Федеральне агентство з охорони здоров'я і соціального розвитку
ГОУ ВПО «Алтайський державний медичний університет» Росздрава
Факультет «Сестринська справа»
Заочне відділення
Контрольна робота
з дисципліни: «Мікробіологія»
Варіант - 3
Склав: студент 285 групи
факультету «Сестринська справа»
Дубіненко О.С.
Барнаул - 2008
Розділ «Загальна мікробіологія та вірусологія»
Питання 1. Біологічний сенс спороутворення в бактерій. Бацили, клостридії, приклади. Особливості хімічного складу і методи виявлення
Спори бактерій можна розглядати як форму збереження спадкової інформації бактеріальної клітини за несприятливих умовах впливу зовнішнього середовища [1, с. 25].
До спороутворюючих відноситься велике число еубактерій приблизно з 15 родів, що характеризуються морфологічним і фізіологічним різноманітністю.
Серед них є паличкоподібні, сферичні, міцеліальні форми, спірили і нитчасті організми. Всі вони мають будову клітинної стінки, характерне для такої грампозитивних еубактерій. Ні в одному випадку не виявлена зовнішня липопротеиновой мембрана, незважаючи на те, що багато пологів і види спороутворюючих бактерій не фарбуються за Грамом.
За типом харчування серед них виявлені хемоорганогетеротрофи, факультативні хемолітоавтотрофами і паразитичні форми. Відношення до кисню також різноманітно: частина спороутворюючих форм представлена аеробами і факультативними анаеробами, інша частина включає облігатних анаеробів - від аеротолерантних форм до високочутливих до O2.
Краще за все, процес спорообразования вивчений у представників родів Bacillus і Clostridium, хоча наявні дані дозволяють зробити висновок про принципову однотипності цього процесу у всіх видів, що утворюють ендоспори. У кожній бактеріальної клітці, як правило, формується один ендоспори [1, с. 32].
Першим кроком до спороутворення є зміна морфології ядерної речовини вегетативної клітини, що утворює тяж уздовж довгої осі спорулірующей клітини.
Приблизно 1 / 3 тяжа потім відділяється і переходить в формується спору [1, с. 32].
У деяких видів ядерний тяж утворюється тільки на одному полюсі клітини, в його формуванні бере участь не весь генетичний матеріал вегетативної клітини, і згодом ядерний тяж цілком переходить в формується спору. Біологічний сенс формування ядерного тяжа до цих пір залишається нез'ясованим.
Формування суперечки починається з того, що в одного з полюсів клітини відбувається ущільнення цитоплазми, яка разом з генетичним матеріалом, які представляють собою одну або кілька повністю реплікованих хромосом, відокремлюється від решти клітинного вмісту за допомогою перегородки.
Остання формується впячиванием всередину клітини ЦПМ. Мембрана наростає від периферії до центру, де зростається, що призводить до утворення спорової перегородки. Ця стадія формування суперечки нагадує клітинний розподіл шляхом утворення поперечної перегородки.
Наступний етап формування суперечки - «обростання» відсіченого ділянки клітинної цитоплазми з ядерним матеріалом мембраною вегетативної клітини, кінцевим результатом якого є утворення проспорив - структури, розташованої всередині материнської клітини і повністю відділеною від неї двома елементарними мембранами: зовнішньої і внутрішньої по відношенню до проспорив.
Описані вище етапи формування суперечки (аж до утворення проспорив) оборотні. Виявилося, що якщо до спорулірующей культурі додати антибіотик хлорамфенікол (інгібітор білкового синтезу і, отже, інгібітор синтезу мембранних білків), то можна зупинити «обростання» клітинної мембраною відсіченого септи ділянки цитоплазми, і процес спорообразования перетвориться на процес клітинного ділення.
Після утворення проспорив подальші етапи спорообразования вже необоротні.
Між зовнішнім і внутрішнім мембранними шарами проспорив починається формування кортикального шару (кортекса). Потім поверх зовнішньої мембрани проспорив синтезуються спорові покриви, що складаються з декількох шарів, число, товщина і будова яких різні в різних видів спороутворюючих бактерій. У формуванні шарів спорових покривів бере участь як зовнішня мембрана суперечки, так і протопласт материнської клітини.
У багатьох бактерій поверх покривів суперечки формується ще одна структура - екзоспоріум, будова якого різна залежно від виду бактерій. Часто екзоспоріум багатошаровий, з характерною для кожного шару тонкою структурою. Всі шари, що оточують протопласт ендоспори, знаходяться всередині материнської клітини. На їх частку доводиться приблизно половина сухої речовини суперечки.
Після сформування суперечки відбувається руйнування (лізис) «материнської» клітинної стінки, і суперечки виходить у середу [4, с. 85].
Спороутворення супроводжується активним синтезом білка. Білки ендоспори на відміну від білків вегетативних клітин багаті цистеїном і гідрофобними амінокислотами, з чим пов'язують стійкість спір до дії несприятливих чинників.
Зміст ДНК в суперечці трохи нижче, ніж у вихідній вегетативної клітці, оскільки в суперечці переходить лише частина генетичного матеріалу материнської клітини. Генетичний матеріал надходить у суперечці у вигляді повністю реплікованих молекул ДНК. Спори деяких видів містять по 2 або 3 копії хромосоми.
Зміст РНК в суперечках нижче, ніж у вегетативних клітинах, і РНК в значній мірі при спорообразовании синтезується заново. Одним з характерних процесів, що супроводжують освіта ендоспори, є накопичення в них діпіколіновой кислоти та іонів кальцію в еквімолярних кількостях. Ці сполуки утворюють комплекс, локалізований в серцевині суперечки. Крім Са2 + в ендоспори виявлено підвищений вміст інших катіонів (Mg2 +, Mn2 +, K +), з якими пов'язують перебування спір у стані спокою та їх термостійкість [4, с. 85].
Істотні відмінності ендоспори від вегетативних клітин виявляються при вивченні хімічного складу окремих спорових структур. Екзоспоріум складається з ліпідів і білків і, ймовірно, виконує функцію додаткового бар'єру, що захищає спору від зовнішніх впливів, а також регулює проникнення в неї різних речовин. Однак ніяких даних, що підтверджують ці припущення, поки немає. Механічне видалення екзоспоріума не призводить до якого-небудь пошкодження суперечка.
Вони виявляють таку ж здатність до проростання, як і суперечки з невидаленою екзоспоріумом.
Спорові покриви в основному складаються з білків і в невеликій кількості з ліпідів і гліколіпідів. Білки покривів мають високу стійкість до несприятливих умов і забезпечують спорах захист від дії літичних ферментів, інших пошкоджуючих чинників, а також оберігають спору від передчасного проростання. Виявилося, що суперечки мутантів, позбавлені покривів, проростають відразу ж після виходу з материнської клітини, навіть якщо умови для подальшого зростання несприятливі. Кортекс побудований в основному з молекул особливого типу пептидоглікану. При проростанні спори з частини кортекса, прилеглої до внутрішньої спорової мембрані, формується клітинна стінка вегетативної клітини.
На відміну від ендоспори, які виникають всередині материнської клітини і оточених двома елементарними мембранами, екзоспори бактерій з роду Methylosinus і Rhodomicrobium формуються в результаті відокремлення від одного з полюсів материнської клітини. Освіта екзоспори супроводжується ущільненням і потовщенням клітинної стінки. У екзоспори відсутні діпіколіновая кислота і характерні для ендоспори структури (кортекс, екзоспоріум).
У актиноміцетів суперечки є спочиваючими клітинами і одночасно репродуктивними структурами. За типом освіти вони діляться на дві групи - ендогенні та екзогенні. Ендогенне утворення спор всередині цитоплазми материнської гіфи, виявлене у представників родів Thermoactinomyces і Actinobifida, протікає аналогічно описаному вище. У більшості актиноміцетів суперечки формуються екзогенно шляхом ділення гіфи перегородками на ділянки, кожен з яких представляє собою майбутні суперечки. Екзоспори більшості актиноміцетів не містять будь-яких додаткових внутрішніх структур крім тих, які спостерігаються у вегетативній клітці. Стінка суперечки зазвичай значно товщі, ніж стінка гіфи, і в ній можна розрізнити кілька шарів різної електронної щільності. Часто клітинна стінка оточена додатковими зовнішніми покривами.
Спочиваючі клітини еубактерій характеризуються низькими рівнями метаболічної активності. У першу чергу це стосується дихання. Від ступеня зниження метаболічної активності залежить тривалість збереження життєздатності лежать клітин. Великий інтерес представляє з'ясування механізмів, відповідальних за підтримку спеціалізованих клітин у стані спокою. В даний час найбільшу увагу привертають три гіпотези. Перша заснована на тому, що в покояться клітинах є речовини, що пригнічують активність ферментів і, отже, блокуючі метаболізм. З суперечка деяких бактерій дійсно виділені речовини, що запобігають проростанню спор. Згідно з другою гіпотезою збереження спокою пов'язують зі структурою суперечка, що забезпечує підтримку її серцевини в обезвоженном стані. Нарешті, підтримання спокою пояснюють особливим станом ферментів. Зміни їх конфігурації, що призводять до активированию ферментів, виводять покояться клітку з цього стану. Можливо, що підтримка спеціалізованих клітин у стані спокою - результат спільної дії всіх описаних вище механізмів.
Для всіх покояться форм характерна підвищена в порівнянні з вегетативними клітинами стійкість до дії різноманітних ушкоджуючих факторів: високих і низьких температур, зневоднення, високої кислотності середовища, радіації, механічних впливів і ін Найбільшою мірою ця стійкість проявляється у ендоспори. Механізми стійкості в даний час мало вивчені. Для ендоспори основними чинниками, що забезпечують їх стійкість до дії несприятливих умов середовища, імовірно є знаходження спорової цитоплазми в обезвоженном стані, термостійкість спорових ферментів, а також наявність діпіколіновой кислоти і великої кількості двовалентних катіонів. Великий внесок у стабільність суперечка вносять поверхневі структури (мембрани, кортекс, покриви), механічно захищають вміст спори від проникнення ззовні агресивних речовин. Механізм стійкості до несприятливих факторів, заснований на дегідратації клітинних структур, має місце і в інших покояться форм еубактерій, так як всі вони характеризуються зниженим вмістом води порівняно з вегетативними клітинами.
Умови, що сприяють утворенню лежать клітин, до цих пір вивчені недостатньо. До категорії благоприятствующих факторів відноситься наявність або відсутність певних поживних речовин середовища, температура, кислотність середовища, умови аерірованія. Формуванню цист у миксобактерии, наприклад, сприяє наявність в середовищі гліцерину, амінокислот. Кількість цист азотобактера зростає при додаванні до середовища b-оксимасляної кислоти і підвищення концентрації двовалентних катіонів. В якості факторів, які індукують формування акінет ціанобактерій, відзначена низька температура, висушування, відсутність у середовищі пов'язаного азоту або, навпаки, збільшення вмісту глутамінової кислоти.
Крім чинників зовнішнього середовища, не однаковою мірою впливають на формування різних типів лежать клітин, виявлені специфічні речовини, основна функція яких полягає у регулюванні росту і розвитку еубактерій, зокрема в індукуванні процесів формування лежать клітин. Такі речовини можуть виділятися у культуральне середовище або накопичуватися всередині клітини. Вони були виділені, і показана індукція ними спороутворення.
