Методи біохімічних досліджень

[ виправити ] текст може містити помилки, будь ласка перевіряйте перш ніж використовувати.

скачати

МІНІСТЕРСТВО ОСВІТИ
Пензенська ДЕРЖАВНИЙ ПЕДАГОГІЧНИЙ УНІВЕРСИТЕТ ІМЕНІ В.Г. БЕЛІНСЬКА
Прийнято
на засіданні Вченої ради природничо-географічного факультету
протокол засідання ради факультету
№ ___від «___» _________2007 р.
Декан
факультету _____________Н.А. Кагіна
ЗАТВЕРДЖУЮ
Проректор з навчальної роботи
_________________М.А. Пятин
«___» _________2007 Р.
ПРОГРАМА НАВЧАЛЬНОЇ ДИСЦИПЛІНИ
Методи біохімічних досліджень
СПЕЦІАЛЬНІСТЬ 020208 - «Біохімія»
Факультет природничо-географічний
КАФЕДРА біохімії
Пенза - 2007

1. Кваліфікаційні вимоги
Кваліфікація випускника - біохімік.
Нормативний термін освоєння основної освітньої програми підготовки біохіміка за спеціальністю 020208 Біохімія при очній формі навчання 5 років.
Кваліфікаційна характеристика випускника
Спеціаліст-біохімік здійснює діяльність з вивчення будови і властивостей хімічних сполук, що входять до складу живих організмів, метаболізму та його регуляції. Розробляє нормативні документи в своїй області діяльності, організовує і виконує експедиційні роботи і лабораторні дослідження; аналізує отримувану польову та лабораторну інформацію, узагальнює і систематизує результати виконаних робіт, використовуючи сучасну обчислювальну техніку; складає науково-технічні звіти та іншу встановлену документацію, стежить за дотриманням встановлених вимог, чинних норм, правил і стандартів у сфері своєї діяльності. Проводить експериментальні дослідження в своїй області, доручає їм завдання, бере участь у розробці і здійсненні нових методичних підходів, обговоренні, оцінки та публікації результатів, проводить патентну роботу, бере участь у роботі семінарів та конференцій, складанні патентних заявок.
У виробничих і медичних організаціях проводить біохімічну аналітичну роботу, бере участь в діагностиці та експертизі, сертифікації продуктів виробництва.
Виходячи зі своїх кваліфікаційних можливостей, спеціаліст-біохімік підготовлений до самостійної роботи на посадах біохіміка, лікаря-лаборанта, біолога, лаборанта-дослідника, інженера-дослідника, наукового співробітника в науково-дослідних і науково-виробничих установах, та інших посадах, відповідно до вимогами Кваліфікаційного довідника посад керівників, спеціалістів та інших службовців, затверджених постановою Мінпраці РФ від 21.08.98 № 37.
Спеціаліст-біохімік підготовлений до педагогічної діяльності на посаді викладача в середній школі та установах професійної освіти за умови освоєння додаткової освітньої програми психолого-педагогічного профілю.
Область професійної діяльності
Дослідження будови і фізико-хімічних властивостей хімічних сполук, що входять до складу живих організмів, метаболізму і молекулярних механізмів його регулювання.
Об'єкти професійної діяльності
Віруси і мікроорганізми, клітинні органели і поодинокі клітини, багатоклітинні організми (рослини і тварини).
Види професійної діяльності
· Проведення наукових досліджень в галузі біохімії та молекулярної біології: збір і підготовка наукових матеріалів, кваліфікована постановка експериментів, обробка результатів клінічних аналізів і експериментальних досліджень.
· Науково-виробнича і організаційна діяльність;
· Педагогічна діяльність (за умови освоєння відповідної освітньо-професійної програми педагогічного профілю) викладання в середній і вищій школі, здійснення просвітницької діяльності.
· Інші види діяльності, що дозволяють використовувати базову біологічну підготовку та підготовку за спеціальністю 020208 - Біохімія.

