клітин вводяться різні розведення (від 10 ^-7 до 10 ^-10) алантоісной рідини. Культури інкубують 3-е суток при 37 ° С і потім дивляться під мікроскопом.
Максимальні розведення, що роблять в культурі цитопатична дію, приймаються за ТЦД вірусу (титр цитопатичної дії).
_Тітр Гемаглютинінів визначається стандартним методом постановки реакції гемагллютінаціі з використанням курячих еритроцитів (0,5%).
Титр гемаглютинінів не є провідною характеристикою вірусів і постановка реакції гемаглютинації не є обов'язковою для кожної партії вірусу.
У виробництві допускається використання тільки бактеріологічно стерильного вірусу з інфекційним титром 10 ^-8 -10 ^-9 / 1 мл ТЦЦ ₅₀ і титром гемаглютинінів 250 - 1000.
Вірус хвороби Ньюкасла представляє велику цінність для виробництва, тому повинні бути вжиті заходи до того, щоб зберегти його чистоту та інтерфероногенів властивості. Категорично забороняється безперервне використання пасивування вірусу: як вихідний матеріал при зараженні використовують кращу партію вірусу, яку після контролю розливають по I мл в ампули і ліофілізіруют.
Після ліофілізації ця партія надалі вважається робочим стандартом вірусу.
Робочий стандарт вірусу контролюють описаними методами на бактеріологічну стерильність, інфекційний титр і титр гемаглютинінів. Потім в обов'язковому порядку вірус ідентифікують.
Ідентифікацію вірусу хвороби Ньюкасла проводять постановкою стандартної реакції гальмування гемаглютинації з антисироватки. Антисироватка в розведенні, відповідному титру, але не нижче, ніж 1:1000, повинна повністю пригнічувати аглютинацію курячих еритроцитів / 0,5% / при дозі вірусу, рівної 4АЕ.
Отримання первинно-тріпсінізірованних, культур шкірно-мншечной тканини курячих і людських ембріонів.
Культури шкірно-мьшечной тканини курячих і людських ембріонів широко використовують у виробництві інтерферону для контролю вірусів, а також для визначення відсутності токсичності та противірусної активності препарату. Успішна робота виробництва в значній мірі залежить від рівня ведення культур клітин.
Для отримання культур клітин застосовують стандартні методи, засновані на дезінтеграції тканини ембріона трипсином. При вирощуванні культур слід звернути найсерйознішу увагу на якість середовищ, сироватки, допоміжних розчинів і чистоту посуду.
Отримання культури курячих фібробластів
Джерелом тканини є 9-10-денні курячі ембріони з дотриманням умов суворої стерильності ембріон витягують з шкаралупи на стерильну чашку Петрі. Відбирається шкірно-м'язова тканина, переноситься в колбу Ерленмейера і промивається розчином Хенкса з антибіотиками (50 од / мл пеніциліну + 100 од / мл стрептоміцину або 20 од / мл мономіцііа). Промивні води зливають і тканина подрібнюють, розміри шматочків 1 - 5 мм . Потім тканину заливають підігрітим до 37 ° С розчином трипсину (0,2%), розведеним розчином Хенкса (1:1). Колбу з тканиною поміщають на магнітну мішалку, включають обертання. Через 5 хв. обертання припиняють і після осідання шматочків тканини надосадову рідину зливають з дотриманням умов суворої стерильності. У колбу знову заливають підігріту до 37 ° С суміш розчинів трипсину і Хенкса. Суспензію перемішують 5-7 хв. Потім обертання зупиняють і після осідання великих шматочків тканини надосадову рідину переливають у стерильні центрифужні стакани з пробкою. Суспензій центрифугують при 1250 об / хв, протягом 10 хв. Надосадову рідину відкидають, а осад клітин суспендують в культуральній рідині наступного складу: середа № 199 - 30%, гідролізат лактальбуміну - 50%, нормальна бичача сироватка - 20% і антибіотики.
Таку операцію тріпсінізаціі повторюють 4-6 разів, але клітини збирають в один флакон з культуральної рідиною.
Після закінчення збору суспензію ретельно перемішують і клітини підраховують у лічильній камері Горяєва. Суспензію розводять культуральної рідиною до такої міри, щоб у I мл містилося 650 000 -750 000 клітин. Потім суспензію розливають у стерильні пробірки по I мл і інкубують при 37 ° С протягом 2-3 діб, до утворення моношару клітин.