Сформовані покояться клітини протягом різного часу можуть перебувати в життєздатному стані і проростати у відповідних умовах з утворенням активно метаболізуються вегетативних клітин.
Для ендоспори процес проростання складається з кількох етапів: активації, ініціації і виростання. Як правило, ендоспори навіть у сприятливих умовах можуть не проростати. Для цього їх необхідно піддати активації. Найбільш загальним активує чинником є термообробка спорової суспензії. Після цього суперечки набувають здатність проростати, але для початку проростання необхідний хімічний «пусковий» механізм.
В якості речовин, що ініціюють проростання ендоспори, найбільш ефективні вуглеводи, деякі амінокислоти і неорганічні іони.
Питання 2. Цілі і методи виділення чистих культур
Чистої культурою називають таку культуру, яка містить мікроорганізми одного виду [7, с. 64].
Виділення чистих культур бактерій - обов'язковий етап бактеріологічного дослідження в лабораторній діагностиці інфекційних хвороб, у вивченні мікробної забрудненості різних об'єктів навколишнього середовища, і, в цілому, при будь-якій роботі з мікроорганізмами [7, с. 64].
Досліджуваний матеріал (гній, харкотиння, фекалії, кров та інший матеріал від хворих, вода, грунт, повітря, харчові продукти, трупи тварин і людини, переносники) зазвичай містить асоціації мікробів.
Виділення чистої культури дозволяє вивчити морфологічні, культуральні, біохімічні, антигенні та інші ознаки, за сукупністю яких визначається видова та типова приналежність збудника, тобто виробляється, його ідентифікація.
Для виділення чистих культур мікроорганізмів використовують методи, які можна розділити на кілька груп [7, с. 64].
Метод Пастера - послідовне розведення досліджуваного матеріалу в рідкому поживному середовищі до концентрації однієї клітини в обсязі (має історичне значення).
Метод Коха («пластинчасті розводки») - послідовне розведення досліджуваного матеріалу в розплавленому агарі (температура 48-50 ° С), з наступним розливом у чашки Петрі, де агар застигає.
Висіви роблять, як правило, із трьох-чотирьох останніх розведень, де бактерій стає мало і, надалі, при зростанні на чашках Петрі з'являються ізольовані колонії, які утворюються з однієї вихідної материнської клітини. З ізольованих колоній в глибині агару отримують чисту культуру бактерій пересівом на свіжі середовища.
Метод Шукевич - застосовується для отримання чистої культури протею та інших мікроорганізмів володіють «повзучим» ростом. Посів досліджуваного матеріалу роблять у конденсаційну воду біля основи скошеного агару. Рухливі мікроби (протей) здатні підніматися вгору по скошеного агару, нерухомі форми залишаються рости внизу на місці посіву. Пересіву верхні краї культури можна отримати чисту культуру.
Метод Дрігальского - широко застосовується у бактеріологічній практиці, при цьому досліджуваний матеріал розводять у пробірці стерильним фізіологічним розчином або бульйоном.
Одну краплю матеріалу вносять в першу чашку і стерильним скляним шпателем розподіляють по поверхні середовища. Потім цим же шпателем (не пропалюючи його в полум'ї пальника) роблять такий же посів у другій і третій чашках. З кожним посівом бактерій на шпателе залишається все менше і менше і, при посіві на третю чашку, бактерії будуть розподілятися по поверхні живильного середовища окремо один від одного.
Через 1-7 діб. витримування чашок в термостаті (залежно від швидкості росту мікроорганізмів) на третій чашці кожна бактерія дає клон клітин, утворюючи ізольовану колонію, яку пересівають на скошений агар з метою накопичення чистої культури.
Метод Вейнберга.
Особливі труднощі виникають при виділенні чистих культур облігатних анаеробів. Якщо контакт з молекулярним киснем не викликає відразу ж загибелі клітин, то посів виробляють за методом Дрігальского, але після цього чашки відразу розміщують у анаеростат. Однак, частіше користуються методом розведення. Сутність його полягає в тому, що розведення досліджуваного матеріалу проводять у розплавленої і охолодженою до 45-50 ° С агарізірованной живильному середовищі.
Роблять 6-10 послідовних розведень, потім середу в пробірках швидко охолоджують і заливають поверхню шаром суміші парафіну і вазелінового масла, щоб перешкодити проникненню повітря в товщу живильного середовища. Іноді живильне середовище після посіву і перемішування переносять у стерильні трубки Буррі або капілярні піпетки Пастера, кінці яких запаюють.
При вдалому розведенні в пробірках, трубках Буррі, піпетках Пастера виростають ізольовані колонії анаеробів.
Щоб ізольовані колонії добре було видно, використовують прояснені живильні середовища. Для вилучення ізольованих колоній анаеробів, пробірку злегка нагрівають, обертаючи її над полум'ям, при цьому агар, прилеглий до стінок, плавиться і вміст пробірки у вигляді агарового стовпчика вислизає в стерильну чашку Петрі. Стовпчик агару розрізають стерильним пінцетом і витягають колонії петлею. Витягнуті колонії поміщають в рідке середовище, сприятливе для розвитку виділяються мікроорганізмів (наприклад, середу Китта-Тароцці). Агарізірованную середу з трубки Буррі видувають, пропускаючи газ через ватяну пробку.
Метод Хангейт - коли хочуть отримати ізольовані колонії бактерій з особливо високою чутливістю до кисню (строгі аероби) використовують метод обертових пробірок Хангейт. ГОУ ВПО «Алтайський державний медичний університет» Росздрава
Факультет «Сестринська справа»
Заочне відділення
Контрольна робота
з дисципліни: «Мікробіологія»
Варіант - 3
Склав: студент 285 групи
факультету «Сестринська справа»
Дубіненко О.С.
Барнаул - 2008
Розділ «Загальна мікробіологія та вірусологія»
Питання 1. Біологічний сенс спороутворення в бактерій. Бацили, клостридії, приклади. Особливості хімічного складу і методи виявлення
Спори бактерій можна розглядати як форму збереження спадкової інформації бактеріальної клітини за несприятливих умовах впливу зовнішнього середовища [1, с. 25].
До спороутворюючих відноситься велике число еубактерій приблизно з 15 родів, що характеризуються морфологічним і фізіологічним різноманітністю.
Серед них є паличкоподібні, сферичні, міцеліальні форми, спірили і нитчасті організми. Всі вони мають будову клітинної стінки, характерне для такої грампозитивних еубактерій. Ні в одному випадку не виявлена зовнішня липопротеиновой мембрана, незважаючи на те, що багато пологів і види спороутворюючих бактерій не фарбуються за Грамом.
За типом харчування серед них виявлені хемоорганогетеротрофи, факультативні хемолітоавтотрофами і паразитичні форми. Відношення до кисню також різноманітно: частина спороутворюючих форм представлена аеробами і факультативними анаеробами, інша частина включає облігатних анаеробів - від аеротолерантних форм до високочутливих до O2.
Краще за все, процес спорообразования вивчений у представників родів Bacillus і Clostridium, хоча наявні дані дозволяють зробити висновок про принципову однотипності цього процесу у всіх видів, що утворюють ендоспори. У кожній бактеріальної клітці, як правило, формується один ендоспори [1, с. 32].
Першим кроком до спороутворення є зміна морфології ядерної речовини вегетативної клітини, що утворює тяж уздовж довгої осі спорулірующей клітини.
Приблизно 1 / 3 тяжа потім відділяється і переходить в формується спору [1, с. 32].
У деяких видів ядерний тяж утворюється тільки на одному полюсі клітини, в його формуванні бере участь не весь генетичний матеріал вегетативної клітини, і згодом ядерний тяж цілком переходить в формується спору. Біологічний сенс формування ядерного тяжа до цих пір залишається нез'ясованим.
Формування суперечки починається з того, що в одного з полюсів клітини відбувається ущільнення цитоплазми, яка разом з генетичним матеріалом, які представляють собою одну або кілька повністю реплікованих хромосом, відокремлюється від решти клітинного вмісту за допомогою перегородки.
Остання формується впячиванием всередину клітини ЦПМ. Мембрана наростає від периферії до центру, де зростається, що призводить до утворення спорової перегородки. Ця стадія формування суперечки нагадує клітинний розподіл шляхом утворення поперечної перегородки.
Наступний етап формування суперечки - «обростання» відсіченого ділянки клітинної цитоплазми з ядерним матеріалом мембраною вегетативної клітини, кінцевим результатом якого є утворення проспорив - структури, розташованої всередині материнської клітини і повністю відділеною від неї двома елементарними мембранами: зовнішньої і внутрішньої по відношенню до проспорив.
Описані вище етапи формування суперечки (аж до утворення проспорив) оборотні. Виявилося, що якщо до спорулірующей культурі додати антибіотик хлорамфенікол (інгібітор білкового синтезу і, отже, інгібітор синтезу мембранних білків), то можна зупинити «обростання» клітинної мембраною відсіченого септи ділянки цитоплазми, і процес спорообразования перетвориться на процес клітинного ділення.
Після утворення проспорив подальші етапи спорообразования вже необоротні.
Між зовнішнім і внутрішнім мембранними шарами проспорив починається формування кортикального шару (кортекса). Потім поверх зовнішньої мембрани проспорив синтезуються спорові покриви, що складаються з декількох шарів, число, товщина і будова яких різні в різних видів спороутворюючих бактерій. У формуванні шарів спорових покривів бере участь як зовнішня мембрана суперечки, так і протопласт материнської клітини.
У багатьох бактерій поверх покривів суперечки формується ще одна структура - екзоспоріум, будова якого різна залежно від виду бактерій. Часто екзоспоріум багатошаровий, з характерною для кожного шару тонкою структурою. Всі шари, що оточують протопласт ендоспори, знаходяться всередині материнської клітини. На їх частку доводиться приблизно половина сухої речовини суперечки.
Після сформування суперечки відбувається руйнування (лізис) «материнської» клітинної стінки, і суперечки виходить у середу [4, с. 85].
Спороутворення супроводжується активним синтезом білка. Білки ендоспори на відміну від білків вегетативних клітин багаті цистеїном і гідрофобними амінокислотами, з чим пов'язують стійкість спір до дії несприятливих чинників.
Зміст ДНК в суперечці трохи нижче, ніж у вихідній вегетативної клітці, оскільки в суперечці переходить лише частина генетичного матеріалу материнської клітини. Генетичний матеріал надходить у суперечці у вигляді повністю реплікованих молекул ДНК. Спори деяких видів містять по 2 або 3 копії хромосоми.
Зміст РНК в суперечках нижче, ніж у вегетативних клітинах, і РНК в значній мірі при спорообразовании синтезується заново. Одним з характерних процесів, що супроводжують освіта ендоспори, є накопичення в них діпіколіновой кислоти та іонів кальцію в еквімолярних кількостях. Ці сполуки утворюють комплекс, локалізований в серцевині суперечки. Крім Са2 + в ендоспори виявлено підвищений вміст інших катіонів (Mg2 +, Mn2 +, K +), з якими пов'язують перебування спір у стані спокою та їх термостійкість [4, с. 85].
Істотні відмінності ендоспори від вегетативних клітин виявляються при вивченні хімічного складу окремих спорових структур. Екзоспоріум складається з ліпідів і білків і, ймовірно, виконує функцію додаткового бар'єру, що захищає спору від зовнішніх впливів, а також регулює проникнення в неї різних речовин. Однак ніяких даних, що підтверджують ці припущення, поки немає. Механічне видалення екзоспоріума не призводить до якого-небудь пошкодження суперечка.