2. Вимоги ГОС з дисципліни
Методи препаративної хімії і біохімії; методи виділення органел; різні види хроматографії, в тому числі афінна хроматографія; різні види електрофорезу, в тому числі імунний електрофорез; методи диференціального центрифугування, спектральні методи, методи мічених атомів; методи хімічної модифікації білків і мембран; програмування та ін
3. Цілі і завдання дисципліни
Курс «методи біохімічних досліджень» повинен ознайомити студентів з основними методами досліджень, які використовуються в біохімії.
Метою курсу є підготовка висококваліфікованих біохіміків, здатних виконувати дослідження, самостійно планувати хід роботи та підбирати необхідні методи для вирішення конкретних завдань.
«Методи біохімічних досліджень» - це лекційний курс.
У курсі «методи біохімічних досліджень» вивчаються теоретичні основи біохімічних методів досліджень, основні методологічні та методичні прийоми, необхідні для успішного застосування цих методів. Особливу увагу в курсі відводиться сучасним хроматографічним та електрофоретичних методів досліджень, видам сучасного лабораторного устаткування і прийомам роботи з ним.
Успішне освоєння курсу «методи біохімічних досліджень» підготує студентів до проведення наукових досліджень в галузі біохімії та молекулярної біології.

4. Місце дисципліни у професійній підготовці студентів
Дисципліна методи біохімічних досліджень відноситься до спеціальних дисциплін і дисциплін спеціалізації федерального компонента.
Розподіл часу, відведеного на вивчення дисципліни за навчальним планом
Форма навчальної роботи
Форма навчання
Очна
По семестрах
7
8
Загальна трудомісткість, всього годин
36
44
Аудиторні заняття (АЗ)
17
22
Лекції (Л)
17
22
Практичні заняття (ПЗ)
Семінари (С)
Лабораторні заняття (ЛЗ)
Інші види аудиторних занять
Самостійна робота (СР)
19
22
Контрольна робота
Комп'ютерне тестування
Курсова робота
+
Форма підсумкового контролю
(Залік, іспит)
іспит
Тематичні плани для очної форми навчання на 7 семестр
№ п / п
Теми
Кількість годин
Лекцій
Самост.
1.
Обладнання біохімічної лабораторії. Загальні принципи біохімічного дослідження.
2
2
2.
Руйнування клітин і екстракція. Центрифугування.
2
2
3.
Поділ білків шляхом осадження. Осадження нуклеїнових кислот.
3
3
4.
Буферні розчини та спеціальні добавки. Ультрафільтрація. Діаліз. Детергенти та їх застосування.
2
2
5.
Загальні принципи хроматографії, класифікація хроматографічних методів.
2
2
6.
Матеріали матриць сорбентів і обмінників. Техніка колонкової хроматографії.
2
2
7.
Адсорбційна та розподільна хроматографії.
2
2
8.
Тонкошарова хроматографія.
1
2
9.
Іонообмінна хроматографія.
1
2
Разом:
17
19
На 8 семестр
№ п / п
Теми
Кількість годин
Лекцій
Самост.
1.
Іонообмінна ЖХВД білків. Хроматофокусірованіе.
1
1
2.
Адсорбційна хроматографія.
2
2
3.
Гель-фільтрація.
3
3
4.
Теоретичні та методичні основи електрофорезу.
3
3
5.
Ізоелектричного фокусування і ізотахофорез.
2
2
6.
Виявлення, кількісне визначення і характеристика
макромолекул після електрофорезу.
2
2
7.
Принцип імунного електрофорезу. Іммунофіксація.
1
1
8.
Електросінерез. Електроіммуноаналіз. Перехресний імуноелектрофорез.
1
1
9.
Методи мічених атомів.
2
2
10.
Спектрофотометричні методи аналізу.
2
2
11.
Флюоріметріческіе методи аналізу.
1
1
12.
Імуноферментний аналіз
1
1
13.
Радіометричний аналіз. Мас-спектроскопія.
1
1
Разом:
22
22

