Міністерство сільського господарства Російської Федерації
Ульяновська державна сільськогосподарська академія
Кафедра фізіології сільськогосподарських тварин та зоології
Методичні рекомендації до визначення і виведенню гемограми у тварин
Ульяновськ, 2005 р .
УДК
Н. А. Любін, Л. Б. Конова.
Методичні рекомендації до визначення і виведенню гемограми у сільськогосподарських і лабораторних тварин при патологіях.
Для студентів та аспірантів факультетів ветеринарної медицини і технологічного. Ульяновськ, ГСХА, 2005, с.
При підготовці цих рекомендацій був використаний досвід роботи ...
Рецензент: В. А. Єрмолаєв, доктор ветеринарних наук, професор
Рекомендовано до видання
методичною комісією
факультету ветеринарної медицини
Протокол № від 2005 р .
Ульяновська державна сільськогосподарська академія, 2005 р
МЕТОДИКА ПРИГОТУВАННЯ Мазки крові ДЛЯ ДОСЛІДЖЕННЯ
А. взяття крові та ОТРИМАННЯ МАЗКА
Циркулює в судинній системі кров представляє більш-менш рівномірну завись в плазмі формених елементів: еритроцитів, лейкоцитів і кров'яних пластинок (у птахів, рептилій і амфібій - тромбоцитів). Абсолютна кількість і співвідношення окремих груп клітин в крові різних видів тварин неоднакові. Найбільші коливання дають еритроцити: від 3,5 млн. у 1 мм 3 крові курей до 14,4 млн. в тому ж об'ємі крові кіз. Дещо менше видові коливання кількості білих кров'яних тілець: у 1 мм 3 крові ссавців міститься від 5 до 15 тис. лейкоцитів. Кількість лейкоцитів у крові птахів значно вище: у курей, наприклад воно, доходить до 35 тис., а у гусей до 38 тис. на 1 мм 3. Нарешті, зміст кров'яних платівок у 1 мм 3 крові коливається від 200 до 400 тис.
У крові, взятої з різних ділянок судинної системи, знаходиться далеко не одина-ковое кількість кров'яних тілець, особливо, і це найбільш важливо, лейкоцитів. Значно коливається при цьому і співвідношення окремих форм білої крові (табл.1, 2).
Таблиця1
Кількість лейкоцитів у різних ділянках кров'яного русла у кроликів
Якщо взяти середню кількість лейкоцитів в 1 мм 3 крові з вушної вени за 100%, то в крові з судин інших органів міститься:
Ульяновська державна сільськогосподарська академія
Кафедра фізіології сільськогосподарських тварин та зоології
Методичні рекомендації до визначення і виведенню гемограми у тварин
Ульяновськ,
УДК
Н. А. Любін, Л. Б. Конова.
Методичні рекомендації до визначення і виведенню гемограми у сільськогосподарських і лабораторних тварин при патологіях.
Для студентів та аспірантів факультетів ветеринарної медицини і технологічного. Ульяновськ, ГСХА, 2005, с.
При підготовці цих рекомендацій був використаний досвід роботи ...
Рецензент: В. А. Єрмолаєв, доктор ветеринарних наук, професор
Рекомендовано до видання
методичною комісією
факультету ветеринарної медицини
Протокол № від
Ульяновська державна сільськогосподарська академія, 2005 р
МЕТОДИКА ПРИГОТУВАННЯ Мазки крові ДЛЯ ДОСЛІДЖЕННЯ
А. взяття крові та ОТРИМАННЯ МАЗКА
Циркулює в судинній системі кров представляє більш-менш рівномірну завись в плазмі формених елементів: еритроцитів, лейкоцитів і кров'яних пластинок (у птахів, рептилій і амфібій - тромбоцитів). Абсолютна кількість і співвідношення окремих груп клітин в крові різних видів тварин неоднакові. Найбільші коливання дають еритроцити: від 3,5 млн. у
У крові, взятої з різних ділянок судинної системи, знаходиться далеко не одина-ковое кількість кров'яних тілець, особливо, і це найбільш важливо, лейкоцитів. Значно коливається при цьому і співвідношення окремих форм білої крові (табл.1, 2).
Таблиця1
Кількість лейкоцитів у різних ділянках кров'яного русла у кроликів
| Назва органу або посудини, тканини | % | Назва органу або посудини, тканини | % |
| Паренхіма печінки | 83,9 | Легкі. | 74,4 |
| Паренхіма селезінки | 385, 3 | Vena. Pulmon. | 43,9 |
| Нирки | 103,8 | М'язи серця | 61,7 |
| Наднирники | 73,8 | Кістковий мозок | 128,29 |
| Vena mesent. | 89,0 | Vena. femoralis | 62,4 |
| Art. mesent. | 84,4 | Аrt. femoralis | 69,9 |
| Vena cava caud. | 4.9 | Vena. renalis | 60,5 |
Тому важливо брати кров для аналізу завжди з одного і того ж судини або групи судин. У всіх сільськогосподарських ссавців таким місцем є вени вуха, у курей - гребінь, у качок і гусей - м'якоть ступні ноги.
Таблиця 2 Склад білої крові свиней
Кількість лейкоцитів залежить і від фізіологічного стану тварини.
У багатьох сільськогосподарських і лабораторних тварин помітно виражені травний лейкоцитоз (особливо у собаки), менше у коня, і коливання кількості лейкоцитів і (особливо) еритроцитів при м'язовій роботі. При деяких патологічних станах має місце ретенція білих кров'яних тілець у судинах печінки та наднирника. Лейкоцитоз спостерігається також у другій половині вагітності.
Місце взяття крові ретельно вистригає і якщо потрібно, промивається водою з милом, потім спиртом (або спиртом з ефіром). Рекомендується ретельно розтирати місце взяття крові ваткою зі спиртом і ефіром, що викликає місцеву гіперемію і разом з тим допомагає уникнути випадкових коливань лейкоцитарної формули, пов'язаних з деяким застоєм крові в дрібних венах вуха. Особливо слід мати на увазі можливе виборче скупчення в них еозинофілів.
Хороші мазки крові можна отримати тільки на дуже чистих, знежирених предметних стеклах, ретельно промитих спочатку гарячою водою з милом, а потім, після висушування, - спиртом з ефіром. Промивання в спирті з ефіром особливо важливо для повного знежирення стекол. Якщо використовуються вже були у вжитку скла, то їх необхідно попередньо прокип'ятити у воді з содою.
Прокол тканин для отримання крові краще всього проводити голкою Франка, але можна вживати і звичайну голку або спеціальне перо для уколів.
Першу виступила на поверхню краплю крові швидко і ретельно стирають з місця уколу, а з другої та наступних готують мазки.
Приготування мазка крові. Чисте предметне скло тримають, як показано на малюнку 1, між великим і середнім пальцями лівої руки. У правій руці, тими ж або великим і вказівним пальцями тримають чисте покривне або тонке шліфоване предметне скло. Принаймні, одне ребро таких стекол має бути вже ширини того предметного скла, на якому готують мазок. Зазвичай це досягається підбором або обламуванням кутів шліфованого скла.
Рис. 1. Приготування мазка крові.
Поверхностью предметного скла, затиснутого в лівій руці, обережно, але швидко стосуються виступила з проколу краплі крові, намагаючись зробити це ближче до середнього пальця і, зараз же, привівши скло в горизонтальне положення, прикладають до його поверхні вузьке ребро того скла, яке тримають в правій руці. Докладене ребро має лежати перпендикулярно до довгих граней предметного набрякла, а саме прикладена скло потрібно нахилити в бік краплі під кутом в 40-50 °. Тримаючи це скло, таким чином, обережно рухають його в бік краплі до зіткнення з нею. Як тільки крапля, торкнувшись рухомого скла, розійдеться по лінії зіткнення стекол, верхнє похиле скло швидким, але рівним рухом направляють назад, у бік великого пальця, зберігаючи весь час колишній кут нахилу в 40-50 °. Отриманий таким способом мазок висушують на повітрі і на нього пишуть голкою назву або номер тварини, її стать ((J або Q), і дату взяття крові.
Можна виготовляти мазки і на покривних скельцях. Для цього одним покривним склом беруть дуже маленьку краплю крові і прикладають до нього інше покривне скло так, щоб кути одного скла лягли на середину ребер іншого. Як тільки крапля крові розійдеться найтоншим шаром між обома стеклами, останні паралельним
рухом в протилежні сторони розлучаються, і, таким чином, виходять два мазка.
В. ФІКСАЦІЯ МАЗКА
Щоб закріпити всі формені елементи крові в препараті з максимально можливим збереженням їх структури та підготувати мазки до подальшому фарбуванні, існують різні методи фіксації мазків. Найбільше практичне значення мають:
1. Фіксація абсолютним метиловим спиртом. Це кращий метод фіксації. Сухі мазки на 3 хвилини занурюються в абсолютний метиловий спирт або на той же час спирт наливається на мазок, цілком покриваючи препарат. Через 3 хвилини мазки виймають (або зливають з них спирт) і просушують на повітрі.
2. Фіксація абсолютним етиловим спиртом, змішаним з рівною кількістю ефіру. Фіксація триває 10-30 хвилин у звичайних судинах для гістологічних розчинів. Цей спосіб значно гірше, тому що дає багато артефактів.
В. фарбування мазків. ОСНОВНИЙ МЕТОД Забарвлення за Романовським
За допомогою забарвлення препарату найбільш чітко виявляється найтонша структура, як ядра, так і цитоплазми. Принцип сучасних методів забарвлення мазків крові відкритий в 1891 р . Д. Л. Романовським і полягає у виборчому поглинання (хімічному і коллоідальнохіміческом) речовинами клітини трьох фарбувальних речовин - Азура метиленової синьки і еозину. Азур («червона з метиленової синьки») має амфотерноосновную реакцію, метиленовая синька - лужну, еозин - кислу.
Ядро клітини, багате нуклеопротеїдами і нуклеотидами, базофільно, тобто забарвлюється основними фарбами з виборчим поглинанням о з у р а.
Цитоплазма молодих клітин, щодо багата нуклеїновими кислотами (нуклеотидами), також, хоча і в меншій мірі, базофильна. При цьому вибірково поглинається переважно метиленовая синька. Цитоплазма ж багатьох зрілих клітин крові (насамперед нейтрофілів) ацидофільна (оксифильная).
Лімфоцити зберігають базофілія цитоплазми на всіх стадіях розвитку, вибірково поглинаючи метиленовим синьку. Наявність базофілія молодий цитоплазми, що вказує на відносне багатство її нуклеїновими кислотами, пов'язане зі збереженням здатності молодих клітин до інтенсивного синтезу білків.
Лімфоцити зберігають цю здатність на весь онтогенез.
Базофілія гранул базофілів визначається наявністю в них кислої слизу (мукоітіносерная кислота).
У лабораторній практиці найчастіше користуються наступними способами забарвлення за методом Романовського.
Забарвлення розчином Гімза
Фарба Гімза, застосовувана при фарбуванні за методом Романовського, являє собою комбінацію метилен-Азура (АЗУР II) і еозину (В, жовтого). Вона складається з Азура II *- 3,0, еозину У -0,8, хімічно чистого гліцерину 250,0 і метилового спирту 250,0.
Ця фарба зазвичай відпускається готовою. Дуже багато в успіху фарбування визначає бездоганну якість розчину фарби, а останнє у вищій мірі залежить від реакції води.
Для приготування робочого розчину фарби вживається двічі дистильована вода. Зазвичай вона має рН = 5,4, тобто занадто кисла, і дає слабку, погану забарвлення. Тому таку воду потрібно подщелочив, додавши до 2-3 л води кілька крапель 1-процентного розчину соди. Кращим рН води слід вважати 6,8-6,9 (до 7,1). При більш лужної реакції води мазки виходять більш синіми (навіть еритроцити).
Практично придатність води до забарвлення визначають за розчинення в ній гематоксиліном. У 10 см 3 дистильованої води (краще всього в часовому скельці) кладуть пінцетом кілька крупинок гематоксиліном. Не раніше як через 1 хвилину і не пізніше 5 хвилин вода повинна забарвитися в ясний слабофіолетовий колір. Більш раннє і інтенсивне забарвлення вказує на сильно лужну реакцію, більш пізніше - на кислу.
Якщо немає дуже хорошого гематоксилін, то реакцію води, подщелачиваєт розчином соди, можна визначити, користуючись як індикатор нейтральній червоною. У два хімічних склянки (або колби Ерленмейера) наливають по 200 см 3 дистильованої води і додають 1 - 2 краплі 1-процентного розчину нейтральній червоною. При рН дистильованої води, що дорівнює 5,4-5,5, виходить буряко-червона (рубінова) забарвлення. Після цього в один зі склянок додають по краплі, ретельно розмішуючи, 1% розчин соди до появи слабкого оранжевого відтінку (колір лососини). Не можна доводити воду до ясно помаранчевого і, тим більше, жовтого кольору, так як в цьому випадку реакція буде сильно лужний.
Більш ретельно користуватися індикаторами Міхаеліса і менш точно - універсальним індикатором.
Краще за все для отримання потрібної і стійкою реакції води застосовувати буферні розчини. Добрими буферними розчинами для цієї мети будуть фосфатні. Для них потрібно мати два вихідних розчину:
1. Двоосновний фосфату натрію (Na 2 HP0 4. • 2Н 2 0) -17,814 г на 1 л (РН = 8,302).
2. Одноосновної фосфату калію (КН 2 Р0 4) - 13,638 г на 1 л (РН = 4,529).
Азур II - суміш у рівних частинах фарб: АЗУР I (діметілтіоніохлорід) і метиленової синьки. У постарілим розчині вихідної фарби Гімза метиленовая синька часто погано забарвлює цитоплазму лімфоцитів (немає суто блакитного кольору). Тоді необхідно додати метиленової синьки в вихідний розчин фарби.
Якщо до літру дистильованої води додати по 5 см 3 того та іншого розчину, то рН такої води буде дорівнює 6,813. Випадкові коливання концентрації вуглекислоти в повітрі при такому способі не роблять впливу на рН води.
Перед фарбуванням (ex tempore) до дистильованої води додають вихідний розчин фарби Гімза з розрахунку 1,0-1,5 краплі фарби на 1 см 3 води.
Робочий розчин фарби наливається піпеткою (обережно!) на предметне скло так, щоб препарат (мазок крові) був повністю покритий фарбою. Скло поміщаються над широкою чашкою Петрі на скляних паличках, з'єднаних гумовими трубками попарно. Щоб уникнути опадів, які неможливо відмити, можна скла укладати мазками вниз, на скляні палички, що лежать в чашці Петрі, так, щоб фарба покривала мазки повністю (спосіб академіка М. Д. Стражеска).
При першому способі на один мазок витрачається 2,5 - 3,0 см 3 робочого розчину фарби.
Через 20-30 хвилин фарбу зливають, препарати промивають чистою водопровідною водою і висушують на повітрі. Для фарбування старою фарбою потрібно менше часу.
При фарбуванні розчином Гімза добре диференціюється структура ядра, трохи гірше - структура цитоплазми, особливо нейтрофільна зернистість. Однак при дуже вмілому фарбуванні і зернистість виявляється досить добре.
За цим методом погано забарвлюються псевдоеозінофіли (палочкозерністие гранулоцити) крові сільськогосподарських птахів.
Пофарбований фарбою Гімза ядра мають гарний фіолетово-червоний колір (колір вишні); нейтрофільна зернистість - рожево-фіолетовий; еозинофільна зернистість - рожевий або червоно-рожевий; базофильная-кольори мальви; азурофільних - червоно-фіолетового кольору.
Цитоплазма лімфоцитів - блакитна, моноцитів - від блакитно-сірого до попелясто-сірої.
Еритроцити - червонувато-рожевого кольору, поліхроматофіл'ние еритроцити - синюваті, базофильная пунктація еритроцитів - синя.
Якщо немає хорошої готової фарби Гімза, то можна добре забарвити мазки по Н про х т у. Для фарбування по Нохту готується два розчини: 1) 1-промо-ний розчин Азура II, 2) 1-промілльний розчин еозину. Перед приготуванням робочого розчину фарбу потрібно відтитрувати. Для цього спочатку беруть на 3 см 3 дистильованої води 4 краплі розчину Азура II і 3 краплі розчину еозину (тобто відносно 4: 3). Якщо фарбування мазків неправильна, пробують ставлення 4: 4, або 4: 5, або 4: 6, і т. д.
Досить інтенсивне фарбування виходить, якщо на 1,5 см 3 Азура II береться 1,0 см 3 еозину і 6 см 3 води.
Модифікація Паппергейма (Травень-Грюнвальд - Гімза)
При цьому способі забарвлення попередня фіксація мазка не потрібна, так як перша фарба - Травень-Грюнвальд має розчинником метиловий спирт.
Метод фарбування двухмоментно. Спершу мазок покривають 2 см 3 нерозведеною фарби
Травень-Грюнвальд, що представляє собою розчин в метиловий спирт еозину і метиленової синьки. Якщо немає готової надійної фарби, то розчиняють приготований фабричним способом сухий порошок Травень-Грюнвальд: 1,0 г порошку на 100 см 3 абсолютного метилового спирту і 50 см 3 чистого гліцерину. Хороша фарба виходить і без гліцерину.
Через 3 хвилини до фарби Травень-Грюнвальд, що знаходиться на мазку, додають 2 см 3 дистильованої води і ретельно змішують їх продуванням або послідовним набрання і випусканням через тонко відтягнуту піпетку. Коли, приблизно через 1 хвилину, мазок набуває рожевий відтінок, фарбу з препарату зливають і після цього, не висушуючи, 10-12-15 хвилин фарбують мазок робочим розчином фарби Гімза, а потім промивають чистою водопровідною водою. Цей спосіб забарвлення вдало поєднує гарне виявлення зернистості клітин фарбою Травень-Грюнвальд з чіткою забарвленням структури ядра розчином Гімза.
Таке забарвлення особливо цінна для виявлення псевдоеозінофілов (спеціальних гранулоцитів) курячої крові.
Результати забарвлення: ядра червоно-фіолетові, цитоплазма лімфоцитів блакитно-синя, азурофільних зернистість лімфоцитів пурпурово-червона, мієлоїдна азурофілія фіолетово-коричневий, так само як і центральна субстанція кров'яних платівок. Нейтрофільна зернистість коричнево-червона, до синювато-рожевої; еозинофільна - від червоно-помаранчевої до цегляно-червоного кольору; базофильная зернистість темного ультрамариново-фіолетового кольору (метахромазію); еритроцити мідно-рожеві; поліхроматофільние еритроцити синюваті; базофильная пунктація еритроцитів (слабко що виявляється) синього кольору *.
Таблиця 2 Склад білої крові свиней
| Кров | Базофіли | Еозином-філи | Нейтрофіли | Лімфо-ціти | Моноцити | ||
| Юні | Палочко ядерні. | Сегменто ядерні. | |||||
| З вени вуха | 0,5 | 2,5 | 1,0 | 5,5 | 31,5 | 55,5 | 3,5 |
| З серця | до 0,1 | 0,4 | 1,0 | 10,0 | 62,0 | 24,5 | 4,0 |
У багатьох сільськогосподарських і лабораторних тварин помітно виражені травний лейкоцитоз (особливо у собаки), менше у коня, і коливання кількості лейкоцитів і (особливо) еритроцитів при м'язовій роботі. При деяких патологічних станах має місце ретенція білих кров'яних тілець у судинах печінки та наднирника. Лейкоцитоз спостерігається також у другій половині вагітності.
Місце взяття крові ретельно вистригає і якщо потрібно, промивається водою з милом, потім спиртом (або спиртом з ефіром). Рекомендується ретельно розтирати місце взяття крові ваткою зі спиртом і ефіром, що викликає місцеву гіперемію і разом з тим допомагає уникнути випадкових коливань лейкоцитарної формули, пов'язаних з деяким застоєм крові в дрібних венах вуха. Особливо слід мати на увазі можливе виборче скупчення в них еозинофілів.
Хороші мазки крові можна отримати тільки на дуже чистих, знежирених предметних стеклах, ретельно промитих спочатку гарячою водою з милом, а потім, після висушування, - спиртом з ефіром. Промивання в спирті з ефіром особливо важливо для повного знежирення стекол. Якщо використовуються вже були у вжитку скла, то їх необхідно попередньо прокип'ятити у воді з содою.
Прокол тканин для отримання крові краще всього проводити голкою Франка, але можна вживати і звичайну голку або спеціальне перо для уколів.
Першу виступила на поверхню краплю крові швидко і ретельно стирають з місця уколу, а з другої та наступних готують мазки.
Приготування мазка крові. Чисте предметне скло тримають, як показано на малюнку 1, між великим і середнім пальцями лівої руки. У правій руці, тими ж або великим і вказівним пальцями тримають чисте покривне або тонке шліфоване предметне скло. Принаймні, одне ребро таких стекол має бути вже ширини того предметного скла, на якому готують мазок. Зазвичай це досягається підбором або обламуванням кутів шліфованого скла.
Рис. 1. Приготування мазка крові.
Поверхностью предметного скла, затиснутого в лівій руці, обережно, але швидко стосуються виступила з проколу краплі крові, намагаючись зробити це ближче до середнього пальця і, зараз же, привівши скло в горизонтальне положення, прикладають до його поверхні вузьке ребро того скла, яке тримають в правій руці. Докладене ребро має лежати перпендикулярно до довгих граней предметного набрякла, а саме прикладена скло потрібно нахилити в бік краплі під кутом в 40-50 °. Тримаючи це скло, таким чином, обережно рухають його в бік краплі до зіткнення з нею. Як тільки крапля, торкнувшись рухомого скла, розійдеться по лінії зіткнення стекол, верхнє похиле скло швидким, але рівним рухом направляють назад, у бік великого пальця, зберігаючи весь час колишній кут нахилу в 40-50 °. Отриманий таким способом мазок висушують на повітрі і на нього пишуть голкою назву або номер тварини, її стать ((J або Q), і дату взяття крові.
Можна виготовляти мазки і на покривних скельцях. Для цього одним покривним склом беруть дуже маленьку краплю крові і прикладають до нього інше покривне скло так, щоб кути одного скла лягли на середину ребер іншого. Як тільки крапля крові розійдеться найтоншим шаром між обома стеклами, останні паралельним
рухом в протилежні сторони розлучаються, і, таким чином, виходять два мазка.
В. ФІКСАЦІЯ МАЗКА
Щоб закріпити всі формені елементи крові в препараті з максимально можливим збереженням їх структури та підготувати мазки до подальшому фарбуванні, існують різні методи фіксації мазків. Найбільше практичне значення мають:
1. Фіксація абсолютним метиловим спиртом. Це кращий метод фіксації. Сухі мазки на 3 хвилини занурюються в абсолютний метиловий спирт або на той же час спирт наливається на мазок, цілком покриваючи препарат. Через 3 хвилини мазки виймають (або зливають з них спирт) і просушують на повітрі.
2. Фіксація абсолютним етиловим спиртом, змішаним з рівною кількістю ефіру. Фіксація триває 10-30 хвилин у звичайних судинах для гістологічних розчинів. Цей спосіб значно гірше, тому що дає багато артефактів.
В. фарбування мазків. ОСНОВНИЙ МЕТОД Забарвлення за Романовським
За допомогою забарвлення препарату найбільш чітко виявляється найтонша структура, як ядра, так і цитоплазми. Принцип сучасних методів забарвлення мазків крові відкритий в
Ядро клітини, багате нуклеопротеїдами і нуклеотидами, базофільно, тобто забарвлюється основними фарбами з виборчим поглинанням о з у р а.
Цитоплазма молодих клітин, щодо багата нуклеїновими кислотами (нуклеотидами), також, хоча і в меншій мірі, базофильна. При цьому вибірково поглинається переважно метиленовая синька. Цитоплазма ж багатьох зрілих клітин крові (насамперед нейтрофілів) ацидофільна (оксифильная).
Лімфоцити зберігають базофілія цитоплазми на всіх стадіях розвитку, вибірково поглинаючи метиленовим синьку. Наявність базофілія молодий цитоплазми, що вказує на відносне багатство її нуклеїновими кислотами, пов'язане зі збереженням здатності молодих клітин до інтенсивного синтезу білків.
Лімфоцити зберігають цю здатність на весь онтогенез.
Базофілія гранул базофілів визначається наявністю в них кислої слизу (мукоітіносерная кислота).
У лабораторній практиці найчастіше користуються наступними способами забарвлення за методом Романовського.
Забарвлення розчином Гімза
Фарба Гімза, застосовувана при фарбуванні за методом Романовського, являє собою комбінацію метилен-Азура (АЗУР II) і еозину (В, жовтого). Вона складається з Азура II *- 3,0, еозину У -0,8, хімічно чистого гліцерину 250,0 і метилового спирту 250,0.
Ця фарба зазвичай відпускається готовою. Дуже багато в успіху фарбування визначає бездоганну якість розчину фарби, а останнє у вищій мірі залежить від реакції води.
Для приготування робочого розчину фарби вживається двічі дистильована вода. Зазвичай вона має рН = 5,4, тобто занадто кисла, і дає слабку, погану забарвлення. Тому таку воду потрібно подщелочив, додавши до 2-3 л води кілька крапель 1-процентного розчину соди. Кращим рН води слід вважати 6,8-6,9 (до 7,1). При більш лужної реакції води мазки виходять більш синіми (навіть еритроцити).
Практично придатність води до забарвлення визначають за розчинення в ній гематоксиліном. У 10 см 3 дистильованої води (краще всього в часовому скельці) кладуть пінцетом кілька крупинок гематоксиліном. Не раніше як через 1 хвилину і не пізніше 5 хвилин вода повинна забарвитися в ясний слабофіолетовий колір. Більш раннє і інтенсивне забарвлення вказує на сильно лужну реакцію, більш пізніше - на кислу.
Якщо немає дуже хорошого гематоксилін, то реакцію води, подщелачиваєт розчином соди, можна визначити, користуючись як індикатор нейтральній червоною. У два хімічних склянки (або колби Ерленмейера) наливають по 200 см 3 дистильованої води і додають 1 - 2 краплі 1-процентного розчину нейтральній червоною. При рН дистильованої води, що дорівнює 5,4-5,5, виходить буряко-червона (рубінова) забарвлення. Після цього в один зі склянок додають по краплі, ретельно розмішуючи, 1% розчин соди до появи слабкого оранжевого відтінку (колір лососини). Не можна доводити воду до ясно помаранчевого і, тим більше, жовтого кольору, так як в цьому випадку реакція буде сильно лужний.
Більш ретельно користуватися індикаторами Міхаеліса і менш точно - універсальним індикатором.
Краще за все для отримання потрібної і стійкою реакції води застосовувати буферні розчини. Добрими буферними розчинами для цієї мети будуть фосфатні. Для них потрібно мати два вихідних розчину:
1. Двоосновний фосфату натрію (Na 2 HP0 4. • 2Н 2 0) -17,814 г на
2. Одноосновної фосфату калію (КН 2 Р0 4) -
Азур II - суміш у рівних частинах фарб: АЗУР I (діметілтіоніохлорід) і метиленової синьки. У постарілим розчині вихідної фарби Гімза метиленовая синька часто погано забарвлює цитоплазму лімфоцитів (немає суто блакитного кольору). Тоді необхідно додати метиленової синьки в вихідний розчин фарби.
Якщо до літру дистильованої води додати по 5 см 3 того та іншого розчину, то рН такої води буде дорівнює 6,813. Випадкові коливання концентрації вуглекислоти в повітрі при такому способі не роблять впливу на рН води.
Перед фарбуванням (ex tempore) до дистильованої води додають вихідний розчин фарби Гімза з розрахунку 1,0-1,5 краплі фарби на 1 см 3 води.
Робочий розчин фарби наливається піпеткою (обережно!) на предметне скло так, щоб препарат (мазок крові) був повністю покритий фарбою. Скло поміщаються над широкою чашкою Петрі на скляних паличках, з'єднаних гумовими трубками попарно. Щоб уникнути опадів, які неможливо відмити, можна скла укладати мазками вниз, на скляні палички, що лежать в чашці Петрі, так, щоб фарба покривала мазки повністю (спосіб академіка М. Д. Стражеска).
При першому способі на один мазок витрачається 2,5 - 3,0 см 3 робочого розчину фарби.
Через 20-30 хвилин фарбу зливають, препарати промивають чистою водопровідною водою і висушують на повітрі. Для фарбування старою фарбою потрібно менше часу.
При фарбуванні розчином Гімза добре диференціюється структура ядра, трохи гірше - структура цитоплазми, особливо нейтрофільна зернистість. Однак при дуже вмілому фарбуванні і зернистість виявляється досить добре.
За цим методом погано забарвлюються псевдоеозінофіли (палочкозерністие гранулоцити) крові сільськогосподарських птахів.
Пофарбований фарбою Гімза ядра мають гарний фіолетово-червоний колір (колір вишні); нейтрофільна зернистість - рожево-фіолетовий; еозинофільна зернистість - рожевий або червоно-рожевий; базофильная-кольори мальви; азурофільних - червоно-фіолетового кольору.
Цитоплазма лімфоцитів - блакитна, моноцитів - від блакитно-сірого до попелясто-сірої.
Еритроцити - червонувато-рожевого кольору, поліхроматофіл'ние еритроцити - синюваті, базофильная пунктація еритроцитів - синя.