Технологічний процес виготовлення лейкоцитарного інтерферону поділяють на 7 стадій і 12 операцій,
Стадія 1 - Виділення лейкоцитів.
Біосинтез інтерферону проводять з використанням лейкоцитів, звільнених від домішки еритроцитів. У тих випадках, коли домішка еритроцитів перевищує 100 клітин на I лейкоцит, наприклад, в еритромаси для їх відділення необхідно застосувати фракціонування з наступним гемолізом лейкоцітсодержащей фракцій. Якщо зміст еритроцитів менше 100 клітин на I лейкоцит, обмежуються тільки гемолізом.
Операція.1. Фракціонування.
У стерильні скляні колби - відстійники грушоподібної форми з герметично закриваються верхнім і нижнім відводами, місткістю не нижче 5 л заливають 2 л стабілізуючого розчину такого складу: апірогенна дистильована вода - I л, глюкоза фармацевтична - 20 г , Аскорбінова кислота - 0,25 г, хлористий кальцій - 5 г , Цитрат натрію тризаміщені - 15 г . Стабілізуючий розчин при 20 ° С повинен мати щільність 1,05 г / мл. Розчин стерилізується автоклавуванням або фільтрацією і може зберігатися тривалий час при температурі 4 ° С. Однак, концентрований розчин цитрату натрію доцільно автоклавування окремо і вводити безпосередньо у відстійник.
У відстійник із стабілізуючим розчином вводять рівний (2л) обсяг клітинної фракції. Суспензію ретельно перемішують і додають розчин осадителя еритроцитів у кількості 1 / 10 від сумарного об'єму суспензії (близько 400 мл).
Як осадителей використовують декстран фармацевтичний з молекулярною масою не нижче 80 000 Дальтон (вихідний розчин 100г / л), полівініловий спирт фармацевтичний (вихідний розчин 50 г / л або суміш 1:1 за об'ємом). Розчини осадителей стерилізують в автоклаві або фільтрацією і можуть зберігатися тривалий час при температурі +4 ° С,
Під дію осадителей відбувається агрегація еритроцитів, що прискорює їх випадання з суспензії, У результаті відбувається розшарування суспензії на 2 фракції - темно-забарвлену нижню (фракція еритроцитів) і світлу верхню (фракція лейкоцитів). Через нижній відвід відстійника фракцію еритроцитів зливають. Потім зливають і фракцію лейкоцитів. Клітини відокремлюють центрифугуванням. Надосадову рідину відкидають, а осад клітин ресуспедіруют у живильному середовищі з кінцевої концентрацією 0,5% этилендиаминотетрауксусной кислоти (ЕДТА).
Операція 2. Гемоліз залишкових еритроцитів.
Для гемолізу використовують 0,83%-ний розчин хлористого амонію в апірогенної дистильованої воді, охолодженої до 4 ° С. Розчин стерілізіруют автоклавуванням. Клітинну суспензію заливають не менш ніж 10 обсягами Гемолітико, витримують протягом 10 хв при 4 ° С, у потім клітини відокремлюють центрифугуванням (600 * Д, 10 хв, 4 ° С).
Надосадову рідину зливають і не використовують на наступних стадіях. Осад клітин суспендують у живильному середовищі 199 чи мінімальною "голка", що містить 3 од / мл гепарину, 5% донорської плазми або сироватки, 0,1 трилону Б та 5 од / мл мономицина, середа № I.
Операція 3. Підрахунок життєздатних лейкоцитів.
Для визначення кількості життєздатних клітин використовують 1%-ний водний розчин еозіната натрію. Еозінатом, забарвлюються в червоний колір тільки загиблі клітини.
Відбирають 0,5 мл ретельно змінного суспензії і об'єднують її з 0,5 мл розчину еозіната. Витримують суміш 30 сек при кімнатній температурі і розводять фізіологічним розчином в 100 разів. Розведення вводять в лічильну камеру Горяєва і вважають кількість забарвлених і нефарбованих клітин під мікроскопом із збільшенням 100 у всій камері, кількість життєздатних клітин (X) визначають за формулою:
X = А х 200 х 1100, де
А - кількість нефарбованих клітин в камері.