Зміст дисципліни
1. Введення
Історія розвитку методів біохімічних досліджень. Роль методичного забезпечення в розвитку біохімії. Класифікація методів дослідження в біохімії. Застосування біохімічних методів у медицині, біотехнології, екології та ін галузях
2. Методи препаративної хімії і біохімії
Особливості біологічних макромолекул як об'єктів дослідження: висока молекулярна маса, денатурація, поліелектролітний природа, низька швидкість дифузії.
Обладнання біохімічної лабораторії, спеціальні матеріали та реактиви. Відділення опадів і нерозчинних речовин. Центрифугування. Ультрафільтрація. Деякі прийоми, використовувані при роботі з білковими розчинами. Діаліз.
Поділ білків шляхом осадження. Загальні положення. Розчинність білків при низькій концентрації солей. Висалювання при високій концентрації солі. Осадження білків органічними розчинниками. Осадження білків органічними полімерами та іншими речовинами. Осадження внаслідок виборчої денатурації. Осадження нуклеїнових кислот. Кристалізація білків.
3. Методи виділення органел
Приготування екстракту. Вихідний матеріал. Особливості різних видів живих організмів як вихідний матеріал біохімічних досліджень. Свіжість сировини і його зберігання.
Руйнування клітин і екстракція. Способи руйнування клітин. Розчини, використовувані для екстракції. Буферні розчини та спеціальні добавки. Оптимізація і освітлення екстракту. Особливості приготування екстрактів рослинних тканин і мікроорганізмів.
Методи, використовувані при очищенні білків, асоційованих з частинками. Детергенти та їх застосування.
4. Методи диференціального центрифугування
Центрифуга, її устрій. Сили, які діють на частинку в роторі центрифуги. Швидкість осадження частинок. Константа седиментації. Роздільне осадження частинок. Диференціальне центрифугування. Центрифугування в градієнті щільності. Методи отримання ступінчастих і безперервних градієнтів щільності.
5. Хроматографія
5.1. Класифікація та елементи теорії хроматографії
Класифікація хроматографічних методів. Класифікація за принципом фракціонування. Класифікація за способом елюції. Класифікація за розташуванням нерухомої фази.
Елементи теорії хроматографічної елюції. Хроматографічний процес. Хроматографічна зона. Концепція теоретичних тарілок. Кінетична теорія хроматографії. Дозвіл близько мігруючих зон. Оптимізація умов фракціонування. Градієнтна елюція. Хроматографія макромолекул.
5.2. Матеріали матриць сорбентів і обмінників
Целюлоза. Гелі на основі декстрану (сефадекса). Агарози. Поліакріламідний гель. Сефакріли. Ультрогелі. Полістирольні смоли. Поліамідні смоли. Кизельгур (цілить, діатомова земля). Силікагель. Окис алюмінію. Пористе скло. Оксіапатіт.
5.3. Техніка колонкової хроматографії
Хроматографія при низькому тиску. Хроматографічні колонки. Резервуари для елюента. Змішувачі. Внесення препарату в колонку. Перистальтичні насоси. Детектори. Колектори фракцій. Допоміжне обладнання.
Хроматографія при високому тиску. Колонки. Внесення препарату. Завдання градієнта елюції. Детектори.
Хроматографія при помірному тиску.
5.4. Гель-фільтрація
Загальна характеристика методу. Принцип методу. Коефіцієнти розподілу. Графік селективності. Ефективність фракціонування.
Характеристика продажних матриць.
Методичні особливості гель-фільтрації при низькому тиску. Підготовка матриці. Набивання колонки. Перевірка якості набивання. Визначення V 0. Внесення препарату. Підтримання робочого режиму. Регенерація колонки.
Вибір параметрів хроматографічного процесу. Вибір матриці. Розміри колонки. Вибір елюента. Швидкість елюції. Оптимізація умов експерименту.
Області застосування. Очищення і фракціонування макромолекул. Визначення молекулярної маси білка. Знесолення і зміна буфера.
Гель-фільтрація при високому тиску. Гель-фільтрація в тонкому шарі.
5.5. Розподільна хроматографія
Принцип методу. Нормальнофазовая розподільна хроматографія. Розподільна хроматографія в звернених фазах.