Якщо немає хорошої готової фарби Гімза, то можна добре забарвити мазки по Н про х т у. Для фарбування по Нохту готується два розчини: 1) 1-промо-ний розчин Азура II, 2) 1-промілльний розчин еозину. Перед приготуванням робочого розчину фарбу потрібно відтитрувати. Для цього спочатку беруть на 3 см 3 дистильованої води 4 краплі розчину Азура II і 3 краплі розчину еозину (тобто відносно 4: 3). Якщо фарбування мазків неправильна, пробують ставлення 4: 4, або 4: 5, або 4: 6, і т. д.
Досить інтенсивне фарбування виходить, якщо на 1,5 см 3 Азура II береться 1,0 см 3 еозину і 6 см 3 води.
Модифікація Паппергейма (Травень-Грюнвальд - Гімза)
При цьому способі забарвлення попередня фіксація мазка не потрібна, так як перша фарба - Травень-Грюнвальд має розчинником метиловий спирт.
Метод фарбування двухмоментно. Спершу мазок покривають 2 см 3 нерозведеною фарби
Травень-Грюнвальд, що представляє собою розчин в метиловий спирт еозину і метиленової синьки. Якщо немає готової надійної фарби, то розчиняють приготований фабричним способом сухий порошок Травень-Грюнвальд:
Через 3 хвилини до фарби Травень-Грюнвальд, що знаходиться на мазку, додають 2 см 3 дистильованої води і ретельно змішують їх продуванням або послідовним набрання і випусканням через тонко відтягнуту піпетку. Коли, приблизно через 1 хвилину, мазок набуває рожевий відтінок, фарбу з препарату зливають і після цього, не висушуючи, 10-12-15 хвилин фарбують мазок робочим розчином фарби Гімза, а потім промивають чистою водопровідною водою. Цей спосіб забарвлення вдало поєднує гарне виявлення зернистості клітин фарбою Травень-Грюнвальд з чіткою забарвленням структури ядра розчином Гімза.
Таке забарвлення особливо цінна для виявлення псевдоеозінофілов (спеціальних гранулоцитів) курячої крові.
Результати забарвлення: ядра червоно-фіолетові, цитоплазма лімфоцитів блакитно-синя, азурофільних зернистість лімфоцитів пурпурово-червона, мієлоїдна азурофілія фіолетово-коричневий, так само як і центральна субстанція кров'яних платівок. Нейтрофільна зернистість коричнево-червона, до синювато-рожевої; еозинофільна - від червоно-помаранчевої до цегляно-червоного кольору; базофильная зернистість темного ультрамариново-фіолетового кольору (метахромазію); еритроцити мідно-рожеві; поліхроматофільние еритроцити синюваті; базофильная пунктація еритроцитів (слабко що виявляється) синього кольору *.
3. Посилена регенерація. Різка поліхромазія, юні форми більшої величини (макроцитоз), загальний анізоцитоз внаслідок посиленого утворення і надходження в кров незрілих, почасти ядерні елементів (нормо-і еритробластів): кістковий мозок в загальному гіпертрофованого, в стані прогресуючого червоного переродження (метаплазія); при наявності токсичного фактора - уривки ядер, - нормобластичну картина крові (ступінь ІІІа).
4. Гіперрегенерація. Загальне порушення утворення еритроцитів і надходження в кров дійсно новостворених (змінили форму або «ембріональних», багатих гемоглобіном, гіперхромних) юних форм: мегалобластов, мегалоцитов і взагалі всіх дегенеративних форм, що вказує на порушення нормальної регенерації (прогресуюча мегалобластична гіперплазія кісткового мозку), - мегалобластична (перніціозна) картина крові (ступінь IV. а і б).
М. Д. Стражеска та Д. Н. Яновський стверджують,
що порушення нормальної регенерації при мегалобластозах немає і що при гіперхромних анеміях типу Бірмера одночасно виробляються як нормоцитами, так і мегалоціти.
Спостерігається при різних ступенях патологічних змін картина червоної крові може бути представлена у вигляді такої схеми.
НОМЕНКЛАТУРА ГОЛОВНИХ ЕРІТРОЦПТАРНИХ КАРТИН КРОВІ
Макроцитоз: багато великих клітин (макроцітов).
Микроцитоз: багато ненормально малих еритроцитів (мікроцітов).
Мегалоцітоз: наявність мегалобластов в мегалоцитов.
Анізоцитоз: неоднакова величина еритроцитів, особливо наявність макроцітов.
Пойкилоцитоз: еритроцити неправильної форми.
Шістоцітоз: наявність у мазку обривків еритроцитів (шістоцітов).
Поліхромазія: присутність в мазку поліхроматофілія взагалі.
Базофілія: присутність в мазку базофільних еритроцитів. Те саме - для базофільною пунктаціі,
Олігохромемія, олігохромазія: бліда забарвлення еритроцитів, обумовлена зменшеним вмістом у них гемоглобіну або, набагато рідше, потоншенням («распластиваніем») еритроцитів.
Гіперхромазія: підвищена насиченість еритроцитів гемоглобіном, звідси - більш інтенсивна їхня окрашиваемость. Підвищення кольорового індексу крові.
Олігоцітемія: зменшена кількість червоних кров'яних тілець, впізнаване на рівномірному хорошому мазку за їх рідкісному розташуванню.
Гіперглобулія: підвищена кількість клітин. На мазку - дуже тісне розташування еритроцитів.
ХАРАКТЕРИСТИКА ОСОБЛИВОСТЕЙ кров'яних тілець
І КАРТИНИ КРОВІ СІЛЬСЬКОГОСПОДАРСЬКИХ
І ЛАБОРАТОРНИХ ТВАРИН
Кінь
Еритроцити досить великі (середній діаметр 5,6-5,8 μ), мало варіюють у розмірах. У верхових коней еритроцити декілька більше, у крокових порід щодо дрібніше. Кількість еритроцитів у скакових порід помітно більше, ніж у крокових.
Загальний вигляд мазка крові коня характерний склеюванням еритроцитів в довгі ланцюжки, які на товстому мазку перетинаються один з одним і утворюють подобу грубої, неправильної сітки або решітки. Тільки на кінці мазка зазвичай вдається знайти червоні кров'яні тільця, що лежать поодинці.
Поліхроматофілія і ретикулоцити зустрічаються в нормі дуже рідко (менше 1%). Ще рідше спостерігаються пойкілоціти і бичка Жолі.
Найбільш характерною особливістю крові всіх однокопитних і, зокрема, коні є структура еозинофілів. Еозинофіли щодо вельми великі (до 20-22 μ); зерна їх винятково великі (2-3 μ в діаметрі) і до такої міри густо наповнюють цитоплазму, що зовсім закривають її. Лише дуже рідко бувають видно невеликі ділянки рожево-сірого або сірувато-блакитний цитоплазми. З-під гранул видно окремі ділянки ядра, а проте із-за маси еозинофільних зерен форму ядра вловити майже не вдається. Тому неможливо або майже неможливо встановити стадію зрілості ядра еозінофіла. Лише зрідка у коней трапляються порівняно невеликі еозинофіли з малою кількістю великих зерен.
Тісна розташування гранул веде до їх часткового сплющиванию; поряд з круглими, трапляються зерна незграбні, іноді сильно витягнуті в довжину.
Колір зерен у еозинофілів коні не яркокрасной. а скоріше малиново-червоний, більш блідий, ніж у еозинофілів інших тварин. При гарній забарвленням зерна здаються напрочуд красиво мутно-просвічує. Простори між зернами зазвичай мають колір самих зерен, але більш блідий. Це просвічує нижній шар гранул еозінофіла.
Базофіли коні теж дуже великі (до 18-21μ в діаметрі). Вони дуже легко деформуються. Особливо часто на мазках зустрічаються базофіли з лопнули ядром, фарбувальним всю цитоплазму у вишнево-рожевий колір. Добре збереглися і правильно забарвлені базофіли коні дуже красиві, з бузково-блакитний цитоплазмою і химерно-звивистих, ніжною хмарної структури, рожево-фіолетового кольору ядром. Гранули базофілів великі і варіюється в розмірах в одній і тій же клітині.
Форма ядра юних, паличкоядерних і навіть сегментоядерних спеціальних гранулоцитів дуже часто подковообразно. Сегментоядерние форми найчастіше мають 3-4 сегмента, рідше 2 плі 5.
За Максимову, зернистість спеціальних гранулоцитів коні швидше оксифильная, ніж нейтрофіло. "Справжніми нейтрофільними спеціальні зерна ..., можуть вважатися ..., наприклад, у мавпи, собаки, свині, у більшості ж ссавців вони повинні бути названі амфофільнимі, так як фарбуються як кислими, так і основними фарбами, причому в одних випадках проявляється більшу спорідненість до перших, а в інших - до других. Перший випадок зустрічається особливо часто і стосується, наприклад, порівняно досить грубих зерен спеціальних гранулоцитів кролика і морської свинки, чому вони тут називаються також ще псевдоеозінофільнимі або більш дрібних зерен тих же елементів у бика, вівці, коні і т. д. "
Моноцити мають у більшості випадків мало розгалужене, компактне ядро і відносно бідні цитоплазмою.
Кров'яні пластинки, в середньому, досить великі (близько 3 μ) і дуже варіюють у розмірах. Зустрічаються і карликові форми (в 1 μ) і прямо гіганти (досягають 12 μ). Межі звичайних коливань розмірів кров'яних пластинок - від 1,8 до 6,6 μ.
Лімфоцити досить часто мають бобовидную форму ядра. Вони бідні цитоплазмою. У ній іноді зустрічаються вакуолі (0,8-5,4%), навіть у здорових тварин. Азурофільних грануляція в цитоплазмі зустрічається досить часто (до 6,1% у малих і до 14,3% у великих лімфоцитів).
Зрідка в нормі зустрічаються плазматичні клітини.
Осел
Морфологічно кров осла дуже близька до крові коня. Діаметр червоних кров'яних тілець коливається між 5,41 і 6,7 μ, тобто вони декілька дрібніше, ніж у коня.
Гранули еозинофілів дрібніше, ніж у еозинофілів коні. Вони не завжди заповнюють всю цитоплазму, і між зернами часто зустрічаються блакитні цито-плазматичні проміжки. Набагато краще помітна форма ядра.
Базофіли дрібніше еозинофілів і грануляція їх менша чим базофілів коні.
Ядро моноцитів компактно, рідко утворює короткі, округлі лопаті.
Лімфоцити, на противагу лімфоцитам коні, мають найчастіше округлі ядра, без помітних вдавлення або виступів. Іноді, при швидкій фіксації, у лімфоцитів (і у моноцитів) бувають помітні псевдоподии. Цитоплазма мізерна (навіть і у великих лімфоцитів).
Верблюд
Найбільш характерною особливістю крові верблюда є еліптична форма еритроцитів, які фарбуються зазвичай досить інтенсивно, зі слабко помітним зблідненням в центрі. Еритроцити лежать на мазку дуже густо, відповідно високому вмісту їх у крові (11 млн. в 1 мм 3). Розміри еритроцитів мало варппруют. Їх коротка вісь дорівнює в середньому 4,0 μ., Довга 7,35 μ. Еліпсоїдна (овальна) форма дуже правильна. Деформації вкрай рідкісні.
Білі кров'яні тільця мають відносно малі розміри, особливо базофпли, діаметр яких у 2 рази менше, ніж у базофілів коні (всього 8-10,5 μ).
Еозинофіли декілька більше, з досить великими (1,0-1,8 μ.) Круглими гранулами, розсіяними серед ясноголубой цитоплазми. Форма ядра видно дуже добре, так само як і у еозинофілів всіх інших наведених в атласі тварин, за винятком однокопитних. Зерна не «придушують» ядра.
Ядро моноцитів іноді значно звивистою, утворює своєрідні петлі або досить довгі лопаті. Зрідка в цитоплазмі моноцитів трапляються великі шматочки (бичка), окрашивающиеся як ядро. Можливо, що це - отшнуровавшіеся ділянки лопатей ядра.
Велика рогата худоба
Середній розмір еритроцитів 5,1 μ (Межі варіацій - від 4,4 до 7,7 μ). Найчастіше розмір еритроцитів коливається в межах від 4,4 до 5,5 μ.
Серед еритроцитів дорослих тварин у нормі дуже рідко попадаються ретнкулоціти. Ще рідше зустрічаються тільця Жолі. Пойкилоцитоз, поліхромазія і еритробластів при фізіологічній нормі або не зустрічаються зовсім, або виключно рідкісні. Породні коливання кількості еритроцитів у великої рогатої худоби відносно невеликі (у порівнянні, наприклад, з кількістю еритроцитів у коней).
Еозинофіли корів досить великі; їх цитоплазма наповнена дуже яскраво фарбувальними зернами, середньої або досить великої величини (0,5 μ). Іноді гранули лежать в ясноголубой цитоплазмі досить рідко. Кількість еозинофілів зазвичай значно вища, ніж v інших ссавців (в нормі 6,0 - 8,0% і більше).
При депресії кровотворення в крові корів можна знайти карликові (розміром з середній і навіть з малий лімфоцит) еозинофіли, цитоплазма яких густо наповнена зернами.
Спеціальні гранулоцити великої рогатої худоби порівняно великі (більше, ніж у всіх інших сільськогосподарських ссавців). Зернистість злегка оксифильная, виражена добре.
Ядро часто значно розчленоване - до 5-8 сегментів.
Впадає в око великий розмір агранулоцитам.
Моноцити в переважаючій своїй частині мають значно розчленоване, лопатеві або лентообразной ядро. Цитоплазма багата. Найдрібніша азурофільних зернистість близько ядра виражена добре.
У телят і навіть у дорослих корів у крові зустрічаються великі лімфоцити. Цитоплазма лімфоцитів дуже багата, в ній досить часто зустрічаються азурофільних гранули (5,1% у малих форм і 12,6% у великих). Дуже рідко в цитоплазмі попадаються вельми великі азургранули (до 1,5 μ і більше).
Плазматичні клітини зрідка зустрічаються в крові і при фізіологічній нормі.
Середній розмір кров'яних пластинок-близько 2,6 μ, Межі коливань 1,1-4,9 μ.
У мазку зустрічається порівняно багато кров'яних платівок, часто злипаються у великі купки.
Вівця
Дуже характерні маленькі, густо розташовані в мазку, еритроцити. Їх середній діаметр 4.3μ при звичайних коливаннях від 3,5 до 4,5 μ. Проте, зустрічаються і дуже маленькі форми (до 2,5 μ.) Та великі (до 7,0 і навіть 8,3 μ.). Взагалі для вівці звичайний невеликий анізоцитоз.
Густота розташування еритроцитів у мазку визначається дуже великою їх кількістю .6-13 млн. в 1 мм 3) у крові; це компенсує їх малий розмір.
Еозинофіли відрізняються великим діаметром (9,9 - 17,6 μ); вони містять округлі, іноді неправильної форми, досить великі гранули (0,5-1,0 μ). Зерна пухко наповнюють звичайно добре помітну, ясноголубую цитоплазму.
Ядро еозинофілів (як і спеціальних гранулоцитів) визріває по кільчасто типу. Тому часті форми ядра у вигляді цілого кільця (у паличкоядерних) пли розірваного кільця (у сегментоядерних клітин).
Багато еозинофілів зі значною сегментацією ядра (3-5 сегментів).
Базофіли трохи меншого розміру, ніж еозинофіли (в середньому 12,1 μ при коливаннях у 11,0-13,2 μ). Ядро базофілів, особливо при поганій фіксації, дуже часто деформовано (лопається). Гранули великі, мало варіюють у розмірах, дуже темно-окрашивающиеся.
Надзвичайно характерна велика сегментування ядер зрілих спеціальних гранулоцитів. Дуже часті форми з 8-10 і більш сегментами. Для вівці це норма, а не патологічна форма. Розмір спеціальних гранулоцитів відносно великий, хоча п менше, ніж у великої рогатої худоби. Зернистість по Клінебергеру та Карлу нейтрофільні, по Максимову - із більшою спорідненістю з кислим фарбам.
Моноцити великі; ядро їх сильно розчленоване на лопаті, іноді з'єднуються між собою лише тонкими містками.
У великих і середніх лімфоцитів добре видно цитоплазма. У ній зрідка зустрічаються вакуолі. Азургранули в 5,2-6,3% лімфоцитів.
Кров'яні пластинки дуже малі - 1,9-2,4 μ в діаметрі.
Кров кози по своїй морфології дуже близька до крові вівці (особливо лейкоцити). Відмітна особливість еритроцитів кози - і х мала осмотична резістентноет'. Тому мазкп часто виходять зі зірчастої формою червоних кров'яних тілець. Вельми част анізоцитоз. Навіть у цілком клінічно здорових тварин в крові зустрічаються співай-кілоціти, ретикулоцити, поліхроматофілія і зрідка навіть тільця Жолі. Це вказує на деяку фізіологічну роздратованість еритропоезу, характерну для кіз.
Лейкоцити морфологічно дуже подібні з білими кров'яними тільцями овець.
Свиня
Еритроцити досить великі (середній діаметр 5-6 μ). У червоній крові свиней в нормі зустрічаються поліхроматофілія і ретикулоцити, "кільцеві" форми еритроцитів і навіть еритробластів. Найсильніше це висловлено у поросят. Вітально гранульовані еритроцити у дорослих евнней зустрічаються в малій кількості (3-4 на 1 000 нормоцитами); у поросят їх кількість доходить до 1,1-13,8%.
Білі кров'яні тільця не мають особливо різких видових ознак.
Базофіли характерні великими, темнофарбовані-ми гранулами. Еозинофіли невеликі, правильної округлої форми. Вони мають яскраві, досить великі вірна (0,5-1,0 μ в діаметрі). Сегментування ядра невелика (звичайно 2, рідше 3 сегменти).
Ядро моноцитів мало розчленована, звичайно витягнутої або злегка скрученої форми. Зрідка в цитоплазмі моноцитів зустрічаються вакуолі.
Клітини роздратування рідкісні.
У лімфоцитах попадаються азургранули (4% малих лімфоцитів і 5,8% великих).
Кров'яні пластинки відносно малі (близько 2,0 μ) -
Кількість лейкоцитів у крові досить велика (10-15 тис. в 1 мм 3).
Собака
Еритроцити, в порівнянні з еритроцитами інших домашніх ссавців, великі. Їх середній діаметр дорівнює 7μ, при коливаннях від 5 до 9 μ.
На забарвлених препаратах центральна частина еритроцитів і при фізіологічній нормі майже безбарвна («кільцева» форма).
У дорослих собак в крові зустрічаються в незначній кількості (2-3 на 1 000) поліхромія-тофільние і вітально гранульовані еритроцити і залишки ядра в еритроцитах (тільця Жолі). Дуже рідко трапляються нормобластів. Є слабко виражений анізоцитоз.
Базофіли крові собак характерні досить чітко вираженими контурами ядра, правильно круглими, з різкими межами, порівняно нечисленними, неоднакової величини гранулами і бузково-рожевим кольором цитоплазми. Базофілів в крові дуже мало.
Ядро еозінофплов мало розчленована. Гранули середнього розміру - 0,5-1,0 μ в діаметрі.
Визрівання ядра спеціальних гранулоцитів відбувається по кільцевому типу.
Ядро моноцитів найчастіше за все колбасовідний, зі своєрідними конволюте на кінцях. Рідше зустрічаються лопатеві форми.
Лімфоцити фіксуються з досить великими псевдоподиями. Цитоплазма, навіть у великих лімфоцитів, розвинена помірно. У ній зрідка трапляються вакуолі.
Плазматичні клітини зустрічаються і при фізіологічній нормі.
При деяких патологічних змінах (інфекціях і, особливо, інтоксикаціях) у спеціальних гранулоцитах бувають тільця Деле.
Кішка
Еритроцити досить великі: середній діаметр 5,9 μ, при крайніх коливаннях від 3,2 до 7,5 μ. Доволі частими є кільцеві форми червоних кров'яних тілець.
Поліхроматофпли і нормобластів в крові при фізіологічній нормі вкрай рідкісні.
Базофіли дуже великі, з темною, рожево-фіолетового цитоплазмою і великими, але нечисленними гранулами. Вони дуже рідко трапляються в крові кішки, і тому Максимов вважав, що базофілів у кішки немає.
Еозинофіли середньої величини, з округлими, іноді кілька неправильної форми гранулами. Автор ніколи не зустрічав еозинофілів котячої крові з паличкоподібними гранулами, як це стверджують Вірт, Клінебергер і Карл. Гранули досить великі (1,0-1,5 μ). Розміри їх значно варіюють.
Спеціальні гранулоцити характерні надзвичайно дрібними зернятками в цитоплазмі. Контури ядра на всіх стадіях зрілості своєрідно округлені, чіткі і витончені. Визрівання ядра відбувається, мабуть, по кільцевому типу.
Ядро моноцитів дуже компактно і майже не утворює лопатей.
Кров'яні пластинки досить великі (2-4 μ). Межі коливань їх розмірів дуже значні: від карликових, в 0,8 μ, до гігантських форм, що доходять до 10μ.
Кролик
Еритроцити великі (в середньому 6,0-6,5-6,8 μ в діаметрі). У них дуже слабо виражене ослаблення забарвлення в центрі. Поліхромазія помітно виражена навіть при фізіологічній нормі (до 1%). Ретикулоцити дуже часті (до 8% еритроцитів у дорослих тварин і 20-80% у новонароджених і в перші місяці розвитку). Зрідка зустрічаються нормобластів. Червона кров взагалі дуже лабільна.
Еозинофіли з великими гранулами (1,5 μ), дуже густо розташованими в цитоплазмі.
Спеціальні гранулоцити кролика дуже своєрідні. Їх зернистість набагато більше, ніж у нейтрофілів інших тварин, і фарбується комбінацією фарб за Романовським в яркокрасной колір, тобто еозинофільна (оксифильная). Тому спеціальні гранулоцити кроликів отримали назву псевдоеозінофілов. Форма зерен неправильно округла, іноді незграбна.
Однакова забарвлення і майже однакові розмір і форма псевдоеозінофілов і еозинофілів кролика дуже ускладнюють диференціації цих клітин. Нещодавно (1945 р.) Якобі запропонований для цієї мети наступний спеціальний метод забарвлення.
Свіжоприготований, висушений на повітрі мазок крові кролика фіксують спиртом з формаліном і потім протягом 5-10 хвилин фарбують 0,05-процентним водяним розчином
2-6 - діхлорфеноліндофенола (4 частини) і 0,5% розчину нейтрального червоного (1 частина). До кожних 5 см 3 цієї суміші додають перед забарвленням 4 краплі перекису водню.
Після швидкої промивки - висушити фільтрувальним папером і негайно дивитися в мікроскоп під іммерсіей.
При такій забарвленні протоплазма еозинофілів щільно набита сильно забарвленими великими сферичними гранулами (1,5 і в діаметрі), майже кожна гранула має темне пурпурово-чорну периферію і трохи світлішу нутро, колір якої коливається між темнопурпуровим і грязносероголубим. У псевдоеозінофілов ж дуже мізерні, окремі темнопурпурние гранули (діаметром 0,5 μ), швидше за овоїдної і жезлообразной форми.
Ядра псевдоеозінофілов і окремі їхні сегменти зазвичай відрізняються заокругленість форм; «містки» і «нитки» між сегментами або досить товсті або майже невидимі, що створює в цьому останньому випадку враження роз'єднаних сегментів.
Моноцити і лімфоцити кроликів не мають характерних видових особливостей.
У крові кролів, по Салін та Вірту, зустрічаються іноді дуже великі, що нагадують часом еозинофіли, фагоцитуючі клітини - так звані «клазматоціти». Автор (В. М.) спостерігав в крові кролика дуже великі, фагоцитуючі, з великою кількістю вакуолей, ендотеліальні клітини (клазматоціти). Вони, однак, ніколи не містили еозинофільних або псевдоеозінофільних гранул. Кров'яні пластинки - середнього розміру (2,7 μ), досить численні і мають більш темнофарбовані хромомер.
Морська свинка
Еритроцити діаметром в 4,3-5,7 і до 7,0 μ.
У нормальній крові зустрічається значна кількість поліхроматофілія (до 1,0-1,5% від нормо-цитов). Цьому відповідає наявність вітально гранульованих еритроцитів (0,1-0,9%). У новонароджених морських свинок їх кількість досягає 20-40%.
Базофіли і еозинофіли крові морських свинок дуже нагадують аналогічні клітини крові мавпи.
Спеціальні гранулоцити мають оксифільних, добре виражену, досить велику зернистість. Вказівка Вірта на повну подібність псевдоеозінофілов у кроликів і спеціальних гранулоцитів у морських свинок слід вважати абсолютно неправильним: гранули в псевдоеозінофілах кроликів дуже великі (до 8,5 μ) і пофарбовані еозином в яркокрасной колір, спеціальні ж гранулоцити морських свинок мають набагато менші зерна бляклої, червонувато-рожевою, з фіолетовим відтінком, забарвлення.
Агранулоціти не мають особливо характерних відмінностей. Можна тільки відзначити відносну бідність цитоплазмою у великих і середніх лімфоцитів.
Для крові морських свинок виключно характерна наявність у значної частини моноцитів (до 25-40%) так званих тілець Курлова. Це (на добре фіксованих препаратах) дуже великі, круглі або овальні, окрашивающиеся азурит у вишневий колір, освіти. На менш добре фіксованих або довго сохнувшіх препаратах вони як би стискуються (можливо, - осмотичний висмоктування води. - В. М.) і стають спочатку борознистим, а потім набувають зірчастої форми. У цьому останньому випадку на місці, залишеному завмерлим тільцем, утворюється неокрашіваемие простір (порожнеча).
Тельця Курлова дуже, часто такі великі, що відтісняють ядро до периферії, вдавлюються в нього і викликають значну деформацію не лише ядра, але і всієї клітини. При дуже значному розвитку тільця Курлова можуть викликати розпад клітини.
Паппенгейм і Феррата вважають, що курловскіе тільця зустрічаються не тільки в моноцитах, а й у великих лімфоцитах. Однак Максимов локалізує їх тільки в моноцитах, що видається більш правильним.
Природа і походження курловскіх тілець зовсім не ясні. Менш імовірними представляються погляди на них, то як на вакуолі, наповнені азурофільних секретом, то як на фагоцитовані частинки клітин або, нарешті, як на стимулюючі зростання спеціальні гігантські гранули, що виникають під впливом статевих гормонів.
Більш вірогідні два припущення. По першому, тільця Курлова - це клітинні паразити з класу найпростіших. Тоді стає зрозумілим їх поступове зростання, загрозливий самому існуванню клітини. По іншому припущенням, курловскіе тільця - його новоутворення в клітинах, викликані впровадженням вірусів.
V окремих дорослих морських свинок і у новонароджених курловскіе тільця відсутні.
Середній розмір кров'яних платівок 2-3 μ.
Щур
Ерптрогшти досить великі (5,7-7,0 μ, в середньому 6,2 μ діаметром). Дуже часті поліхроматофілія (до 5% у дорослих тварин).
Ядро еозинофілів і особливо спеціальних гранулоцитів розвивається за кільчасто типу. Тому нерідкі кільцеподібні форми юних і паличкоядерних гранулоцитів.
Еозінофлльние гранули маленькі, круглі; вони густо заповнюють цитоплазму.
Зернистість спеціальних гранулоцитів дуже дрібна, вона, однак, ясно видно на добре фіксованих і забарвлених за Папергейму мазках крові.
Біла кров щурів виключно лабільна. У двох здорових щурів одного віку і навіть у одного і того ж тваринного часті значні коливання в співвідношенні окремих видів лейкоцитів.
Миша
Середній розмір еритроцитів 6,7 μ.
Дуже часті поліхроматофілія (до 10-20% від всіх еритроцитів). Іноді зустрічаються нормобластів.
Біла кров морфологічно дуже близька до щурячої. Тільки еозинофіли більшою за розміром і мають досить великі зерна (до 1,0 μ).
Моноцити крові мишей, навіть при удаваній нормі, часто дають виключно химерні, покручені, скручені ядра, з численними лопастями.
Курка
Картина крові курки, як і всіх птахів, різко відрізняється від картини крові ссавців, насамперед, наявністю великих еліптичних ядерних еритроцитів. Розміри їх часто більше розмірів лейкоцитів. Третя група формених елементів крові птахів - тромбоцити - теж має ядро.
Це велика кількість ядерних клітин ускладнює знаходження лейкоцитів у крові птахів, у той час як в крові ссавців таких труднощів немає.
Розмір еритроцитів курки 11-13 х 7-8 μ; розмір ядер 5-6x3-4 μ. Вітально гранульованих еритроцитів досить багато (2-3%, а іноді й значно більше).
Тромбоцити (веретеноподібні клітини) значно менше еритроцитів (8,5 x5, 3 μ).
Лейкоцити птахів, в цілому, дещо меншого розміру, ніж лейкоцити ссавців.
До цих пір не можна вважати вирішеним питання про те, чи слід в крові птахів розрізняти еозинофілів від спеціальних гранулоцитів (псевдоеозінофілов). Букраба (1928 р.), Ханка (1930 р.), Соловей (1934 р.) та ін схильні визнавати існування тільки однієї групи - еозинофілів. При цьому В. Букраба (1928 р.), Гедфельд (1911 р.) і Еллерманн і Банг (1908 р.) пропонують диференційовано еозинофіли на круглозерністие і палочкозерністие.