Вони виявляють таку ж здатність до проростання, як і суперечки з невидаленою екзоспоріумом.
Спорові покриви в основному складаються з білків і в невеликій кількості з ліпідів і гліколіпідів. Білки покривів мають високу стійкість до несприятливих умов і забезпечують спорах захист від дії літичних ферментів, інших пошкоджуючих чинників, а також оберігають спору від передчасного проростання. Виявилося, що суперечки мутантів, позбавлені покривів, проростають відразу ж після виходу з материнської клітини, навіть якщо умови для подальшого зростання несприятливі. Кортекс побудований в основному з молекул особливого типу пептидоглікану. При проростанні спори з частини кортекса, прилеглої до внутрішньої спорової мембрані, формується клітинна стінка вегетативної клітини.
На відміну від ендоспори, які виникають всередині материнської клітини і оточених двома елементарними мембранами, екзоспори бактерій з роду Methylosinus і Rhodomicrobium формуються в результаті відокремлення від одного з полюсів материнської клітини. Освіта екзоспори супроводжується ущільненням і потовщенням клітинної стінки. У екзоспори відсутні діпіколіновая кислота і характерні для ендоспори структури (кортекс, екзоспоріум).
У актиноміцетів суперечки є спочиваючими клітинами і одночасно репродуктивними структурами. За типом освіти вони діляться на дві групи - ендогенні та екзогенні. Ендогенне утворення спор всередині цитоплазми материнської гіфи, виявлене у представників родів Thermoactinomyces і Actinobifida, протікає аналогічно описаному вище. У більшості актиноміцетів суперечки формуються екзогенно шляхом ділення гіфи перегородками на ділянки, кожен з яких представляє собою майбутні суперечки. Екзоспори більшості актиноміцетів не містять будь-яких додаткових внутрішніх структур крім тих, які спостерігаються у вегетативній клітці. Стінка суперечки зазвичай значно товщі, ніж стінка гіфи, і в ній можна розрізнити кілька шарів різної електронної щільності. Часто клітинна стінка оточена додатковими зовнішніми покривами.
Спочиваючі клітини еубактерій характеризуються низькими рівнями метаболічної активності. У першу чергу це стосується дихання. Від ступеня зниження метаболічної активності залежить тривалість збереження життєздатності лежать клітин. Великий інтерес представляє з'ясування механізмів, відповідальних за підтримку спеціалізованих клітин у стані спокою. В даний час найбільшу увагу привертають три гіпотези. Перша заснована на тому, що в покояться клітинах є речовини, що пригнічують активність ферментів і, отже, блокуючі метаболізм. З суперечка деяких бактерій дійсно виділені речовини, що запобігають проростанню спор. Згідно з другою гіпотезою збереження спокою пов'язують зі структурою суперечка, що забезпечує підтримку її серцевини в обезвоженном стані. Нарешті, підтримання спокою пояснюють особливим станом ферментів. Зміни їх конфігурації, що призводять до активированию ферментів, виводять покояться клітку з цього стану. Можливо, що підтримка спеціалізованих клітин у стані спокою - результат спільної дії всіх описаних вище механізмів.
Для всіх покояться форм характерна підвищена в порівнянні з вегетативними клітинами стійкість до дії різноманітних ушкоджуючих факторів: високих і низьких температур, зневоднення, високої кислотності середовища, радіації, механічних впливів і ін Найбільшою мірою ця стійкість проявляється у ендоспори. Механізми стійкості в даний час мало вивчені. Для ендоспори основними чинниками, що забезпечують їх стійкість до дії несприятливих умов середовища, імовірно є знаходження спорової цитоплазми в обезвоженном стані, термостійкість спорових ферментів, а також наявність діпіколіновой кислоти і великої кількості двовалентних катіонів. Великий внесок у стабільність суперечка вносять поверхневі структури (мембрани, кортекс, покриви), механічно захищають вміст спори від проникнення ззовні агресивних речовин. Механізм стійкості до несприятливих факторів, заснований на дегідратації клітинних структур, має місце і в інших покояться форм еубактерій, так як всі вони характеризуються зниженим вмістом води порівняно з вегетативними клітинами.
Умови, що сприяють утворенню лежать клітин, до цих пір вивчені недостатньо. До категорії благоприятствующих факторів відноситься наявність або відсутність певних поживних речовин середовища, температура, кислотність середовища, умови аерірованія. Формуванню цист у миксобактерии, наприклад, сприяє наявність в середовищі гліцерину, амінокислот. Кількість цист азотобактера зростає при додаванні до середовища b-оксимасляної кислоти і підвищення концентрації двовалентних катіонів. В якості факторів, які індукують формування акінет ціанобактерій, відзначена низька температура, висушування, відсутність у середовищі пов'язаного азоту або, навпаки, збільшення вмісту глутамінової кислоти.
Крім чинників зовнішнього середовища, не однаковою мірою впливають на формування різних типів лежать клітин, виявлені специфічні речовини, основна функція яких полягає у регулюванні росту і розвитку еубактерій, зокрема в індукуванні процесів формування лежать клітин. Такі речовини можуть виділятися у культуральне середовище або накопичуватися всередині клітини. Вони були виділені, і показана індукція ними спороутворення.
Сформовані покояться клітини протягом різного часу можуть перебувати в життєздатному стані і проростати у відповідних умовах з утворенням активно метаболізуються вегетативних клітин.
Для ендоспори процес проростання складається з кількох етапів: активації, ініціації і виростання. Як правило, ендоспори навіть у сприятливих умовах можуть не проростати. Для цього їх необхідно піддати активації. Найбільш загальним активує чинником є термообробка спорової суспензії. Після цього суперечки набувають здатність проростати, але для початку проростання необхідний хімічний «пусковий» механізм.
В якості речовин, що ініціюють проростання ендоспори, найбільш ефективні вуглеводи, деякі амінокислоти і неорганічні іони.
Питання 2. Цілі і методи виділення чистих культур
Чистої культурою називають таку культуру, яка містить мікроорганізми одного виду [7, с. 64].
Виділення чистих культур бактерій - обов'язковий етап бактеріологічного дослідження в лабораторній діагностиці інфекційних хвороб, у вивченні мікробної забрудненості різних об'єктів навколишнього середовища, і, в цілому, при будь-якій роботі з мікроорганізмами [7, с. 64].
Досліджуваний матеріал (гній, харкотиння, фекалії, кров та інший матеріал від хворих, вода, грунт, повітря, харчові продукти, трупи тварин і людини, переносники) зазвичай містить асоціації мікробів.
Виділення чистої культури дозволяє вивчити морфологічні, культуральні, біохімічні, антигенні та інші ознаки, за сукупністю яких визначається видова та типова приналежність збудника, тобто виробляється, його ідентифікація.
Для виділення чистих культур мікроорганізмів використовують методи, які можна розділити на кілька груп [7, с. 64].
Метод Пастера - послідовне розведення досліджуваного матеріалу в рідкому поживному середовищі до концентрації однієї клітини в обсязі (має історичне значення).
Метод Коха («пластинчасті розводки») - послідовне розведення досліджуваного матеріалу в розплавленому агарі (температура 48-50 ° С), з наступним розливом у чашки Петрі, де агар застигає.
Висіви роблять, як правило, із трьох-чотирьох останніх розведень, де бактерій стає мало і, надалі, при зростанні на чашках Петрі з'являються ізольовані колонії, які утворюються з однієї вихідної материнської клітини. З ізольованих колоній в глибині агару отримують чисту культуру бактерій пересівом на свіжі середовища.
Метод Шукевич - застосовується для отримання чистої культури протею та інших мікроорганізмів володіють «повзучим» ростом. Посів досліджуваного матеріалу роблять у конденсаційну воду біля основи скошеного агару. Рухливі мікроби (протей) здатні підніматися вгору по скошеного агару, нерухомі форми залишаються рости внизу на місці посіву. Пересіву верхні краї культури можна отримати чисту культуру.
Метод Дрігальского - широко застосовується у бактеріологічній практиці, при цьому досліджуваний матеріал розводять у пробірці стерильним фізіологічним розчином або бульйоном.
Одну краплю матеріалу вносять в першу чашку і стерильним скляним шпателем розподіляють по поверхні середовища. Потім цим же шпателем (не пропалюючи його в полум'ї пальника) роблять такий же посів у другій і третій чашках. З кожним посівом бактерій на шпателе залишається все менше і менше і, при посіві на третю чашку, бактерії будуть розподілятися по поверхні живильного середовища окремо один від одного.
Через 1-7 діб. витримування чашок в термостаті (залежно від швидкості росту мікроорганізмів) на третій чашці кожна бактерія дає клон клітин, утворюючи ізольовану колонію, яку пересівають на скошений агар з метою накопичення чистої культури.
Метод Вейнберга.
Особливі труднощі виникають при виділенні чистих культур облігатних анаеробів. Якщо контакт з молекулярним киснем не викликає відразу ж загибелі клітин, то посів виробляють за методом Дрігальского, але після цього чашки відразу розміщують у анаеростат. Однак, частіше користуються методом розведення. Сутність його полягає в тому, що розведення досліджуваного матеріалу проводять у розплавленої і охолодженою до 45-50 ° С агарізірованной живильному середовищі.
Роблять 6-10 послідовних розведень, потім середу в пробірках швидко охолоджують і заливають поверхню шаром суміші парафіну і вазелінового масла, щоб перешкодити проникненню повітря в товщу живильного середовища. Іноді живильне середовище після посіву і перемішування переносять у стерильні трубки Буррі або капілярні піпетки Пастера, кінці яких запаюють.
При вдалому розведенні в пробірках, трубках Буррі, піпетках Пастера виростають ізольовані колонії анаеробів.
Щоб ізольовані колонії добре було видно, використовують прояснені живильні середовища. Для вилучення ізольованих колоній анаеробів, пробірку злегка нагрівають, обертаючи її над полум'ям, при цьому агар, прилеглий до стінок, плавиться і вміст пробірки у вигляді агарового стовпчика вислизає в стерильну чашку Петрі. Стовпчик агару розрізають стерильним пінцетом і витягають колонії петлею. Витягнуті колонії поміщають в рідке середовище, сприятливе для розвитку виділяються мікроорганізмів (наприклад, середу Китта-Тароцці). Агарізірованную середу з трубки Буррі видувають, пропускаючи газ через ватяну пробку.
Для цього розплавлену агарізірованную середу засівають бактеріями при постійному струмі через пробірку інертного газу, звільненого від домішки кисню. Потім пробірку закривають гумовою пробкою і поміщають горизонтально в затиск, що обертає пробірку, середа при цьому рівномірно розподіляється по стінках пробірки і застигає тонким шаром. Застосування тонкого шару в пробірці, заповненої газовою сумішшю, дозволяє отримати ізольовані колонії, добре видимі неозброєним оком.
Виділення окремих клітин за допомогою мікроманіпулятори. Мікроманіпулятори - прилад, що дозволяє за допомогою спеціальної мікропіпетки або мікропетлі витягувати одну клітку з суспензії. Цю операцію контролюють під мікроскопом. На предметному столику мікроскопа встановлюють вологу камеру, в яку поміщають препарат «висяча крапля» [7, с. 70].