Кількість нежиттєздатних (забарвлених клітин) не повинно перевищувати 3% від загального числа клітин в суспензії.
Стадія 2. Стимуляція інтерфероногенезу - праймінг.
На цій стадії переслідують дві основні мети; активізувати метаболізм лейкоцита (для цього в культуральне середовище вводять нативну плазму та інсулін) і стимулювати інтерфероногенез дії інтерферону. При правильній постановці праймінг забезпечує підвищення виходу активності не менше, ніж у 4 рази.
Операція 4. Складання культурального середовища.
Лейкоцити, звільнені від домішки еритроцитів, суспендують з розрахунку 10-20 млн клітин в I мл середовища № 1, в яку додані 0,0015 од / мл інсуліну і 100-200 од / мл нативного інтерферону. Суспензію переливають у плоскодонні колби ємністю 5 л , Заповнюючи тільки половину обсягу. У колбу поміщають стержень з м'якого заліза з некоррозірующім покриттям, який попередньо стерилізують в автоклаві або спалюванням в полум'ї пальника.
Операція 5. Суспензійний культивування.
Колби з клітинної суспензією перекривають стерильною алюмінієвою фольгою і поміщають у водяну баню з магнітно-провідного матеріалу (пластика будь-якого типу або оргскла), підключену до ультратермостат. Ультратермостат повинен забезпечувати сталий підтримки температури в клітинній суспензії в межах 37,5 ° С. Під банею завадять магнітні мішалки, обертання яких передається стрижню в культуральній колбі. При швидкості обертання 100 об / хв лейкоцити не травмуються, але стійко підтримуються в суспензії.
Клітини інкубують не менше 2-х годин (біологічний час). Якщо виникає необхідність, тривалість праймінга можна збільшити до 12 - годин. Однак у цьому трапляться у культуральне середовище необхідно додати 0,005 М сукцинату натрію.
Стадія 3. Індукція інтерферону.
Для індукції використовують бактеріологічний стерильний вірус хвороби Ньюкасла з інфекційним титром не нижче 10 ⁸ / мл ТЦД ₅₀ в культурі курячих фібробластів. Вірус заздалегідь підігрівають по 37,5 ° С.
Операція 6. Введення вірусу-інтерфероногени.
Культуральні колби розкривають під полум'ям пальника і вірусосодержащую аллантоісную рідина переливають в суспензію з розрахунку 10 ^-100 ТЦД ₅₀ на I лейкоцит. Так, при вмісті лейкоцитів 25 млрд. додають 250 млн вірусу з інтерфероногенів титром ¹⁰ вересня ТЦД _50. Колбу перекривають алюмінієвою фольгою з дотриманням умов стерильності і інкубують протягом I години при 37,5 ° С.
Стадія 4. Відділення індукованих лейкоцитів.
На стадії індукції завершують підготовчі етапи інтерфероногенезу.
Для поліпшення переносимості препарату, після індукції необхідно видалення культуральної рідини неадсорбіровавшіхся частинок вірусу-індуктора і антигенів курячої аллантоісной рідини. Для цих цілей виявилося доцільним відділення індукованих лейкоцитів і переведення їх у середовище нового складу.

Операція 7. Відділення індукованих лейкоцитів.
Суспензію індукованих лейкоцитів центрифугують при 600хД 15 хв 4 ° С, або сепарують в умовах стерильності. Надосадову рідину відбирають в окрему ємність для знезараження, а осад клітин суспендують у живильному середовищі такого складу: середа № 199 чи мінімальна "Голка", 3 од / мг гепарину, 5% плазми або сироватки донорської крові, мономіцин 50 од / мл, рН 7 ,2-7, 4 / середа № 2 /.
Стадія 5. Біосинтез
Біосинтез інтерферону проводять в стаціонарній культурі лейкоцитів. При цьому відбувається досить міцне прикріплення лейкоцитів до поверхні культурного судини. Виявилося, що найважливішим параметром, що визначав вихід активності, при стаціонарному культивуванні є щільність посадки, тобто кількість клітин на одиницю поверхні. Експериментально встановлено, що оптимальним для інтерфероногенезу є щільність в 5-7 млн лейкоцитів на I см поверхні. Показово, що при такій щільності посадки лейкоцити створюють пласт товщиною в 3 клітини. Хорошому прикріпленню клітин сприяє нанесення на внутрішні поверхні культурального судини гідрофобного покриття - силікону будь-якої марки.