Навпаки, Максимов (1915-1926 рр..), Клінебергер і Карл (1912 і 1928 рр..), Вірт (1925 р.) і школа професора М. П. Рухлядева (1930 р.), особливо Л. О. Лебедєв (1940 р.), вважають, що морфологічно і функціонально в крові курей розрізняються псевдо-еозинофіли і еозинофіли. Якщо, наприклад, псевдоеозінофіли (особливо юні їхньої форми) мають округлі зерна, подібні гранулам еозинофілів, то краї гранул псевдоеозінофілов здаються трохи «розмитими», не різкими, порівняно з гранулами еозинофілів. У переважній більшості псевдоеозінофілов знаходиться паличкоподібна зернистість, яка часто приймає форму правильних веретен. Ядра зрілих псевдоеозінофілов, так само як і взагалі гранулоцитів птахів, більш пікнотичне, чим ядра гранулоцитів ссавців.
Лебедєв (1940 р.) наступними ознаками характеризує відміну зернистості псевдоеозінофілов і еозинофілів:
а) Якщо мазок крові, попередньо пофарбований 0,5-процентним розчином еозину, обробити розчином оцтової кислоти в спирті, то круглі зерна еозинофілів стійко зберігають червоне забарвлення, а паличкоподібні та круглі гранули псевдоеозінофілов знебарвлюються.
б) Гранули еозинофілів забарвлюються за Папергейму в червоно-рожевий колір, а при фарбуванні Брілл-анткрезіловой блакитний - в блакитно-рожевий.
Гранули ж псевдоеозінофілов за першим способом фарбуються в яркокрасной (іноді коричнево-червоний), а по другому - в зеленувато-синій колір.
При фарбуванні розчином Гімза (навіть дуже гарної) зерна псевдоеозінофілов фарбуються дуже слабо, і тому кращим забарвленням (і єдино цілком придатною) для крові птахів слід вважати забарвлення Романовського в модифікації Паппенгейма.
в) Оксидази-і пероксидаза-позитивні у курей лише еозинофільні лейкоцити круглозерністие. Псевдоеозінофіли дають негативну реакцію.
г) Суданофільная зернистість є тільки у еозинофілів.
д) Ядра у псевдоеозінофілов фарбуються слабкіше, ніж у еозинофілів.
Вірт вважає, що гранули псевдоеозінофілов навіть на юних стадіях їх розвитку не бувають круглими. Вони можуть бути довгастими, паличкоподібними, веретеноподібними або катушковіднимі.
За Люндквіста (Lundquist, 1925 р.), гранули псевдоеозінофілов прижиттєво круглі, а різні модифікації їх форм залежать від фіксації. Прижиттєво кругла форма гранул псевдоеозінофілов все-таки мало ймовірна. Але немає сумніву, що спосіб фіксації може дещо впливати на форму зерен псевдоеозінофілов. Так, автор цієї книги при деяких змінах в способі фіксації отримував особливу гранулювання псевдоеозінофілов, дуже нагадує міцелій гриба. Близькі до цього рн-Сунки в роботі М. Я. Соловей (1934 р.).
В атласі приведені тільки ті форми клітин, які належать безперечно до однієї з двох груп оксифільних гранулоцитів курей (та інших сільськогосподарських птахів). Саме, в ньому дані еозинофіли, з одного боку, і палочкозерністие псевдо-еозинофіли, з іншого. Практично розрізнити еозинофіли і юні (круглозерністие) форми псевдоеозінофілов вкрай важко.
Лімфоцити курей зазвичай малі, часто з характерними для них виступами (псевдоподиями), утвореними цитоплазмою. Остання в лімфоцитах (навіть великих) убога.
Моноцити, всупереч Клінебергеру та Карлу (1912-1928 рр..), У крові курей та інших сільськогосподарських птахів, безсумнівно, є (школа М. П. Рухлядева, 1930 р.). Тільки цитоплазма сірувато-блакитна, близька за забарвленням до цитоплазми великих лімфоцитів. У цитоплазмі моноцитів птахів майже не виявлена найдрібніша азурофільних зернистість.
Дуже характерно для крові курей, а також інших сільськогосподарських птахів, наявність на мазках своєрідних фігур розпаду ядер, - так званих «тіней» ядер, що свідчить про дуже велику лабільності, «крихкості» клітин крові птахів. Особливо лабільні клітини дуже молодих тварин. Це ускладнює підрахунок лейкоцитарної формули і навіть може спотворити результати підрахунку.
Індичка. Гусак. Качка.
Кров всіх цих трьох видів сільськогосподарських птахів морфологічно дуже близька до крові курки. Кілька варіюється тільки псевдоеозінофіли. У качок вони так само малі, як і у курей; їх зернистість не має таких чітких веретеноподібних форм.
Вона швидше нагадує неправильної форми короткі палички, нерівної довжини. Еозинофіли індичок крупніші, ніж псевдоеозінофіли.
У гусей і качок, навпаки, псевдоеозінофіли досить великі і значно перевершують порівняно маленьких еозинофілів.
Гранули псевдоеозінофілов дуже нагадують зерна рису. У качок вони декілька довше і тонше, ніж у гусей.
Тромбоцити крові гусака і качки кілька кругліше і коротше, чим тромбоцити курей. У індичок тромбоцити, навпаки, більш подовжені. Еритроцити мають трохи більш тупі кінці.
Клітини крові гусей і качок більш резистентні, ніж у курей. Тому тіней ядер у мазках крові гусей і качок значно менше, ніж у мазках курячої крові.
Жаба
Еритроцити дуже великі (22,8 х 15,8 μ) і мають ядра. Кількість еритроцитів у крові жаб невелика (0,38 млн. в 1 мм 3).
Базофіли крові жаби малі, густо наповнені середньої величини зернами.
Еозинофіли мають досить великі (0,5-1,0 μ), дивно правильною, круглої форми, роздільно лежать у цитоплазмі зерна. Цитоплазма інтенсивно блакитного кольору.
Спеціальні гранулоцити мають дуже дрібну рожеву зернистість. Тип дозрівання ядра - кільцевий.
Лімфоцити, навіть великі, з вузькою цитоплазмою, що фіксується з витягнутими псевдоподиями.
У крові нормальної жаби зустрічаються моноцити, фагоцитовані чужорідні частинки.
Тромбоцити досить великі (5x17 μ, частіше кілька коротше), еліптичної, витягнутої форми.
У цілому, мазки, пофарбовані за цим способом, дещо багатші відтінками, ніж при фарбуванні розчином Гімза, але здаються більш темними, «похмурими». 4. Гіперрегенерація. Загальне порушення утворення еритроцитів і надходження в кров дійсно новостворених (змінили форму або «ембріональних», багатих гемоглобіном, гіперхромних) юних форм: мегалобластов, мегалоцитов і взагалі всіх дегенеративних форм, що вказує на порушення нормальної регенерації (прогресуюча мегалобластична гіперплазія кісткового мозку), - мегалобластична (перніціозна) картина крові (ступінь IV. а і б).
М. Д. Стражеска та Д. Н. Яновський стверджують,
що порушення нормальної регенерації при мегалобластозах немає і що при гіперхромних анеміях типу Бірмера одночасно виробляються як нормоцитами, так і мегалоціти.
Спостерігається при різних ступенях патологічних змін картина червоної крові може бути представлена у вигляді такої схеми.
НОМЕНКЛАТУРА ГОЛОВНИХ ЕРІТРОЦПТАРНИХ КАРТИН КРОВІ
Макроцитоз: багато великих клітин (макроцітов).
Микроцитоз: багато ненормально малих еритроцитів (мікроцітов).
Мегалоцітоз: наявність мегалобластов в мегалоцитов.
Анізоцитоз: неоднакова величина еритроцитів, особливо наявність макроцітов.
Пойкилоцитоз: еритроцити неправильної форми.
Шістоцітоз: наявність у мазку обривків еритроцитів (шістоцітов).
Поліхромазія: присутність в мазку поліхроматофілія взагалі.
Базофілія: присутність в мазку базофільних еритроцитів. Те саме - для базофільною пунктаціі,
Олігохромемія, олігохромазія: бліда забарвлення еритроцитів, обумовлена зменшеним вмістом у них гемоглобіну або, набагато рідше, потоншенням («распластиваніем») еритроцитів.
Гіперхромазія: підвищена насиченість еритроцитів гемоглобіном, звідси - більш інтенсивна їхня окрашиваемость. Підвищення кольорового індексу крові.
Олігоцітемія: зменшена кількість червоних кров'яних тілець, впізнаване на рівномірному хорошому мазку за їх рідкісному розташуванню.
Гіперглобулія: підвищена кількість клітин. На мазку - дуже тісне розташування еритроцитів.
ХАРАКТЕРИСТИКА ОСОБЛИВОСТЕЙ кров'яних тілець
І КАРТИНИ КРОВІ СІЛЬСЬКОГОСПОДАРСЬКИХ
І ЛАБОРАТОРНИХ ТВАРИН
Кінь
Еритроцити досить великі (середній діаметр 5,6-5,8 μ), мало варіюють у розмірах. У верхових коней еритроцити декілька більше, у крокових порід щодо дрібніше. Кількість еритроцитів у скакових порід помітно більше, ніж у крокових.
Загальний вигляд мазка крові коня характерний склеюванням еритроцитів в довгі ланцюжки, які на товстому мазку перетинаються один з одним і утворюють подобу грубої, неправильної сітки або решітки. Тільки на кінці мазка зазвичай вдається знайти червоні кров'яні тільця, що лежать поодинці.
Поліхроматофілія і ретикулоцити зустрічаються в нормі дуже рідко (менше 1%). Ще рідше спостерігаються пойкілоціти і бичка Жолі.
Найбільш характерною особливістю крові всіх однокопитних і, зокрема, коні є структура еозинофілів. Еозинофіли щодо вельми великі (до 20-22 μ); зерна їх винятково великі (2-3 μ в діаметрі) і до такої міри густо наповнюють цитоплазму, що зовсім закривають її. Лише дуже рідко бувають видно невеликі ділянки рожево-сірого або сірувато-блакитний цитоплазми. З-під гранул видно окремі ділянки ядра, а проте із-за маси еозинофільних зерен форму ядра вловити майже не вдається. Тому неможливо або майже неможливо встановити стадію зрілості ядра еозінофіла. Лише зрідка у коней трапляються порівняно невеликі еозинофіли з малою кількістю великих зерен.
Тісна розташування гранул веде до їх часткового сплющиванию; поряд з круглими, трапляються зерна незграбні, іноді сильно витягнуті в довжину.
Колір зерен у еозинофілів коні не яркокрасной. а скоріше малиново-червоний, більш блідий, ніж у еозинофілів інших тварин. При гарній забарвленням зерна здаються напрочуд красиво мутно-просвічує. Простори між зернами зазвичай мають колір самих зерен, але більш блідий. Це просвічує нижній шар гранул еозінофіла.
Базофіли коні теж дуже великі (до 18-21μ в діаметрі). Вони дуже легко деформуються. Особливо часто на мазках зустрічаються базофіли з лопнули ядром, фарбувальним всю цитоплазму у вишнево-рожевий колір. Добре збереглися і правильно забарвлені базофіли коні дуже красиві, з бузково-блакитний цитоплазмою і химерно-звивистих, ніжною хмарної структури, рожево-фіолетового кольору ядром. Гранули базофілів великі і варіюється в розмірах в одній і тій же клітині.
Форма ядра юних, паличкоядерних і навіть сегментоядерних спеціальних гранулоцитів дуже часто подковообразно. Сегментоядерние форми найчастіше мають 3-4 сегмента, рідше 2 плі 5.
За Максимову, зернистість спеціальних гранулоцитів коні швидше оксифильная, ніж нейтрофіло. "Справжніми нейтрофільними спеціальні зерна ..., можуть вважатися ..., наприклад, у мавпи, собаки, свині, у більшості ж ссавців вони повинні бути названі амфофільнимі, так як фарбуються як кислими, так і основними фарбами, причому в одних випадках проявляється більшу спорідненість до перших, а в інших - до других. Перший випадок зустрічається особливо часто і стосується, наприклад, порівняно досить грубих зерен спеціальних гранулоцитів кролика і морської свинки, чому вони тут називаються також ще псевдоеозінофільнимі або більш дрібних зерен тих же елементів у бика, вівці, коні і т. д. "
Моноцити мають у більшості випадків мало розгалужене, компактне ядро і відносно бідні цитоплазмою.
Кров'яні пластинки, в середньому, досить великі (близько 3 μ) і дуже варіюють у розмірах. Зустрічаються і карликові форми (в 1 μ) і прямо гіганти (досягають 12 μ). Межі звичайних коливань розмірів кров'яних пластинок - від 1,8 до 6,6 μ.
Лімфоцити досить часто мають бобовидную форму ядра. Вони бідні цитоплазмою. У ній іноді зустрічаються вакуолі (0,8-5,4%), навіть у здорових тварин. Азурофільних грануляція в цитоплазмі зустрічається досить часто (до 6,1% у малих і до 14,3% у великих лімфоцитів).
Зрідка в нормі зустрічаються плазматичні клітини.
Осел
Морфологічно кров осла дуже близька до крові коня. Діаметр червоних кров'яних тілець коливається між 5,41 і 6,7 μ, тобто вони декілька дрібніше, ніж у коня.
Гранули еозинофілів дрібніше, ніж у еозинофілів коні. Вони не завжди заповнюють всю цитоплазму, і між зернами часто зустрічаються блакитні цито-плазматичні проміжки. Набагато краще помітна форма ядра.
Базофіли дрібніше еозинофілів і грануляція їх менша чим базофілів коні.
Ядро моноцитів компактно, рідко утворює короткі, округлі лопаті.
Лімфоцити, на противагу лімфоцитам коні, мають найчастіше округлі ядра, без помітних вдавлення або виступів. Іноді, при швидкій фіксації, у лімфоцитів (і у моноцитів) бувають помітні псевдоподии. Цитоплазма мізерна (навіть і у великих лімфоцитів).
Верблюд
Найбільш характерною особливістю крові верблюда є еліптична форма еритроцитів, які фарбуються зазвичай досить інтенсивно, зі слабко помітним зблідненням в центрі. Еритроцити лежать на мазку дуже густо, відповідно високому вмісту їх у крові (11 млн. в 1 мм 3). Розміри еритроцитів мало варппруют. Їх коротка вісь дорівнює в середньому 4,0 μ., Довга 7,35 μ. Еліпсоїдна (овальна) форма дуже правильна. Деформації вкрай рідкісні.
Білі кров'яні тільця мають відносно малі розміри, особливо базофпли, діаметр яких у 2 рази менше, ніж у базофілів коні (всього 8-10,5 μ).
Еозинофіли декілька більше, з досить великими (1,0-1,8 μ.) Круглими гранулами, розсіяними серед ясноголубой цитоплазми. Форма ядра видно дуже добре, так само як і у еозинофілів всіх інших наведених в атласі тварин, за винятком однокопитних. Зерна не «придушують» ядра.
Ядро моноцитів іноді значно звивистою, утворює своєрідні петлі або досить довгі лопаті. Зрідка в цитоплазмі моноцитів трапляються великі шматочки (бичка), окрашивающиеся як ядро. Можливо, що це - отшнуровавшіеся ділянки лопатей ядра.
Велика рогата худоба
Середній розмір еритроцитів 5,1 μ (Межі варіацій - від 4,4 до 7,7 μ). Найчастіше розмір еритроцитів коливається в межах від 4,4 до 5,5 μ.
Серед еритроцитів дорослих тварин у нормі дуже рідко попадаються ретнкулоціти. Ще рідше зустрічаються тільця Жолі. Пойкилоцитоз, поліхромазія і еритробластів при фізіологічній нормі або не зустрічаються зовсім, або виключно рідкісні. Породні коливання кількості еритроцитів у великої рогатої худоби відносно невеликі (у порівнянні, наприклад, з кількістю еритроцитів у коней).
Еозинофіли корів досить великі; їх цитоплазма наповнена дуже яскраво фарбувальними зернами, середньої або досить великої величини (0,5 μ). Іноді гранули лежать в ясноголубой цитоплазмі досить рідко. Кількість еозинофілів зазвичай значно вища, ніж v інших ссавців (в нормі 6,0 - 8,0% і більше).
При депресії кровотворення в крові корів можна знайти карликові (розміром з середній і навіть з малий лімфоцит) еозинофіли, цитоплазма яких густо наповнена зернами.
Спеціальні гранулоцити великої рогатої худоби порівняно великі (більше, ніж у всіх інших сільськогосподарських ссавців). Зернистість злегка оксифильная, виражена добре.
Ядро часто значно розчленоване - до 5-8 сегментів.
Впадає в око великий розмір агранулоцитам.
Моноцити в переважаючій своїй частині мають значно розчленоване, лопатеві або лентообразной ядро. Цитоплазма багата. Найдрібніша азурофільних зернистість близько ядра виражена добре.
У телят і навіть у дорослих корів у крові зустрічаються великі лімфоцити. Цитоплазма лімфоцитів дуже багата, в ній досить часто зустрічаються азурофільних гранули (5,1% у малих форм і 12,6% у великих). Дуже рідко в цитоплазмі попадаються вельми великі азургранули (до 1,5 μ і більше).
Плазматичні клітини зрідка зустрічаються в крові і при фізіологічній нормі.
Середній розмір кров'яних пластинок-близько 2,6 μ, Межі коливань 1,1-4,9 μ.
У мазку зустрічається порівняно багато кров'яних платівок, часто злипаються у великі купки.
Вівця
Дуже характерні маленькі, густо розташовані в мазку, еритроцити. Їх середній діаметр 4.3μ при звичайних коливаннях від 3,5 до 4,5 μ. Проте, зустрічаються і дуже маленькі форми (до 2,5 μ.) Та великі (до 7,0 і навіть 8,3 μ.). Взагалі для вівці звичайний невеликий анізоцитоз.
Густота розташування еритроцитів у мазку визначається дуже великою їх кількістю .6-13 млн. в 1 мм 3) у крові; це компенсує їх малий розмір.
Еозинофіли відрізняються великим діаметром (9,9 - 17,6 μ); вони містять округлі, іноді неправильної форми, досить великі гранули (0,5-1,0 μ). Зерна пухко наповнюють звичайно добре помітну, ясноголубую цитоплазму.
Ядро еозинофілів (як і спеціальних гранулоцитів) визріває по кільчасто типу. Тому часті форми ядра у вигляді цілого кільця (у паличкоядерних) пли розірваного кільця (у сегментоядерних клітин).
Багато еозинофілів зі значною сегментацією ядра (3-5 сегментів).
Базофіли трохи меншого розміру, ніж еозинофіли (в середньому 12,1 μ при коливаннях у 11,0-13,2 μ). Ядро базофілів, особливо при поганій фіксації, дуже часто деформовано (лопається). Гранули великі, мало варіюють у розмірах, дуже темно-окрашивающиеся.
Надзвичайно характерна велика сегментування ядер зрілих спеціальних гранулоцитів. Дуже часті форми з 8-10 і більш сегментами. Для вівці це норма, а не патологічна форма. Розмір спеціальних гранулоцитів відносно великий, хоча п менше, ніж у великої рогатої худоби. Зернистість по Клінебергеру та Карлу нейтрофільні, по Максимову - із більшою спорідненістю з кислим фарбам.
Моноцити великі; ядро їх сильно розчленоване на лопаті, іноді з'єднуються між собою лише тонкими містками.
У великих і середніх лімфоцитів добре видно цитоплазма. У ній зрідка зустрічаються вакуолі. Азургранули в 5,2-6,3% лімфоцитів.
Кров'яні пластинки дуже малі - 1,9-2,4 μ в діаметрі.
Кров кози по своїй морфології дуже близька до крові вівці (особливо лейкоцити). Відмітна особливість еритроцитів кози - і х мала осмотична резістентноет'. Тому мазкп часто виходять зі зірчастої формою червоних кров'яних тілець. Вельми част анізоцитоз. Навіть у цілком клінічно здорових тварин в крові зустрічаються співай-кілоціти, ретикулоцити, поліхроматофілія і зрідка навіть тільця Жолі. Це вказує на деяку фізіологічну роздратованість еритропоезу, характерну для кіз.
Лейкоцити морфологічно дуже подібні з білими кров'яними тільцями овець.
Свиня
Еритроцити досить великі (середній діаметр 5-6 μ). У червоній крові свиней в нормі зустрічаються поліхроматофілія і ретикулоцити, "кільцеві" форми еритроцитів і навіть еритробластів. Найсильніше це висловлено у поросят. Вітально гранульовані еритроцити у дорослих евнней зустрічаються в малій кількості (3-4 на 1 000 нормоцитами); у поросят їх кількість доходить до 1,1-13,8%.
Білі кров'яні тільця не мають особливо різких видових ознак.
Базофіли характерні великими, темнофарбовані-ми гранулами. Еозинофіли невеликі, правильної округлої форми. Вони мають яскраві, досить великі вірна (0,5-1,0 μ в діаметрі). Сегментування ядра невелика (звичайно 2, рідше 3 сегменти).
Ядро моноцитів мало розчленована, звичайно витягнутої або злегка скрученої форми. Зрідка в цитоплазмі моноцитів зустрічаються вакуолі.
Клітини роздратування рідкісні.
У лімфоцитах попадаються азургранули (4% малих лімфоцитів і 5,8% великих).
Кров'яні пластинки відносно малі (близько 2,0 μ) -
Кількість лейкоцитів у крові досить велика (10-15 тис. в 1 мм 3).
Собака
Еритроцити, в порівнянні з еритроцитами інших домашніх ссавців, великі. Їх середній діаметр дорівнює 7μ, при коливаннях від 5 до 9 μ.
На забарвлених препаратах центральна частина еритроцитів і при фізіологічній нормі майже безбарвна («кільцева» форма).
У дорослих собак в крові зустрічаються в незначній кількості (2-3 на 1 000) поліхромія-тофільние і вітально гранульовані еритроцити і залишки ядра в еритроцитах (тільця Жолі). Дуже рідко трапляються нормобластів. Є слабко виражений анізоцитоз.
Базофіли крові собак характерні досить чітко вираженими контурами ядра, правильно круглими, з різкими межами, порівняно нечисленними, неоднакової величини гранулами і бузково-рожевим кольором цитоплазми. Базофілів в крові дуже мало.
Ядро еозінофплов мало розчленована. Гранули середнього розміру - 0,5-1,0 μ в діаметрі.
Визрівання ядра спеціальних гранулоцитів відбувається по кільцевому типу.
Ядро моноцитів найчастіше за все колбасовідний, зі своєрідними конволюте на кінцях. Рідше зустрічаються лопатеві форми.
Лімфоцити фіксуються з досить великими псевдоподиями. Цитоплазма, навіть у великих лімфоцитів, розвинена помірно. У ній зрідка трапляються вакуолі.
Плазматичні клітини зустрічаються і при фізіологічній нормі.
При деяких патологічних змінах (інфекціях і, особливо, інтоксикаціях) у спеціальних гранулоцитах бувають тільця Деле.
Кішка
Еритроцити досить великі: середній діаметр 5,9 μ, при крайніх коливаннях від 3,2 до 7,5 μ. Доволі частими є кільцеві форми червоних кров'яних тілець.
Поліхроматофпли і нормобластів в крові при фізіологічній нормі вкрай рідкісні.
Базофіли дуже великі, з темною, рожево-фіолетового цитоплазмою і великими, але нечисленними гранулами. Вони дуже рідко трапляються в крові кішки, і тому Максимов вважав, що базофілів у кішки немає.
Еозинофіли середньої величини, з округлими, іноді кілька неправильної форми гранулами. Автор ніколи не зустрічав еозинофілів котячої крові з паличкоподібними гранулами, як це стверджують Вірт, Клінебергер і Карл. Гранули досить великі (1,0-1,5 μ). Розміри їх значно варіюють.
Спеціальні гранулоцити характерні надзвичайно дрібними зернятками в цитоплазмі. Контури ядра на всіх стадіях зрілості своєрідно округлені, чіткі і витончені. Визрівання ядра відбувається, мабуть, по кільцевому типу.
Ядро моноцитів дуже компактно і майже не утворює лопатей.
Кров'яні пластинки досить великі (2-4 μ). Межі коливань їх розмірів дуже значні: від карликових, в 0,8 μ, до гігантських форм, що доходять до 10μ.
Кролик
Еритроцити великі (в середньому 6,0-6,5-6,8 μ в діаметрі). У них дуже слабо виражене ослаблення забарвлення в центрі. Поліхромазія помітно виражена навіть при фізіологічній нормі (до 1%). Ретикулоцити дуже часті (до 8% еритроцитів у дорослих тварин і 20-80% у новонароджених і в перші місяці розвитку). Зрідка зустрічаються нормобластів. Червона кров взагалі дуже лабільна.
Еозинофіли з великими гранулами (1,5 μ), дуже густо розташованими в цитоплазмі.
Спеціальні гранулоцити кролика дуже своєрідні. Їх зернистість набагато більше, ніж у нейтрофілів інших тварин, і фарбується комбінацією фарб за Романовським в яркокрасной колір, тобто еозинофільна (оксифильная). Тому спеціальні гранулоцити кроликів отримали назву псевдоеозінофілов. Форма зерен неправильно округла, іноді незграбна.
Однакова забарвлення і майже однакові розмір і форма псевдоеозінофілов і еозинофілів кролика дуже ускладнюють диференціації цих клітин. Нещодавно (1945 р.) Якобі запропонований для цієї мети наступний спеціальний метод забарвлення.
Свіжоприготований, висушений на повітрі мазок крові кролика фіксують спиртом з формаліном і потім протягом 5-10 хвилин фарбують 0,05-процентним водяним розчином
2-6 - діхлорфеноліндофенола (4 частини) і 0,5% розчину нейтрального червоного (1 частина). До кожних 5 см 3 цієї суміші додають перед забарвленням 4 краплі перекису водню.
Після швидкої промивки - висушити фільтрувальним папером і негайно дивитися в мікроскоп під іммерсіей.
При такій забарвленні протоплазма еозинофілів щільно набита сильно забарвленими великими сферичними гранулами (1,5 і в діаметрі), майже кожна гранула має темне пурпурово-чорну периферію і трохи світлішу нутро, колір якої коливається між темнопурпуровим і грязносероголубим. У псевдоеозінофілов ж дуже мізерні, окремі темнопурпурние гранули (діаметром 0,5 μ), швидше за овоїдної і жезлообразной форми.
Ядра псевдоеозінофілов і окремі їхні сегменти зазвичай відрізняються заокругленість форм; «містки» і «нитки» між сегментами або досить товсті або майже невидимі, що створює в цьому останньому випадку враження роз'єднаних сегментів.
Моноцити і лімфоцити кроликів не мають характерних видових особливостей.
У крові кролів, по Салін та Вірту, зустрічаються іноді дуже великі, що нагадують часом еозинофіли, фагоцитуючі клітини - так звані «клазматоціти». Автор (В. М.) спостерігав в крові кролика дуже великі, фагоцитуючі, з великою кількістю вакуолей, ендотеліальні клітини (клазматоціти). Вони, однак, ніколи не містили еозинофільних або псевдоеозінофільних гранул. Кров'яні пластинки - середнього розміру (2,7 μ), досить численні і мають більш темнофарбовані хромомер.
Морська свинка
Еритроцити діаметром в 4,3-5,7 і до 7,0 μ.
У нормальній крові зустрічається значна кількість поліхроматофілія (до 1,0-1,5% від нормо-цитов). Цьому відповідає наявність вітально гранульованих еритроцитів (0,1-0,9%). У новонароджених морських свинок їх кількість досягає 20-40%.
Базофіли і еозинофіли крові морських свинок дуже нагадують аналогічні клітини крові мавпи.
Спеціальні гранулоцити мають оксифільних, добре виражену, досить велику зернистість. Вказівка Вірта на повну подібність псевдоеозінофілов у кроликів і спеціальних гранулоцитів у морських свинок слід вважати абсолютно неправильним: гранули в псевдоеозінофілах кроликів дуже великі (до 8,5 μ) і пофарбовані еозином в яркокрасной колір, спеціальні ж гранулоцити морських свинок мають набагато менші зерна бляклої, червонувато-рожевою, з фіолетовим відтінком, забарвлення.
Агранулоціти не мають особливо характерних відмінностей. Можна тільки відзначити відносну бідність цитоплазмою у великих і середніх лімфоцитів.
Для крові морських свинок виключно характерна наявність у значної частини моноцитів (до 25-40%) так званих тілець Курлова. Це (на добре фіксованих препаратах) дуже великі, круглі або овальні, окрашивающиеся азурит у вишневий колір, освіти. На менш добре фіксованих або довго сохнувшіх препаратах вони як би стискуються (можливо, - осмотичний висмоктування води. - В. М.) і стають спочатку борознистим, а потім набувають зірчастої форми. У цьому останньому випадку на місці, залишеному завмерлим тільцем, утворюється неокрашіваемие простір (порожнеча).
Тельця Курлова дуже, часто такі великі, що відтісняють ядро до периферії, вдавлюються в нього і викликають значну деформацію не лише ядра, але і всієї клітини. При дуже значному розвитку тільця Курлова можуть викликати розпад клітини.