У власниках операційних штативів закріплюють мікропіпетки (мікропетлі), переміщення яких у полі зору мікроскопа здійснюється з мікронною точністю завдяки системі гвинтів і важелів. Дослідник, дивлячись у мікроскоп, витягує окремі клітини микропипетка і переносить їх у пробірки зі стерильною рідким середовищем для отримання клону клітин.
Основним методом є бактеріологічний метод, який полягає у виділенні чистої культури збудника (популяції, що містить бактерії одного виду) та її ідентифікації.
Під ідентифікацією мікроорганізмів подразумевают вивчення їх властивостей з метою встановлення належності до тієї чи іншої систематичної групи (роду, виду).
Бактеріологічний метод є багатоетапне дослідження. У зв'язку з тим, що досліджуваний матеріал найчастіше містить суміш мікроорганізмів, основою бактеріологічного методу є виділення чистої культури збудника, яке виробляють на першому етапі дослідження. З цією метою роблять посів досліджуваного матеріалу, як правило, на щільні живильні середовища, вибір яких обумовлюється властивостями передбачуваного збудника.
Застосовують по можливості елективні середовища, на яких росте тільки даний вид бактерій, або диференційно-діагностичні середовища, що дозволяють відрізнити передбачуваного збудника від інших мікроорганізмів.
Наприклад, для виділення дифтерійної палички використовують теллурітовие середовища, при бактеріологічної діагностики кишкових інфекцій - середовище Ендо, вісмут-сульфітний агар.
При виділенні умовно-патогенних мікроорганізмів посів матеріалу проводять на універсальні поживні середовища, наприклад, кров'яний агар. Всі маніпуляції, пов'язані з посівом і виділенням бактеріальних культур, здійснюють над полум'ям пальника.
Посів матеріалу на живильні середовища виробляють або бактеріальної петлею, або скляним або металевим шпателем таким чином, щоб розсіяти перебувають у досліджуваному матеріалі бактерії по поверхні живильного середовища, в результаті чого кожна бактеріальна клітина потрапляє на свою ділянку середовища. При виділенні чистої культури збудника з патологічного матеріалу, значною мірою забрудненого сторонньої мікрофлорою, іноді користуються біологічним методом виділення чистої культури: досліджуваним матеріалом заражають чутливих до збудника лабораторних тварин.
Так, при дослідженні мокротиння хворого на вміст у ній пневмококів мокротиння внутрішньочеревно вводять білим мишам і через 4-6 год з їх крові отримують чисту культуру пневмокока. У тому випадку, якщо в досліджуваному матеріалі передбачається зміст малої кількості збудника, для його накопичення посів виробляють на рідку живильне середовище - середовище збагачення (оптимальну для даного мікроорганізму). Потім з рідкої живильного середовища здійснюють пересів на щільні середовища, розлиті в чашках Петрі. Засіяну середу поміщають у термостат зазвичай при t ° 37 ° на 18-24 ч. Посіви анаеробів поміщають в анаеростат, звідки видаляють повітря і замінюють його газовою сумішшю без кисню.
Питання 3 Бактеріофаги помірні і вірулентні; форми існування та особливості взаємодії з бактеріальною клітиною
Бактеріофаги (фаги) - це віруси, що вражають бактеріальні клітини (як клітини-господаря) [5, с. 148].
Віріони фагів складаються з голівки, яка містить нуклеїнових кислот вірусу, і більш-менш вираженого відростка. Нуклеокапсид головки фага має кубічний тип симетрії, а відросток - спіральний тип, тобто бактеріофаги мають змішаний тип симетрії нуклеокапсида [5, с. 148].
Більшість фагів містять кільцеву двунитчатую ДНК, і лише деякі - РНК або однонітчатую ДНК. Фаги, як і інші віруси, володіють антигенними властивостями і містять группоспецифических (по них діляться на серотипи) і типоспецифічні антигени.
Сироватки, що містять антитіла до цих антигенів (антіфаговие сироватки), нейтралізують літичну активність фагів. Взаємодія бактеріофага з кліткою відбувається у відповідності з основними типами взаємодії, характерними для всіх вірусів, - продуктивна (літична), абортивна вірусна і латентна (лізогенія, вірогенія) інфекція, а також вірусіндуцірованном трансформація.
За характером взаємодії фага з клітиною всі бактеріофаги діляться:
• на вірулентні (літичні), що викликають продуктивну інфекцію і лізис бактеріальної клітини;
• помірні, викликають латентну інфекцію і асоціацію геному вірусу з бактеріальною хромосомою. Помірні фаги, на відміну від вірулентності, не викликають загибелі бактеріальних клітин і при взаємодії з неї переходять в неінфекційну форму фага, звану профагом [5, с. 148].
Профаг - геном фага, асоційований з бактеріальною хромосомою.
Профаг, що став частиною хромосоми клітини, при її розмноженні реплікується синхронно з геномом бактерії, не викликаючи її лізису, і передається у спадок від клітини до клітини в необмеженій кількості поколінь. Бактеріальні клітини, що містять в своєму геномі профаг, називаються лізогенним. Профаг в лізогенним бактеріях спонтанно або під впливом різних індукованих агентів може переходити в вегетативний фаг. У результаті такого перетворення бактеріальна клітина лізується і продукує нові фаговой частки. У ході лизогенизации бактеріальні клітини можуть додатково набувати нових ознак, детермініруемие геномом вірусу. Таке явище - зміна властивостей мікроорганізмів під впливом профага - називається фагової, ілілізогенной, конверсією (прояв вірус-інду-ціроанной трансформації).
Помірні фаги, нездатні ні за яких умов переходити з профага в вегетативний фаг (утворювати зрілі фаговой частки), називаються дефектними, частіше це відбувається в результаті порушення стадії складання вірусних частинок. Деякі помірні фаги називаються трансдуцірующімі, оскільки з їх допомогою здійснюється один з механізмів генетичної рекомбінації у бактерій - трансдукції. Такі фаги можуть використовуватися, зокрема, в генній інженерії в якості векторів для отримання рекомбінантних ДНК і / або приготуванні рекомбінантних (генно-інженерних) вакцин.
Процес взаємодії вірулентного бактеріофага з клітиною складається з декількох стадій: адсорбції бактеріофага на клітці, проникнення в клітину, біосинтезу компонентів фага і їх збірки, виходу бактеріофагів з клітини.
Спочатку бактеріофаги прикріплюються до фагоспеціфіческім рецепторів на поверхні бактеріальної клітини. Хвіст фага за допомогою ферментів, що знаходяться на його кінці, оболонку клітини, скорочується і міститься в головці ДНК ін'еціруют в клітку, при цьому білкова оболонка бактеріофага залишається зовні. Ін'єктовані ДНК пригнічує клітинно-спрямовані синтезують механізми клітини, примушуючи їх синтезувати ДНК і білки фага. З утворилися в різних частинах клітини в різний час фагової нуклеїнової кислоти і білка формуються нові фаговой частки. Потім відбувається лізис клітини, і звільняються зрілі бактеріофаги [5, с. 152].
Помірні бактеріофаги інфікують клітину, але не викликають її лізису. При цьому ДНК бактеріофага, що потрапила в клітку, вбудовується в генетичний апарат клітини і передається у спадок від клітини до клітини. Подібний стан фага називається профагом. Під дією різних факторів, а іноді спонтанно може відбуватися перетворення профага у вегетативну форму, що супроводжується розмноженням бактеріофага, лізисом клітини і виходом бактеріофагів з клітини.
Дуже важливою властивістю бактеріофагів є їх специфічність: бактеріофаги лизируют культури певного виду, більш того, існують так зв. типові бактеріофаги, лизирующие варіанти всередині виду.
Розділ «Інфекція. Імунітет »
Питання 4. Екзотоксини бактерій: класифікація, механізм дії. Анатоксини: одержання, практичне використання
Екзотоксини - це токсична речовина, що виділяється клітиною в навколишнє середовище [2, с. 117].
Як правило, екзотоксини більш специфічні і більш токсичні, ніж ендотоксини. Один з найбільш відомих екзотоксинів - ботулотоксин, що викликає ботулізм. Багато екзотоксини утворюються грампозитивними бактеріями.
Екзотоксини залежно від міцності їх з'єднання з мікробною клітиною поділяються:
- На повністю секретуються (власне екзотоксини) у навколишнє середовище;
-Частково секретуються;
- Несекретіруемие.
Останні звільняються тільки в процесі руйнування бактеріальних клітин, що робить їх подібними по цій властивості з ендотоксинами.
За механізмом дії на клітини макроорганізму бактеріальні токсини діляться на кілька типів, хоча цей поділ є досить умовним і деякі токсини можуть бути віднесені відразу до декількох типів:
1-й тип - мембранотоксіни (гемолізіни, лейкоцідіни);
2-й тип - функціональні блокатори, або нейротоксини (тета-носпазмін, ботулінічний токсин), - блокують передачу нервових імпульсів в синапсах (у клітинах спинного та головного мозку);
3-й тип - термостабільні і термолабільні ентеротоксини - активізують клітинну аденілатциклазу, що призводить до порушення ентеросорбції та розвитку діарейного синдрому. Такі токсини продукують холерний вібріон (холероген), ентеротоксигенні кишкові палички;
4-й тип - цитотоксини - токсини, що блокують синтез білка на субклітинному рівні (ентеротоксин золотистих стафілококів, дерматонекротоксіни стафілококів, паличок сибірки, синьо-зеленого гною і збудника коклюшу); сюди ж відносять антіелонгатори - перешкоджають елонгації (нарощування) або транслокації, т . е. пересуванню і-РНК вздовж рибосоми, і тим самим блокують синтез білка (дифтерійний гістотоксін, токсин синьогнійної палички);
5-й тип - ексфоліатіни, утворені деякими штамами золотистого стафілокока, і ерітрогеніни, які продукують піогенними стрептококом групи А.
Вони впливають на процес взаємодії клітин між собою і з міжклітинними речовинами і повністю визначають клінічну картину інфекції (у першому випадку виникає пухирчатка новонароджених, у другому - скарлатина)
Багато бактерій утворюють не один, а кілька білкових токсинів, які володіють різною дією - нейротоксичних, цитотоксическим, гемолітичним: стафілокок, стрептокок.
У той же час деякі бактерії можуть одночасно утворювати як білкові екзотоксини, так і ендотоксини: кишкова паличка, холерний вібріон.
Àнатоксіни - препарати, отримані з бактеріальних екзотоксинів, повністю позбавлених токсичних властивостей [2, с. 119].
Метод отримання анатоксину запропонував у 1923 році французький вчений Рамон. Для приготування анатоксинів до екзотоксин додають 0,3-0,4% розчину формаліну і поміщають у термостат при температурі 37-400 С на 3-4 тижні до повного зникнення токсичних властивостей [2, с.119].
Отриманий анатоксин перевіряють на стерильність, нешкідливість та імуногенність. В даний час застосовуються переважно очищені анатоксини, вільні від всіх баластних речовин і сконцентровані в меншому обсязі.
Однак зменшення розмірів частинок анатоксину викликало необхідність адсорбувати препарат на ад'ювант. Àнатоксіни застосовуються для профілактики і, рідше, лікування токсінеміческіх інфекцій (дифтерія, газова гангрена, ботулізм, правець і деякі захворювання, викликані стафілококами).
Анатоксини випускаються у вигляді монопрепаратів і в складі асоційованих вакцин, призначених для імунізації проти декількох захворювань.