Обратнофазовая гідрофобна хроматографія при низькому тиску. Немодифіковані сефароза. Елюція знижується градієнтом концентрації солі. Гідрофобізовані гелі агарози.
Розподільна хроматографія при високому тиску.
5.6. Адсорбційна хроматографія
Принцип методу. Сорбенти. Приготування оксіапатіта. Сорбційні властивості оксіапатіта. Сорбція білків. Сорбція нуклеїнових кислот. Деякі особливості хроматографії на оксіапатіте. Фракціонування та очищення білків. Фракціонування та очищення нуклеїнових кислот. Поділ двунітевой і однониткових ДНК. Очищення гібридів ДНК-РНК.
5.7 Іонообмінна хроматографія
Принцип методу. Компоненти хроматографічної системи. Іонообмінники. Елюент. Хроматографіруемие речовини. Хроматографічний процес. Іонні взаємодії речовини та сорбенту. Управління силою іонного взаємодії. Неіонні взаємодії речовини та сорбенту.
Характеристики продажних іонообмінників.
Підготовка обмінників до набивання в колонку. Преформірованіе і промивання. Переклад в потрібну іонну форму. Небезпека поглинання СО 2.
Застосування статичної іонообмінної хроматографії. Нейтралізація лугу або кислоти без утворення солі. Заміна іонів. Знесолення розчинів. Видалення деяких органічних домішок. Концентрування препаратів. Поділ компонентів суміші, сильно розрізняються спорідненості до обмінника.
Вибір умов динамічної іонообмінної хроматографії. Вибір іонообмінника. Вибір типу елюції. Вибір рН буфера для елюції. Вибір концентрації солі. Збереження нативного препарату. Вибір обсягу елюента. Вибір розмірів колонки. Вибір швидкості елюції. Збір та обробка фракцій. Регенерація іонообмінника.
Застосування динамічної іонообмінної хроматографії.
Іонообмінна ЖХВД білків.
Хроматофокусірованіе. Принцип методу. Колонки для хроматофокусірованія. Фракціонування білків.
5.8. Адсорбційна хроматографія
Принцип методу. Компоненти аффинного сорбенту. Матриці. Активація матриць. Спейсери. Активовані Спенсер. Ліганди з індивідуальною специфічністю. Ліганди з груповою специфічністю. Посадка лігандів на активовані матриці. Посадка лігандів на спейсери за допомогою конденсуючий агентів. Характер закріплення ліганду на матриці. Іммобілізація нуклеїнових кислот як лігандів. Сорбенти для ковалентного хроматографії.
Вибір умов хроматографії. Вибір сорбенту і характеру хроматографічного процесу. Вибір концентрації ліганду. Завантаження сорбенту. Вибір буфера для посадки речовини. Вибір елюенту і методу елюції. Біоспеціфіческая елюція. Проведення експерименту. Електрофоретична елюція. Афінна елюція з іонообмінника.
Застосування афінної хроматографії.
Афінна ЖХВД. Афінних електрофорез
5.9. Тонкошарова хроматографія
Особливості методу. Техніка ТШХ. Приготування пластинок. Нанесення препаратів. «Виявлення» платівок (хроматографічна елюція). Виявлення плям або смуг. Елюція речовини з платівки.
Застосування ТШХ.
6. Електрофорез
6.1. Теоретичні та методичні основи електрофорезу
Принципи електрофорезу. Електрофорез з рухомою кордоном. Зональний електрофорез без підтримуючого середовища. Безперервний електрофорез в тонкому шарі рідини (проточний електрофорез у вільній середовищі). Зональний електрофорез в градієнті щільності.
Зональний електрофорез в підтримуючої середовищі з капілярною структурою. Електрофорез на фільтрувальному папері. Електрофорез на ацетат целюлози.
Електрофорез у колонках і блоках гранульованої підтримуючого середовища.
Електрофорез у агаровому і агарозном гелях. Теорія електрофорезу в агаровому (агарозном) гелі. Аналітичний електрофорез в агаровому (агарозном) гелі. Препаративний електрофорез в агаровому і агарозном гелях.
Електрофорез у крохмальних гелях.
Електрофорез у поліакриламідному гелі. Теорія електрофорезу в поліакриламідному гелі. Фізико-хімічні властивості складових частин гелю. Аналітичний електрофорез в поліакриламідних гелях. Препаративний електрофорез в поліакриламідному гелі
6.2. Ізоелектричного фокусування і ізотахофорез
Ізоелектричного фокусування. Принцип методу. Формування градієнтів рН. Методичні прийоми ізоелектричного фокусування. Труднощі, пов'язані з поділом білків методом ІЕФ. Аналітичне та препаративної ізоелектричного фокусування