Для забезпечення живильної потреби культури цілком достатньо 0,1 л середовища № 2 на I млн лейкоцитів. Основою енергетичного обміну для лейкоцитів є анаеробний гліколіз. Через дефектності ферментних систем початкових стадій циклу Кребса, окислення глюкози в цих клітинах завершується на стадії лактату і лише невелика кількість (в межах 3%) піддається подальшому розщепленню. Тому, обсяг повітряної фази в культуральному посудині мало впливає на вихід активності. Однак, заповнення середовищем культурального судини, більш ніж на половину його об'єму не рекомендується.
Зазначені вище рекомендації слід використовувати при складанні клітинної суспензії в конкретних умовах.
Для кожного типу культурального судини необхідно підібрати оптимальні співвідношення кількості клітин і середовища № 2 (зберігши і газову фазу), враховуючи виходи активності та економічність процесу біосинтезу.
Операція 8. Стаціонарне культивування індукованих лейкоцитів.
У матриці, з суворим дотриманням стерильності, заливають розраховану кількість середовища № 2 і вводять необхідну кількість лейкоцитів. Перекривають матриці стерильними пробками, суспензію клітин ретельно перемішують і встановлюють матриці в соответствующе положення (норма "ребро") на стелажі термального приміщення з температурою 37 ° С. Культивування продовжують 18-20 годин. Допускається ролерною культивування лейкоцитів на стації біосинтезу при дотриманні вищезгаданих принципів.
Операція 9. Відділення відпрацьованих лейкоцитів.
Після завершення синтезу інтерферон-яка містить культуральне середовище піддають центрифугування або сепарування з дотриманням умов стерильності для відділення відпрацьованих клітин.
Надосадову рідину збирають в стерильні бутлі ємністю -10 л. Потім, для інактивації вірусу - інтерфероногени в кожній бутлі доводять величину рН до 2,5 додаванням при ретельному перемішуванні (піпеткою, поступово) 20%-ного розчину соляної кислоти. Правильність доведення величини рН необхідно контролювати за допомогою потенціометра будь-якої системи. З кожному бутлі відбирають зразок (10 мл) для проведення контролів, після чого бутель перекривають стерильною гумовою пробкою і запечатують, на бутель приклеюють етикетку із зазначенням номера серії і дати виготовлення. Перед розливом по ампулах доводять рН розчину до 7,0-6,5.
Операція 10. Розлив і лиофильная сушка.
У ампули і флакони ємністю 5-10 мл препарат розливають по 2 мл. У флакони ємністю 500 мл по 50 мл.
Препарат вводять мірно за допомогою дозатора або бюретки з суворим дотриманням умов стерильності. Ампули або флакони з препаратом перекривають стерильними марлевими (2 шари) тампонами і встановлюють вертикально в касети сушильного апарату. Касети з препаратом піддають заморожуванню при З6-40 ° С протягом 48-72 годин,
Ліофілізацію проводять у вакуумсушільних апаратах будь-якої системи.
Препарат зберігають у сухому, захищеному від світла місці при температурі від +4 до 10 ° С. Термін придатності препарату 1,5 роки з моменту виготовлення.