Паппенгейм і Феррата вважають, що курловскіе тільця зустрічаються не тільки в моноцитах, а й у великих лімфоцитах. Однак Максимов локалізує їх тільки в моноцитах, що видається більш правильним.
Природа і походження курловскіх тілець зовсім не ясні. Менш імовірними представляються погляди на них, то як на вакуолі, наповнені азурофільних секретом, то як на фагоцитовані частинки клітин або, нарешті, як на стимулюючі зростання спеціальні гігантські гранули, що виникають під впливом статевих гормонів.
Більш вірогідні два припущення. По першому, тільця Курлова - це клітинні паразити з класу найпростіших. Тоді стає зрозумілим їх поступове зростання, загрозливий самому існуванню клітини. По іншому припущенням, курловскіе тільця - його новоутворення в клітинах, викликані впровадженням вірусів.
V окремих дорослих морських свинок і у новонароджених курловскіе тільця відсутні.
Середній розмір кров'яних платівок 2-3 μ.
Щур
Ерптрогшти досить великі (5,7-7,0 μ, в середньому 6,2 μ діаметром). Дуже часті поліхроматофілія (до 5% у дорослих тварин).
Ядро еозинофілів і особливо спеціальних гранулоцитів розвивається за кільчасто типу. Тому нерідкі кільцеподібні форми юних і паличкоядерних гранулоцитів.
Еозінофлльние гранули маленькі, круглі; вони густо заповнюють цитоплазму.
Зернистість спеціальних гранулоцитів дуже дрібна, вона, однак, ясно видно на добре фіксованих і забарвлених за Папергейму мазках крові.
Біла кров щурів виключно лабільна. У двох здорових щурів одного віку і навіть у одного і того ж тваринного часті значні коливання в співвідношенні окремих видів лейкоцитів.
Миша
Середній розмір еритроцитів 6,7 μ.
Дуже часті поліхроматофілія (до 10-20% від всіх еритроцитів). Іноді зустрічаються нормобластів.
Біла кров морфологічно дуже близька до щурячої. Тільки еозинофіли більшою за розміром і мають досить великі зерна (до 1,0 μ).
Моноцити крові мишей, навіть при удаваній нормі, часто дають виключно химерні, покручені, скручені ядра, з численними лопастями.
Курка
Картина крові курки, як і всіх птахів, різко відрізняється від картини крові ссавців, насамперед, наявністю великих еліптичних ядерних еритроцитів. Розміри їх часто більше розмірів лейкоцитів. Третя група формених елементів крові птахів - тромбоцити - теж має ядро.
Це велика кількість ядерних клітин ускладнює знаходження лейкоцитів у крові птахів, у той час як в крові ссавців таких труднощів немає.
Розмір еритроцитів курки 11-13 х 7-8 μ; розмір ядер 5-6x3-4 μ. Вітально гранульованих еритроцитів досить багато (2-3%, а іноді й значно більше).
Тромбоцити (веретеноподібні клітини) значно менше еритроцитів (8,5 x5, 3 μ).
Лейкоцити птахів, в цілому, дещо меншого розміру, ніж лейкоцити ссавців.
До цих пір не можна вважати вирішеним питання про те, чи слід в крові птахів розрізняти еозинофілів від спеціальних гранулоцитів (псевдоеозінофілов). Букраба (1928 р.), Ханка (1930 р.), Соловей (1934 р.) та ін схильні визнавати існування тільки однієї групи - еозинофілів. При цьому В. Букраба (1928 р.), Гедфельд (1911 р.) і Еллерманн і Банг (1908 р.) пропонують диференційовано еозинофіли на круглозерністие і палочкозерністие.
Навпаки, Максимов (1915-1926 рр..), Клінебергер і Карл (1912 і 1928 рр..), Вірт (1925 р.) і школа професора М. П. Рухлядева (1930 р.), особливо Л. О. Лебедєв (1940 р.), вважають, що морфологічно і функціонально в крові курей розрізняються псевдо-еозинофіли і еозинофіли. Якщо, наприклад, псевдоеозінофіли (особливо юні їхньої форми) мають округлі зерна, подібні гранулам еозинофілів, то краї гранул псевдоеозінофілов здаються трохи «розмитими», не різкими, порівняно з гранулами еозинофілів. У переважній більшості псевдоеозінофілов знаходиться паличкоподібна зернистість, яка часто приймає форму правильних веретен. Ядра зрілих псевдоеозінофілов, так само як і взагалі гранулоцитів птахів, більш пікнотичне, чим ядра гранулоцитів ссавців.
Лебедєв (1940 р.) наступними ознаками характеризує відміну зернистості псевдоеозінофілов і еозинофілів:
а) Якщо мазок крові, попередньо пофарбований 0,5-процентним розчином еозину, обробити розчином оцтової кислоти в спирті, то круглі зерна еозинофілів стійко зберігають червоне забарвлення, а паличкоподібні та круглі гранули псевдоеозінофілов знебарвлюються.
б) Гранули еозинофілів забарвлюються за Папергейму в червоно-рожевий колір, а при фарбуванні Брілл-анткрезіловой блакитний - в блакитно-рожевий.
Гранули ж псевдоеозінофілов за першим способом фарбуються в яркокрасной (іноді коричнево-червоний), а по другому - в зеленувато-синій колір.
При фарбуванні розчином Гімза (навіть дуже гарної) зерна псевдоеозінофілов фарбуються дуже слабо, і тому кращим забарвленням (і єдино цілком придатною) для крові птахів слід вважати забарвлення Романовського в модифікації Паппенгейма.
в) Оксидази-і пероксидаза-позитивні у курей лише еозинофільні лейкоцити круглозерністие. Псевдоеозінофіли дають негативну реакцію.
г) Суданофільная зернистість є тільки у еозинофілів.
д) Ядра у псевдоеозінофілов фарбуються слабкіше, ніж у еозинофілів.
Вірт вважає, що гранули псевдоеозінофілов навіть на юних стадіях їх розвитку не бувають круглими. Вони можуть бути довгастими, паличкоподібними, веретеноподібними або катушковіднимі.
За Люндквіста (Lundquist, 1925 р.), гранули псевдоеозінофілов прижиттєво круглі, а різні модифікації їх форм залежать від фіксації. Прижиттєво кругла форма гранул псевдоеозінофілов все-таки мало ймовірна. Але немає сумніву, що спосіб фіксації може дещо впливати на форму зерен псевдоеозінофілов. Так, автор цієї книги при деяких змінах в способі фіксації отримував особливу гранулювання псевдоеозінофілов, дуже нагадує міцелій гриба. Близькі до цього рн-Сунки в роботі М. Я. Соловей (1934 р.).
В атласі приведені тільки ті форми клітин, які належать безперечно до однієї з двох груп оксифільних гранулоцитів курей (та інших сільськогосподарських птахів). Саме, в ньому дані еозинофіли, з одного боку, і палочкозерністие псевдо-еозинофіли, з іншого. Практично розрізнити еозинофіли і юні (круглозерністие) форми псевдоеозінофілов вкрай важко.
Лімфоцити курей зазвичай малі, часто з характерними для них виступами (псевдоподиями), утвореними цитоплазмою. Остання в лімфоцитах (навіть великих) убога.
Моноцити, всупереч Клінебергеру та Карлу (1912-1928 рр..), У крові курей та інших сільськогосподарських птахів, безсумнівно, є (школа М. П. Рухлядева, 1930 р.). Тільки цитоплазма сірувато-блакитна, близька за забарвленням до цитоплазми великих лімфоцитів. У цитоплазмі моноцитів птахів майже не виявлена найдрібніша азурофільних зернистість.
Дуже характерно для крові курей, а також інших сільськогосподарських птахів, наявність на мазках своєрідних фігур розпаду ядер, - так званих «тіней» ядер, що свідчить про дуже велику лабільності, «крихкості» клітин крові птахів. Особливо лабільні клітини дуже молодих тварин. Це ускладнює підрахунок лейкоцитарної формули і навіть може спотворити результати підрахунку.
Індичка. Гусак. Качка.
Кров всіх цих трьох видів сільськогосподарських птахів морфологічно дуже близька до крові курки. Кілька варіюється тільки псевдоеозінофіли. У качок вони так само малі, як і у курей; їх зернистість не має таких чітких веретеноподібних форм.
Вона швидше нагадує неправильної форми короткі палички, нерівної довжини. Еозинофіли індичок крупніші, ніж псевдоеозінофіли.
У гусей і качок, навпаки, псевдоеозінофіли досить великі і значно перевершують порівняно маленьких еозинофілів.
Гранули псевдоеозінофілов дуже нагадують зерна рису. У качок вони декілька довше і тонше, ніж у гусей.
Тромбоцити крові гусака і качки кілька кругліше і коротше, чим тромбоцити курей. У індичок тромбоцити, навпаки, більш подовжені. Еритроцити мають трохи більш тупі кінці.
Клітини крові гусей і качок більш резистентні, ніж у курей. Тому тіней ядер у мазках крові гусей і качок значно менше, ніж у мазках курячої крові.
Жаба
Еритроцити дуже великі (22,8 х 15,8 μ) і мають ядра. Кількість еритроцитів у крові жаб невелика (0,38 млн. в 1 мм 3).
Базофіли крові жаби малі, густо наповнені середньої величини зернами.
Еозинофіли мають досить великі (0,5-1,0 μ), дивно правильною, круглої форми, роздільно лежать у цитоплазмі зерна. Цитоплазма інтенсивно блакитного кольору.
Спеціальні гранулоцити мають дуже дрібну рожеву зернистість. Тип дозрівання ядра - кільцевий.
Лімфоцити, навіть великі, з вузькою цитоплазмою, що фіксується з витягнутими псевдоподиями.
У крові нормальної жаби зустрічаються моноцити, фагоцитовані чужорідні частинки.
Тромбоцити досить великі (5x17 μ, частіше кілька коротше), еліптичної, витягнутої форми.
Кольорові таблиці картин крові виконані з препаратів крові, пофарбованих за Романовським в модифікації Паппергейма, найкраще діференцірующей структуру клітин.
Прискорена забарвлення розчином Гімза (нова модифікація)
Цей метод дає добрі результати тільки в руках досвідченого дослідника. Перевага - швидкість приготування препарату, так як фіксація та фарбування відбуваються одночасно.
Для роботи необхідні крапельниці ємністю в 30 см 3, в які наливається вихідний розчин фарби Гімза, розведений навпіл метиловим спиртом або найчистішим ацетоном. У добре закупореній склянці цей розчин може зберігатися місяцями.
Фарбування виробляється або в чашках із спеціальними перетинку, або в звичайних чашках Петрі. На свіжий мазок (не пізніше 2-денного!), Висушений на повітрі і не фіксований, наливають з крапельниці близько 20 крапель фарби. Щоб уберегти фарбу від випаровування, чашка, в якій лежать препарати, закривається склом.
Через 1 / 2 хвилини - 1 хвилину до фарби на мазку підливають близько 10 см 3 подщелоченной дистильованої води (1-2 краплі 1-процентного розчину лугу на 50 см 3 води). Погойдуванням чашечки добре перемішують фарбу з підлита водою. Через 10 - 15 хвилин воду з фарбою зливають і мазок промивають водопровідною (недістіллірованной!) водою.
У разі приготування основного розчину з ацетоном особливо добре виявляється зернистість структура ядер кров'яні платівки.
• Опис квітів дано, з деякими невеликими зміною, за А. II. Крюкову.
Забарвлення крові і кровепаразітов за Г. Епштейна
Фіксація метиловим спиртом
Готують два розчини.
1-й: дистильованої води 100 см 3; лимоннокислого літію -
2-й: насичений водний розчин пікринової кислоти.
Мазки фарбують 20-30 хвилин у першому розчині і, сполоснувши в проточній воді, поміщають на 1-2 секунди на другий розчин (пікринової кислоти). Промивають (тщательно!) знову у водопровідній воді і після цього швидко обсушують фільтрувальним папером.
Забарвлення: еритроцити зелені; ядра лейкоцитів фіолетово-сині; базофильная зернистість вишнева; еозинофільна зернистість смарагдово-зелена; нейтрофільна зернистість сіра; у кровепаразітов ядро червоне, а цитоплазма синя.
Забарвлення складом Лейшмана
На нефіксований препарат налити 15-20 крапель готового розчину фарби Лейшмана (
Спеціальні способи фарбування і фіксації мазка
а) Отримання та фарбування товстої краплі. На добре промите (подщелоченной водою, потім спиртом з ефіром) предметне скло наносять 2 великі краплі крові. Власне, достатньо однієї краплі, але друга служить «резервом» на випадок необережного стирання однієї краплі, невдачі забарвлення і т. д. Кожна крапля зараз же, за допомогою голки, розподіляється по склу рівним шаром - приблизно в 1 \ 4 - 1 \ 2 мм товщини, щоб вийшли плями розміром з десятикопеечную монету. Препарати ретельно висушуються (у термостаті при 37 ° або на сонці) протягом півгодини.
Після цього висохлий препарат двічі фарбують робочим розчином Гімза (1 крапля вихідного спиртового розчину Гімза на 1 см 3 дистильованої води).
Перше фарбування триває близько 3 хвилин після того, як в розчині фарби з'явиться червона хмаринка розчинилося гемоглобіну. Потім один кінець предметного скла злегка підводять і старий розчин Гімза замінюють новим, припливу його дуже обережно з піднесеного кінця препарату, у той час як колишній розчин фарби з гемоглобіном стікає з іншого кінця. Коли таким чином вся стара фарба змінена нової, предметне скло знову встановлюють горизонтально і продовжують докрашіваніе ще 25 хвилин.
Значення методу полягає в тому, що в товстій краплі вдається виявити таких паразитів крові, які знаходяться в ній у невеликих кількостях. Швидко встановлюється наявність або відсутність еозинофілів і проводиться їх підрахунок їх підрахунок.
Те ж саме відносно базофільних еритроцитів.
б) оксидазного і пероксидаза реакції лейкоцитів. оксидазного реакція заснована на виникненні індофеноловой блакитної фарби при дії окислювальних ферментів на анафтол і діметілпарафенілендіамін, у місцях локалізації оксидаз у клітці виникає синє забарвлення.
Техніка реакції полягає в наступному:
1. Фіксація мазка в суміші з 1 частини 40-процентного формальдегіду і 9 частин 95-процентного спирту протягом кількох секунд плі 40-процентного формальдегіду і абсолютного алкоголю аа протягом 15-20 хвилин.
2. Забарвлення: а) 3 хвилини легко розведеним 1-відсоткового водного лужним розчином анафтола (розчин готується таким чином: анафтол при нагріванні в дестіллірованной воді піднімається догори і плаває в рідкому вигляді; після введення в розчин кристала їдкого лугу анафтол розчиняється у воді), б) не видаляючи анафтола, на препарат нашаровують 1-відсотковий водний розчин діметілпарафенілендіаміна. Через кілька хвилин зернистість лейкоцитів, що містить оксидазу, стає темно-синьому. Дофарбовувати препарат сильно розведеним розчином фуксину Ціля.
Пероксидазна реакція.
а) Фарбування за Край-биш в модифікації Грема. Добре висохлий мазок протягом 10-15 хвилин фіксувати рідиною, що з 1 частини 40-процентного формаліну і 9 частин 95-процентного спирту. Після фіксації злегка промити водою і покрити розчином бензидину (приготування: до 10 см 3 40-відсоткового етилового спирту додається декілька кристалів бензидину +00,2 см 3 3-процентного перекису водню). Забарвлення триває 5 хвилин. Потім змити водою.
Місця локалізації пероксидаз забарвлюються спочатку у сіруватий, а потім у золотисто-коричневий колір.
Подальше докрашіваніе - тіоніном, метиленової синькою або фарбою Гімза.
б) Забарвлення за Сато. Воздушносухіе мазки фіксують протягом 30 секунд 1 / 2-процентним розчином мідного купоросу (CuS0 4) і потім фарбують бензидином з перекисом водню (рецепт приготування - як у попередньому методі). Через 2 хвилини препарат обережно промивають дистильованою водою, на мазок наливають шар 1-процентного водного розчину сафраніном, через 15-20 хвилин сафраніном змивають водою і висушують препарат на повітрі (уникати висушування фільтрувальним папером!).
Пероксидази-позитивні гранули забарвлюються в темно-синій колір, ядра - в червоно-жовтий; еритроцити не фарбуються.
За допомогою оксидазної і пероксидазної реакцій полегшується диференциация міелоідних клітин від лімфоїдних. Обидві реакції дають аналогічні результати, але оксидазного реакція більш чутлива.
Нейтрофіли та еозинофіли реагують різко позитивно, базофіли так само, але тільки на ранніх стадіях розвитку. Зрілі форми оксидази-негативні. Однак ряд авторів вважає, що і зрілі базофіли оксидази-позитивні.
Лімфоцити дають безумовно негативну реакцію. Моноцити - іноді дуже слабо позитивну.
З клінічної точки зору являє інтерес той факт, що при деяких інфекційних захворюваннях у нейтрофілів зникають позитивна оксидазного п Пероксидазна реакції.
в) Забарвлення токсичної зернистості розчином Гімза при рН = 5,4. Токсичну зернистість, на відміну від звичайної, нормальної зернистості гетерофілов (нейтрофілів), вибірково забарвлюють, при забарвленні за принципом Романовського розчином фарби Гімза, застосовуючи буферний розчин з рН = 5,4.
Буферний розчин:
Їдкий натр (хімічно чистий). 21,6 г
Оцтова кислота (хімічно чиста) .............. 27,0 »
Дистильована вода до ..... 1000,0 см 3
Приготування фарби:
Вихідною фарби Гімза ... ... ... ... 10см 3
Дістіллігрованной води ... ... ... .40 »
Буферного розчину до ... ... ... ... .100 »
Свіжі мазки фарбують у продовження 1 години, старі препарати - довше (до 2 годин). Фарба з мазка змивається буферним розчином і потім висушується, як зазвичай.
При фарбуванні препарат потрібно класти на розчин фарби мазком вниз.
Білі кров'яні тільця - лейкоцити.
Лейкоцити (білі кров'яні тільця) різняться між собою як морфологічно, так і з біологічної ролі в організмі. Будучи повноцінними клітинами, що мають протоплазму і ядро, лейкоцити мають чітко виражену здатність до активного способу харчування шляхом захоплення і внутрішньоклітинного перетравлювання потрапляють в кров органічних тел. Ця здатність набуває першорядного біологічне значення у разі проникнення в організм патогенних мікробів: пожирання їх лейкоцитами - фагоцитоз (Мечников, 1882-1893) - становить найважливіший засіб боротьби організму з інфекцією.
Поряд з фагоцитозом, вельми важливе значення має освіту лейкоцитами імунних тел. У багатьох нижчих, а цілком можливо і вищих тварин особливі лейкоцити виконують також функцію переносу поживних речовин (трефоціти). Нарешті, окремі види лейкоцитів (еозинофіли вищих тварин) здатні знешкоджувати токсини. Велику роль лейкоцити грають в обміні речовин і освіти про трефонов - стимуляторів клітинного росту, особливо в умовах регенерації тканин.
Структурні відмінності окремих видів білих кров'яних тілець вивчені, починаючи з робіт П. Ерліха (Р. Ehrlich, 1877-1898 рр..), Досить добре. Значно менше вивчені їх функціональні особливості, їх целюлярна фізіологія. Незважаючи на величезну кількість робіт, онтогенез білої крові повністю ще не з'ясований. Нарешті, складна нейро-гуморальна регуляція судинної і позасудинним білої крові досліджена в надзвичайно малій мірі. Мало даних є навіть про тривалість життя білих кров'яних тілець. За деяким авторам, вона досить невелика (3-4 дні).
Основним принципом сучасної класифікації лейкоцитів є морфологічний.
У різних сільськогосподарських і лабораторних тварин один і той же тип лейкоцитів (особливо еозинофіли і нейтрофіли, або гетерофіли) має специфічні відмінності в структурі. Проте в головному структура кожного типу лейкоцитів у всіх сільськогосподарських тварин дуже близька і тому доцільно спочатку дати їх загальний опис, без видової диференціації.
За структурою ядро еозинофілів близько до ядра нейтрофілів, але кілька бліді і виглядає грубіше, так як чергуються світлі (оксіхроматін) і темні (базіхроматін) ділянки ядра еозинофілів більше, ніж у нейтрофілів.
У міру дозрівання клітини ядро еозинофільних лейкоцитів змінюється в тому ж напрямку, що і нейтрофільних, тобто ядерний палять скручується і тоншає, спершу рівномірно (юні та паличкоядерних форми), а потім окремі ділянки (сегменти) майже перестають стоншуватися і залишаються порівняно товстими , а знаходяться між ними - перетворюються в "найтонші нитки (сегментоядерние форми). Однак сегментація ядра еозинофілів виражена не дуже різко. Дуже частою, типовою формою є 2-дольчатая форма ядра, причому часточки нагадують формуються і тільки що відриваються краплі, звернені один до одному вузькими кінцями, з'єднаними перемичкою, або дві груші, з'єднані плодоніжками. У овець полиморфность ядра еозинофілів виражена сильніше. Хоча при деяких хворобах можна спостерігати в крові зміна відносини між віковими формами еозинофілів у бік збільшення більш молодих (паличкоядерних, юних і навіть міелоцітов. - «зсув ядра вліво»), але, зважаючи на відносну нечисленність (3-10%) еозинофілів, облік ядерного зсуву в лейкоцитарній формулі не проводиться.
Еозинофіли мають дуже велике клінічне значення. Еозинофіли або зникають з крові (анео-вінофілія), або зменшуються в кількості (гіпоеозінофілія), або, нарешті, кількість їх різко наростає (гіпереозинофілія, або просто еозинофілія). Більшість інфекційних захворювань в першому своєму періоді пов'язано з різким зменшенням кількості еозинофілів (гіпоеозінофілія). Повернення еозинофілів у кров'яне русло вважають ознакою ослаблення хвороби. При пиці свиней і при багатьох інвазіях (особливо гельмінтозах) спостерігається різке збільшення еозинофілів (еозинофілія), що доходить у великої рогатої худоби до 40%. Еозинофілія зустрічається і при алергічних реакціях, причому тут її пов'язують, так само як і при гельмінтозах, з роздратуванням системи блукаючого нерва.
Функції еозинофілів недостатньо вивчені.
Ймовірна здатність їх зернистості до знешкодження токсинів, а також участь зерен в окислювальних процесах. Еозинофіли нагромаджується в місцях тканинної регенерації. Характерна локальна еовінофілія кишечника.
III. Спеціальні зернисті лейкоцити, або нейтрофіли
Нейтрофіли (спеціальні зернисті лейкоцити, гетерофіли, псевдоеозінофіли або амфіоксіфіли деяких тварин) мають дуже важливе значення для клініки і фізіології.
Клітини нейтрофілів округлі, діаметром від 7,0 до 15,0 μ. У цитоплазмі рясна, дуже дрібна, нейтрофільна зернистість. Я д р о, у міру розвитку клітини, поступово сегментується. Зернистість ясно помітна навіть у свіжій незабарвленої крові. Ці за життя клітини сріблясто блискучі зернятка густо виконують ендоплазму, пересуваючись з нею при амебоідному руху клітини. Ектоплазма являє собою тонкий гомогенний периферичний шар, вільний від гранул. У деяких тварин (миші, щура та кішки) еерні-стості виражена дуже слабко, але, проте, всупереч заперечення Максимова, безсумнівно є.
Цитоплазма оксифильная, забарвлюється в бледнорозовой колір, іноді майже безбарвна. Зрідка в цитоплазмі нейтрофілів зустрічаються невеликі ділянки, які зберегли базофілів, характерну для материнської клітини. Такі ясноголубие плями отримали назву тілець Справі (Dohle).
Забарвлення зернистості спеціальних гранулоцитів кілька різна у різних видів тварин. Тому останнім часом для нейтрофілів запропоновано нове, вдале найменування - гетерофіли.
У мавпи, собаки, кішки та свині зернистість має спорідненість до нейтральних фарб і при комбінаціях фарб за Романовським забарвлюється в рожево-фіолетовий колір. У більшості ж інших ссавців зернистість амфофільна, тобто фарбується як кислими, так і основними фарбами. У корови, вівці, коні і морської свинки (по Максимову) ці зерна амфооксіфільни, тобто мають більшу спорідненість до кислих фарбам; у кролика вони забарвлюються еозином в яркокрасной колір і тому називаються псевдоеозінофіламі.
У деяких тварин гранули амфобазофільни. Зернистість псевдоеозінофілов курей та інших домашніх птахів забарвлюється в яркокрасной колір, дуже крупна і в більшості випадків (особливо у зрілих форм) має паличкоподібну і навіть веретеноподібну, з загостреними кінцями, форму. У більш молодих форм зерна округлі (Лебедєв). Ряд авторів (Букраба, Я. Соловей) вважає, що у курей немає взагалі псевдоеозінофілов, а тільки еозинофіли. Але більшість дослідників діференцірует еозинофілів від псевдоеозінофілов, і морфологічно і функціонально, зближуючи останніх зі спеціальними гранулоцитами (Максимов, Рухлядев, Клінебергер і Карл, Лебедєв). Особливо ретельне дослідження різниці між еозинофільної і псевдоеозінофільной зернистістю справив Лебедєв (
Поділ лейкоцитів на типи можна представити так:
| Лейкоцити (білі кров'яні тільця) | ||||
| Гранулоцити | Агранулоціти | |||
| Мають цитоплазматичну зернистість. Містять оксидазу. За типом окисного обміну відрізняються більш інтенсивним поглинанням кисню і значним анаеробним гликолизом | Не мають цитоплазматичної зернистості або мають дрібну азурофільних зернистість, не визначальну функціональну значимість клітини. Оксидази не містять або містять тільки сліди за типом окисного обміну менш інтенсивно поглинають кисень і володіють вдвічі найслабшою здатністю до анаеробного гліколізу. | |||
| Базофіли або гладкі клітини (з базофільною в цитоплазмі) | Еозинофіли (З ацидофільної зернистістю в цитоплазмі | Нейтрофіли (гетерофіли), або спеціальні гранулоцити (з нейтрофільної зернистістю в цитоплазмі) | Лімфоцити (цитоплазма блакитна з перинуклеарних зоною. Округле, темно профарбовується ядро, щодо грубої структури) | Моноцити (димчасто-сіра, іноді з рожевим або лілуватим відтінком цитоплазма, кілька розчленоване, блідо фарбується, тонкої структури ядро) |
Тому в подальшому описі під структурою ядра слід розуміти виникаючі в ядрі при взаємодії з фіксуючими і барвниками варьирующие освіти - коагулятом. У ядрах різних клітин, в залежності від специфічних колоїдальному хімічних відмінностей їх ядерної плазми (кариоплазма), ці коагулятом мають деякі морфологічні особливості, які й дають можливість розрізняти між собою види клітин.
А. ГРАНУЛОЦИТІВ
I. Базофіли
Базофіли, або гладкі клітини, звичайно круглої або округло-овальної форми, діаметром 8-15 μ. (У коней і корів кілька більші). Сама цитоплазма слабооксіфільна і забарвлюється в блідий, рожево-фіолетовий або, іноді. сирувато-блакитний колір, але знаходяться в ній великі округлі зерна (гранули) різко базофіл'ной природи та фарбуються метахроматіческі в темний червоно-фіолетовий або ультрамариново-фіолетовий колір (колір мальви - по Крюкову) .. Зерна легко розчиняються у воді і тому в препаратах, фіксованих погано зневодненим метиловим спиртом, часто на місце вірний в цитоплазмі утворюються білі «віконечка». При фіксації абсолютним метиловим спиртом зерна зберігаються добре. Розташування гранул в цитоплазмі нерівномірне, недолуге. Часто вони закривають окремі ділянки ядра. За своєю хімічною природою базофільні зерна є білками, близькими до глікопротеїдів.
Ядро базофілів - неясною структури, неправильно лопатеві або округле, забарвлюється у фіолетово-рожевий колір. У ядрі розпливчасто чергуються світлі поля оксіхроматіна з темнозабарвленими базіхроматіновимі полями.
У базофілах надзвичайно важко розрізнити стадії міелоціта - юну, палочкоядерную і сегментоядерную. Взагалі сегментування ядра виражена слабо. Практичного значення, для підрахунку лейкоцитарної формули, диференціація базофілів за ступенем їх зрілості не має, перш за все, тому, що в крові ссавців їх дуже мало: від 0,1 до 1-2%, в середньому 0,5%. Кров сільськогосподарських птахів містить 3-4% базофілів, а зміст їх у крові жаб доходить до 23%.
Взагалі, зміст базофілів дуже високо в амфібій, рептилій і у деяких риб.
Функціональне значення базофілів не з'ясовано. Здається, вони відіграють певну роль у захисті організму при парентеральному введенні чужих білків. Вони здатні фагоцитувати і містити окислювальні ферменти. Ряд вчених вважає їх трефоцітамі («живлять клітини» Лібмана). Такі клітини, які переносять поживні речовини, особливо широко поширені у безхребетних, де вони часто переважають.
Клінічне значення базофілів невелика. Кількість їх дещо зростає при ін'єкції білків, при деяких авітамінозах (групи В) і гепатический цирозах.