Ізотахофорез
6.3. Виявлення, кількісне визначення і характеристика
макромолекул після електрофорезу
Виявлення макромолекул з поглинання ультрафіолетового світла і флуоресценції. Виявлення розділених при електрофорезі компонентів шляхом їх фарбування. Сканування забарвлених Електрофореграма. Фотографування Електрофореграма. Висушування поліакриламідних гелів. Розрізання поліакриламідних гелів. Виявлення радіоактивності після електрофорезу.
6.4. Електрофорез білків
Поведінка білків при електрофорезі. Поділ білків відповідно до розмірів молекул: визначення їх молекулярної маси. Двомірний електрофорез.
Фарбування білків на Електрофореграма. Виявлення білків за їх ферментативної активності.
6.5. Електрофорез нуклеїнових кислот і нуклеопротеїдів
Електрофоретичні методи розділення нуклеїнових кислот і полінуклеотидів. Електрофорез нуклеїнових кислот в агаровому і агарозном гелях. Електрофорез нуклеїнових кислот в поліакриламідних гелях. Електрофорез нуклеїнових кислот у поліакриламідному-агарозного гелях. Особливі проблеми, що виникають при електрофоретичному поділі нуклеїнових кислот. Ізоелектрофокусірованіе нуклеїнових кислот. Виявлення нуклеїнових кислот після електрофорезу. Препаративний електрофорез нуклеїнових кислот в гелі. Мікрометодом електрофоретичного поділу нуклеїнових кислот. Визначення молекулярної маси полінуклеотидів. Електрофорез нуклеопротеїдних частинок.
7. Імунний електрофорез
Принцип методу. Реакції антиген-антитіло. Імуноелектрофорез в агарових або агарозного гелях. Дифузія і преципитация в гелі.
Іммунофіксація. Принцип методу. Оцінка методу. Область застосування.
Електросінерез (зустрічний електрофорез, електроіммуноосмофорез). Принцип методу. Оцінка методу. Область застосування.
Електроіммуноаналіз (електроіммунодіффузія, ракетний імуноелектрофорез). Принцип методу. Кількісне визначення антигенів. Модифікації методу. Область застосування. Оцінка методу.
Перехресний імуноелектрофорез (перехресний електрофорез в системі - антиген-антитіло). Принцип методу. Оцінка методу. Область застосування.
Способи посилення преципітації при електроіммуноаналізе і перехресному імуноелектрофорез
8. Спектральні методи
Спектр електромагнітного випромінювання, його основні характеристики і способи їх вираження (довжина хвилі, частота, хвильове число, потік випромінювання, інтенсивність). Ультрафіолетова, видима і інфрачервона області спектра. Класифікація спектроскопічних методів.
Спектрофотометричний метод аналізу. Суть методу. Закони поглинання електромагнітного випромінювання і способи їх вираження. Закон Бугера-Ламберта-Бера, його математичний вираз. Величини, що характеризують поглинання. Молярний коефіцієнт поглинання. Оптична щільність. Оптимальний інтервал вимірюваних значень оптичної щільності (крива помилок). Критерії дотримання законів поглинання та оцінка чутливості фотометричної реакції. Побудова калібрувального графіка. Способи визначення концентрацій речовин. Диференціальний метод. Спектрофотометричне титрування. Використання спектрофотометрії в хроматографії. Фотоелектроколориметри і спектрофотометри. Застосування колориметрії та спектрофотометрії.
Флюоріметріческіе методи аналізу. Різні види люмінесценції та їх класифікація. Основні закономірності молекулярної фотолюмінесценції. Незалежність спектрів люмінесценції від довжини хвилі збуджуючого світла. Гасіння люмінесценції: температурне, концентраційне, гасіння сторонніми домішками. Практичне застосування методу. Хемілюмінісцентний аналіз.
9. Методи мічених атомів
Радіоактивні ізотопи, що використовуються в біології. Вимірювання радіоактивності. Авторадіографія: принцип методу, техніка проведення авторадіографії, переваги та недоліки. Сцинтиляційні лічильники випромінювання: принцип дії, сцинтилятори. Счет радиоактивности на фильтрах. Введення радіоактивної мітки в біологічні препарати in vivo і in vitro. Радіоіммуноаналіз.