7. ТАБЛИЦЯ противірусних препаратів

№ п / п	Структурна формула	Назва, синоніми	Систематичне назву	Методи отримання	Аналіз	Різне
1		Ремантадин (полірують, флумадін)	альфа-метил-1-адамантил-метиламіни гідрохлорид
2		Дейтіфорін	1-Норборнілетіл-аміну гідрохлорид
3		Адапромін	альфа-метил-1-адамантил-етіламіна гідрохлорид
4		Арбідол	етилового ефіру 6-бром-5-гідрокси-1-метил-4-диметил-амінометил-2-фенілтіометіл-індол-3-карбонової кислоти гідрохлорид, моногідрат
5		Бонафтон	6-бром-1 ,2-нафтохінон	[10], [11]
6		Оксолін	1,2,3,4-тетраоксо-1 ,2,3,4-тетрагідро-нафталіну дигідрат
7		Теброфен	3,5,3 ', 5'-тетрабром-2, 4,2', 4'-тетраоксі дифеніл
8		Ріодоксол	2,4,6-трійодрезорцін
9		Флореналь	бісульфітное з'єднання 2-флуореноніл-гліоксалю
10		Метисазон	Тіосемікарбазон N-метилгуанін
11		Ідоксурідін (перецід, Офтан-IDU, iduviran)	5-йод-2'-дезоксіурідан
12		Ацикловір (ацівір, виролекс, зовіракс, цевірін)	9 - (2-гідрокси) етоксіметілгуанін
13		Ганцикловір (цимевен, cymevene)	9 - (1,3-дигідрокси-2-пропоксіметіл) цінина
14		Фармцікловір (фамвір, famvir)	2 - [- (2-аміно-9H-пурин-9-іл) етил] -1,-1-пропіндіола діацетат
15		Рібаміділ (віразол, рибавірин)	1-бета-Д-рібофурінозіл-1H-1 ,2,4-тіазол-3-карбоксамідів
16		Зидовудин (озідотімідін, ретровір)	1 - (3'-азидо-2'-дезоксирибози) тимідин
17		Фланозід	7-бета-Д-глюкопіранозід-8-(3-метилбута-2-еніл) -4 ',5,7-тріоксілфліванон
18		альпізарін	2-С-бета-Д-(глюкопіранозід) -1,3,6,7-тетраоксіксантон
19		Мегосін	1,1 ', 6,6'-тетраоксі-5, 5'-діізопропіл-3, 3'-диметил-7, 7'-діоксо-8, 8'-діметіламіноетан-сульфокислоти динатрієва сіль-2, 2'-дінафталіна
20		Госипол	2,2 '-Ді-(1,6,7-тріоксі-3-метил-5-ізопропіл-8-нафтальдегід
21		Полудон	поліаденіт-уріділовая кислота
22		Камедон (camedon) неовір	натрієва сіль 10-метіленкарбоксілат-9-акридину
23		Тилорон	2,7-біс-[2 - (діетиламіно) етокси]-флуорен-9-він	[7], [8], [9]

ЛІТЕРАТУРА

1. Машковский М.Д. Лікарські препарати. Т.2. - Москва «Медицина», 1993.367с.
2. Харкевич Д. А. Фармакологія. - Москва «Медицина», 1996.425с.
3. БМП / Под ред. Б.В. Петровського. - М. «Рад. Енциклопедія », 1976. Визначення / Под ред. Прохорова. - М. «Рад. Енциклопедія », 1976.673с.
5. Машковский М.Д. Лікарські препарати. Т.2. - Харків «Торсінг», 1997.423с.
6. Михайлов Клінічна фармакологія. - М. «Медицина», 1983, 258с.
7. Andrews. Edwin R, Fleming Roberts W, Girisar J. Martin, Kihm James C. , Wenstup David L, Mayer Gerald D. «J. Med. Chem », 1974, 17, № 8 882 - 886 (англ). (РЖХ, 8ж326, 1975).
8. Про синтезі 2,7-біс-[2 - (діетиламіно) етокси]-флуорен-9-він. Богатський А. В. Грень А. І. Литвинова Л. А. Лемпарт Г. В. «Доповідь АН УРСР» 1976р, Б, № 7 610 - 612 (ред. англ.). (РЖХ, 7ж141, 1977).
9. Нові шляхи синтезу хлоргідрату тилорону. Burke Sister M., Jeullie Madeleine M. «Synth. Communs », 1976, 6, № 5371 -376 (англ). (РЖХ, 11ж209, 1977).
10. Отримання 6-бромнафтохінона-1, 2 з нітрозодісульфонатом калію. «Z. Chem ». 1973 р, 13, № 6, 216 (ньому). (РЖХ, 6ж203, 1974).
11. Бонафтон - ¹⁴ С. Ківокурцева Л. М., булот А. Д., Боброва Н. С. «мічені біологічно-активні речовини» (Москва), 1982р, № 4, 54-59. (РЖХ, 1ж188, 1983).
12. Прикладна імунологія. Під редакцією Сохіна А.А. і Чернушенко Е.Ф. - Київ, 1994
13. Сучасні аспекти застосування інтерферонів та інших імуномодуляторів. Збірник науковий праць .- Москва, 1994 р .
14. Лоуренс Д.Р., Бенітт П.М. Клінічна фармакологія .- Москва, 1993 р .