II. Еозинофіли
Еозинофіли (синоніми - оксіфіли або ацидофіли) - це великі (особливо у коня) круглі клітини, діаметром від 8,2 до 19,8) 1. Дуже рідко трапляються карликові форми еозинофілів (особливо у великої рогатої худоби при депресії гемопоезу). Дуже великі Еозинофіли коні.
Цитоплазма злегка базофіл'на, безбарвна або блакитного кольору. Зерна яскраво пофарбовані еозином в інтенсивний червоний або рожево-червоний колір (за описом Крюкова, в цегляно-червоний). У птахів вони швидше рожеві, ніж червоні. У молодих форм гранули часто забарвлені базофільно і лише поступово, у міру дозрівання клітини, стають ацидофільними. У кішок колір вірний червонувато-пурпурний.
Розмір і форма гранул досить різні. У коня. Вони дуже великі (до Зμ в поперечнику], покривають частина ядра і додають еозинофіли вигляд плоду малини (табл. 1-2). Досить великі вірна у еозинофілів кролика (до 1,5 μ). Значно дрібніше еозинофільна зернистість вівці. У свині зерна дуже правильної круглої форми.
Зазвичай зерна еозпнофілов розташовані дуже тісно, у коня вони часто навіть здавлюють один одного і набувають незграбну форму і між зернами важко розрізнити цитоплазму. Однак у деяких тварин (наприклад, у вівці) зерна можуть бути розташовані порівняно рідко, особливо в молодих клітинах, і тоді цитоплазма видно добре. Типові еозинофіли є в крові майже у всіх хребетних (крім деяких риб). У п т і ц (Казарінов, Лебедєв) зерна еозинофілів щодо дрібні. У рептилій еозинофіли складають більшість лейкоцитів. Ацидофільні зерна еозинофілів рептилій, щільно розташовані в цитоплазмі, то кулясті, то овальні, іноді мають форму ромбічних кристалоїдів або, нарешті, є грудочки неправильної форми. Еозинофіли амфібій вельми нагадують собою аналогічні клітини у ссавців. Їх гранули щодо вельми великі. У більшості риб є типові еозинофіли, найчастіше з простим, круглим ядром. У деяких видів риб еозинофіли атипові, - це лімфоїдні клітини з рідкими, але дуже великими гранулами, в цитоплазмі. Нарешті, в крові деяких видів риб еозинофіли, невидимому, не містяться.
Мікрохімічний методами встановлена липоидно-білкова природа зерен еозинофілів; вони містять фосфор і, можливо, залізо. За Кальмана (Kallman), юні еозинофіли птахів мають гранули нуклеопротеїдному природи; пізніше вони стають суто альбумінові.
Зерна еозинофілів видно навіть в нефарбованих клітинах, де вони виділяються жовтим кольором і високим показником заломлення.
У амфібій, особливо жаб, при гарній фіксації і забарвленням за Романовським в модифікації Паппергейма, зернистість вдається виявити досить ясно. Зернистість гетерофілов у рептилій виражена слабо, але твердження Максимова, що цитоплазма гетерофілов амфібій фарбується дифузно або виявляє сітчасте будову, але не містить різних гранул, безсумнівно неправильно.
Окрашиваемость гранул в гетерофілах риб сильно варіює; у одних видів зернистість нейтрофільні, в інших амфофільна. Нарешті, у деяких видів риб гетерофіли (типові за сегментованому ядра) до цих пір не знайдені.
Форма ядра спеціальних гранулоцитів змінюється в залежності від віку клітини. Рідко з'являється в крові (тільки при патологічних станах) початкова форма - Міелоц має округле, рідше з окремими вдавлені, ядро. Надалі воно витягується («скручується», за А. Н. Крюкову) в соковите бобовидной чи колбасовідний ядро (юна форма), а
У більшості сільськогосподарських тварин процес дозрівання супроводжується не сегментацією ядра, а освітою кілець і призводить до виникнення так званих цепочкообразних і вузлуватих форм ядра. Це видно з наступного малюнка (мал. 2).
Ядро спеціальних гранулоцитів забарвлюється інтенсивно (особливо у молодих), з різким чергуванням базіхроматіна і оксіхроматіна (темних і світлих ділянок). Тому у зрілих форм структура ядра груба. У ядрі відносно багато базіхроматіна (нуклеопротеїдів і нуклеїнових кислот).
Спеціальні гранулоцити - це мікрофаги І. І. Мечникова. Він пояснює перешнуровиванієм та сегментацію їх ядра як спеціальне пристосування до діапедез (міграції з проникненням через стінки капілярів). Саме тому вони отримали назву спеціальних гранулоцитів (А. Максимов).
Гетерофіли містять оксидазу і протеолітичні ферменти (трипсин). Але деяким даними, вміст ферментів, особливо трипсину, збільшується при переважанні в їжі білків.
Кількість спеціальних гранулоцитів у крові досить велика і коливається в залежності від виду тварини, її функціонального стану та захворювання. Найбільше їх у собак (60-70% всіх лейкоцитів), найменше - у великої рогатої худоби (25-35%).
При патологічних станах організму складу спеціальних гранулоцитів значно змінюється. Різко зменшується кількість сегментоядерних клітин і наростає кількість паличкоядерних, юних і навіть міелоцітов, що мобілізуються з кісткового мозку в судинну кров. Так як у самій лівій графі лейкоцитарної формули відзначаються наймолодші, в нормальній крові не зустрічаються клітини - міелопіти, а все більш дорослі форми - юні, паличкоядерних і сегментоядерние - размешаются у відповідних графах все правіше, то збагачення крові більш молодими формами отримало назву «зсуву ядра вліво ».
Регенеративний і дегенеративний зрушення ядра. Розрізняють два основних типи зсуву ядра: а) регенеративний і б) дегенеративний.
а) Регенеративний зрушення ядра виражається в зсуві ядра вліво з збільшенням у крові паличкоядерних, юних і навіть міелоцітов; зазвичай при цьому спостерігається лейкоцитоз. Це зрушення і посилення лейкопоезу є показником подразнення кісткового мозку, відбувається під час його функціональної достатності. Кістковий мозок, компенсуючи загибель нейтрофілів у боротьбі з інфекцією, віддає у кров'яне русло, поряд із зрілими, дедалі зростаючу кількість недостатньо зрілих форм, зазвичай не надходять в судинну кров.
б) При дегенеративно зсуві загальне часто зменшується, відзначається наростання паличкоядерних форм, в значній мірі дегенеративних без подальшого зсуву ядра вліво. Дегенеративний зрушення є показником функціональної недостатності кісткового мозку, в якому спостерігається тканинна дегенерація.
Індексом зсуву ядра називається відношення (М + Ю + П) / С рівне зазвичай для крові дорослої коня (О + О +4) / 50 = 4 / 50
Для крові верблюда він дорівнює 12.5/38, корови 6 / 25 і свині 3 / 40 (по Сьомушкін і Домрачева).
У легких випадках патологічного процесу зрушення ядра вліво не йде далі збільшення паличкоядерних і частково юних форм. Навпаки, поява великої кількості міелоцітов і юних спеціальних гранулоцитів у крові свідчить про тяжкість захворювання.
При деяких захворюваннях (особливо кровотворних органів) в крові з'являються гігантські полісегментірованние клітини. У деяких тварин, проте (наприклад, у вівці), полісегментірованние нейтрофіли знаходяться і в нормальній крові.
До дегенеративних змін спеціальних гранулоцитів належать: пікнотичне і химерні, різко кутасті форми ядра, токсична зернистість і численні вакуолі в цитоплазмі.
Особливо велике значення має токсична зернистість цитоплазми. При звичайному забарвленні розчинами Гімза або Паппергейма, дрібна у фізіологічній нормі зернистість різко укрупнюється, і зерна часто зливаються в химерну мережу (токсично змінена зернистість). Для зручності диференціації нормальної зернистості від токсичної краще застосовувати фарбування карболфуксінметіленовой синькою за Є. Фрейфельд. У цьому випадку фізіологічно нормальна зернистість гетерофілов майже не фарбується, а патологічна різко виступає у вигляді фіолетово-синіх зерен або ниток і сіток на нежнорозовом тлі цитоплазми. Можна також застосовувати забарвлення по Гімза при кислій реакції води (рН = 5,4).
Вакуолі досить часті в токсично змінених або «старих» гетерофілах.
Іноді при інфекціях та інтоксикаціях в цитоплазмі гетерофілов зустрічаються сіро-блакитні ділянки у вигляді пластівців або бляшок, так звані тільця Деле (Dohle). Це залишки базофільних ділянок цитоплазми раннього періоду розвитку клітини.
Кількість спеціальних гранулоцитів різко зростає в початковій стадії більшості інфекційних хвороб («нейтрофільна фаза боротьби»).
В. агранулоцитам
IV. Лімфоцити
Лімфоцити є типовими агранулоцитам, так як не містять ніякої характерною зернистості в цитоплазмі, 8а винятком зрідка трапляються окремих азурофільних вірний. Клітини лімфоцитів округлі, з круглим або овальним ядром, яке оточене або дуже вузьким (малі лімфоцити), або більш широким (середні і великі лімфоцити) поясом цитоплазми. Лімфоцити птахів і земноводних (жаба) часто зустрічаються з зафіксованими в момент пересування псевдоподиями.
Діаметр малих лімфоцитів від 4,5 до 6,5 (л, середніх від 6,5 до 10 р. Та великих від 10,0 до 18,0 jx.
Цитоплазма лімфоцитів базофильна; при фарбуванні за способом Паппергейма має сітчасте будову, а пофарбована розчином Гімза - гомогенна. Колір-від бледноголубой у великих і середніх лімфоцитів до синього у малих. Навколо ядра помітна світла, так звана перинуклеарних зона. Остання ознака допомагає диференційовано великих лімфоцитів від не мають цієї зони моноцитів. У деяких (переважно малих, іноді середніх) лімфоцитах в цитоплазмі зустрічаються в дуже невеликій кількості азурофільних зернятка (2-8). Вкрай рідко ці зерна бувають дуже великими (до 2 ji в діаметрі).
Цитоплазма малих лімфоцитів іноді видно лише з одного боку ядра у вигляді дуже вузького, ледь помітного обідка (форма "серпа"). У деяких клітинах і цей серп непомітний, і тоді малий лімфоцит має вигляд «голого ядра».
Взагалі по відношенню до цитоплазми ядро лімфоцитів велике, форма його кругла або овальна, особливо правильна у малих лімфоцитів. Часто зустрічаються ядра з одностороннім вдавлением, що додає ядру форму бобу (рідеровская форма ядра). Великі лімфоцити іноді мають ядро менш правильної форми - кутасте, з виступами або вдав-леніямі. У патологічних випадках зустрічаються лімфоцити з неправильною лопатевої формою ядра чи розчленування ядра може нагадувати сегментовані ядра спеціальних гранулоцитів.
У будові ядра лімфоцитів характерна наявність темноокрашівающіхся, неясноочерченних великих грудочок базіхроматіна, зі слабкими просвітами між ними. Іноді це чергування темних грудочок з тонкими просвітами надає ядру деяку схожість з малюнком колеса, спицями якого служать светлоокрашівающіеся ділянки (А. Н. Крюков та ін.) У малих лімфоцитів темні грудочки базіхроматіна настільки зливаються, що структуру ядра встановити важко.
Ядро великих лімфоцитів більш недолуге і менш інтенсивно фарбується. У ядрі великих лімфоцитів є не завжди ясно помітні 1-2 ядерця.
Лімфоцити містять ліпазу і, очевидно, беруть відоме участь в кишковому травленні (Синельников). Їх базофильная, що містить деяку кількість нуклеотидів цитоплазма, продукує значну кількість імунних тіл (Догерті і Вайт) (Dougherty, White) (
Нарешті, лімфоцити беруть участь в утворенні, з білків плазми крові, трефонов (Хрущов).
Лімфоцити складають більшість клітин білої крові у великої рогатої худоби (50-60% всіх лейкоцитів), свиней (45-60%), овець (55-65%), кіз (40-50%), курей (45-65%) і кроликів (50-65%). У цих тварин є так званий лімфоцитарний профіль крові. У собаки і коні кількість лімфоцитів в крові менше; там превалюють спеціальні гранулоцити. Однак і у цих тварин число лімфоцитів залишається досить значним (20-40% від всіх білих кров'яних тілець).
Кількість лімфоцитів в крові молодих тварин більше, ніж у крові дорослих (за винятком перших днів після народження). У нижчих хребетних кількість лімфоцитів може бути відносно дуже велике.
У клініці лімфоцитоз зустрічається в кінці сприятливо протікає інфекційного захворювання («лімфоцитарна фаза одужання»). Лімфоцитоз характерний для лімфатичної лейкемії, зустрічається при інфекційній анемії у коней та деяких інших захворюваннях.
V. Моноцити
Моноцити - великі клітини крові (від 10,0 до 20,0 μ в діаметрі), здебільшого округлої, іноді неправильної форми, з добре вираженою цитоплазмою, що має найменшу азурофільних зернистість, і великим, часто ексцентрично розташованим ядром з бухтообразнимі вдавлениями і лопатами.
Дрібна азурофільних верністость цитоплазми майже не видно у моноцитів сільськогосподарських птахів.
Цитоплазма моноцитів злегка базофіл'на, голубувато-сірого або попелясто-сірого кольору («кольору сигарного диму») при фарбуванні розчином Гімза п свинцево-сірого плі грязноспнего кольору при фарбуванні за способом Паппенгейма. Перинуклеарних зони немає або вона виражена дуже слабо. За Крюкову, особливості забарвлення цитоплазми моноцитів залежать від того, що переважає в ній пара-плазма методом Паппергейма фарбується частиною в синій колір, частиною в рожевий, причому в деяких клітинах превалює синя субстанція при майже повній відсутності рожевою, в інших велика кількість рожевої субстанції залишає виразний , своєрідний. відбиток на морфологічному вигляді клітки, надаючи її протоплазмі фіолетово-синій чи сіро-фіолетовий тон.
У птахів цитоплазма моноцитів сірувато-блакитна і мало відрізняється від кольору цитоплазми лімфоцитів.
Азурофільних зернистість моноцитів добре виявляється при забарвленні за Папергейму і з труднощами, тільки при тривалій і дуже хорошою забарвленням, - по Гімза. Зернистість рожево-червона, дуже дрібна, пилоподібна.
Ядро порівняно велика, зазвичай утворює виступи (лопаті) і бухтообразние поглиблення. Воно має дуже ніжну, тонку структуру. Ядро моноцитів амбліохроматічно (блідо фарбується), з шіроконітчатой, м'якою, «облачнослівающейся», нерівномірної хроматиновой мережею. Інтенсивність забарвлення ядра моноцитів набагато слабкіше, ніж у лімфоцитів.
Моноцити - це типові макрофаги І. І. Мечникова. Вони захоплюють і перетравлюють залишки розпалися клітин, які потрапляють в кров, чужорідні частинки, у тому числі деякі бактерії, і відіграють значну роль в утворенні імунних тел.
У моноцитах є протеолітичний фермент типу катепсина.
Нормальна кількість моноцитів у крові ссавців і птахів коливається в межах від 2 до 8%. Моноцитоз (підвищений вміст моноцитів) спостерігається в першу фазу одужання при більшості випадків інфекційних хвороб («моноцитарна захисна фаза, або фаза подолання»), при інфекційній анемії коней, протозойних захворюваннях і більшості інших інфекційних хвороб. За Н. М. Ніколаєву, однак, моноцитоз при захворюваннях далеко не завжди сприятлива ознака, що знаменує собою початок одужання.
Плазматичні клітини (клітини роздратування)
Плазматичні клітини (клітини роздратування) характеризуються одним загальним для них ознакою - різкій базофілія цитоплазми (ультрамариновий колір). Іноді в цитоплазмі видно вакуолі. Ця вельми нечисленна група клітин має полифилетического, головним чином лімфоцітоідное або міелоідное походження. Відповідно до цього, ядро клітин Тюрка має структуру, що відповідає структурі ядер тих клітин, з яких вони виникли, але фарбування його завжди відносно темніше. Форма ядра - кругла або овальна. Правильні грудочки хроматину надають ядру плямистий і кілька пікнотичної характер.
Навколо ядра зазвичай добре помітна перинуклеарних зона, периферичний же шар цитоплазми забарвлений в інтенсівносіній (ультрамаринового відтінку) колір. Форма клітин - овальна, іноді сильно витягнуті або полігональна, рідше кругла. Розташування ядра зазвичай ексцентричне. Структура цитоплазми волокниста або комковатая.
З плазматичних клітин можуть виникнути різко відмінні від них з вигляду дегенеративні форми. У протоплазмі плазматичних клітин, що втрачає базофільною, з'являються великі еозинофільні гранули, спочатку мають игольчатую форму. Ядро пікнотізіруется, і клітина розпадається. Гранули розпалися клітин, проникли в сполучну тканину, називаються Русселівських тільцями.
Плазматичні клітини в крові ссавців в помітних кількостях зустрічаються тільки при патології. Ними характеризується так звана «строката картина крові». У сільськогосподарських птахів вони є і в нормальній крові (у курей 0,1%, по Лебедєву, у гусей до 1,5%, по Домрачева).
КЛАСИФІКАЦІЯ БІЛИХ КЛІТИН КРОВІ ЗА Н. М. НІКОЛАЄВУ
Описана до цих нір класифікація лейкоцитів грунтується, головним чином, на їх морфології, так як сучасний стан наших знань про фізіологію білих кров'яних клітин недостатньо для складання обгрунтованої функціональної класифікації лейкоцитів. Однак деякі спроби в цьому відношенні є.
Однією верб таких спроб є класифікація лейкоцитів Н. М. Миколаєва. Він розглядає зернистість білих кров'яних клітин як момент, тісно пов'язаний з їх функцією. Добре виражена зернистість - ознака високої реактивності клітин мезенхіми.
Відповідно до цього основного положення, Н. М. Миколаїв виділяє п'ять груп лейкоцитів:
I група А
ендотелій
I група моноціт
гістіоціт
міелобласт
I група Б
проміелоціт
міелоціт
I група юний нейтрофіл (гетерофіл)
I група В
Палочкоядерний нейтрофіл (гетерофіл)
II група {сегментоядерний нейтрофіл (гетерофіл)
III група {еозінофіла одно-і двоядерний
IV група {базофил
Лімфобластів
Клітини роздратування
V група Ерітрогоній
Еритробластів
Нормобластов
V група Б
Лімфоцит
До першої групи М. М. Миколаїв відносить вихідні (материнські) клітини, і близькі до них; до другої - сегментоядерние і нейтрофіли (зрілі мікрофаги); до третьої - клітини фагоцитовані (Н. М. Миколаїв вважає, що зерна еозинофілів - це залишки поглинених еритроцитів); до четвертої - дегенеративні клітини і, нарешті, до п'ятої - так звані синтетичні клітини, що утворюють або гемоглобін (еритробластів), або глобулін (лімфоцити).
В якості принципово нової клітинної форми серед агранулоцитам Н. М. Миколаїв виділяє так званий гістіоціт або мікромоноціт. При фарбуванні розчином Гімза він може бути відмінний від лімфоцитів за такими ознаками (цитуємо за М. М. Миколаєву):
| Лімфоцит Вузький пояс протоплазми Інтенсивна базофілія протоплазми Гомогенна або грубозерниста протоплазма Азурчфільние зерна рідкісні або поодинокі Темнофіолетовая забарвлення ядра Густе пікнотрчное ядро, іноді глиСчатое Перінуклеаріая зона навколо ядра | Гістіоціт Більш широка протоплазма Светлоголубая або сірувата протоплазма Сітчаста або вакуолізуються-ванна протоплазма Здебільшого азурофіль-ні зерна Більше світла забарвлення ядра Більш рівномірний, менш щільне ядро перинуклеарних зона часто відсутня |
РОЗМІРИ ЛЕЙКОЦИТІВ СІЛЬСЬКОГОСПОДАРСЬКИХ ТВАРИН
Видові відмінності у величині білих кров'яних тілець незначні. Нижче наводиться таблиця діаметрів еритроцитів, лейкоцитів і кров'яних пластинок у сільськогосподарських і лабораторних тварин.
Розміри (діаметри в μ) кров'яних клітин у лабораторних і сільськогосподарських тварин
Лейкоцитарної формули і ЛЕЙКОЦИТАРНИЙ ПРОФІЛЬ КРОВІ
Кількісний та якісний склад крові залежить від функціонального і патологічного стану організму. Складні біохімічні і фізіологічні зміни, що відбуваються в організмі при різних патологічних станах, змінюють функціональний стан гемопоетичної системи, а отже, і склад крові. Ці впливи вивчені в абсолютно недостатньою мірою. Вирішальна роль тут, безсумнівно, належить зміни характеру обміну речовин в самих периферичних тканинах. Певне уявлення про це дає схема взаємин кровотворних органів з залозами внутрішньої секреції, в основному запозичена у М. М. Шустрова і XX Владос (
Відомо також вплив нуклеіновокіслого натру, що викликає лейкоцитоз. Безсумнівна, хоча і мало вивчене, вплив на кровотворення надає активна реакція ретикулоендотеліальної системи тканин внутрішнього середовища.
При патологічному подразненні вегетативної нервової системи спостерігаються дві фази лейкоцитозу: 1-а фаза - лейкоцитоз з мієлоїдної тенденцією, що поєднується при хворобі з посиленням гарячкового стану, обміну речовин, прискоренням розпаду білків, підвищенням вмісту цукру і падінням вмісту холестерину в крові і ацидозом,-переважно симпатикотонія; 2-а фаза - лейкопенія з лімфатичної тенденцією, еозинофілія, ослаблення лихоманки та обміну речовин, уповільнення розпаду білків і взагалі явища, протилежні спостерігається в 1-й фазі, переважно ваготонія. Вплив блукаючого нерва на еозінофілню встановлено з достатньою достовірністю, так само як вплив симпатичного на нейтрофіли.
На гемопоез впливають такі основні гуморальні фактори:
а) продукти розпаду червоних кров'яних тілець і,
можливо, лейкоцитів - стимулююче;
б) щитовидна залоза - стимулююче;
в) печінка - стимулююче;
г) статеві гормони: андроген - стимулююче-і естроген - гнітюче (це встановлено тільки для кролика);
д) ряд вітамінів групи В, перш за все фолеівая кислота, - стимулююче;
е) токсини мікроорганізмів, особливо патогенних, і продукти їх розпаду (дія неоднозначне і диференційовано по відношенню до різних видів кров'яних клітин);
ж) гумор: ацетилхолін, адреналін (вплив мало вивчений);
з) антианемічний фактор шлунка - стимулююче (П. А. Троїцький та ін);
і) гормон селезінки - гнітюче.
Під впливом цих гуморальних факторів кількісний і якісний склад крові своєрідно змінюється. Проте слід мати на увазі, що картина крові oтражает (і то не завжди прямо) функціональний стан лише кровотворних органів, а не організму в цілому. При цьому токсини, що діють, наприклад, на нервову тканину, можуть не робити істотного впливу на систему кровотворення, і навпаки. Очевидно, при різних захворюваннях склад крові може бути однаковим, і, навпаки, одне і те ж захворювання, в залежності від функціонального стану кровотворних органів, може дати різні картини крові. Тому Е. Фрейфел'д (
2. По крові ми встановлюємо функціональну діагностику кровотворної системи, деякі функції якої вам відомі, інших же ми не знаємо.
3. З огляду на те, що деякі захворювання дають різко виражений різний морфологічний склад крові можливо дослідженням крові виключити одне захворювання і висловитися на користь іншого.
4. Так як кров'яні клітини постійно змінюються новими, то у випадках, коли вони виявляють морфологічно дію токсину (токсичність лейкоцитів, різні ступені дозрівання - зрушення), можна легко простежити, коли дія токсину припиняється, і, навпаки, виявити його, як тільки вона з'являється.
5. При захворюваннях, що дають певну криву лейкоцитарної формули, відхилення від неї вказують на неправильність течії або ускладнення.
6. Реакція кровотворних органів не є вираз імунобіологічного стану всього організму, тому при діагностиці варто зважати на три можливостями:
а) реакція кровотворних органів відповідає реакції всіх інших органів, - тоді картина крові аналогічна загальному стану хворого;
б) реакція кровотворних органів внаслідок їх недостатності слабкіше реакцію інших органів, - тоді по картині крові можна поставити значно гірший прогноз, ніж він опиниться в дійсності; в) незважаючи на тяжкість захворювання, функція кровотворної системи перевищує реактивну здатність інших органів, і тоді картина крові буде краще, ніж стан «хворого».
До змін картини білої крові належать:
а) збільшення та зменшення загальної кількості лейкоцитів;
б) зміна відсоткового співвідношення окремих видів лейкоцитів;
в) зміна морфологічних властивостей (дегенеративні та регенеративні форми) окремих клітинних
елементів у крові
Лейкоцитарна формула враховує якісні зрушення складу білої крові, лейкоцитарний
профіль Мошковського та якісні і кількісні зрушення
Підрахунок лейкоцитарної формули здійснюється по забарвлених мазків крові. При підрахунку методом меандру, рухомим столиком поступово зрушують мазок крові по відношенню до об'єктива мікроскопа під прямими кутами зубчастої лінії (нагадує по ламаній давньогрецький орнамент - меандр).
Схема цього руху наступна (рис. 4).
Однак такий метод підрахунку не враховує того, що клітини крові розподіляються в мазку нерівномірно: на периферії мазка відносно більше гра-нулоцітов, а в глибині - лімфоцитів. Тому, особливо у тварин з лімфатичним профілем крові (корова, свиня, кролик, коза, вівця, курка), краще «прорізати» полем зору мікроскопа всю товщу мазка, як це видно на такій схемі (рис. 5).
Рис.5 Підрахунок лейкоцитів при суцільному проходженні полем зору мазка
Підрахувавши від 100 до 200 (для наукових цілей і більше) лейкоцитів, що потрапили в поле зору мікроскопа, отримуємо гемограми.
Для гемограми сільськогосподарських тварин доцільно замінити назву «нейтрофіли» на «спеціальні гранулоцити», або «гетерофіли», так як у деяких тварин замість нейтрофільної є псевдоеозінофільная зернистість. Для великої рогатої худоби та овець можливий поділ лімфоцитів на малі й великі. Професор М. М. Миколаїв пропонує виділити гістіоцитів (мікромоноцітов). Значна кількість досліджень крові показує, що лейкоцитарна формула крові у деяких видів тварин (наприклад, кролика) має значні індивідуальні варіації. Тому А. А. Заварзін запропонував розрізняти тварин з филогенетично усталеною формулою крові і з філогенетично лабільною формулою. У ранньому онтогенезі лейкоцитарна формула більш лабільна, з вираженим лімфоцитарні профілем.
Вікові зміни картини крові у сільськогосподарських і лабораторних тварин
Раціональне застосування методу вивчення картини крові, як для клінічних, так і для зоотехнічних та біологічних цілей, вимагає обов'язкового знання онтогенезу судинної крові, гематологічних дослідженнях не можна не враховувати особливостей вікової еволюції організму, якісної своєрідності кожної стадії онтогенезу: характерних для даної стадії розвитку рис найтоншої структури клітин і тканин, співвідношення тканин в цілому організмі, показників напруги і динаміки процесів, що характеризують окремі функціональні системи, а також властивих даному віку співвідношення та характеру гуморальної та нервової регуляції життєвих процесів.
Так як все це відбивається не тільки на картині нормальної крові, але і на тих змінах, які викликаються у ній різними патогенними факторами, то знання онтогенезу крові має велике значення і для правильного читання гемограми.
Крім того, ряд авторів вказує на наявність сезонної мінливості складу крові (Кудряшев та ін.)
З іншого боку, онтогенез білої крові, утворення лейкоцитів у червоному кістковому мозку та інших місцях гемопоезу та утримання в судинах організму різних форм лейкоцитів не може не відображати послідовної зміни нейрогуморальних регуляцій і змін загального функціонального стану організму в онтогенезі. Тому індивідуальна еволюцпя білої і червоної крові вельми цікава, як своєрідний, легко визначається, хоча, очевидно, не завжди адекватний, показник («сигналізатор>) функціональної і регуляторної індивідуальної еволюції всього організму в цілому.
ОНТОГЕНЕЗІ БІЛІЙ КРОВІ У ОСНОВНИХ СІЛЬСЬКОГОСПОДАРСЬКИХ ТВАРИН
Велика рогата худоба
Вікові зміни білої крові у великої рогатої худоби були спочатку вивчені І. С. Токарем (1938 р.) для червоної степової породи, а потім автором цього атласу (В. М. Нікітін. 1946 р.) для остфрізской породи. Дані І.С. Токаря представлені в таблиці 9.
Свої основні висновки І. С. Токар формулює наступним чином:
1. Число лейкоцитів з віком зменшується; максимальну кількість (11 228 в 1 мм 3) спостерігається у віці 3-9 місяців.
2. Картина білої крові істотно змінюється з віком. У молодому віці спостерігається лімфоцитоз, причому кількість лімфоцитів доходить до 71.9%.
3. Відзначається велика зв'язок відсотка лімфоцитів з ростом і розвитком тварин, а також і з статевим дозріванням.
4. Число нейтрофілів з віком збільшується. Особливий стрибок нейтрофілів спостерігається з моменту отелення.