Питання 5 Імуноглобуліни: природи, будову, класи імуноглобулінів, функції в організмі
Імуноглобулінами називаються білки, які синтезуються під впливом антигену і специфічно з ним реагують [2, с. 122].
При електрофорезі вони локалізуються в глобулінової фракції.
Імуноглобуліни складаються з поліпептидних ланцюгів. У молекулі імуноглобуліну розрізняють чотири структури:
1. Первинна - це послідовність певних амінокислот. Вона будується з нуклеотидних триплетів, генетично детермінується і визначає основні наступні структурні особливості.
2. Вторинна визначається конформацією поліпептидних ланцюгів.
3. Третинна визначає характер розташування окремих ділянок кола, що створюють просторову картину.
4. Четвертичная характерна для імуноглобулінів. З чотирьох поліпептидних ланцюгів виникає біологічно активний комплекс. Ланцюги попарно мають однакову структуру.
Будь-яка молекула імуноглобуліну має Y-подібну форму і складається з 2 важких (Н) і 2 легких (L) ланцюгів, пов'язаних між собою дисульфідними містками.
Кожна молекула імуноглобулінов має 2 однакових антигензв'язуючих фрагмента Fab (англ. Fragment antigen binding) і один Fc-фрагмент (англ. Fragment cristalisable), за допомогою якого ІГ комплементарно зв'язуються з Fc-рецепторами клітинної мембрани.
Кінцеві ділянки легких і важких ланцюгів молекули імуноглобуліну досить різноманітні (варіабельні), а окремі області цих ланцюгів відрізняються особливо вираженим різноманітністю (гіперваріабельні).
Інші ділянки молекули імуноглобуліну щодо ницими.
Імуноглобуліни поділяються на 5 класів: JgG, JgM, JgA, JgE, JgD.
JgG - складають основну кількість антитіл (80%) і забезпечують імунітет проти бактерій, вірусів, екзотоксинів.
Мають здатність проходити через плаценту від матері в організм плоду і тим самим забезпечують імунітет дитини до 1 року
JgM - ранні імуноглобуліни, першими синтезуються при попаданні в організм антигену.
JgA - існують у двох формах: сироваткової і секреторної (JgAS). Секреторні Jg грають важливу роль у створенні місцевого специфічного імунітету на слизових оболонках дихальних шляхів, шлунково-кишкового тракту, порожнини рота, сечостатевих шляхів.
JgE (реагіни) - обумовлюють розвиток алергічних реакцій негайного типу. Вони мають підвищену здатність фіксуватися на тучних клітинах і при попаданні в організм антигену утворювати комплекс антиген-антітелона поверхні клітин. До таких комплексів приєднується комплемент, який руйнує мембрани тучних клітин, з яких, виділяється гістамін та інші біологічно активні речовини, що зумовлюють спазм гладкої мускулатури бронхів, підвищення проникності судин, патофизиологическую фазу алергічних реакцій.
JgD - функція цього класу Jg найменш вивчена, проте є думка, що JgD є аутоімунними антитілами, так як при аутоімунних захворюваннях (наприклад, червоний вовчак) їх кількість у сироватці крові хворих збільшується в сотні разів.
Розділ «Приватна мікробіологія і вірусологія»
Питання 6. Збудник холери: біологічна характеристика, місце існування, джерела, шляхи та механізми інфікування; фактори патогенності; принципи лабораторної діагностики; імунобіологічна профілактика холери
Збудник холери - Vibrio cholerae (холерний вібріон), виділений Р. Кохом у 1884 році являє собою грамнегативну паличку, що має форму коми.
Vibrio cholerae був причиною семи відомих людству тривалих величезних пандемій диарейний хвороби. Багато з цих пандемій починалися в долині річки Ганг, на території Індії та Бангладеш, які завжди служили і служать джерелами холерного вібріона.
Існує 140 серотипів Vibrio cholerae, але в даний час лише серотип 01 служить причиною дуже важкої диарреи (так звана «азіатська холера»).
У 60-і роки в країнах Азії, Африки і Європи отримала поширення епідемія, обумовлена серотипом Vibrio eltor (Ель-Тор), що вважався раніше умовно-патогенних.
З'явившись в 1992 році, новий серотип холерного вібріона 0139, відомий також під ім'ям «Бенгальський», привів до розвитку великої епідемії водним шляхом.
Збудники холери тривалий час зберігають життєздатність на різних об'єктах навколишнього середовища. Так, в молоці, молочних продуктах він залишається життєздатним до 14 днів, в кип'яченій воді - до 39 годин, у відкритих водоймах, забруднених стічними водами, - до декількох місяців.
Холера відноситься до антропонозам.
Людина заражається від хворого холерою, а також від бактеріоносіїв, які виділяють вібріони з калом, а хворі - і з блювотними масами. Зараження відбувається при вживанні води, рідше харчових продуктів, забруднених виділеннями, які містять вібріони (при вживанні овочів, які вирощують на полях і городах, удобрюваних незнезаражені стічними водами, при митті посуду зараженою водою). Людина може заразитися також при догляді за хворим на холеру через забруднені ним предмети вжитку. Розповсюдженню збудників хвороби сприяють мухи. Зараження можливе при ковтанні води під час купання в забруднених водоймах. Деякі серотипи вібріону холери, наприклад, вібріон Ель-Тор, здатні жити в організмі жаб, устриць.
У цих випадках зараження людини може відбутися опосередковано, за відсутності хворого.
Інкубаційний період становить від кількох годин до 5 діб (частіше 2-3 дні).
У гострих випадках захворювання починається раптовим поносом. Випорожнення швидко стають водянистими, за зовнішнім виглядом і кольором нагадують рисовий відвар. Пізніше приєднується блювота, багаторазова, дуже багата. Поєднання поносу і блювоти веде до значної втрати води організмом. За кілька годин хворі можуть втрачати до 7 л рідини з блювотними масами і до 30 л - з екскрементами. Разом з рідиною хворий втрачає велику кількість електролітів, особливо хлористого калію і хлористого натрію, - відбуваються різкі порушення водно-електролітного рівноваги в організмі.
Через великої втрати рідини шкіра збирається в складки, стає зморшкуватою. Можливі судоми. Голос хриплий, а іноді і зовсім пропадає. Відзначається сильна спрага. Може бути задишка.
Нерідко зустрічається легкий перебіг хвороби, аж до так званого безсимптомного носійства збудників.
Після подолання кислотного бар'єра шлунка (у добровольців холеру вдавалося викликати лише після нейтралізації шлункового соку), Vibrio cholerae потрапляють у тонку кишку. Вібріони ніколи не проникають в епітелій слизової оболонки, а величезні скупчення збудника розміщуються в просвіті тонкої кишки і виділяють ентеротоксин, який кодується вірулентним фагом. За своїми хімічними характеристиками ентеротоксин вібріона холери практично ідентичний ентеротоксину E.coli.
Джгутикові протеїни дозволяють вібріона здійснювати рух і забезпечують їм фіксацію до зовнішньої мембрани епітеліоцитів. Прикріплення вібріона необхідно для організації бактеріальних колоній подібно тим, які формує Campylobacter (ця властивість відрізняє їх від Shigella і деяких штамів E.coli, які є нерухомими і все-таки інвазивними). Прикріплення до епітеліальних клітин забезпечується гемаглютиніном - металопротеаз вібріонів, яка за дією аналогічна нейрамідазе вірусу грипу.
Холерний токсин складається з п'яти пептидів В і каталізного пептиду А. Пептиди У пов'язують карбогідрати GM-гангліозид з поверхнею епітеліальних клітин тонкої кишки. У епітеліальної клітці дисульфід, який зв'язує два фрагменти пептиду А (А1 і А2), розщеплюється. Каталізний пептид А1 взаємодіє з 20кD-цитозольним і G-протеїнами. Обидва ферменту беруть участь в обміні рибози ентероцита, тому їх позначили як АДФ (аденозіндіфосат)-рібозілірующіе чинники ". Ці фактори рібозіліруют протеїн 49-КD Gsa.
У свою чергу фермент 49-КD Gsa при взаємодії з ГТФ (гуанозінтріфосфат) активує холерний токсин. Холерний токсин активує аденілатциклазу, приводячи її у постійне активний стан. Цей процес супроводжується різким підвищенням рівня цАМФ, що, у свою чергу, різко посилює секрецію епітеліальними клітинами слизової тонкої кишки Cl, Na і води. Паралельно реабсорбційну функція товстої кишки пригнічена.
І літри «рисового відвару», що містять пластівці слизу і практично не містять лейкоцитів, спрямовуються в кишечник, приводячи до нестримної діареї.
Структурні зміни найбільш виражені в тонкій кишці. Просвіт кишки, особливо тонкої, різко розширений, переповнений безбарвною або рожевою рідиною, іноді злегка забарвленою жовчю. Ця рідина нагадує за своїм виглядом рисовий відвар. Описується також водянистий характер жовчі в жовчному міхурі. Стінка кишки, зокрема її слизова оболонка, набрякла, з червоними плямами (множинні мелкоточечние крововиливи). Ці зміни позначають як серозно-геморагічний холерний ентерит. Мікроскопічно переважають різкі набряк, в тому числі внутрішньоклітинний, і повнокров'я, відзначаються також дрібні крововиливи. При відносно легкому перебігу виявляються також значні скупчення клітин, серед яких переважають лімфо-і плазмоцити. До ентериту може приєднатися серозний або серозно-геморагічний гастрит. При холерному гастроентериті явища ентериту наростають, епітеліальні клітини вакуолізуються, спостерігається десквамація мікроворсинок. Серозна оболонка кишки суха, з крапковими крововиливами, матова, пофарбована в рожево-жовтий колір. Між петлями тонкої кишки виявляється прозора, липка, що тягнеться у вигляді ниток слиз.
Вираженою дисемінації холерних вібріонів за межі органів травлення не відбувається. Зрідка відзначається лише бактеріємія. Можливо також попадання збудника в легені інтраканалікулярним шляхом. Профузная діарея призводить до швидкої втрати води та електролітів (натрію, калію, бікарбонатів), а обезводнення - до гіповолемічного шоку і обмінним ацидозу, згущення крові і гіпоксії, наростаючою олігурії і падіння температури тіла, що характеризує алгідний (від лат. Algor-холод) період холери. Прогресуючий ексікоз і порушення електролітного балансу відіграють провідну роль у виникненні холерної коми.
Гострий період холери може закінчитися:
- Смертельним результатом;
- Одужанням;
- Іноді розвитком картини холерного тіфоід.
Вважається, що холерний тіфоід - не стадія хвороби, зумовлена сенсибілізацією, як припускали раніше, а прояв ускладнення цієї хвороби в результаті приєднання вторинної, в основному бактеріальної, мікрофлори. В цей час основні зміни розвиваються вже в товстій кишці. У ній виникає фібринозне запалення слизової оболонки, в подальшому можуть утворюватися виразки.
При аутопсії відзначається різко виражене трупне задубіння, яке зберігається протягом декількох днів. Тіло загиблого набуває незвичайної форми, яку позначають як "поза гладіатора". По мірі зникнення трупного задубіння положення трупа може мінятися, що створює враження його пересування. Таке переміщення трупа в просторі наводило панічний жах на родичів загиблих і служителів холерних бараків. Вони вважали, що померлих від холери ховають заживо. Це і служило в минулому сторіччі причиною, так званих «холерних бунтів».