СЛОВНИК ТЕРМІНІВ

Адсорбція - поглинання газів, парів або рідин поверхневим шаром твердого тіла (адсорбенту) чи рідини.
Білки - природні високомолекулярні органічні сполуки, побудовані із залишків 20 амінокислот, які з'єднані пептидними зв'язками у довгі ланцюги.
Віруси (від лат. Virus - отрута), дрібні неклітинні частки, що складаються з нуклеїнової кислоти (ДНК і РНК) і білкової оболонки (капсида).
Віріон - повністю сформована вірусна частка, що складається з нуклеїнової кислоти та білкової оболонки (капсида). Зберігає та переносить генетичний матеріал вірусу від однієї клітини до іншої.
Вірулентність - ступінь хвороботворності (патогенності) даного мікроорганізму.
Глікопротеїди (мукопротеїдів), складні білки, що містять вуглеводні компоненти. До глікопротеїдів відносяться багато білки плазми крові (імуноглобуліни, трансферину та ін), гормони та ін
Інфекція - впровадження та розмноження в організмі людини або тварини хвороботворних мікроорганізмів, що супроводжується комплексом реактивних процесів; завершується інфекційним захворюванням, бактерионосительством або загибеллю мікробів. Джерело збудника інфекції заражає здорових при зіткненні, через рот (з водою і їжею), повітря (з крапельками слини і слизу), членистоногих переносників.
Інгібітори - хімічні речовини, що пригнічують активність ферментів. Використовують для вивчення механізму дії ферментів, для лікування порушень обміну речовин, а також у якості пестицидів.
Інтерферон - захисний білок, що виробляється клітинами ссавців і птахів у відповідь на зараження їх вірусами; неспецефіческій фактор противірусного імунітету.
Капсид - білкова оболонка вірусу, що оберігає його нуклеїнових кислот від зовнішніх впливів. Складається з окремих однакових структурних одиниць - капсомеров.
Транскрипція - ферментативний процес передачі генетичної інформації одного ланцюга ДНК для синтезу компліментарною нуклеотидної послідовності в структурі мРНК
Трансляція-процес використання генетичної інформації мРНК для синтезу білка відповідної амінокислотної послідовності
Ліпіди - велика група природних органічних сполук включає жири і жироподібні речовини. Містяться в усіх живих клітинах, один з основних компонентів біологічних мембран.
Нуклеїнові кислоти - високомолекулярні органічні сполуки, утворені залишками нуклеотидів. Розрізняють ДНК або РНК кислоти. Виконують функції передачі та зберігання генетичної інформації, беруть участь в механізмах, за допомогою яких вона реалізується в процесі синтезу клітинних білків.
Нуклеозиди - глікозиди до складу яких входять пуриновое або пірімідіновоє підставу і вуглевод рибоза або дезоксирибоза. Міститься в нуклеїнових кислотах і нуклеотидах.
Паразитизм - форма взаємовідносин між організмами різних видів, з яких один (паразит) використовує іншого (хазяїна) як середовище проживання і джерела живлення, завдаючи йому шкоди.
Реплікація - процес самоудвоенія нуклеїнових кислот. Здійснюється напівконсервативним способом, коли двуспіральной ДНК деспіралізуются і кожна гілка індукує синтез комплементарної собі гілки за участю ДНК-або РНК-полімерази. Ферментативний процес реплікації поділяють на три етапи: ініціація, елонгація (зростання ланцюга) і терминацию.
Сенсибілізація - підвищення чутливості організму тварини і людини до впливу будь-яких подразників.
Субстрат - хімічна речовина піддається перетворенню під дією ферменту.
Вуглеводи - велика група природних органічних сполук. Входять до складу клітинної оболонки та інших структур, беруть участь у захисних реакціях організму.
Ферменти - біологічні каталізатори, присутні у всіх живих клітинах.
Пірогенні речовини (грец. pyr - вогонь + gennao - створювати, виробляти; син. Пірогени) - біологічно активні речовини екзогенного (бактеріального і вірусного) і ендогенного (клітинно-тканинного) походження, що володіють властивістю викликати перебудову рівня регуляції температурного гомеостазу, що приводить до підвищення температури тіла і розвитку лихоманки.