5. Еозинофіли з моменту статевого дозрівання значно підвищуються, з л актування спостерігається зниження.
6. Для базофілів і моноцитів не виявлено певної закономірності в зміні з віком.
7. Юні і міелоціти виявлені тільки у молодих тварин ».
І. С. Токар не диференціював у підсумковій таблиці різні стадії зрілості нейтрофплов і злив в одну групу аналізи крові телят молодше 1 місяця.
8. М. Нікітін (1946 р.) дослідив усі вікові періоди великої рогатої худоби остфрізской породи, диференціюючи ступеня зрілості ядра нейтрофілів.
Основні закономірності онтогенезу білої крові у великої рогатої худоби зводяться до наступного:
1. Кількість лейкоцитів в онтогенезі змінюється порівняно мало. Можна відзначити слабо виражений максимум між 3 і 12 місяцями і деяке зменшення кількості лейкоцитів у дорослих тварин.
2. Вікові зміни у змісті базофілів і моноцитів незначні і не мають певної закономірності.
3. Вікові зміни кількості еозинофілів виражені досить чітко. У ранньому періоді онтогенезу, до 1 року, спостерігається гіпоеозінофілія. У річному віці - різке, стрибкоподібне збільшення, що зберігається на тому ж високому рівні протягом усього подальшого онтогенезу.
4. Загальною закономірністю для онтогенезу нейтрофілів (гетерофілов) є стрімке падіння їхнього вмісту в самому ранньому віці (від 52-53% у новонароджених до 17-18% у тримісячних телят) і повільний, але безперервний підйом їх кількості в подальшому (до 38-39% у дев'ятирічних і більш старих тварин).
5. Міелоціти зустрічаються тільки в самому ранньому онтогенезі, юні досить типові для раннього віку (6,94% у новонароджених і 5,3% у двотижневих телят).
Кількість паличкоядерних форм порівняно велика в дуже молодих телят (12,05% у новонароджених і 10,9% у двотижневих телят). Від місячного до дворічного віку воно знаходиться в мінімумі (від 3,07 до 4,52%), потім кілька наростає і, нарешті, різко збільшується в пізньому онтогенезі (11,39% для восьмирічних корів і 16.5% для корів 9 років і старше ).
6. Вікові зміни кількості лімфоцитів представляють собою зворотне відображення змін нейтрофілів.
7. Спостерігається у корів зозінофілію далеко не завжди можна вважати патологічною.
У вікових змінах білої крові коня спостерігаються, за даними В. С. Любанова (лабораторія В. М. Нікітіна, 1947 р.), ті ж основні закономірності, що й у великої рогатої худоби. Різниця тільки в абсолютних числах гетерофілов і лімфоцитів, властивих коням, і в інших переломних періодах онтогенезу. Це видно з діаграми (рис. 10) і таблиці 11.
До числа особливостей онтогенезу білої крові коня слід зарахувати:
а) ааметное зниження кількості лейкоцитів до старості;
б) слабкий лейкоцитоз новонароджених;
в) найменшу кількість нейтрофплов у віці 6 місяців, тобто дещо пізніше, ніж у корів;
г) порівняно короткий період гіпоеозінофіліі в ранньому онтогенезі.
Свині
Онтогенез білої крові у свиней досліджено В. Н. Нікітіним і М. К. Камишанській. У свиней також спостерігаються загальні для всіх ссавців
закономірності вікових змін крові. Головна особливість онтогенезу білої крові у свиней полягає в тому, що падіння і подальший підйом нейтрофілів припадають на дуже ранній період онтогенезу. Очевидно, це пов'язано зі скоростиглістю організму свиней, посиленою зоотехнічним підбором.
Онтогенез білої крові у свиней великої білої породи видно на діаграмі (рис. І) і таблиці 12.
Крім того:
а) На відміну від коня і великої рогатої худоби, у свиней на початку онтогенезу кількість лейкоцитів знижений (5,04 тис. в 1 мм 3 крові у новонароджених). Воно досягає норми, характерної для дорослих, до 2-місячного віку.
б) Кількість базофілів на всіх стадіях онтогенезу у свиней помітно більше, ніж у інших сільськогосподарських тварин (крім птахів).
в) Гппоеозінофілія дуже раннього онтогенезу у свиней триває до 2-місячного віку і виражена відносно слабо.
г) Мінімальний рівень нейтрофілів спостерігається у поросят тритижневого віку. На цей же період падає максимальний рівень лімфоцитів.
Кролики
За даними М. К. Камишанській (лабораторія В. Н. Нікітіна), онтогенез білої крові кроликів близькості до до онтогенезу лейкоцитів у інших сільськогосподарських тварин. Головну його особливість складу ляєт різке переважання лімфоцитів майже на всіх етапах індивідуального розвитку кроликів (крім новонароджених) (табл. 12а).
ЗАГАЛЬНІ ЗАКОНОМІРНОСТІ ОНТОГЕНЕЗА БІЛІЙ КРОВІ СІЛЬСЬКОГОСПОДАРСЬКИХ ТВАРИН
Зіставляючи криві вікових змін білої крові великої рогатої худоби, коней, свиней і кроликів, можна встановити в онтогенезі білої крові всіх цих тварин деякі загальні закономірності.
Однією з таких основних загальних закономірностей є зміна кількості нейтрофілів: високий вміст нейтрофілів у крові новонароджених змінюється швидким падінням його в перші дні життя і наростанням числа нейтрофілів у більш пізньому віці.
Зворотну картину представляють зміни лімфоцитів.
У коней, з їх нейтрофільним профілем крові у дорослих особин, такі зміни ведуть до подвійного перекреста кривих нейтрофілів і лімфоцитів: одному майже на самому початку онтогенезу, іншому - у більш пізньому віці.
У картині крові великої рогатої худоби, з його лімфоцитарні профілем крові у стадії стабільного зростання, другий перехрест не спостерігається, хоча в старих корів кількість нейтрофілів стає дуже близьким до кількості лімфоцитів. Те ж саме спостерігається у свиней і кроликів. Спільність динаміки вікових змін відносини лімфоцити (Л) / нейтрофіли (Н) незалежно від її абсолютної
величини, добре видно на наступній діаграмі (рис. 12).
З питання про основні причини вікових змін нейтрофілів і лімфоцитів поки можна висловити лише деякі припущення. Так, початкове багатство крові новонароджених ній-трофіламі та швидке падіння їх кількості в перші дні життя можна пояснити, наприклад:
а) явищами сінкаінгенеза (Кон - Франк). За цією теорією, гормони, які утворюються в материнському організмі, потрапляючи в кров при плацентарном кровообігу, викликають у плоду такі ж зміни, як і в організмі матері; до явищ цього порядку треба віднести, наприклад, збільшення надниркових залоз, збільшення матки, набрякання грудних залоз і деякі інші явища, що спостерігалися у новонароджених (А. Ф. Тур).
До цих же сінкаінгенетіческім явищ можна віднести і різкий нейтрофилез новонароджених. У подальшому, з видаленням з організму новонародженого гормонів матері, картина крові все більше визначається власними гормонами та їх співвідношенням у молодого організму. Звідси різке падіння нейтрофілів у перші дні після народження.
б) нейтрофилез новонароджених можна розглядати як пристосування до захисту організму від зараження в умовах, коли в перші дні в крові новонародженого є лише дуже мало антитіл (В. М. Нікітін). Подальше падіння нейтрофілів і збагачення крові лімфоцитами можна зв'язати:
а) з повторенням філогенезу білих кров'яних тілець на початкових стадіях онтогенезу. Лімфоцити, як найменш диференційованої і давня форма білих кров'яних тілець, превалюють на ранніх етапах онтогенезу;
б) з значним розвитком і активністю тимуса в ранньому онтогенезі;
в) з високими потенціями зростання в рівній онтогенезі; лімфоцити, за багатьма даними, грають певну роль у засвоєнні і синтезі білків.
За підйомом кількості лімфоцитів відбувається
їх повільне падіння у всіх чотирьох видів тварин. Іншою загальною закономірністю є знаходження в крові в ранньому онтогенезі незрілих форм нейтрофілів. Це веде до зрушення ядра нейтрофілів вліво. Він добре виражений у великої рогатої худоби і менш помітний у коней і свиней.
Ймовірно, спочатку онтогенезу кровотворні органи функціонують ще не в такому ступені, щоб нейтрофіли (так само як і інші форми лейкоцитів) встигали в них дозріти. Функціональна повноцінність міелопоетіческой системи досягається тільки значно пізніше.
З тієї ж позиції можна розглядати і деякий зсув вліво ядра нейтрофілів у старих тварин. Тут це - прояв вже недостатньою повноцінності кровотворної системи. Більш того, це свого роду фізіологічна роздратованість міелопоеза, викликана вже порушуються нейро-гуморальної регуляції в організмі.
Третю загальну (різко виражену у всіх досліджених тварин) закономірність представляє гіпоеозінофілія в ранній молодості.
ОСНОВНІ БІОЛОГІЧНІ ЗАКОНОМІРНОСТІ ЗМІНУ БІЛІЙ КРОВІ
При фізіологічно нормальному стані організму, кровотворні органи викидають в судинну кров достатньо зрілі форми лейкоцитів. У цьому випадку гемопоез відбувається під впливом, загалом, досить стабільних і добре збалансованих нейрогуморальних факторів, що забезпечують оптимальні умови для повноцінного функціонування кісткового мозку, лімфатичних вузлів і т. д. Стабільність кровотворення і відповідна їй стабільність рівня розпаду білих кров'яних тілець в організмі визначають сталість складу судинної білої крові і загальної кількості в ній лейкоцитів. Проте сталість це досить відносно: у складі білої крові сільськогосподарських і, особливо, лабораторних тварин навіть у нормі спостерігаються досить помітні варіації («філогенетично менш усталена кров», за А. Заварзіна). Особливо вариабильность кров таких лабораторних тварин, як щури, миші, морські свинки. Менш мінлива кров кролика.
Можливо, що на розмах коливань лейкоцитарної формули сільськогосподарських і лабораторних тварин впливає також і те, що фізіологічна норма у них зустрічається, по суті, порівняно рідко. Крім малоучітиваемих патологічних станів, майже всі сільськогосподарські та лабораторні тварини в тій чи іншою мірою інвазовано (Гельмінтози, протозоози і арахно-ентомози). На думку академіка К. П. Скрябіна, «... ніде в світі не можна зустріти жодної голови великої рогатої худоби, ні однієї вівці і коні, вільної від паразитичних черв'яків »(1937 р.).
Нарешті, необхідно мати на увазі наявність у сільськогосподарських тварин часом досить значних породних відмінностей складу білої крові (а до певної міри і червоної). Так, у крокових порід коней лейкоцитарна формула має лімфо-цітарний профіль, а у скакових нейтрофільний. Кров рисистої коні займає проміжне становище. Вважається, що лімфопітарний профіль з наявністю еозинофілії характеризує собою ваготонічному стан, на противагу вираженого нейтрофільні, властивому симпатикотонії. Суха конституція східній коні характеризується сімпатікотоніческая комплексом, і йому частіше відповідає нейтрофільний профіль, в той час як ваговози з пухкою конституцією знаходять вираження ваготонічності в лимфоцитарном профілі.
При патологічних процесах змінюється характер нейрогуморальних впливів на кровотворення. На гемопоетичних систему впливають токсини, продукти розпаду і метаболізму бактерій, специфічні антитіла і продукти зміненого катаболізму.
Звідси подвійне вплив на кровотворення в умовах патології. З одного боку, роздратований кістковий мозок викидає у кров'яне русло не тільки зрілі, але і не закінчили свій цикл розвитку («визрівання») форми лейкоцитів (зсув лейкоцитарної формули вліво, поява в крові лімфобла-стів, монобластов, збільшення числа плазматичних клітин).
З іншого боку, особливо при сильних інтоксикаціях, дія отрути безпосередньо позначається на утворюється клітці: з'являються дегенеративні форми білої і червоної крові.
Основними біологічними закономірностями у змінах білої крові при патології є наступні:
I. Слабкі роздратування викликають лише функціональні зміни лейкоцитарної картини; середні роздратування, діючи через лейкопоетіческіе органи, є формативне; сильні - впливають також на освіту окремої клітини, самі сильні роздратування діють гнітюче, послаблюючи центральні і руйнуючи периферичні клітини кровотворних органів.
II. У більшості інфекційних процесів першими реагують на подразнення нейтрофіли, потім моноцити і в останню чергу лімфоцити; відмінність інфекційних картин крові залежить від взаємного зсуву (у часі) цих трьох фаз і від коливання ступеня реакції окремих груп, а також від появи поряд з ними більш рідкісних формених елементів.
По відношенню до загальної кількості лейкоцитів слабке, помірне і, в значній більшості випадків, сильне подразнення (інтоксикація) викликає наростання лейкоцитів (лейкоцитоз); при дуже сильних, «позамежних» подразненнях, кровотворення пригнічується і виникає лейкопенія.
Набагато важливіше, звичайно, враховувати диференційовані зміни окремих груп лейкоцитів. Лейкоцитарна формула при переважній більшості інфекційних захворювань зазнає три послідовні фази змін.
На початку б о л е із зв і спостерігається зростаючий лейкоцитоз, нейтрофілія з різким регенеративним зрушенням ядра вліво (до юних форм і навіть до міелоцітов), анеозннофілія, лімфо-і монопенія. Це - нейтрофільна фаза боротьби.
У другій стадії розвитку хвороби, при кризі і починається одужання, лейкоцитоз поступово зменшується, знижується кількість нейтрофілів і послаблюється зрушення ядра вліво, з'являються еозинофіли (відновлення еозинофілії), дещо збільшується кількість лімфоцитів і різко зростає число моноцитів (моноцитоз). Це - моноцитарна захисна фаза, або фаза подолання.
У третій стадії хвороби, при триваючому й закінчується одужання, спостерігаються: подальше поступове падіння загального числа лейкоцитів, еозинофілія, різкий лімфоцитоз, кілька зменшуваний моноцитоз, зменшення числа нейтрофнлов і поступове повернення зсуву ядра до норми. Це - л і м ф про ц т а р-н а я фаза, або фаза одужання.
Спостерігаються при типовому перебігу хвороби фази зміни лейкоцитарної формули можна бачити з зміни трьох послідовних гемограми коні (запозичено у А. В. Синьова):
На наступній діаграмі (рис. 13) показано типовий хід змін лейкоцитарної формули крові протягом всієї хвороби.
Підвищена кількість еозтгаофілов іноді утримується довго після одужання. Так, в.о. даними А. Ф. Дорофєєва (1928-1929 рр..), Перипневмонія у великої рогатої худоби залишає по собі тривалий слід на лейкоцитарної формулою, і різко виражена еозинофілія зберігається до 3-6 місяців після клінічно встановленого одужання.
При ряді захворювань особиста зміна картин білої крові може істотно змінюватися. Так, при крупозній пневмонії у коней і корів спочатку є період лейкопенії із зменшеною кількістю нейтрофілів. Потім-різко виражений нейтрофільний лейкоцитоз. Добре виражена лейкопенія спостерігається при інфлуенца коней, паратифі телят і чумі свиней. Цікаво, що в той час як чума свиней пов'язана з різко вираженою лейкопенією (всього 2-3 тис. лейкоцитів в 1 мм 3 крові), близька до неї за початковим клінічними ознаками рожа супроводжується не менш сильно вираженим лейкоцитозом (до 25 тис. лейкоцитів в 1 мм 3 крові). Таким чином, диференційний діагноз пики і чуми свиней значно полегшується підрахунком кількості лейкоцитів в судинній крові.
При гельмінтозах, особливо у коней, собак і великої рогатої худоби, і при пиці свиней спостерігається різка еозинофілія (до 45-50% еозинофілів). Набагато менш виражена, але все ж виразна еозинофілія спостерігається і при деяких шкірних захворюваннях, наприклад, при різних формах екземи, при акаріазе у собак.
Наявність значних, характерних для окремих хвороб, специфічних відхилень від типової біологічної реакції кровотворних органів завжди потрібно мати на увазі при клінічному діагнозі. Крім того, ця біологічна реакція навіть і в звичайних випадках далеко не стандартна.
РАННІ ФОРМИ ОНТОГЕНЕЗА ЛЕПКОЦІТОВ
Для нормальної судинної крові характерна наявність в ній більш-менш зрілих формених елементів. В органах ж кровотворення, наприклад, в червоному кістковому мозку, поряд з різними клітинами, що знаходяться на більш пізніх стадіях визрівання (міелоцітамі, юними, паличкоядерних та сегменто формами), можна знайти і самі ранні, вихідні для проліферації та розвитку, клітинні форми лейкоцитів. Сюди належать (у порядку послідовного визрівання): а) гемоцітобласти (лімфоідоціти, міелобласт-останній не в усіх теоріях лейкогенеза є синонімом гемоцітобласта), б) лейкобласти і в) проміелоціти. У лімфопоетіческой системі лейкобластам відповідають г) лімфобластів.
Крім того, в червоному кістковому мозку локалізуються гігантські поліморфноядерні клітини д) мегакаріоцити, з яких, по видимому, виникають кров'яні пластинки ссавців. У дуже рідкісних випадках (при деяких захворюваннях, наприклад, хронічному міелозе) мегакаріоцити потрапляють в судинну кров.
а) Гемоцітобласти (Лімфоідоціти) - великі (12-20 μ діаметром) круглі або овальні клітини з базофільною тонкої цитоплазмою і великим округленим нерозчленованим, компактним ядром виключно ніжної структури.
Окружність ядра іноді з бухтообразнимі поглибленнями. Добре помітна дуже рівномірна, сітчасто-зерниста, без скільки-небудь помітних згущень (грудочок) сітка базіхроматіна. По А. М. Крюкову, «ядро побудовано з найтонших примітивних ниток хроматину, що відрізняються надзвичайною рівномірністю калібру та забарвлення і дають надзвичайної правильності сплетіння. Точки перехрещення ниток ядерної мережі сприймаються як верністость, звідки створюється враження про ніжний мікрогранулярном будову ядра. Унаслідок малого змісту нуклєїн в хроматиновий нитках, ядро отримує лептохроматіческую забарвлення, без ясного поділу субстанції ядра на хроматин і оксіхроматін. У ядрі є дві-три (до шести) нуклеоламі, фарбувальні в синій колір, що переходить у злегка червоно-фіолетовий. Нуклеоламі мають характер округлих і більше довгастих утворень; деякі з них є лише псевдонуклеолямі і являють собою проміжки в хроматиновой мережі ядра, через які просвічує синя субстанція цитоплазми ».
Структура ядра гемоцітобластов може бути охарактеризована і інакше, як має ніжну сітчасто-зернисту структуру, блідо фарбуються завдяки малій кількості базіхроматіна (малій насиченості ядра дифузно розподіленими нуклеотидами). Тому в ядрі немає чергування окремих ділянок з конденсацією бази-або оксіхроматіна (хроматину та парахроматіна).
Ніжну структуру поверхні ядра гемоцітобласта порівнюють то з ніжною брижами на поверхні води від слабкого подуву вітру (Крюків), то з поверхнею шагреневої шкіри (Паппенгейм), то, нарешті, з ніжним нитчасті хмаркою.
Тут необхідно підкреслити, що опис ядерних структур є правильним тільки по відношенню до тієї штучно отриманої при фпкса-яка відображає коагулювати колоїди ядра. Як показала дослідження П. В. Макарова (1946-1948 рр..), Покоїться ядро за життя не володіє ніякими передіснуючою структурами, крім ядерця. Нитки в ядрі і цитоплазмі, постуліруемое А. Н. Крюковим, слід розглядати, як артефакти, які під час фіксації.
Цитоплазма має різну ступінь базофіли; чим більше розвинена цитоплазма, тим вона блідіший, тобто менш базофильна. Периферія її забарвлюється темніше, навколо ж ядра утворюється понад ледь забарвлюється перинуклеарних зона, яка інколи набуває рожевого відтінку. У тонкопротоплазменних клітин ця зона відсутня.
Зрідка в цитоплазмі зустрічаються азурофільних гранули.
Гемоцітобласт поліпотентен і може розвиватися, в залежності від нейрогуморальних факторів, у напрямку міелопоеза, лімфопоезу, монопозза і ерітропоеза.
За Арінкіну, в пунктаті кісткового мозку міститься від 1,0 до 1,4% мізлобластов (тобто гемоцітобластов і подальшої форми диференціації в напрямку міелопоеза - лейкобластов).
б) Лейкобласти - проміжна клітинна форма між поліпотентних гемоцітобластамі і досить чітко диференційованим у бік гранул-цітопоеза проміелоцітамі і міелоцітамі. Ряд дослідників зближує лейкобласти з міелоцітамі і не виділяє їх в самостійну проміжну форму (Максимов, Крюков, Заварзін, Нагелі).
За Папергейму, лейкобласт характеризується:
а) ядром, що має структуру, наближену до міелоціту, і іноді містять ядерця;
б) базофільною, кілька більш широкої, ніж у гемоцітобласта, цитоплазмою, іноді містить темні, азурофільних зернятка, часом дуже рясні.
М. Д. Стражеска та Д. Н. Яновський наступні чином характеризують особливості лейкобластов:
«Ми під лейкобластом розуміємо лімфоїдну клітку, ядро якої втрачає спеціальну лімфоідоцітарную структуру. Це не означає, що вона повинна бути виражено міелоцітарной. Ця лімфоїдна клітина має ядро більш грубої структури, ніж ядро лімфоідоціта. Правильне густе сплетіння тонких ниток замінюється більш грубим сплетінням тяжів хроматину з невеликими просвітами парахроматіна. У ядрі частини з цих клітин ще зберігаються ядерця. Протоплазма не різко базофильна. Ядро значно відрізняється від ядра міелоціта, де щільні ділянки хроматину чергуються з більш світлими ділянками, утворюючи строкату мізлоцітарную структуру. Так як придбання певних біологічних властивостей йде разом з морфологічним дозріванням клітини, то втрата спеціальної лімфоідоцітарной структури ядра, огрубіння його, повинні служити доказом діфрренціаціі як морфологічній, а й біологічної, тобто набуття чи втрати клітиною ряду властивостей, як, наприклад, зникнення поліпотентної можливості, тобто здатність розвиватися у бік тільки лімфоїдних або мієлоїдних клітин, поява ферментів і т. п. У такому розумінні лейкобласт буде дійсно відповідати лімфобластів лімфатичного ряду. Якраз лейкобласти найбільш важко відрізнити від лімфобластів за морфологічними ознаками ».
М. Д. Стражеска та Д. Н. Яновський вважають, що лейкобласти, вже почавши диференційованої в напрямку гранулопітов ще зберігають можливість перетворитися, при відомих умовах, в моноцити, так само як і лімфобластів. Наступна ступінь їх розвитку - проміелоціти - вже не має цієї потентность і може диференційованої тільки в гранулоцити.
А. Н. Крюков, не вважаючи можливим виділити лейкобласт в самостійну перехідну клітинну форму, об'єднує, як синоніми, гемоцітобласти, лімфоідоціти і міелобласти. М. Д. Стражеска та Д. Н. Яновський об'єднують гемоцітобласт і його подальшу стадію - лейкобласт - назвою міелобласт.
Виділення лейкобласта в самостійну клітинну форму характерно для багатьох поміркованих унітаристів, по заперечується як прихильниками крайнього монізму, так і прихильниками поліфілетізма.
в) Проміелоціти - подальша форма діферен-ціація гемоцітобласта і лейкобласта в гранулоцити Вона характеризується:
1) вираженої міелоцітарной структурою ядра з чергуванням ясно виражених темних і світлих ділянок;
2) відсутністю ядерець в ядрі;
3) появою азурофільних, вже досить багатою, зернистості, яка згодом перетворюється, в залежності від умов розвитку, то в еозинофільну, то в гетерофільних, то, нарешті, в базофільну зернистість;
4) подальшим збільшенням маси цитоплазми Ядро виявляє вже деяку тенденцію до утворення виступів і вдавлення.
Зерна дають більш-менш виражену оксідазоположітельную реакцію.
Проміелоціти складають 0,8-1.4% клітин в пунктаті кісткового мозку (Арінкін).
г) лімфобластів (макролімфоціти) - такі ж проміжні ступені в напрямку розвитку гемоцітобласта в лімфоцити, як лейкобласти по відношенню до міелоцітам. Лімфобласти важко відрізнити від лейкобластов.
Це великі клітини, з дещо більш широким, ніж у гемоцітобласта, поясом базофільною цитоплазми. Їх діаметр коливається між 10 і 15 μ, іноді і більше. На відміну від лейкобласта, що має кілька туманне цитоплазму, у лімфобластів вона ясно-блакитна.
Велике, що має невеликі виступи і западини, ядро забарвлюється блідіший, ніж у середніх лімфоцитів. Його структура набагато ніжніше, ніж у останніх (більш рихла), хоча, на відміну від гемоцітобластов, в ньому стають ясно помітними світлі і темні поля. Ядро містить ядерця (від одного до трьох), не так різко відмежовані, як в ядрі лімфоідоціта.
У цитоплазмі ясно виражена світла перинуклеарних зона, і це служить додатковим відзнакою лімфобластів від лейкобласта. Базофілія цитоплазми виражена значно слабкіше, ніж у гемоцітобласта. Колір цитоплазми - ясноголубой.
Іншим, досить важливим, відзнакою лімфобластів від лейкобластов є їх різна оксидазного реакція: у лейкобластов вона позитивна, у лімфобластів негативна.
Лімфобласти знаходяться в периферичної крові тільки при деяких патологічних станах, особливо при лімфатичної лейкемії.
д) Гігантські клітини червоного кісткового мозку - мегакаріоцити. мегакаріоцити (і їх Родоначальная, не всіма визнається форма - мегакаріобласти) представляють гігантські клітини кісткового мозку, що мають розмір у 20-40 μ і більше.
Ядро мегакаріоцитів зазвичай різко полиморфное, утворює складні вигини (конволюте) і лише дуже рідко має більш просту форму, злегка нагадує форму ядра моноцитів. Іноді зустрічаються мегакаріоцити з кільцеподібними, складно звитими ядрами.
Ядро мегакаріоцитів, по Крюкову, «загалом бідно хроматином, що дає виразну мережу з тонких і більш товстих ниток з потовщеннями у вигляді частинок, що лежать на різній відстані один від одного. У ядрі можуть знаходитися численні нуклеоламі ».
У ядрі мегакаріоблаетов видно нуклеоламі.
Цитоплазма гігантських клітин кісткового мозку досить об'ємиста, забарвлюється базофільно, мутна. У більш зрілих форм у цитоплазмі знаходяться численні дрібні азурофільних зернятка.
Особливістю цитоплазми мегакаріоцитів є наявність в ній дуже великої кількості цент-Ріоло (по А. Максимову, декількох сотень).
Від цитоплазми зрілих мегакаріоцитів постійно відділяються невеликі грудочки, що містять АЗУР-ною зернистість. Це явище, а також спостерігається паралелізм між зміною кількості мегакаріоцитів в кістковому мозку і зміною кількості кров'яних пластинок в судинній крові дали Райту (Wright) підставу розглядати кров'яні пластинки як продукт розпаду мегакаріоцитів. У кістковому мозку міститься близько 0,2% мегакаріоцитів (Арінкін).
Мегакаріоцити ніколи не зустрічаються в периферичній крові фізіологічно нормального організму. Досить часто їх знаходять при лейкеміях (переважно малі, бідні цитоплазмою, клітини). М. Д. Стражеска та Д. Н. Яновський вважають їх не мегакариоцитами, а мегакаріобластамі.
ГЕНЕЗИС кров'яних клітин
Теорію кровотворення І філогенетичного і онтогенетического ВІДНОСИНИ РІЗНИХ ФОРМ ЛЕЙКОЦИТІВ
Картина крові найтіснішим чином залежить від функціонального стану органів кровотворення, відображаючи в тій чи іншій мірі відбуваються в гемопоетичних системі зміни. Тому для правильного тлумачення картини крові велике значення має знання закономірностей кровотворення в нормі і в патологічних умовах і, перш за все, генезу кров'яних клітин.
На жаль, до цих пір ще немає єдиної, бездоганно обгрунтованої теорії кровотворення. Відомо, що у безхребетних і нижчих хребетних тварин, що не мають кровотворних органів і диференційованих білих кров'яних тілець, всі елементи крові виникають з індіферентних мезенхімних клітин. Щось подібне спостерігається і на самих ранніх стадіях ембріогенезу ссавців. Однак і в філогенезі (у більш високо організованих тварин) і в онтогенезі (на більш пізніх стадіях ембріогенезу) відносини значно ускладнюються. Виникають спеціальні органи кровотворення (міелоідная та лімфоїдна системи), діференціруются білі кров'яні тільця. Генезис клітин крові у вищих тварин виявляється набагато більш складним, ніж у тварин примітивних. Він вивчений далеко не в достатній мірі. В даний час існують три основні теорії генезису клітин крові:
а) моністичний, або унітарістіческая, монофілетична теорія (Усов, Вайденрайх, Максимов, Немилов, Доминичи, Феррата, Хлопін, Мясоєдов, Альошин та ін);
б) дуалістична теорія (Ерліх, Негелі та ін);
в) триалістичну теорія (Ашоф та ін.) Особливу теорію представляє собою помірний
унітаризм плі монофілетичної дуалізм (Крюков, Паппенгейм, Стражеско та Яновський, Тимофєєвський), що поєднує унітаризм і дуалізм, усуваючи їх крайні положення.