Внаслідок швидко наступаючого трупного задубіння шкіра нагадує гусячу, вона суха, зморшкувата, особливо на пальцях рук («руки пралі»). М'язи сухі, темно-червоні. Кров у венах густа і темна. Селезінка зменшується, капсула її зморшкувата, фолікули атрофічним, відзначається гемосидероз пульпи. У печінці розвиваються дистрофія гепатоцитів і вогнищеві некрози паренхіми. У нирках відзначають некроз епітелію звивистих канальців. У міокарді, головному мозку є дистрофічні і некробіотичні зміни.
При холері можливий розвиток некротичного нефрозу, а також швидкопрогресуючого гломерулонефриту, що супроводжуються уремією. Крім того, у хворих на холеру виникають пневмонія, абсцеси, флегмона, бешиха, сепсис.
Смерть хворих на холеру зазвичай настає від обезводнення, коми, інтоксикації. Можлива смерть і від ускладнень холери, серед яких найбільш частим є уремія. При масивному введенні в організм рідини розмірів натрію, бікарбонату смертність зменшується з 50% до 1%.
Питання 7. Вірус кору: біологічна характеристика, джерело, шляхи та механізми інфікування, імунобіологічна профілактика і терапія кору
Збудником кору є вірус з сімейства параміксовірусів. Вірус кору зазвичай розвивається в клітинах, розташованих в задній частині горла і в легенях.
Це РНК-вірус.
Він дуже чутливий до факторів зовнішнього середовища - легко руйнується навіть при слабкому розсіяному світлі, при нагріванні, в кислому середовищі, проте добре переносить заморожування - кров хворого зберігає інфекційні властивості при -72 ° С протягом двох тижнів.
Відмінною особливістю вірусу кору є його здатність зберігатися в організмі хворого на протязі всього життя, викликаючи повільно поточну інфекцію (підгострий склерозуючий паненцефаліт).
Кір хворіють тільки люди. Інфекція передається повітряно-крапельним шляхом (в крапельках слизу вірус зберігає свої властивості протягом декількох днів). Можливо, вірус передається через плаценту від матері до плоду. Раніше кір вважалася винятково дитячою інфекцією, однак тенденція останніх років показує наростання серед захворілих частки підлітків і дорослих.
Кір - хвороба людини, якої, наскільки відомо, не хворіють тварини [3, с. 129].
Високо контагіозний вірус кору поширюється при кашлі та чханні, тісних особистих контактах чи безпосередньому контакті з інфікованими виділеннями з носоглотки [3, с. 129].
Вірус залишається активним і контагіозний в повітрі або на інфікованих поверхнях протягом двох годин.
Він може бути переданий інфікованою людиною протягом періоду часу, що починається за чотири дні до появи у нього висипу і закінчується через чотири дні після її появи.
Спалахи кору можуть приймати форму епідемій, які призводять до численних смертельних результатів, особливо серед дітей раннього віку, які страждають від недостатності харчування.
У країнах, де кір в значній мірі ліквідована, випадки захворювання, ввезені з інших країн, залишаються істотним джерелом інфекції.
Важких ускладнень кору можна уникнути при підтримуючому лікуванні, яке забезпечує хороше харчування, належне надходження рідини і лікування дегідратації за допомогою рекомендованих ВООЗ оральних регідратаціонних розчинів (для відшкодування рідини та інших важливих елементів, втрачаються при діареї та блювання). Для лікування очних і вушних інфекцій і пневмонії слід призначати антибіотики.
Всі діти в країнах, що розвиваються, яким поставлений діагноз кору, повинні отримати дві дози добавки вітаміну А з інтервалом в 24 години. Це може допомогти запобігти поразки очей і сліпоту. Як показує досвід, добавки вітаміну А сприяють зменшенню числа випадків смерті від кору на 50% ..
Регулярна вакцинація дітей від кору в поєднанні з кампаніями масової імунізації в країнах з високими показниками захворюваності та смертності є основними стратегіями громадської охорони здоров'я, спрямованими на зменшення числа випадків смерті від кору. Вакцина проти кору (використовувана протягом 40 років) безпечна, ефективна і недорога. Імунізація одного дитини проти кору коштує менше одного долара США.
Протикорову вакцину часто об'єднують з вакцинами проти краснухи та / або свинки в країнах, де ці хвороби представляють проблеми. Вона однаково ефективна як у вигляді моновакцини, так і в комбінованому вигляді.
У 2007 р. близько 82% всіх дітей у світі отримали одну дозу протикорової вакцини протягом першого року життя в ході надання регулярних медичних послуг, у порівнянні з 72% у 2000 році. (Для забезпечення імунітету рекомендуються дві дози вакцини, тому що приблизно у 15% вакцинованих дітей після першої дози імунітет не виробляється.)
Розділ «Екологія мікроорганізмів»
Питання 8. Антисептики: визначення поняття, вимоги, які пред'являються до антисептиків. Область застосування в медицині
Антисептики - це будь-яка речовина, що перешкоджає росту мікроорганізмів, зокрема бактерій [4, с. 182].
На відміну від антисептиків, сполуки, що викликають загибель мікроорганізмів, називаються дезинфікуючими або бактерицидними засобами.
Багато речовин залежно від концентрації, часу дії, температури та інших умов володіють і тим, і іншим властивістю, і тому в побуті ці терміни використовують як синоніми.
Проте антисептики, як правило, вводять в організм тварин або рослин, де вони пригнічують зростання вірусів, бактерій, грибків або найпростіших, не створюючи небезпеки для живих тканин, а дезинфікуючими засобами звичайно обробляють неживі об'єкти, де їх токсична дія не так небезпечно. Знищення вищих паразитів - черв'яків, кліщів і комах - називають дезінсекцією, повне знищення всіх мікроорганізмів і їх спор - стерилізацією.
Антисептики використовують для лікування інфікованих ран, при ураженні мікроорганізмами шкірних покривів і слизових оболонок та ін Їх відміну від т.зв. дезінфектантів чисто формальне: перші застосовують для антимікробної обробки поверхні людського тіла або його порожнин, другі - для навколишніх предметів або виділень хворого. І ті й інші мають широкий спектр дії і активні щодо бактерій, бацил, найпростіших, грибів. Механізм дії різних препаратів неоднаковий і може бути пов'язаний з денатурацією білка, порушенням проникності плазматичної мембрани, гальмуванням важливих для життєдіяльності мікроорганізмів ферментів (частіше зустрічається при низьких концентраціях антисептиків).
Галогеновмісні антисептики представлені препаратами хлору і йоду. Їх активність пропорційна здібності відщеплювати елементарні галогени. Зовнішньо при лікуванні патології шкіри широко використовують розчин йоду спиртовий, розчин Люголя (містять елементарний йод) і йодоформ, йодинол та ін (отщепляют молекулярний йод). Елементарний йод має протимікробну дію і тому його розчинами обробляють рани, операційне поле і т. п.; при нанесенні на шкіру, слизові оболонки вони викликають роздратування, у тому числі рецепторів шкіри і слизових оболонок, і можуть надавати рефлекторний вплив на діяльність організму.
В якості антисептиків застосовують також речовини з групи окислювачів, до яких відносяться: перекис водню, калію перманганат і ін Вони володіють слабким антисептичним і дезодорує ефектами, пов'язаними із звільненням кисню [4, с. 182].
Значне число антисептиків представлено сполуками (солями) металів (препарати вісмуту, цинку, свинцю). У низьких концентраціях вони блокують сульфгідрильні групи ферментів мікроорганізмів (антисептичний ефект), а в більш високих - денатурують білки з утворенням альбуминатов, в результаті чого на поверхні тканини утворюється плівка, тканина ущільнюється, запалення зменшується (в'яжучий ефект).
До антисептичним засобів відносять також кислоти і луги (саліцилова і борна кислоти, натрію тетраборат, бензоілпероксід), альдегіди (цидипол та ін), спирти (спирт етиловий), феноли (резорцин), барвники (метиленовий синій, брильянтовий зелений), аніонні ( мила) і катіонні детергенти, препарати рослинного походження (квітки нагідок, ромашки).
Хімічні речовини, застосовувані для дезінфекції, відносяться до наступних груп:
1) хлор і хлорсодержащие з'єднання;
2) йод, бром та їх сполуки;
3) перекисні з'єднання;
4) ПАР;
5) альдегіди;
6) кислоти, надкислоти і деякі їх солі;
7) спирти;
8) феноли, крезоли та їх похідні.
Ці речовини мають різну ступінь активності, неоднакові спектри антимікробної дії, токсичність і вплив на оброблювані об'єкти і, як наслідок, широку сферу застосування. Знання властивостей і особливостей дезінфікуючих засобів необхідно для їх правильного вибору і ефективного застосування відповідно до поставленої мети.
Традиційними засобами дезінфекції є хлорактивними препарати органічної (тозілхлорамід натрію, хлорпохідних цианурової кислоти і гідантоїну) і неорганічної (гіпохлорити) природи.
Багато хлорактивними препарати поряд з достоїнствами мають і ряд недоліків (недостатня розчинність, низька стабільність, різкий запах, здатність подразнювати слизові оболонки очей і верхніх дихальних шляхів, викликати корозію металевих поверхонь, руйнувати і знебарвлювати тканини).
З неорганічних сполук хлору вкрай низькою стабільністю відрізняється гіпохлорит натрію (NaOCl). Підвищити стабільність його розчинів вдається додаванням силікату натрію і сульфонол, силікату натрію і оцтової кислоти або її солей, цитралю та інших речовин.
Ряд зарубіжних фірм пропонує тверді форми гіпохлориту натрію, найбільш стабільним з яких є пентагідрат гіпохлориту натрію.
Відома висока дезинфицирующая активність хлору. На її основі створено спеціальний препарат, що є бінарну суміш хлориту натрію і кислоти, на відміну від гипохлоритов хлорити лужних металів володіють властивістю окислення тільки в кислому середовищі, в результаті утворюється діоксид хлору, що володіє бактерицидним і спорацідним дією.
До органічних сполук хлору, використовуваним для дезінфекції, відносять тозілхлорамід натрію (Хлорамін), хлорпохідних цианурової кислот і гідантоїну. Ці речовини мають високу антимікробну активність і ряд інших позитивних якостей, але слабо розчинні у воді.
Для дезінфекції використовують, як правило, їх композиції - хлорацін, сульфохлорантін-Д.
Хлорцін (включає хлорізоціанурат калію або натрію) містить порівняно невелику кількість (12-15%) активного хлору, що дозволяє застосовувати його не тільки в лікувально-профілактичних установах, а й удома. Хлорцін має активністю щодо грамнегативних і грампозитивних мікроорганізмів, дерматофітів, мікобактерій туберкульозу, вірусів, спор. ДП-2 (основа - тріхлорізоціануровая кислота) є не тільки бактерициди, але і спороцідом - містить активного хлору до 45%. Позитивне властивість композицій - збереження активності в широкому діапазоні рН, що дає можливість використовувати їх при різній лужності природної води.
Найбільш відомим хлорпохідних гідантоїну є діхлорметілгідантоін. Прикладом композиції на основі діхлорметілгідантоіна є сульфохлорантін-Д. За рахунок введення до складу препарату сульфонол розчинність діхлорметілгідантоіна підвищується до 2,5-2,9%. Бактерицидна дія поширюється як на грампозитивні, так і на грамнегативні мікроорганізми.