Проліферація (від лат. Proles - потомство і ferre - приносити, виробляти) - новоутворення клітин в організмі шляхом їх розмноження поділом. Процеси поділу, що лежать в основі проліферації - амітоз і мітоз. Подання про можливість утворення клітин з неоформленої бластома або "живої речовини", а не шляхом проліферації, в сучасній науці визнані позбавленими підстави. Проліферація лежить в основі фізіологічної регенерації клітин, яка відбувається у різних тканинах протягом усього життя індивідуума, але з особливою інтенсивністю і закономірністю має місце в кровотворної тканини, епітеліальних покривах. Джерелом проліферації при цьому служать або спеціальні недиференційовані материнські клітини, або камбіальні елементи.
Простагландини - біологічно активні речовини, що представляють собою похідні поліненасичених жирних кислот, молекула яких містить 20 вуглецевих атомів.
Протизапальні засоби - лікарські засоби, що пригнічують прояви запальних процесів.
Регенерація (позднелат. regeneratio - відродження, відновлення) - відновлення структур організму в процесі життєдіяльності та відновлення тих структур, які втрачені в результаті патологічних процесів.
Репарація - повна або неповна регенерація внутрішньоклітинних структур, клітин, ділянок тканини або органу, пошкоджених в результаті якого-небудь патологічного процесу.
Таксис (грец. taxis - побудова, розташування) - рухові реакції вільно рухливих нижчих рослин, найпростіших тварин, окремих клітин багатоклітинних організмів та мікроорганізмів у відповідь на дію подразника. Рух у напрямку до подразника називається позитивним таксисом, від подразника - негативним; рух не орієнтоване по відношенню до подразника, позначають як фоботаксіс.
Фагоцитоз (phagocytosis; грец. Phagos пожирає + kytos вмістилище, тут - клітина +-osis) - процес пізнавання, активного захоплення і поглинання мікроорганізмів, руйнування клітин та сторонніх частинок спеціалізованими клітинами імунної системи. Об'єктом фагоцитозу є мікроби, чужорідні і змінені власні клітини або їхні ферменти, комплекси антиген-антитіло та ін Невід'ємну частина фагоцитозу становить спрямований рух - хемотоксіс - фагоцитів до місця локалізації чужорідних частинок.
Цитостатичні засоби (cytostatica; грец. Kytos вмістилище, тут - клітина + statikos зупиняє; син. Цитостатики) - лікарські засоби, що пригнічують поділ клітин; використовується головним чином для лікування злоякісних пухлин.
Ендокринна система - система, що складається зі спеціальних структур, розташованих у центральній нервовій системі, різних органах і тканинах, а також залоз внутрішньої секреції, що виробляють специфічні біологічно активні речовини (гормони). Поряд з нервовою системою ендокринна система бере участь у регуляції функцій різних систем, органів і метаболічних процесів.
Протромбін - попередник ферменту троібіна, що міститься в плазмі крові. Під дією протромбіну розчинений у крові білок фібриноген перетворюється на згустки фібрину, тромбообразующіе судини. Як і низка інших факторів згортання крові (фактори VII; IX; X), протромбін синтезується в печінці під впливом вітаміну К. Зниження вмісту цих чинників у крові, визначене за протромбінового часу, супроводжується вираженою кровоточивістю і виникає внаслідок тяжких захворювань печінки, нестачі в організмі вітаміну К або порушення його всмоктування в кишечнику, при передозуванні або отруєння антикоагулянтами - антагоністами вітаміну К.
Хромосома-(від грец. Хрому - колір, фарба і сома - тіло) термін запропонований в 1888 році німецьким морфологом В. Вальдейера, який позначав внутрішньоядерні структури еукаріотичної клітини, добре забарвлюються основними барвниками. Основний носій спадкового матеріалу (комплексу генів) у еукаріотичної клітці. Хімічна організація хромосом заснована на ДНК і білках, що утворюють нуклеопротеїнових комплекс. ДНК є матеріальним носієм властивостей спадковості і мінливості і містить біологічний алгоритм розвитку клітини, організму. Білки становлять близько 65% маси хромосом і виконують структурує і регуляторну функції.
Еукаріоти - (від грец. Eu - добре, повністю і karyon - ядро, горіх) - організми, що володіють сформованим клітинним ядром, обмеженого від цитоплазми оболонкою. Генетичний матеріал укладений у хромосомах. Характерний статевий процес розмноження