10. Методи хімічної модифікації білків і мембран
Зшивання білкових субодиниць і мембран біфункціональність агентами. Дисоціація та складання. Фрагментація поліпептидів хімічними методами. Фрагментація поліпептидного ланцюга ферментативними методами. Модифікація дисульфідних зв'язків та SH-груп. Методи хімічної модифікація функціональних груп у білках і біомембранах.
11. Імуноферментний аналіз
Принцип імунного аналізу. Отримання антитіл з необхідною специфічністю. Пришивання ферменту до антитіл. Варіанти методик ІФА. Сучасна апаратура.
12. Мас-спектрометричний аналіз
Принцип методу. Можливості якісного та кількісного аналізу. Вимоги до досліджуваних зразків. Сучасна апаратура.
13. Біохімічні аналізатори
Використання проточних замкнутих систем в аналізі.
14. Оптимізація методів виділення і очищення біологічних макромолекул і дотримання рекомендацій
Швидкість і дозвіл: часовий фактор. Можливі послідовності процесів фракціонування. Стабілізація макромолекул у процесі виділення й очищення. Зберігання препаратів макромолекул. Заморожування і відтавання.
Збільшення і зменшення масштабів операцій. Відтворення опублікованій методики. Програмування.

Список основної літератури
1. Адсорбційна хроматографія: Методи. Під ред. П. Дін, У. Джонсона, Ф. Мідл. М.: Мир, 1988.
2. Гекселер К., Екштайн Е. Аналітичні та препаративні лабораторні методи. М.: Хімія, 1994.
3. Галь, Е., Медьєші Г., Верецькому Л. Електрофорез у поділі біологічних макромолекул. М.: Світ, 1982.
4. Дарбре А. Практична хімія білка. М.: Світ, 1989.
5. Остерман Л.А. Хроматографія білків і нуклеїнових кислот. М.: Наука, 1985.
6. Остерман Л.А. Дослідження біологічних макромолекул електрофокусірованіем, імуноелектрофорез і радіоізотопними методами. М.: Наука, 1983.
7. Остерман Л.А. Методи дослідження білків і нуклеїнових кислот: електрофорез і центрифугування. М.: Наука, 1981.
8. Остерман Л.А. Методи дослідження білків і нуклеїнових кислот. М. МЦНМО, 2002.
9. Практикум з біохімії. Під редакцією С. Є. Северіна та Г. А. Соловйової. М.: Издательство МГУ, 1989.
Список додаткової літератури
1. Ригетти П. Изоэлектрическое фокусирование. М.: Мир, 1985.
2. Скоупс Р. Методы очистки белков. М.: Мир, 1985.
3. Стыскин Е.Л., Ициксон Л.Б., Брауде Е.В. Практическая высокоэффективная жидкостная хроматография. М.: Химия, 1986.