З сполук йоду для дезінфекції найбільш широко використовуються йодофори (С-280, веладін, іозан, супердіп, дайазан та ін) - комплекс йоду і носія, що представляє собою високомолекулярна з'єднання і ПАР. Виражену бактерицидну, туберкулоцидной, фунгіцидну, вірулоцідное, спороцидну дію йодофоров зумовлює застосування цих речовин в основному в якості антисептиків і дуже обмежено - для дезінфекції окремих об'єктів. З йодофоров відомі йодопірон і йодонатом, носіями йоду в яких є відповідно полівінілпіролідон і сульфонати, повідон-йод (містить 1% активного йоду). Для знезараження рук медичного персоналу на основі повідон-йоду створені композиції з сульфонол і неонол.
Широко застосовується для дезінфекції, стерилізації та передстерилізаційного очищення об'єктів перекис водню. Вона відповідає багатьом вимогам: не пахне, швидко розкладається у зовнішньому середовищі на нетоксичні продукти (молекулярний кисень і воду), не викликає алергізації, але разом з тим малостабільна, має виражену місцевоподразнюючу та шкірно-резорбтивну дію, має низьку (порівняно з іншими дезінфікуючими засобами) бактерицидну активність.
З метою зниження токсичності, підвищення антимікробної активності і стабільності на основі перекису водню створюються композиційні препарати. Найбільш зручні для практичного використання тверді форми перекисних сполук (пероксікарбонат натрію - Персол, пероксид карбаміду - гидроперит, пероксоборати натрію). Композиції на основі перекису водню в твердій і рідкій формі отримали широке визнання (наприклад, апісін) через високу ефективність, широкого спектру дії, невеликий токсичності, екологічної безпеки і зручності в застосуванні.
Високої антимікробну активність і широким спектром антимікробної дії відрізняються препарати з групи надкислот. На основі надуксусной кислоти відомі вофастеріл і перстеріл (вміст діючої речовини 40% і 20% відповідно). Ці препарати рекомендовані для дезінфекції виробів медичного призначення зі скла, металу, текстилю, гуми, гігієнічної та хірургічної обробки рук.
Останнім 10-річчя широке поширення отримали дезінфікуючі засоби з групи ПАР.
За здатністю іонізуватися у водних розчинах їх поділяють на катіонні, аніонні, амфолітние і неіоногенні ПАР. В якості самостійних дезінфектантів використовують тільки катіонні і амфолітние ПАР (наприклад, амфолан). Амфолітние ПАР мають ряд переваг перед катіонними - вони малотоксичні, діють на бактерії, гриби і деякі віруси, не втрачають активності в присутності жиру і білка, не піддаються корозії метали. ПАР всіх інших груп застосовують як корисні добавки в складі композиційних дезінфікуючих засобів.
З групи гуанідинів найбільшого поширення як антисептики і дезінфектанти отримали хлоргексідінбіглюконат (гібітан) і лактацід (полісепт). Гібітан володіє широким спектром антибактеріальної дії, проте віріліцідная активність властива тільки його спиртовим розчинам. Метацід викликає загибель грампозитивних і грамнегативних мікроорганізмів, багатьох дерматофітів. Позитивною якістю його є тривалий ефект.
З групи альдегідів в практиці дезінфекції використовуються дві речовини (формальдегід (ФА) і глутаровий альдегід (ГА). Для альдегідів характерні бактерицидну, віруліцидної, фунгіцидну та спороцидну дію, що дозволяє віднести їх до дезінфектантів високого рівня.
В якості дезінфікуючих засобів (і антисептиків) знаходять застосування спирти. Їх використовують як самостійно, так і в якості розчинників, що підсилюють активність інших дезинфікуючих засобів. Спирти мають бактерицидну та віруліцидні властивостями. Для дезінфекції найбільш широко застосовують етиловий та ізопропіловий спирти у концентрації 60-90% (за об'ємом).
Питання 9 Стерилізація текучим паром і парою під тиск: апаратура, характеристика дії на організми. Об'єкти, що підлягають стерилізації зазначеними методами, що використовуються режими
Стерилізація-це звільнення об'єкта від всіх мікроорганізмів за допомогою фізичних або хімічних способів [6, с. 229].
Найбільш надійним і добре контрольованої є термічна стерилізація предметів. Обробка насиченим водяною парою під тиском у парових стерилізаторах - автоклавах, в деяких випадках більш краща, ніж вплив сухого жару в повітряних стерилізаторах - сухоповітряний шафах. Чим вище тиск, що створюється у герметично закритій камері, тим вище температура пари.
Стерилізацію виробів проводять для знищення всіх патогенних і непатогенних мікроорганізмів, включаючи їх спорові форми. У автоклавах стерилізують загальні хірургічні та спеціальні інструменти, деталі приладів і апаратів з корозійно-стійких металів, скла, перев'язувальний матеріал, вироби з гуми, латексу. У сухоповітряний шафах стерилізують хірургічні, стоматологічні, гінекологічні інструменти, деталі приладів і апаратів, в тому числі виготовлені з корозійно-нестійких металів, скла та гуми. У автоклавах зазвичай використовують такі температурні режими і експозицію:
-110 * С (тиск 0,5 кгс / см в 2) протягом 180 хв.,
-120 * С (тиск 1,14 кгс / см в 2) протягом 45 хв.,
-132 * С (тиск 2,0 кгс / см в 2) протягом 20 хв.
У сухоповітряний шафах завантаження і вивантаження виробів проводять при температурі в камері 40-50 * С. Час стерилізації:
- При температурі 180 * С-60 хв;
- При температурі 160 * С-150мін [6, с. 229].
Дробова стерилізація - цей метод стерилізації. Дрібно стерілізіруют об'єкти, які можуть бути поживним субстратом для мікробів (в проміжках між впливами об'єкт залишають в термостаті при 37 0 С або кімнатній температурі для проростання спор). Утворилися вегетативні форми мікроорганізмів вбивають при подальшому прогріванні.
Різновиди, методи і область застосування дробової стерилізації відображені в таблиці 1
Таблиця 1
Дробова стерилізація (тіндалізація)
Питання 10. Мікрофлора шкірних покривів людини: основні представники, роль у життєдіяльності людини, значення в патології. Епідеміологічне значення мікрофлори рук співробітників ЛПУ
Місцем проживання транзиторних мікроорганізмів найчастіше стає шкіра внаслідок постійного контакту із зовнішнім середовищем.
Є стабільна і добре вивчена постійна мікрофлора, склад якої різний у різних анатомічних зонах в залежності від вмісту кисню в навколишньому середовищі бактерії (аероби - анаероби) і близькості до слизистих оболонок (рот, ніс, періанальна область), особливостей секреції і навіть одягу людини.
Особливо рясно заселені мікроорганізмаміте області шкірних покривів, які захищені від дії світла і висихання:
• пахвові западини;
• міжпальцеву;
• пахові складки;
• промежину.
При цьому на мікрорганізми шкірних покривів впливають бактерицидні фактори сальних і потових залоз.
У складі резидентної мікрофлори шкіри і слизових оболонок присутні:
• Staphylococcus epidermidis;
• Staphylococcus aureus;
• Micrococcusspp.;
• Sarcina spp.;
• корінеформние бактерії;
• Propionibacteriumspp.
У складі транзиторною:
• Streptococcus spp.;
• Peptococcusspp.;
• Bacillus subtilis;
• Escherichia coli;
• Enterobacterspp.;
• Acinetobacterspp.;
• Lactobacillisspp.;
• Candida albicans імногіедругіе.
У зонах, де є скупчення сальних залоз (геніталії, зовнішнє вухо), зустрічаються кислотостійкі непатогенні мікобактерії.
Найбільш стабільною і в той же час дуже зручною для вивчення є мікрофлора області чола.
Значна більшість мікроорганізмів, у тому числі патогенних, не проникає через непошкоджені шкірні покриви і гине під впливом бактерицидних властивостей шкіри.
До числа таких факторів, які можуть чинити істотний вплив на видалення непостійних мікроорганізмів з поверхні шкіри, відносяться:
• кисла реакція середовища;
• наявність жирних кислот в секретах сальних залоз і присутність лізоциму.
Ні рясне потовиділення, ні миття чи купання не можуть видалити нормальну постійну мікрофлору або суттєво вплинути на її склад, так як мікрофлора швидко відновлюється внаслідок виходу мікроорганізмів з сальних і потових залоз, навіть у тих випадках, коли контакт з іншими ділянками шкіри або з зовнішнім середовищем повністю припинений.
Тому збільшення обсіменіння тієї чи іншої ділянки шкіри в результаті зменшення бактерицидних властивостей шкіри може служити показником зниження імунологічної реактивності макроорганізму.
Список використаної літератури
1. Борисов Л.Б. Медична мікробіологія, вірусологія, імунологія / Л. Б. Борисов - 4-е видання перер. і доп .- М.: Медичне інформагенство, 2005 .- 735с.
2. Воробйов О.О. Медична та санітарна мікробіологія: [Навчальний посібник для студентів мед. вузів] / А.А. Воробйов, Ю.С. Кривошеїн, В.П. Широбоков .- М.: Academia, 2003 .- 462с.
3. Єліне Н.П., Заїкіна Н.А., Соколова І.П. Керівництво до лабораторних заняття з мікробіології. / За ред. Н.П. Елінова .- М.: «Медицина», 1988 .- 207с.
4. Медична мікробіологія: навчальний посібник / Військова медична академія; Під ред. А.М. Королюка, С.Б. Стойчакова .- 2-е вид .- Спб: Елбі - Спб, 2002 .- 267с.
5. Мікробіологія та імунологія: [Текст]: [Підручник] / А.А. Воробйов та ін - 2-е вид. перераб. і доп. - М.: «Медицина», 2005 .- 492с.
6. Основи мікробіології, вірусології та імунології: [Навчальний посібник] / під ред. А.А. Воробйова, Ю.С. Кривошеїна .- М.: Видавництво Вища школа, 2001 .- 224с.
7. Райкіс Б.М. Загальна мікробіологія з вірусологією та імунологією: Навчальний посібник / Б.М. Райкіс, В.О. Пожарська А.Х. Казіев .- М.: Тріада-Х, 2002 .- 347с.
Відома висока дезинфицирующая активність хлору. На її основі створено спеціальний препарат, що є бінарну суміш хлориту натрію і кислоти, на відміну від гипохлоритов хлорити лужних металів володіють властивістю окислення тільки в кислому середовищі, в результаті утворюється діоксид хлору, що володіє бактерицидним і спорацідним дією.
До органічних сполук хлору, використовуваним для дезінфекції, відносять тозілхлорамід натрію (Хлорамін), хлорпохідних цианурової кислот і гідантоїну. Ці речовини мають високу антимікробну активність і ряд інших позитивних якостей, але слабо розчинні у воді.
Для дезінфекції використовують, як правило, їх композиції - хлорацін, сульфохлорантін-Д.
Хлорцін (включає хлорізоціанурат калію або натрію) містить порівняно невелику кількість (12-15%) активного хлору, що дозволяє застосовувати його не тільки в лікувально-профілактичних установах, а й удома. Хлорцін має активністю щодо грамнегативних і грампозитивних мікроорганізмів, дерматофітів, мікобактерій туберкульозу, вірусів, спор. ДП-2 (основа - тріхлорізоціануровая кислота) є не тільки бактерициди, але і спороцідом - містить активного хлору до 45%. Позитивне властивість композицій - збереження активності в широкому діапазоні рН, що дає можливість використовувати їх при різній лужності природної води.