Деякі основні положення визнаються майже всіма дослідниками. Вважається, наприклад, встановленим, що в ембріональному кровотворенні недіференцірованние клітини мезенхіми в процесі диференціації (і проліферації) утворюють перші острівці кровотворення, які продукують всі основні види клітин крові і надалі розвиваються в кровотворні органи. При цьому виникають дві кровотворні системи: міелоідная (кістковий мозок) та лімфоїдна (лімфатичні вузли і селезінка). Обидві системи діференціруются вже в ембріогенезі і утворюють при фізіологічно нормальних умовах різні клітини крові: міелоідная-кров'яні пластинки, червоні кров'яні тільця та гранулоцити, а лімфатична - лімфоцити. Диференціація мезенхімальних елементів у цих тканинах зайшла так далеко, що перетворення однієї тканини в іншу (або зворотний розвиток) в звичайних фізіологічних умовах зустрічається рідко (унітаристи) або виключено (дуалісти і тріалісти). Морфологічна диференціація поєднувалася тут з диференциация біохімічної; одне з найяскравіших проявів останньої - наявність оксидаз в міелоідних елементах і відсутність цих ферментів в лімфоїдних клітинах (тільки моноцити іноді слабко оксидази-позитивні). Різні й умови внутрішньоклітинного травлення у гранулоцитів і моноцитів; у перших травні ферменти діють в слабощелочной середовищі, а у других в слабокислою. Окислювальний обмін у гранулоцитів зсунутий у бік гліколізу, а у агранулоцитам гліколіз виражений дуже слабко.
Проте в дорослих організмів, як у кровотворних органах, так і поза ними, зберігаються і мало змінилися індіферентние мезенхімного клітини. Під впливом особливих фізіологічних і патологічних впливів вони можуть розвиватися в будь-які кров'яні клітини - як міелоідного, так і лімфоїдного ряду.
При фізіологічно нормальних умовах лейкопоез забезпечується не цими індіферентнимі мезенхімного клітинами і навіть не першими формами їх починається диференціації - міелобластамі і лімфобластів, а розмноженням ще більш диференційованим форм - міелоцітов і відповідних їм за ступенем зрілості форм агранулоцитам.
Основна проблема теорії кровотворення полягає в тому, до якої стадії дозрівання зберігається у дорослої хребетного поліпотентної клітин кровотворної тканини, інакше кажучи, наскільки далеко зайшла диференциация міелоідной і лімфоїдної тканин.
За поданням унітаристів (Максимов), грань між міелоідной і лімфоїдною тканиною дуже відносна, різкого відокремлення між ними немає, і в звичайних фізіологічних умовах можливе утворення лімфоїдних елементів з мало діференці-ваних елементів міелоідной тканини і навпаки. Унітаристи вважають, що всі Агранулоціти крові та кровотворних органів (малі і великі лімфоцити і моноцити) є недіференціровашшмі або лише дуже мало диференційованим клітинами, які за деяких умов можуть розвинутися в гранулоцити, еритроцити і мегакаріоцити.
За А. Максимову, «співвідношення між усіма ... формами незерністие лейкоцитів у циркулюючої крові набагато більш тісні і прості, вони не тільки відбуваються з однією загальною родоначальної клітини, що, звичайно, поза сумнівом, але вони і в самій крові і в інших тканинах можуть у відомих межах прямо перетворюватися один в одного. Принаймні, в крові тварин ... дуже часто взагалі не вдається провести різкої межі між ними, а, навпаки, вдається підібрати безперервний ряд поступових перехідних форм від малого лімфоцита до великого (де останній циркулює в крові) і до моноцити, який є як би найбільш зрілою формою лейкоцитів. Великий же лімфоцит чи моноціт, розмножуючись поділом, можуть знову дати початок малим лімфоцитам ».
«На підставі цієї нерезкой відокремлені один від одного різних видів незерністие лейкоцитів, вони і можуть бути об'єднані ... під загальною назвою «лімфоцити» або «Агранулоціти>. Це завжди в основі одна і та ж рівнозначна клітина. Зовнішній вигляд її, величина, відношення між масою протоплазми і ядра, ступінь базофільною протоплазми, ставлення до прижиттєвої забарвленням і т. п. можуть значно коливатися, і клітина може відповідно до цього більш-менш наближатися то до одного, то до іншого з описаних трьох типів , але внутрішні потенційні її якості при цьому залишаються незмінними ». «Це вчення визнає, що всі взагалі лімфоїдні елементи в організмі по суті абсолютно рівнозначні, хоча в гістологічному відношенні можуть бути дуже різноманітні. Як би вони не були різні за видом, величиною, відношенню між обсягом ядра і протоплазми, по базофільною останньої і т. д., це все-таки завжди ті ж самі індиферентні блукаючі клітини, мезенхімного амебоцити, лімфоцити в широкому сенсі », з дуже великий «потенцією розвитку; малі лімфоцити, великі лімфоцити, моноцити представляють собою лише деякі найбільш типові зовнішні форми, які може приймати цей елемент в організмі ... всі ці клітинні типи поступово переходять один в одного і пов'язані проміжними формами. Те, що описується під ім'ям гістіоцитів, лейкобластов і т. д., також не може вважатися визначеними і різко обмеженими клітинними типами. Сказане стосується потім і до міелобластам і лімфобластів дуалістів, тобто до незерністие родоначальних клітинам міелоідной і лімфоїдної тканини. Вони повинні розглядатися не як дві різні клітинні форми, а як один і той же індіферентний, мезенхімного амебоціт, який можна в даних двох випадках за гістологічною увазі назвати просто великим лимфоцитом. Якщо цей
Унітарна теорія кровотворення видно на схемі, запозиченою у Максимова (кольорова таблиця 64).
Всі клітини в цій схемі розміщені по лініях, які показують їх поступове днференціальное розвиток у певному напрямку, починаючи від родоначальних індіферентних великих лімфоцитів (1 -3) і закінчуючи відповідними зрілими формами циркулюючої крові (11, 12, 13, 23, 27, 34) . Найбільш сильні позиції унітаристів в області порівняльної гематології та ембріології.
Полифилетического теорії спираються, головним чином, на дані клінічної діагностікі.Дуалісти (Негелі, Шрідде) різко відокремлюють міелоідную і лімфоїдну тканини. Вони вважають диференціації цих тканин зайшла так далеко, що виникнення клітин однієї системи з родоначальних клітин іншої абсолютно неможливо ні в фізіологічних, ні в патологічних умовах. Далеким відлунням колись існувала зв'язку і єдності цих двох систем є у дорослих ссавців тільки індіферентная мезенхімного клітина.
Нижче наводиться дуалістична схема кровотворення по Негелі (з А. Єгорова) (рис. 14, 15, 16).
Широко поширена серед гематологів помірно унітарна чи немонофілетичні-дуалістична теорія генезу кров'яних клітин (Крюков, Стражеско, Паппенгейм). За цією теорією, не толькс примітивний гістіогенний елемент (індіферентная клітина мезенхіми), а й наступна стадія його розвитку - лімфоідоціт (гемоцітобласт) є сполучною ланкою і загальної родоначальної клітиною міелоідной і лімфоїдної систем. Це узкопротоплазменная, лімфоцітоподобная клітка з ніжною і тонкою структурою ядра («шагренева шкіра»). Лімфоідоціт (гемоцітобласт), в залежності від різних
умов розвитку, може диференційованої то в лімфобластів (родоначальні клітку для лімфоцитів), то в лейкобласт (родоначальні клітку міелоідного ряду клітин). Гетерогенне розвиток почав диференційованої лімфоідоціта вже неможливо.
Генез крові з теорії помірного унітаризму видно зі схем А. Н. Крюкова та М. Д. Стражеска та Д. Н. Яновського (рис. 17 і кольорова таблиця 63).
А. Н. Крюков наступним чином характеризує прикордонне положення помірного унітаризму по відношенню до унітаризму і дуалізму:
«За цією теорією, тканинне кровотворення йде з примітивного гістіогенного елемента завжди через стадію лімфоідоціта. Лімфоідоціт однаково є джерелом неоплазми міелоідной тканини і повсюдних лейкемічних лімфоцитів. Лімфоідоціти виступають на сцену при утворенні круглоклітинна ексудату при запаленні. Вони є також першими клітинами в ембріональному кровотворенні. Лімфоідоціт має здатність диференційованої в зернисті лейкоцити, лімфоцити і еритроцити. Ця теорія проводить розмежування між ду різними лімфонднимі елементами, розрізняючи між ними міелоідние клітини і лімфатичні в серед тих і інших виділяючи особливі типи - лімфоі-
доціт, лейкобласт або лімфоідоціт з ядром Міель-цита, макролімфоціт, лімфоцит. У той час як унітаризм всі відмінності між цими лімфоїдними елементами заперечує і вважає їх лише відмінностями функціонального значення, дуалізм відомим морфологічним розбіжностям надає надмірне значення, як це існує в питанні про материнських клітинах. Помірний монофілетізм оцінює ці відмінності менш високо там, де вони менш виражені, як у питанні про материнські клітинах, і тут ближче стоїть до унітаризму, але наближається до дуалізму в питанні про відмінності між мізлобластамі і лімфоцитами. Унітаризм вважає лімфоцит ембріональної клітиною, дуалізм - високо діференці-ванням елементом, еквівалентом поліморфної лейкоцитів; помірний унітаризм, визнаючи малі лімфоцити за зрілі елементи, тим не менш не ставить їх на одну дошку з поліморфними гранулоціт-тами, так як ці останні вже втратили здатність до поділу, яка належить лімфоцитам в повній мірі. Дуалізм протиставляє мієлоїдної тканину лімфоденоідной, унітаризм заперечує відособленість кровотворних систем, помірний монофілетізм вважає що обидві тканини суть різні форми розвитку одного і того ж ембріонального лімфоідоціта, через який вони перебувають між собою у родинних відносинах ». «Лімфоцити з цієї теорії утворюються і в кістковому мозку, як особливий параміелоідний тканинний компонент, спочатку виник все-таки з цієї ж загальної материнської клітини, що специфіковані кістковому мозку в напрямку гранулопластікі. При патологічних же умовах, як це буває при сепсисі, розвиток лімфоідоцітов в гранулоцити сильно страждає, і тоді дозрівання може проявлятися у бік лімфопластікі, серед убогих міелоідних елементів виявляються у значній кількості лімфоцити, що є для кісткового мозку вже феноменом патологічного характеру »(Крюків) .
Нарешті, по триалістичну теорії кровотворення, є три родоначальні форми кров'яних клітин, вихідні для виникнення лімфоцитів, моноцитів і гранулоцитів. Гранулоцити виникають в червоному кістковому мозку, лімфоцити - в лімфатичній системі і селезінці, а моноцити в ретикуло-ендотеліальної системи. Таким чином, за поданням тріалістів, є три різні кровотворні тканини - міелоідная, лімфоїдна і ретикуло-ендотеліальної. Найбільш істотним підтвердженням цієї теорії є виявлення особливої форми лейкемії - моноцитарно, поряд з раніше відомими міелоідной і лімфоїдної лейкемії.
Нижче наводяться схеми кровотворення по триалістичну теорії (рис. 18 і 19).
Нову концепцію, яка намагається подолати крайності і деяку догматичність основних теорій кровотворення, висуває А. А. Заварзін (1932 р.).
На його думку, «... така велика кількість суперечливих теорій вказує, безсумнівно, на неправильний підхід до самої постановки питання. Ця неправильність, на нашу думку, полягає в тому, що автори множинних теорій намагаються приписати родоначальних форм абсолютну детермінованість, а автори моністичних поглядів - абсолютну лабільність (нестійкість). Між тим, дуже ймовірно, що для камбіальних елементів тканин внутрішнього середовища не існує ні абсолютної детермінованості, ні абсолютної лабільності.
Є багато даних, які говорять про те, що за певних умов кровотворний камбій детермінований лабільно. Лабільна детермінованість обумовлює ті факти, які лежать в основі всіх множинних теорій кровотворення.
При більш різких втручаннях, при більш значних загальних або місцевих змінах ця лабільна детермінованість порушується, і тоді створюються умови для різних перебудов у кровотворенні, які дали привід до обгрунтування моністичних поглядів ».
Остання концепція представляється нам особливо важливою. Вона дає можливість подолати обмеженість поліфілетізма і крайнього монізму. Найкраще з цією концепцією узгоджується сучасна теорія помірного унітаризму, що розвивається низкою провідних вітчизняних гематологів (А. Н. Крюков, М. Д. Стражеско, Д. П. Яновський, І. А. Кассирський, Г. А. Алексєєв, Б. Л. . Альошин, А. Д. Тимофєєвський). На позиціях цієї теорії стоїть і автор цього атласу.
Картина кровотворення, представлена викладеними тут теоріями, спостерігається у ссавців. У птахів є істотна зміна, яке зводиться, по-перше, до того, що лімфоїдна тканина розсіяна по всьому організму набагато більш дифузно і справжні лімфатичні вузли зустрічаються лише у небагатьох видів, по-друге, у них, як у всіх хребетних, які мають ядерні еритроцити , останні утворюються виключно всередині кровоносних судин червоного кісткового мозку. У кістковому мозку птахів є широкі венозні капіляри (так звані синусоїди) з надзвичайно уповільненим рухом крові. Внутрішня поверхня ендотелію цих судин покрита лежать в кілька рядів еритробластах, що дають при діленні і наступному визріванні зрілі еритроцити. Останні, в міру визрівання, відтісняються утворюються з зрітробластов клітинами до центру судини і потім несуться потоком крові. Екстраваскулярний відбувається утворення червоних кров'яних тілець і у всіх інших нижчих хребетних. У рептилій і безхвостих амфібій еритропоез локалізується в червоному мозку, у хвостатих амфібій і риб - в селезінці.
Зернисті лейкоцити утворюються у птахів (і у рептилій і вищих амфібій) екстраваскулярний, в самій тканині кісткового мозку. У нижчих хребетних (хвостатих амфібій і риб) червоного кісткового мозку немає і гемопоез стає більш дифузним, причому немає різкого поділу лімфоїдної і міелоідной тканин. Надзвичайно мало відомо про генезі тромбоцитів у птахів. За 'деякими даними, вони утворюються з лімфоцитів, у вигляді особливого самостійного виду клітин, за іншими - вони виникають з ендотелію. У ссавців ж, очевидно, кров'яні пластинки утворюються з мегакаріоцитів (гігантських клітин) червоного кісткового мозку, шляхом отшнуровиванія цитоплазми (Райт).
Кров'яний ПЛАСТПНКІ ССАВЦІВ і тромбоцити ПТАХІВ І нижчих хребетних
Іншим видом формених елементів крові ссавців є так звані кров'яні пластинки. Це маленькі тільця (від 1 до 3-4 μ в діаметрі), з неправильними «рваними» краями і потовщенням посередині. Кожна пластинка складається з гіалоплазми (гиаломер), що утворює основу платівки, і хромомера - зерняток, нагромаджується в її центрі або, зрідка, розкиданих по гіалоплазми. Гіалоплазма забарвлюються за Гімза і по Палпенгейму в блакитно-сірий колір (іноді з ро-вовим відтінком). Зернята хромомера фарбуються азурофільних, у вишневий колір.
У середньому 1 мм 3 крові сільськогосподарських ссавців тварин містить від 200 тис. до 400 тис. кров'яних платівок. Однак в окремих видів є значні коливання кількості пластинок у крові. Розміри кров'яних пластинок у деяких тварин (кролик, свиня) мало варіюється, а в інших (особливо у коня) варіації у величині вельми значні: при середньому діаметрі в 3 μ, трапляються і дуже маленькі пластинки (до 1 μ) і прямо гіганти, що досягають 12 μ.
Кров'яні пластинки не є клітинами. Мабуть, це осколки клітин, але походження їх недостатньо ясно. Найімовірніше припущення Райта, який встановив, що гігантські клітини кісткового мозку - так звані мегакаріоцити, отшнуровивая виступи своєї цитоплазми, що містять азурофільних зерна, утворюють кров'яні пластинки. Дослідження Райта були підтверджені рядом авторів. Однак Максимов вважає кров'яні пластинки залишками дегенерировавшие і виштовхнути з еритроцитів ядер.
Функціональне значення кров'яних платівок також не може вважатися добре з'ясованим. Їх здатність швидко розпадатися, злипатися один з одним у щільні купки, з виникненням навколо таких купок ниток фібрину при згортанні крові говорить за активну участь кров'яних платівок у цьому процесі. За деякими даними, кров'яні пластинки (а також і ендотелій судин) містять тромбокінази. Здатність кров'яних платівок утворювати, при порушеннях кроветока, щільні згустки веде нерідко до закупорювання (тромбу) дрібних кровоносних судин.
На препаратах кров'яні пластинки найчастіше зустрічаються купками, причому іноді межі окремих пластинок зникають. Досвідчений дослідник, вивчаючи мазок крові, може відзначити тромбопенії (дуже мала кількість кров'яних пластинок) і тромбоцитів (підвищений їх кількість).
Передбачається, що при тромбопенії швидкість згортання крові різко знижена.
У крові птахів і всіх нижчих хребетних, поряд з еритроцитами і лейкоцитами, зустрічається третій тип клітин - тромбоцити. Кров'яних пластинок у них немає. Які філогенетичні взаємовідносини між тромбоцитами птахів і нижчих хребетних і кров'яними пластинками ссавців, невідомо.
Тромбоцити - це овальні (у амфібій веретеноподібні) клітини з великими ядрами і порівняно тонким шаром облягає їх цитоплазми, яка тільки на полярних кінцях клітини нагромаджується в кілька більшій кількості. У цитоплазмі нерідко видно (на кінцях клітини) кілька азурофільних зерен. Іноді цитоплазма вакуолізований (у гусей дуже часто). Цитоплазма дуже слабко забарвлюється в нежноголубой колір (іноді залишається безбарвною). Однак межі її видно дуже чітко. Ядро містить дрібні, інтенсивно забарвлюються грудочки хроматину.
Розміри тромбоцитів окремих видів сільськогосподарських птахів незначно розрізняються. Так, в гусака середня довжина тромбоцитів дорівнює 6,8 μ, ширина 4,5 μ; у курки - відповідно 8,5 μ і 5,3 μ У 1 мм 3 крові є від 25 до 70 тис. тромбоцитів.
Функція тромбоцитів вивчена ще менше, ніж кров'яних платівок ссавців. На препараті вони нерідко збираються купками, але клітинні кордону при цьому зберігаються.
За Мевес, в препараті свіжої крові тромбоцити дуже швидко піддаються некробіотичні зміни. При цьому вони злипаються купками, прилипають до скла, коротшають, але в той же час розширюються (набухають); цитоплазма, накопичено на одній стороні клітини, утворює все більше тоншає псевдоподии, що перетворюються в найтонші промені. У навколишньому плазмі навколо таких тромбоцитів починають утворюватися нитки фібрину. Все це дає підставу припускати, що функція тромбоцитів близька до функції кров'яних пластинок ссавців, тобто вони відіграють істотну роль у згортанні крові.
Освіта тромбоцитів у птахів локалізується в червоному кістковому мозку. За одними авторам, вони утворюються з особливих родоначальних клітин, з інших - з ендотелію судин.
Червоні кров'яні тільця (ЕРІТРОЦПТИ)
Кількісно переважаючою клітинною формою нормальної крові хребетних тварин є червоні кров'яні тільця - еритроцити. Зазвичай кількість їх в 1 мм 3 крові обчислюється мільйонами, в той час як кров'яні пластинки y птахів і нижчих хребетних-тромбоцити) обчислюються в тому ж об'ємі крові сотнями тисяч, а лейкоцити - тисячами.
Тому на мазках фізіологічно нормальної крові основний фон складають густо лежать один біля одного, пофарбовані еозином в яркорозовий або мідно-червоний колір еритроцити.
Червоні кров'яні тільця виконують в організмі виключно важливу функцію - перенесення кисню від легень до тканин. Це здійснюється завдяки вмісту в еритроцитах залізовмісного складного білка - гемоглобіну. Зазвичай в еритроцитах буває 33% гемоглобіну (відповідно 12-17% гемоглобіну в цільній крові). Кожен грам гемоглобіну, переходячи в оксигемоглобін, пов'язує 1,34 см 3 кисню, утворюючи з ним легко диссоциирующие хімічна сполука.
Сукупність еритроцитів всієї крові тварини називається ерітрояом. У коня вагою 500 кг еритроній складається з 436,5 трильйона червоних тілець, загальним обсягом у 14,4 л і містить 6,76 кг гемоглобіну. За мазку крові можна, при відомій навичці, скласти приблизну уяву як про кількість еритроцитів за густотою розташування клітин на рівномірно отриманому мазку, так і про насиченість їх гемоглобіном - за інтенсивністю забарвлення (методом Романовського) кожного окремого еритроцита. Для підрахунку кількості червоних кров'яних тілець і для точного визначення кількості гемоглобіну застосовують спеціальні, методи дослідження крові. Детальний опис цих методів дано в будь-якому курсі фізіології тварин. Картина червоної крові при спеціальній забарвленні мазка особливо цінна тим, що вона дає можливість розпізнавати регенеративні і дегенеративні зміни в еритроцитах за різною інтенсивністю фарбування їх специфічними фарбами, а також щодо зміни форми і внутрішньої структури еритроцитів.
А. нормоцитами
Картина червоної крові фізіологічно нормального дорослої тварини характеризується безумовним переважанням зрілих форм червоних кров'яних тілець - нормоцігпов. Порівняно дуже рідко серед нормоцитами, пофарбованих за методом Романовського в типовий мідно-червоний колір, трапляються і незрілі еритроцити - поліхроматофілія, пофарбовані в перехідні кольори від ясно синього, типового для юної форми, через синьо-фіолетовий, до фіолетово-червоного кольору, що наближається до нормальної забарвленні зрілого еритроцита. Таких форм буває не більше 1-5 на 1 000 зрілих еритроцитів у корів і коней і кілька більш у свиней, собак, морських свинок і щурів.
Нормоціт ссавців (за винятком верблюда і лами) являє собою круглу без'ядерну, плоску клітку, з потовщеними краями і кілька увігнутим центром. Власне, вірніше навіть було б говорити не про клітці, а про залишок клітини, оскільки нормоціт позбавлений обов'язковою і найважливішої складової частини клітини - ядра. (Тому для елементів червоної крові ссавців краще застосовувати назву «червоне кров'яний тільце», ніж «еритроцит», хоча останнє дуже широко поширене і має перевагу стислості.)
У верблюда і лами нормоцитами овальні.
У профіль нормоціт має вигляд бісквіта. Форму нормоцитами краще представити у вигляді пластинки або диска з потовщеними краями. За деякими новими даними, еритроцити в циркулюючої крові мають колоколообразную форму («шапочки») з увігнутим центром. На незабарвленому мазку червоні кров'яні тільця здаються жовтими або зеленувато-жовтими, відповідно кольору гемоглобіну в дуже тонких шарах. Периферична частина, як що містить більш товстий шар гемоглобіну, забарвлена інтенсивніше.
При забарвленні за Гімза еритроцити фарбуються в красивий рожево-червоний, а при фарбуванні по Папергейму - в мідно-червоний колір. Так як при цьому вибірково забарвлюється гемоглобін, то на периферії, в потовщеній частині еритроцита, де гемоглобіну більше, забарвлення виражена інтенсивніше. У центрі забарвлення кілька менш інтенсивна, але, в нормі, досить помітна. При порушеннях гемоглобіну-освіти, нормоцитами фарбуються атипично. Іноді різко ослаблена забарвлення лише центральної частини червоного кров'яного тільця. Тоді еритроцит здається червоним кільцем з просвітом в центрі, - так звана кільцева форма. Такі форми особливо типові навіть для фізіологічно нормальної крові собаки.
В інших випадках кількість гемоглобіну падає настільки сильно, що весь еритроцит (але, звичайно, в першу чергу його центр) забарвлюється набагато слабкіше нормального. Такі еритроцити називаються гіпохромна, а саме явище - гіпохромія.
Нарешті, можливі випадки, коли еритроцити містять більше гемоглобіну, ніж зазвичай. Такі еритроцити фарбуються інтенсивніше і називаються гіперхромними (явище гіперхромія).
При вивченні мазка з додатковим підрахунком кількості еритроцитів і визначенням кількості гемоглобіну можна встановити дуже важливий показник насиченості кожного окремого еритроцита гемоглобіном - так званий кольоровий індекс (показник) крові.
Кольоровий показник не може бути визначений, навіть дуже приблизно, по мазку крові. Здавалося б, інтенсивність забарвлення червоних кров'яних тілець еозином дає підставу для судження про насиченість еритроцитів гемоглобіном. Однак це далеко не так. Густота забарвлення еритроцита залежить, окрім чинника інтенсивності (концентрації гемоглобіну), також і від чинника ємності (розміри еритроцита, його товщина). При деяких анеміях (особливо при микроцитарную гіперхромною анемії) різко змінюється форма червоних кров'яних тілець. З плоских, щодо розтягнутих дисків вони перетворюються в товсті, набагато меншого діаметра, тільця. При цьому значно зростає густота забарвлення таких, що здаються більш дрібними, еритроцитів. У дійсності зміст гемоглобіну в таких еритроцитах не змінюється або змінюється в набагато меншій мірі, ніж це видається при розгляданні їх в забарвлених мазках.
. Кольоровий показник (У) позначає не абсолютний вміст гемоглобіну в одному еритроциті, але деяку пропорційну абсолютного змісту величину. Рівень гемоглобіну в кровп дано в умовних відсотках за Салі. У нормі кольоровий
показник дорівнює одиниці (У = 1,0). Число більше одиниці вказує на надлишок гемоглобіну в еритроциті (гіперхромія); кольоровий показник менше одиниці вказує на знижений вміст гемоглобіну (гіпохромія).
Кольоровий індекс для сільськогосподарських п лабораторних тварин треба розраховувати за такою повною формулою:
NRxHb
J = AHbxR
де: J - кольоровий індекс; NR - Нормальне для даного виду кількість еритроцитів у 1 мм 3 крові; NHb - Нормальний для даного виду тварин. Багато авторів вважають, що в судинах тваринного еритроцити мають чашеобразную або навіть колоколообразную форму (Гелі, Вайденрайх, Крюков). Можливі прижиттєві зміни
форми еритроцитів представлені на наступній схемі (рис. 20).
За величиною еритроцити можна підрозділити на власне нормоцитами (для коня - 5,6 μ діаметром), мікроцітов і макроціти. Мікроцітов це еритроцити меншого, ніж у нормі, діаметра (для коня - менше 5 μ), макроціти - більшого (7-6 μ). Внутрішня структура еритроцитів майже не з'ясована, але саме наявність цієї прижиттєвої структури здається досить імовірним. Інакше було б непостійної форми еритроцитів, «тіней еритроцитів» зрозуміло наявність їх еластичності, знаходження при гемолізі, проникнення в еритроцит тріпанозом без виходу з нього гемоглобіну, безсумнівно до указані наявність в ньому особливих специфічно окрашивающиеся утворень, і т. д. З поверхні червоне кров'яний тільце відмежоване липоидно-білкової мембраною (Крюков, Лепешинська). В якій мірі вона отдіференцірована гістологічно, представляється
ще спірним. Наявність чітко вираженої оболонки еритроцита захищається Немилова і Лепешинська.
Під оболонкою передбачається наявність «крайових обручів» - еластичних ниток, що утворюють остов еритроцита (рис. 21).
Досить імовірно наявність в еритроцитах «внутрішніх тіл», що вказуються Максимовим, Арнольдом і ін
Ряд дослідників (в тому числі Н. Д. Стражеско) розвивають уявлення про дуже складну прижиттєвої структурі так званого «досконалого еритроцита» ссавців. Ця, в значній мірі гіпотетична, структура представляється складається з:
1. Ядра, залишків ядра або кров'яних пластинок (кр. п.).
2. Протоплазми, що складається з:
a) радіальної структури, лише рідко видимої (С);
b) нагромадженої зверху в юному віці базофільною субстанції (поліхромазія);
c) коркообразной складної зовнішньої оболонки (М).
3. Архоплазми, що складається з:
a) більш світлого центрального речовини (ст. т.), відповідно угнутості («склоподібне тіло»);
b) Мікроцентр (центральне тільце) з з'єднанням (ц); в Мікроцентр є два дуже маленьких блискучих зернятка;
c) прилежащего, важко ізобразімого, завбільшки з 1-2 мікрона, кулястого, так званого «капсул'ного тіла» (К).
Навряд чи, проте, можна визнати таку складну структуру досить експериментально обгрунтованою. Більше того, є висловлювання про відсутність такої складної структури в еритроциті (Насонов). Не зовсім зрозуміло, які фізіологічні функції могли б бути пов'язані з такою складною й у значній мірі штучної структурою червоного кров'яного тільця (рис. 22).
Еритроцити птахів і нижчих хребетних істотно відрізняються від червоних кров'яних тілець ссавців перш за все тим, що навіть у зрілому стані містять ядра. Крім того, вони набагато більші за розміром і мають овальну форму.