Вимоги до рівня освоєння програми
У результаті вивчення даної дисципліни студент повинен:
знать основные методы и методические приемы, использующиеся в современных исследованиях а области биохимии и молекулярной биологии.
уметь применять приемы работы с биологическим материалом.
владеть приемами и навыками работы с современным биохимическим оборудованием.
Перелік питань до іспиту
1. Общие принципы биохимического исследования. Биохимические исследования на различных уровнях организации живой материи.
2. Центрифуга, ее устройство. Скорость осаждения частиц. Константа седиментации. Дифференциальное центрифугирование. Центрифугирование в градиенте плотности. Методы получения ступенчатых и непрерывных градиентов плотности.
3. Разделение белков путем осаждения. Растворимость белков при низкой концентрации солей. Высаливание при высокой концентрации соли.
4. Осаждение белков органическими растворителями. Осаждение белков органическими полимерами и другими веществами. Осаждение вследствие избирательной денатурации. Осаждение нуклеиновых кислот.
5. Особенности различных видов живых организмов в качестве исходного материала биохимических исследований. Разрушение клеток и экстракция. Способы разрушения клеток.
6. Растворы, используемые для экстракции. Буферные растворы и специальные добавки.
7. Классификация хроматографических методов. Классификация по принципу фракционирования. Классификация по способу элюции. Классификация по расположению неподвижной фазы.
8. Элементы теории хроматографической элюции. Хроматографический процесс. Хроматографическая зона. Концепция теоретических тарелок. Кинетическая теория хроматографии. Разрешение близко мигрирующих зон. Оптимизация условий фракционирования. Градиентная элюция. Хроматография макромолекул.
9. Техника колоночной хроматографии. Хроматографические колонки. Резервуары для элюента. Смесители. Внесение препарата в колонку. Перистальтические насосы. Детекторы. Коллекторы фракций. Вспомогательное оборудование.
10. Гель-фильтрация. Общая характеристика метода. Очистка и фракционирование макромолекул методом гель-фильтрации. Определение молекулярной массы. Области применения гель-фильтрации.
11. Распределительная хроматография. Нормальнофазовая и обратнофазовая распределительная хроматография. Методические особенности обратнофазовой гидрофобной хроматографии при низком давлении.
12. Адсорбционная хроматография. Сорбенты. Особенности хроматографии на оксиаппатите.
13. Тонкослойная хроматография. Приготовление пластинок. Нанесение препарата. «Проявление» пластинок (хроматографическая элюция). Обнаружение пятен или полос. Применение ТСХ.
14. Ионообменная хроматография. Ионообменники. Элюэнт. Ионные и неионные взаимодействия вещества и сорбента. Управление силой ионного взаимодействия.Применение статической ионообменной хроматографии. Выбор условий динамической ионообменной хроматографии. Способы элюции с ионообменника.
15. Аффинная хроматография. Застосування. Матрицы, их активация. Спейсеры. Активированные спейсеры. Лиганды с групповой и индивидуальной специфичностью. Посадка лигандов.
16. Принцип электрофореза. Зональный электрофорез. Теория электрофореза в ПААГ. Разделение белков в присутствии ДСН.
17. Специфические электрофоретические методы: высоковольтный, проточный, двумерный электрофорез, диск-электрофорез. Изоэлектрическое фокусирование. Изотахофорез.
18. Иммунный электрофорез. Реакции антиген-антитело. Иммуноэлектрофорез в агаровых или агарозных гелях. Диффузия и преципитация в геле. Иммунофиксация. Ракетный иммуноэлектрофорез.
19. Спектрофотометрический метод анализа. Законы поглощения электромагнитного излучения. Молярный коэффициент поглощения. Оптическая плотность. Способы определения концентраций веществ. Фотоэлектроколориметры и спектрофотометры.
20. Флюорометрические методы анализа. Различные виды люминесценции. Основные закономерности молекулярной фотолюминесценции. Практическое применение метода.
21. Методы меченых атомов. Радиоактивные изотопы, используемые в биологии. Измерение радиоактивности. Авторадиография. Введение радиоактивной метки в биологические препараты in vivo и in vitro. Радиоиммуноанализ.
22. Оптимизация методов выделения и очистки биологических макромолекул и соблюдение рекомендаций Оптимизация методов выделения и очистки биологических макромолекул и соблюдение рекомендаций.