Найбільш відомим хлорпохідних гідантоїну є діхлорметілгідантоін. Прикладом композиції на основі діхлорметілгідантоіна є сульфохлорантін-Д. За рахунок введення до складу препарату сульфонол розчинність діхлорметілгідантоіна підвищується до 2,5-2,9%. Бактерицидна дія поширюється як на грампозитивні, так і на грамнегативні мікроорганізми.
З сполук йоду для дезінфекції найбільш широко використовуються йодофори (С-280, веладін, іозан, супердіп, дайазан та ін) - комплекс йоду і носія, що представляє собою високомолекулярна з'єднання і ПАР. Виражену бактерицидну, туберкулоцидной, фунгіцидну, вірулоцідное, спороцидну дію йодофоров зумовлює застосування цих речовин в основному в якості антисептиків і дуже обмежено - для дезінфекції окремих об'єктів. З йодофоров відомі йодопірон і йодонатом, носіями йоду в яких є відповідно полівінілпіролідон і сульфонати, повідон-йод (містить 1% активного йоду). Для знезараження рук медичного персоналу на основі повідон-йоду створені композиції з сульфонол і неонол.
Широко застосовується для дезінфекції, стерилізації та передстерилізаційного очищення об'єктів перекис водню. Вона відповідає багатьом вимогам: не пахне, швидко розкладається у зовнішньому середовищі на нетоксичні продукти (молекулярний кисень і воду), не викликає алергізації, але разом з тим малостабільна, має виражену місцевоподразнюючу та шкірно-резорбтивну дію, має низьку (порівняно з іншими дезінфікуючими засобами) бактерицидну активність.
З метою зниження токсичності, підвищення антимікробної активності і стабільності на основі перекису водню створюються композиційні препарати. Найбільш зручні для практичного використання тверді форми перекисних сполук (пероксікарбонат натрію - Персол, пероксид карбаміду - гидроперит, пероксоборати натрію). Композиції на основі перекису водню в твердій і рідкій формі отримали широке визнання (наприклад, апісін) через високу ефективність, широкого спектру дії, невеликий токсичності, екологічної безпеки і зручності в застосуванні.
Високої антимікробну активність і широким спектром антимікробної дії відрізняються препарати з групи надкислот. На основі надуксусной кислоти відомі вофастеріл і перстеріл (вміст діючої речовини 40% і 20% відповідно). Ці препарати рекомендовані для дезінфекції виробів медичного призначення зі скла, металу, текстилю, гуми, гігієнічної та хірургічної обробки рук.
Останнім 10-річчя широке поширення отримали дезінфікуючі засоби з групи ПАР.
За здатністю іонізуватися у водних розчинах їх поділяють на катіонні, аніонні, амфолітние і неіоногенні ПАР. В якості самостійних дезінфектантів використовують тільки катіонні і амфолітние ПАР (наприклад, амфолан). Амфолітние ПАР мають ряд переваг перед катіонними - вони малотоксичні, діють на бактерії, гриби і деякі віруси, не втрачають активності в присутності жиру і білка, не піддаються корозії метали. ПАР всіх інших груп застосовують як корисні добавки в складі композиційних дезінфікуючих засобів.
З групи гуанідинів найбільшого поширення як антисептики і дезінфектанти отримали хлоргексідінбіглюконат (гібітан) і лактацід (полісепт). Гібітан володіє широким спектром антибактеріальної дії, проте віріліцідная активність властива тільки його спиртовим розчинам. Метацід викликає загибель грампозитивних і грамнегативних мікроорганізмів, багатьох дерматофітів. Позитивною якістю його є тривалий ефект.
З групи альдегідів в практиці дезінфекції використовуються дві речовини (формальдегід (ФА) і глутаровий альдегід (ГА). Для альдегідів характерні бактерицидну, віруліцидної, фунгіцидну та спороцидну дію, що дозволяє віднести їх до дезінфектантів високого рівня.
В якості дезінфікуючих засобів (і антисептиків) знаходять застосування спирти. Їх використовують як самостійно, так і в якості розчинників, що підсилюють активність інших дезинфікуючих засобів. Спирти мають бактерицидну та віруліцидні властивостями. Для дезінфекції найбільш широко застосовують етиловий та ізопропіловий спирти у концентрації 60-90% (за об'ємом).
Питання 9 Стерилізація текучим паром і парою під тиск: апаратура, характеристика дії на організми. Об'єкти, що підлягають стерилізації зазначеними методами, що використовуються режими
Стерилізація-це звільнення об'єкта від всіх мікроорганізмів за допомогою фізичних або хімічних способів [6, с. 229].
Найбільш надійним і добре контрольованої є термічна стерилізація предметів. Обробка насиченим водяною парою під тиском у парових стерилізаторах - автоклавах, в деяких випадках більш краща, ніж вплив сухого жару в повітряних стерилізаторах - сухоповітряний шафах. Чим вище тиск, що створюється у герметично закритій камері, тим вище температура пари.
Стерилізацію виробів проводять для знищення всіх патогенних і непатогенних мікроорганізмів, включаючи їх спорові форми. У автоклавах стерилізують загальні хірургічні та спеціальні інструменти, деталі приладів і апаратів з корозійно-стійких металів, скла, перев'язувальний матеріал, вироби з гуми, латексу. У сухоповітряний шафах стерилізують хірургічні, стоматологічні, гінекологічні інструменти, деталі приладів і апаратів, в тому числі виготовлені з корозійно-нестійких металів, скла та гуми. У автоклавах зазвичай використовують такі температурні режими і експозицію:
-110 * С (тиск 0,5 кгс / см в 2) протягом 180 хв.,
-120 * С (тиск 1,14 кгс / см в 2) протягом 45 хв.,
-132 * С (тиск 2,0 кгс / см в 2) протягом 20 хв.
У сухоповітряний шафах завантаження і вивантаження виробів проводять при температурі в камері 40-50 * С. Час стерилізації:
- При температурі 180 * С-60 хв;
- При температурі 160 * С-150мін [6, с. 229].
Дробова стерилізація - цей метод стерилізації. Дрібно стерілізіруют об'єкти, які можуть бути поживним субстратом для мікробів (в проміжках між впливами об'єкт залишають в термостаті при 37 0 С або кімнатній температурі для проростання спор). Утворилися вегетативні форми мікроорганізмів вбивають при подальшому прогріванні.
Різновиди, методи і область застосування дробової стерилізації відображені в таблиці 1
Таблиця 1
Дробова стерилізація (тіндалізація)
| Метод | Апаратура | Режим (температура, час, тиск) | Стерілізіруемий матеріал |
| Текучою парою | Паровий стерилізатор з відкритим випускним краном | 100 0 С, 3 дні по 1 год щодня | Молоко, середовища і ліки в вуглеводнями, деякі інші ліки |
| Щадне прогрівання | Водяна баня з терморегулятором | 56-58 0 С, 5 днів: 1 день по 2 год, інші дні по 1 год | Білкові рідини (живильні середовища, що містять білок, сироватка крові, асіцітіческая рідина) |
Питання 10. Мікрофлора шкірних покривів людини: основні представники, роль у життєдіяльності людини, значення в патології. Епідеміологічне значення мікрофлори рук співробітників ЛПУ
Місцем проживання транзиторних мікроорганізмів найчастіше стає шкіра внаслідок постійного контакту із зовнішнім середовищем.
Є стабільна і добре вивчена постійна мікрофлора, склад якої різний у різних анатомічних зонах в залежності від вмісту кисню в навколишньому середовищі бактерії (аероби - анаероби) і близькості до слизистих оболонок (рот, ніс, періанальна область), особливостей секреції і навіть одягу людини.
Особливо рясно заселені мікроорганізмаміте області шкірних покривів, які захищені від дії світла і висихання:
• пахвові западини;
• міжпальцеву;
• пахові складки;
• промежину.
При цьому на мікрорганізми шкірних покривів впливають бактерицидні фактори сальних і потових залоз.
У складі резидентної мікрофлори шкіри і слизових оболонок присутні:
• Staphylococcus epidermidis;
• Staphylococcus aureus;
• Micrococcusspp.;
• Sarcina spp.;
• корінеформние бактерії;
• Propionibacteriumspp.
У складі транзиторною:
• Streptococcus spp.;
• Peptococcusspp.;
• Bacillus subtilis;
• Escherichia coli;
• Enterobacterspp.;
• Acinetobacterspp.;
• Lactobacillisspp.;
• Candida albicans імногіедругіе.
У зонах, де є скупчення сальних залоз (геніталії, зовнішнє вухо), зустрічаються кислотостійкі непатогенні мікобактерії.
Найбільш стабільною і в той же час дуже зручною для вивчення є мікрофлора області чола.
Значна більшість мікроорганізмів, у тому числі патогенних, не проникає через непошкоджені шкірні покриви і гине під впливом бактерицидних властивостей шкіри.
До числа таких факторів, які можуть чинити істотний вплив на видалення непостійних мікроорганізмів з поверхні шкіри, відносяться:
• кисла реакція середовища;
• наявність жирних кислот в секретах сальних залоз і присутність лізоциму.
Ні рясне потовиділення, ні миття чи купання не можуть видалити нормальну постійну мікрофлору або суттєво вплинути на її склад, так як мікрофлора швидко відновлюється внаслідок виходу мікроорганізмів з сальних і потових залоз, навіть у тих випадках, коли контакт з іншими ділянками шкіри або з зовнішнім середовищем повністю припинений.
Тому збільшення обсіменіння тієї чи іншої ділянки шкіри в результаті зменшення бактерицидних властивостей шкіри може служити показником зниження імунологічної реактивності макроорганізму.
Список використаної літератури
1. Борисов Л.Б. Медична мікробіологія, вірусологія, імунологія / Л. Б. Борисов - 4-е видання перер. і доп .- М.: Медичне інформагенство, 2005 .- 735с.
2. Воробйов О.О. Медична та санітарна мікробіологія: [Навчальний посібник для студентів мед. вузів] / А.А. Воробйов, Ю.С. Кривошеїн, В.П. Широбоков .- М.: Academia, 2003 .- 462с.
3. Єліне Н.П., Заїкіна Н.А., Соколова І.П. Керівництво до лабораторних заняття з мікробіології. / За ред. Н.П. Елінова .- М.: «Медицина», 1988 .- 207с.
4. Медична мікробіологія: навчальний посібник / Військова медична академія; Під ред. А.М. Королюка, С.Б. Стойчакова .- 2-е вид .- Спб: Елбі - Спб, 2002 .- 267с.
5. Мікробіологія та імунологія: [Текст]: [Підручник] / А.А. Воробйов та ін - 2-е вид. перераб. і доп. - М.: «Медицина», 2005 .- 492с.
6. Основи мікробіології, вірусології та імунології: [Навчальний посібник] / під ред. А.А. Воробйова, Ю.С. Кривошеїна .- М.: Видавництво Вища школа, 2001 .- 224с.
7. Райкіс Б.М. Загальна мікробіологія з вірусологією та імунологією: Навчальний посібник / Б.М. Райкіс, В.О. Пожарська А.Х. Казіев .- М.: Тріада-Х, 2002 .- 347с.