Втрата зрілими формами еритроцитів ссавців ядра сталася, ймовірно, в процесі пристосування цих клітин до перенесення кисню
Ядерні еритроцити птахів і нижчих хребетних є повноцінними клітинами з інтенсивним обміном речовин і тому значна кількість стерпного ними кисню споживають самі. Еритроцити ж ссавців, втрачаючи ядро, різко знижують свій газообмін і, отже, мало споживають переносимий ними кисень. Без'ядерні еритроцити, отже, більш «економні» переносники кисню, ніж каріоціти птахів і нижчих хребетних.
У мазках крові еритроцити видно іноді тісно накладеними один на одного («монетні стовпчики»). Особливо різко ця здатність виражена в крові коня. Дуже важко отримати мазок кінської крові, де б еритроцити не утворювали, накладаючись один на одного, густий мережі. Окремі червоні кров'яні тільця зазвичай знаходяться тільки на тонкому, вільному краю мазка крові коня.
При повільному підсиханні мазка різко підвищується концентрація солей плазми крові, і в такому гіпертонічному розчині еритроцити, віддаючи воду, беруть неправильну зірчастої форми або форму тутових ягід.
Розміри еритроцитів в різних видів тварин значно варіюється, так само як і їх кількість. У таблиці 14 наведені середні дані про кількість і розміри зрілих еритроцитів у основних сільськогосподарських і лабораторних тварин. Загальною закономірністю є зворотна пропорційність між розмірами і кількістю еритроцитів у 1 мм 3 крові.
За В. П. Зайцеву, розмір еритроцитів коня залежить від типу конституції. Так, у астенічних коней середній діаметр еритроцитів 5,12 μ у мускулярного 5,02 μ і у пікнічеський 4,9 μ.
Відповідно до цього, і кількість еритроцитів, за В. П. Зайцеву, залежить від конституції: в 1 мм 3 крові астенічних коней міститься в середньому
9,97 млн. еритроцитів, у мускулярного 7,51 млн. і у пікніків 7,98 млн.
Дуже мало відомо про тривалість життя еритроцитів. У відношенні без'ядерних червоних кров'яних тілець є дані про те, що їхній життєвий цикл складає 3-4 тижні. Вони піддаються фагоцитозу в селезінці, в розширених капілярах її пульпи. Залізо їх гемоглобіну, разом з частиною піррольних кілець гематнна, відкладається в селезінці у вигляді залізовмісного пігменту - гемосидерину. Частина геміну, який втратив заліза, потрапляє в печінку і перетворюється там в жовчні пігменти. У печінці ж нагромаджується зазвичай і відоме кількість гемосидерину. Ця кількість доходить до величезних розмірів в патологічних умовах, коли відбувається посилений розпад еритроцитів і гемоглобіну. Утворений при цьому залізовмісний пігмент посилено нагромаджується не тільки в печінці і селезінці, а й кістковому мозку і лімфатичних судинах, зумовлюючи явища їх гемосидерозу.
Гемосидерин слід розглядати, як резерв заліза і піррольних кілець, який може бути використаний для синтезу гемоглобіну.
Б. ГЕНЕЗИС ЕРИТРОЦИТІВ
Постійне новоутворення еритроцитів відбувається у ссавців в червоному кістковому мозку. Основний, вихідної клітиною для розвитку еритроцитів є лімфоїдний еритробластів (по А. Н. Крюкову, прогемобласт, або проерітробласт). Лімфоїдний еритробластів є першим ступенем (етапом) диференціації лімфоідоціта (гемоцітобласта) в еритроцит. З лімфоїдного еритробластах виникає безпосередній попередник еритроцита - еритробластів. За рахунок розмноження і диференціації еритробластах і відбувається, при звичайному, фізіологічно нормальному кровотворенні, безперервне новоутворення еритроцитів.
Послідовне освіта еритроцита представити у вигляді наступної схеми:
Схема еритропоезу
Індиферентна мезенхімного клітина.
Лімфоідоціт (гемоцітобласт)
Лімфоїдний еритробластів (проерітробласт, прогемобласт)
Поліхроматофільний еритробластів
Еритробластів (нормобластов)
Еритроцит (нормоціт)
Стадія лімфоідоціта (гемоцітобласта) може дати, діференціруясь під відповідними гуморальними впливами, всі види клітин крові: гранулоцити, Агранулоціти і еритроцити. Лімфоїдний еритробластів (проерітробласт, прогемобласт) вже починає диференційованої в напрямку Ері-тропоеза і є в цьому відношенні уніпотенціальним.
Лімфоїдний еритробластів (проерітробласт). Проерітробласт, ця материнська клітина еритроцитів, за своєю структурою ще дуже близький до родоначальних кров'яним клітинам. Це велика клітка (до 20 μ в діаметрі у коня), з великим, округлим ядром і резкобазофільной цитоплазмою, кілька більш широкої, ніж у гемоцітобласта. Велике, майже правильної круглої або овальної форми ядро, при фарбуванні за Романовським, забарвлюється в інтенсивний червоно-фіолетовий колір. «Хроматиновой мережа ядра відрізняється надзвичайною правильністю свого сплетення, рівномірністю складають мережу примітивних ниток і в той же час ніжністю цього сплетення. У більшості випадків примітивні нитки більшого калібру, ніж у лімфоїдних материнських клітин, різкіше фарбувальні, і тому ядро отримує більш темну і більш насичене забарвлення »(А. Н. Крюков). У більш зрілих проерітробластов ядро має укрупнену структуру, що створює враження зернистості або рубчастого. Іноді всередині ядра зустрічаються невеликі круглястий або витягнуті ділянки, окрашивающиеся в синій або синьо-фіолетовий колір. Це нуклеоламі або, вірніше, псевдонуклеолі - ділянки протоплазми, що просвічує крізь структуру ядра.
Цитоплазма проерітробластов забарвлюється в інтенсивно-синій, з легким відтінком ультрамарину, колір. Вона виразно нитчасті і ділиться на дві зони: перинуклеарних, дуже вузьку, що має рожевий відтінок, і набагато більш широку зону інтенсивного фіолетово-синього або ультрамариново-синього кольору при фарбуванні за Романовським. Перехід між цими зонами плавний, але виразно помітний.
Ерітрпбласт. При подальшому дозріванні лімфоїдний еритробластів перетворюється в еритробластах - клітку, постійно продукує в кістковому мозку ссавців еритроцити. У фізіологічно нормальних умовах лімфоїдні еритроцити є спочиваючими, резервними, малодіференцірованнимі клітинами, безпосередньо не беруть участі в поточному еритропоезі. Тільки в патологічних умовах вони отримують гуморальний стимул до диференціації в еритробластів.
Еритробластів в кістковому мозку розмножуються за допомогою мітотичного (каріокінетіческого) поділу. Однак при ряді патологічних станів еритробластів можуть ділитися і амітотіческі, але при цьому виходять карликові форми еритроцитів. Отже, початковою клітиною фізіологічно нормального еритропоезу є еритробластів.
Первісна, юна форма еритробластах, так званий базофільний еритробластів, поступово переходить у поліхроматофільний, а цей - у ортохромний еритробластів.
У міру визрівання лімфоїдного еритробластах, структура його ядра стає все грубіше, перетворюючись поступово в типову для еритробластах радіарную, з великими, темними грудочки хроматину, зі світлими між ними проміжками, розташованими за типом спиць в колесі. Цитоплазма є блідіший, блеклосінего кольору (базофільний еритробластів) з поступовим переходом до синьо-фіолетового забарвлення (поліхроматофільний еритробластів). Надалі, завдяки поступовому накопиченню гемоглобіну, цитоплазма, пофарбована за Романовським, має спершу жовто-рожевий, а потім типовий для зрілого еритроцита мідно-червоний колір (ортохромний еритробластів). На цій стадії дозрівання ядро еритробластах ссавців різко зменшується і пікнотізіруется, радіар-ва структура поступово зникає, все ядро інтенсивно забарвлюється в вишнево-фіолетовий колір і приймає правильну круглу форму. Розміри созревающего еритробластах прогресивно зменшуються і, нарешті, досягають розмірів еритроцита.
Остання зміна еритробластів (каріоцітов) ссавців перед перетворенням в еритроцити полягає в зникненні ядра (енуклеація). До цих пір ще неясно, як це відбувається. А. Максимов та ряд інших дослідників вважають, що пікнотізірованное ядро еритробластах дедалі більше зсувається до периферії клітини, і, нарешті, виштовхується з неї. Деякі думають, що виштовхнутою ядро перетворюється в кров'яну платівку. Іноді перед виштовхуванням ядро, приймаючи спершу форму розетки і навіть сегментів, з'єднаних між собою містками, піддається розпаду на окремі осколки (каріорексис). При енуклеація еритробластах виникає еритроцит.
Більша частина дослідників вважає, однак, що при фізіологічно нормальних умовах ядро або його осколки розчиняються у клітині (каріолізис) (Паппенгейм, Негелі, Заварзін).
Нарешті, деякі вчені схильні припустити наявність обох шляхів звільнення еритробластах від ядра - і виштовхування його і розчинення (Стражеска, Крюков, Вайденрайх, Феррата).
В. мегалобластов І мегалоцитов
У молодих ембріонів, а також в патологічних умовах постембріонального кровотворення проерітробласти діференціруются в еритробластів дещо іншого типу, звичайно набагато більшого розміру, з ядром, яке зберігає до певної міри ніжну сітчастого більш ранніх стадій розвитку. Такі еритробластів називаються мегалобластов, а виникають з них еритроцити (теж зазвичай кілька більші і з великим насиченням гемоглобіном) - мегалоцитов. Таким чином, у період раннього ембріонального кровотворення всі еритробластів належать до мегалобластів. На більш пізніх стадіях розвитку мегалобластнческое кровотворення змінюється нормобластичну і лише в патологічних умовах в кістковому мозку знову зустрічаються мегалобластов, а в крові-мегалоціти.
У фізіологічній нормі всі або майже все червоне кровотворення дорослих тварин - нормобластичну, а судинна червона кров є тільки нормоцитами. Цей тип еритропоезу зберігається і в більшості анемій, і тільки при перніциозної анемії спостерігається мегалобластична тип кровотворення.
До цих пір були неясними філогенетичні та онтогенетичні взаємини мегалобластичного і нормобластичну кровотворення. Багато дослідників (Ерліх, Негелі, Стражеско та Яновський та ін) різко розмежовують ці два типи клітин, інші ж вважають, що обидві ці форми - лише крайній вираз єдиного типу еритропоезу, і ніякої принципової різниці між нормобластов і мегалобластов не існує (Крюков, Паппенгейм). По А. М. Крюкову, «мегалобластической кровотворення є в результаті превалювання клітинного розмноження над диференціацією. Мегалобластов розмножуються і дозрівають, не диференціюючи, в нормобластів. Кровотворення залишається на ембріональній мегалобластической ступені внаслідок підвищеного регенеративного вимоги і отруєння організму отрутою, що викликав захворювання. Різниця між мегалобластичних і нормо-бластіческім кровотворенням - тільки в ступені реакції кроветворітельной тканини. Нормальний еритропоез йде за рахунок розмноження існуючих в кістковому мозку еритробластів. Мегалобластична еритропоез зачіпає глибше ерітропоетіческіе потенції кроветворітельной тканини, і еритроцити виникають з первинних базофпльних лімфоїдних клітин, що мобілізуються в разі крайньої потреби та виключної потреби. Тюрк (Turk) думає, що чим далі просувається предсозреваніе не містять гемоглобіну еритробластів, перш ніж почнеться утворення гемоглобіну, тим більший нормобластичну характер забезпечений за виникаючими еритробластах, так як за цей час предсозреванія базофільний еритробластів у своєму ядрі і протоплазмі робиться менше, деяким чином концентрується . Чим швидше настає утворення гемоглобіну, тим клітина більше і тим більше і ніжніше структуровано ядро, тобто тим ближче клітина до ме-галобласту. Тому і початковий еритропоез у ембріона має мегалобластична тип, де примітивні еритробластів є похідними мезенхімних елементів, вторинний ж ерптропоез ембріона виникає вже з лімфоїдних предстадий, що мають час підготуватися до утворення Ері-тробласта. Можливо, що у ембріона первісна посилена потреба в червоних елементах задовольняється нагальної проліферацією цих клітин, дп-ференціація ж їх запізнюється. Тільки коли розвивається організм забезпечується червоними клітинами до певної міри, стає можливим більш надійний та більш стійкий еритропоез нормобластичну типу ».
Відкриття «фактора визрівання еритроцитів» (утворюється в стінці шлунка і концентрується в печінці), що сприяє переходу мегалобластов в еритробластів, з'ясовує відносини між останніми. Сабін вважає мегалобластов нормальної проміжною формою при еритропоезі. У його схемі є наступні стадії визрівання еритроцита:
Ретикулярна клітина
«Примітивна клітка»
Мегалобластов
Ранній еритробластів
Пізній еритробластів
Нормобластов
Поліхроматопіт або ретікулоціт
Зрілий еритроцит.
Г. Регенеративний і дегенеративні зміни червоних кров'яних тілець
Регенеративні зміни в еритроцитах спостерігаються при посиленому еритропоезі. Повне визрівання еритроцита може при цьому кілька порушуватися, даючи незвичайні для нормальної крові форми, і в судинну кров можуть надходити не зовсім зрілі форми червоних кров'яних тілець, іноді навіть самі ранні їх предстадий.
Прикладом регенеративних порушень нормального типу дозрівання еритроцитів є передчасна енуклеація ядра, у той час як цитоплазма, зберігаючи притаманні юним клітинам нуклеїнові кислоти і не нагромадивши гемоглобіну, залишається ще базофільною або поліхроматофільной. Звідси поява в судинній крові поліхроматофільних або навіть базофільних еритроцитів. Іноді базофілія цитоплазми зберігається у вигляді невеликих ділянок, плям, острівців на ортохромной поверхні еритроцита. У цьому випадку з'являються базофільно пунктировать еритроцити. Нарешті, в дозрілому еритроциті можуть зберегтися залишки ядра - у вигляді окремих уламків (азурофільних пунктація, тільця Жолі) або у вигляді залишків ядерної оболонки (кільця Кабота) (Cabot).
Іноді, навпаки, дозрівання ядра при стимульованої еритропоезі відстає від дозрівання цитоплазми. У цьому випадку диференційована, Ортохроматичні цитоплазма оточує незріле, ніжно структуроване ядро. Аналогічне явище виходить при прискореному дозріванні цитоплазми.
Всі ці, самі по собі патологічні відхилення у дозріванні еритроцитів свідчать про посилену новоутворенні червоних кров'яних тілець, їх регенерації, про регенеративних зрушення в червоному кістковому мозку.
Однак існують і такі зміни еритроцитів, які відбуваються при пригніченні еритропоезу якими-небудь шкідливими впливами, провідними до явищ дегенерації в червоному кістковому мозку. Такі дегенеративні зміни виражаються у зміні величини (анізоцитоз), форми (пойкилоцитоз) і окрашиваемость (поява гіпер-і гіпохромних форм) еритроцитів.
У процесі дозрівання регенеративні форми, під впливом шкідливих впливів, можуть також піддаватися дегенеративних змін: у цьому випадку в еритроцитах виникають змішані, дегенеративно-регенеративні зміни.
«Щодо істинного значення різних патологічних форм червоних кров'яних елементів не існує повної одностайності в поглядах, і те, що одними визнається за дегенеративні зміни, інші те ж саме вважають регенеративними змінами. Але загалом, виходячи лише з морфологічних змін клітини при прогресивній диференціації її, можна скласти правильне і послідовне уявлення і про патології еритроцитів »(А. Н. Крюков).
Слід мати на увазі, що малі дози кров'яних отрут впливають на кровотворну систему стимулююче, викликаючи, головним чином, явища регенерації (хоча в невеликій мірі викликають і дегенеративні зміни в еритроцитах). При великих дозах кров'яних отрут превалюють явища дегенерації, хоча в якійсь мірі можна вловити і регенеративні зміни еритроцитів. Тільки при дуже великих дозах кров'яних отрут дегенерація зовсім пригнічує всякі ознаки регенерації.
Поліхроматофілія, ретикулоцити і базофільно пунктировать еритроцити. Одним з основних регенеративних ознак червоної крові є знаходження в мазку поліхроматофілія, ретікулоці-тов і базофільно пунктировать еритроцитів.
При звичайному забарвленні за Романовським поліхромазія виявляється за синювато-фіолетовим або рожево-фіолетового забарвлення еритроцитів. При суправіталь-ної забарвленні спиртовим розчином брілліанткрезілголубой зрілі еритроцити фарбуються в зелений колір, а в молодих, недостиглих формах виявляються ніжні яркосініе сіточки (ретикулоцити) або окремі темносині точки і цятки (базофільно пунктировать еритроцити).
Пояснення цього полягає у самій сутності визрівання цитоплазми. Юна цитоплазма багата нуклеїновими кислотами, що роблять її резкобазофільной (Кедровський). Нуклеїнові кислоти відіграють велику роль у синтезі білків, зокрема, глобулінів у лімфоцитах і, очевидно, гемоглобіну в еритробластах. У міру визрівання червоних кров'яних клітин, базофілія цитоплазми зникає, так як кількість нуклеїнових кислот в ній зменшується. Але, при посиленій регенерації, у молодих, що надходять в судинну кров ще Недоспілими, еритроцитів, базофілія частково зберігається у вигляді поліхромазія, якщо вся цитоплазма ще дифузно містить багато нуклеїнових кислот, або у вигляді ба-зофільной пунктаціі, якщо нуклеїнові кислоти зосереджені в окремих місцях еритроцита.
Кількість поліхроматофільних еритроцитів в нормальній крові коні і корови дуже невелика (не більше 1-3 на тисячу ортохромних еритроцитів). У всіх молодих тварин, а у свиней, собак, морських свинок і щурів - також і в дорослому стані, поліхроматофілія значно більше. Особливо багато поліхроматофілія у новонароджених.
При анеміях і деяких інших захворюваннях, при посиленні регенерації в червоному кістковому мозку, кількість поліхроматофілія в судинній крові різко зростає.
Зміни в еритроцитах, пов'язані зі збереженням залишків розпаду ядра. а) Червона поліхроматофілія, червона пунктація і червона штріховатост' еритроцитів.
При фарбуванні за Романовським в еритроцитах можна спостерігати не тільки базофільну, але і азурофільних поліхромазія і пунктаціі. У цьому останньому випадку, завдяки виборчому поглинанню Азура, еритроцит або цілком пофарбований у червоно-фіолетовий колір (червона поліхромазпя) або в ньому виявляється червоно-фіолетова (червона) пунктація у вигляді окремих точок або грудочок. Здається, азурофільних поліхромазія виникає при розчиненні ядерної субстанції і хроматолізе, а азурофільних пунктація - при розпаді ядра на окремі, дуже маленькі грудочки (каріорексис).
Того ж походження і червона штрихуватим еритроцитів, особливо докладно вивчена Негелі. Вона виражається в наявності в еритроцитах окремих червоних (червоно-фіолетових) цяток і штрихів.
У нормі червона поліхромазія і пунктація еритроцитів не зустрічаються ні в дорослих тварин, ні у молодих. Ці явища спостерігаються тільки при важких анемічних станах.
б) хроматиновой порошинка Вайдеірайха, тільця Говелл - Жолі та кільця Кабота в еритроцитах. Більші, зберегли ще залишок структури, ядерні залишки в еритроциті дають так звані тільця Говелл-Жолі, хроматиновой порошинку Вайденрайх і кільця Кабота.
Хроматиновой порошинка Вайденрайх - це останній залишок хроматину ядра у вигляді тонкого, короткого штриха, зернятка, «порошинки», забарвлюється в вишнево-червоний колір за Романовським. Припущення, що це залишок центрозоми, мало ймовірно.
Тельця Говелл-Жолі - трохи більше великі ядерні уламки (хроматіновие грудочки), що дають характерні тинкторіальні реакції хроматину. За Романовським вони забарвлюються в вишнево-червоний колір, метілгрюнпіроніном - в зелений. Вони фарбуються також гематоксиліном. Наявність цих тілець вказує на не цілком закінчився розпад і розчинення ядра і, отже, на юність червоного кров'яного тільця.
Кільця Кабота представляють, мабуть, залишки ядерної оболонки або периферичного шару ядра, що утворюють замкнуті тонкі кільця, часто у вигляді цифри 8 або складних петель. Вони фарбуються азурит в вишнево-червоний колір.
По А. М. Крюкову, «вони суть патологічні продукти, що виникають в результаті незвичайного процесу енуклеація за допомогою каріолізис і вакуолизации в противність нормальної центропетальной редукції ядра (Паппенгейм) або виштовхування ядра (Максимов). Вони є виразом процесу дозрівання виключно патологічного (Феррата). Але в той же час служать симптомом регенерації і характеризують недозрілість червоного елементу ».
Вони з'являються, і то не завжди, лише при тяжких анемічних і лейкемічних процесах.
Зміни величини і форми еритроцитів. Зміни величини і форми еритроцитів, особливо грубі й значні, сигналізують про дегенеративних змінах в кровотворної системи.
До таких змін належать:
а) Анізоцптоз - поява в судинній крові еритроцитів різного, не типового розміру. Форми, великі ніж звичайний еритроцит (нормоціт), називаються макроцітамі, форми менші - мікроцітов. Еритроцити ненормальних розмірів виникають іноді з відповідних материнських клітин - макро-і мікроерітробластов. Частіше, однак, вони утворюються при сморщивании або «набуханні» нормоцитами.
Слабкий анізоцитоз не обов'язково пов'язаний з дегенерацією червоного кісткового мозку. Він звичайний в дуже молодих сільськогосподарських і, особливо, лабораторних тварин.
Сильно виражений анізоцитоз - завжди ознака дегенерації ерітропоетіческой системи.
б) Пойкілоцітов - поява в судинній крові еритроцитів ненормальною, дегенеративної форми. Вони можуть бути схожі на грушу, гімнастичну гирю, бісквіт або мають своєрідні довгі відростки. Краї пойкілоцітов часто нерівні, зубчасті або гофровані.
Виступи еритроцитів можуть отшнуровиваться, виходять маленькі округлені уламки - шістоціти. Таке отшнуровиванпе, дивлячись за своїм характером, називається плазморексісом і плазмо-шізом.
Великі шістоціти легко змішати з мікроцітов. Однак, в останніх завжди є типова, більш бліда окрапшваемость центру клітини, чого немає в шістоцнта.
По А. М. Крюкову, «пойкилоцитоз можна розглядати, як подальшу дегенеративних щабель анізоцитоз. Пойкілоціти і шістоціти виникають на периферії, але для їх походження, повідо-мому, потрібно продукція кістковим мозком дуже мало стійких елементів, які легко піддаються зміни під впливом змінилася у фізико-хімічному відношенні кров'яної плазми ».
в) анізохромія - ненормально слабка або дуже сильна окрашиваемость еритроцитів (гіпо-та гіперцітохромія). В основі їх лежать, безсумнівно, коливання насиченості еритроцита гемоглобіном. У випадках різко вираженою р і п про х р о-м і і центр еритроцита майже або зовсім не фарбується, - виникають так звані кільцеподібні форми еритроцитів. Це особливо характерно для хлорозу. Гіпохлороз не завжди веде до збіднення крові гемоглобіном. Іноді (частіше тимчасово) недостатня насиченість еритроцитів гемоглобіном може компенсуватися підвищеним їх кількістю - полі-цітеміей. Гіперхром і я особливо характерна при перніциозної анемії. (Але, наприклад, при ні-кроцітарной гіперхромною анемії гіперхромія пов'язана з потовщенням клітин за рахунок зменшення їх діаметру.)
г) півмісяцеві тіла. Різко вираженої дегенеративної формою еритроцитів є півмісяцеві тіла. Це бліді, майже безбарвні диски, розміром в 10-15 μ а більш, обмежені блідо-фіолетовим шаром. У дуже великих півмісяцевих тел цей шар дуже вузьке. Розірвалася півмісяцеві тіла дають серповидні форми, нерідко з вигнутими, як би вигинались кінцями.
По А. М. Крюкову, ці утворення можна розглядати «як відбуваються в результаті процесу фізіологічної інволюції нормальних еритроцит-тов, так як вони зустрічаються в значній кількості у абсолютно здорових індивідуумів». Освіта півмісяцевих тіл відбувається таким чином, «що еритроцити робляться блідіший і метахроматіч-ними, далі вакуолізуються, вакуоля в еритроциті збільшується, субстанція ж еритроцита оточує цю вакуолі серповидно, причому одночасно сильно збільшуються розміри інволюційної форми.
Надалі, внаслідок розриву стінки вакуолі, виходять вільні серпи або полумісячну. Дійсно, подібні форми дуже нерідко доводиться бачити в крові, не виявляє дегенеративних ознак ».
Метгемоглобінеміческіе внутрішні тільця в еритроцитах. При дегенерації еритроцитів під впливом таких кров'яних отрут, як фенілгідразин, нітробензол, піридин, в еритроцитах виникають внутрішньоклітинні метгемоглобіновие освіти - так звані тільця Ерліха - Гейнца.
При супровітальной забарвленні метілвіолетом вони забарвлюються в інтенсивний синій колір, а нільсульфатголубая забарвлює їх в зеленувато-синій колір. Вони вибірково забарвлюються кислими фарбами.
Зазвичай в еритроциті знаходиться одне тільце Гейнца. Воно розташоване або центрально, або більш-менш ексцентрично, а іноді навіть випинається зразок дзьобика за контури клітини.
Можливо, що тільце утворено не з чистого гемоглобіну: крім метгемоглобіну (чи, може, іншого дуже стійкого дериватів гемоглобіну), у ньому знаходили ліпіди, пов'язаний з білками діамінофосфатід, трохи холестерину. З переконливістю доведено присутність в тільцях заліза і піррольних кілець. Тельця Ерліха - Гейнца хімічно дуже стійкі, - вони не розчиняються в пирогаллол, воді, ефірі і бензині і протистоять дії сапоніну.
Загальна оцінка регенеративних та дегенеративних змін еритроцитів. Класифікація патологічних зміні червоної крові. А. Н. Крюков робить наступний прекрасний аналіз взаємин регенеративних та дегенеративних змін до червоної крові:
«При скільки-небудь вираженому недокрів'ї картина крові дає одночасно регенеративні і дегенеративні зміни еритроцитів. Як серед перших, так і серед других є градації, які дають можливість судити про ступінь ураження кроветворітельного апарату, про тяжкість захворювання. Найбільш легкий ступінь регенерації визначається поліхроматофілія еритроцитів, як вираженням прискореної ерітропоетіческой діяльності кісткового мозку. Більш підвищена функція супроводжується появою базофпльной пунктаціі »(вона має місце і в ядерних еритроцитів птахів. - В. М.),« далі - еритроцитів з тільцями Жолі, ще далі - нормобластов. Поява мегалобла-стів буде вказівкою на гіперфункцію, на ентдіф-ференціацію кроветворітельной тканини, коли нормальна регенерація вже стає недостатньою. Точно так само по дегенеративних змін еритроцитів можна судити про тяжкість процесу. Я управлін гипохромии і анізоцитоз будуть менш значними змінами, ніж пойкилоцитоз і шістоцітоз, де деформуються і руйнуються еритроцити. Базуючись на ступенях обох роду змін в еритроцитах, можна лише до певної межі будувати масштаб анемічного стану, тому що існують і такі форми недокрів'ї, де, незважаючи на незначні морфологічні зміни в крові, тим не менш тяжкість страждань безмірна, завдяки арегенератівному станом кроветворітельного апарату. Точно так само прагнення конструювати специфічні картини еритроцитарних змін, які б характеризували певні хворобливі форми, опиняються по суті несостоят тільних і можливі лише у вузьких траніцах. Так, центральна гіпохромія притаманна хлорозу, гіперхромія і мегалобластоз - перніциозної анемії. Проте, й інші хворобливі процеси можуть протікати з цими картинами. Якщо регенеративна картина крові є відображення того, що відбувається в кроветворітельной тканини, то дегенеративні зміни еритроцитів є в результаті впливу шкідливих впливів на еритроцити у периферичній крові, а також наслідком безпосереднього отруєння кроветворітельной тканини ».
«... Дійсна картина крові є симптом регенеративного і дегенеративного взаємодій».
Різні ступені патологічних змін крові часто систематизують в такі чотири категорії.
Попередня стадія. Роздратування (досить простого зменшення кількості, завдяки втраті крові) викликає негайне пряме надходження в кров резервних клітин (при більш сильному ступені роздратування - нормальних юних форм) внаслідок хемотаксису або, що більш імовірно, внаслідок васкулярної гіперемії, бути може регульованою вегетативної нервової системою, - короткочасна картина крові при подразненні.
1. Прихована регенерація. Кістковий мозок у стані починається гіпертрофії. На периферії звичайно знаходять значне збільшення числа платівок і помірний лейкоцитоз. Виражені юні форми ще відсутні. У нормі нетривала проміжна стадія (2 - 3 дні), - псевдоапластіческіе або олігоцітотіческіе картини крові (ступінь 1а).
2. Проста регенерація. Збільшення поліхромазія і її підвидів - ознака посиленою, прискореної діяльності кровотворних органів (гіпертрофія кісткового мозку); при наявності токсичного чинника - базофильная пунктацпя, - поліхроматичних картина крові (ступінь ІІа).