Темы курсовых работ
1. Очистка ФМСФ-КП методом гель-фильтрации.
2. Очистка ФМСФ-КП методом ионно-обменной хроматографии.
3. Очистка ФМСФ-КП методом афинной хроматографии.
4. Современные биохимические анализаторы: обзор.
5. Ферментный электрод.
6. Время-пролетная масс-спектрометрия.
7. Жидкостная хроматография высокого давления.
8. Полимеразная цепная реакция.
9. Твердофазные ферментные реакции.
10. Множественные квадрупли в масс-спектрометрии: преимущества и недостатки.
11. Методы определения кинетико-термодинамических свойств ферментов.
12. Методы изучения мембранных компонентов.
13. Дифференциальное центрифугирование: способы и современное приборное обеспечение.
14. Использование радиоактивных меток в анализе.

Відомості про перезатвердження програми на черговий навчальний рік та реєстрації змін
Навчальний рік
Рішення кафедри
Внесені зміни
Номери аркушів (сторінок)
замінений-них
нових
аннулі-ваних
20__/20__
Протокол____
від «____»____________ 20_ р.
Зав. кафедрою ______________
20__/20__
Протокол № ____
від «____»____________ 20_ р.
Зав. кафедрою ______________
20__/20__
Протокол № ____
від «____»____________ 20_ р.
Зав. кафедрою ______________
20__/20__
Протокол № ____
від «____»____________ 20_ р.
Зав. кафедрою _____________
_
20__/20__
Протокол № ____
від «____»____________ 20_ р.
Зав. кафедрою ______________

Учебная программа составлена на основании ГОС ВПО 2000 г. для специальности 020208 – «Биохимия»
Програму склав:
1. Соловйов В.Б., канд. біол. наук, доцент _________________________
(Підпис)
Ця програма не може бути відтворена в якій формі без попереднього письмового дозволу кафедри-розробника програми.
Програма схвалена на засіданні кафедри біохімії
Протокол № від «___» _____________ 200 року
Зав. кафедрою біохімії
д.б.н., професор Генгін М.Т. __________________________________
(Підпис)
Програма схвалена навчально-методичною радою Природничо-географічного факультету
«_____» _____________ 2007
Голова навчально-методичної ради
Природно-географічного факультету,
к.т.н., доцент ___________________________ О.В. Зорькіна
(Підпис)
Програма схвалена навчально-методичним управлінням університету
«_____» _____________ 2007
Начальник навчально-методичного
управління університету ___________________ Г.М. Шалаєва
(Підпис)
ЛИСТ РЕЄСТРАЦІЇ ЗМІН
Зміна
Номери аркушів (сторінок)
Всього аркушів в док.
Номери розпорядиться. документа
Підпис
Дата
Термін введення
змін
замін.
нових
аннул.
Додати в блог або на сайт

Цей текст може містити помилки.

Біологія | Книга
161.8кб. | скачати


Схожі роботи:
Принципи біохімічних досліджень
Практикум з методів біохімічних досліджень
Методи економічних досліджень
Методи педагогічних досліджень 2
Методи соціологічних досліджень
Методи фізіологічних досліджень
Методи педагогічних досліджень
Методи політичних досліджень
Методи політологічних досліджень
© Усі права захищені
написати до нас