Лабораторна діагностика гельмінтозів

[ виправити ] текст може містити помилки, будь ласка перевіряйте перш ніж використовувати.

скачати

Білоруський державний медичний університет
РЕФЕРАТ
НА ТЕМУ:
"ЛАБОРАТОРНА ДІАГНОСТИКА Гельмінтоз"
МІНСЬК, 2009

Для виявлення гельмінтів, їх фрагментів (проглоттід. з кодексів), личинок або яєць досліджують кал, сечу, мокротиння, дуоденальне вміст, кров.
Дослідження випорожнень (копрологіческое дослідження) є найбільш поширеним, оскільки велика частина гельмінтів паразитує у людини в кишечнику або органах, пов'язаних з ним протоками, тому їх яйця або частини тіла виділяються з випорожненнями.
При копрологіческом аналізі необхідно суворо дотримуватися правил особистої гігієни, обпалювати петлі і скляні палички, стерилізувати посуд, скла та інструментарій, утримувати в чистоті робоче місце.
Випорожнення досліджують макроскопічно або мікроскопічно хоча виявлення в них паразитичних хробаків або їх частин (гельмінтоскопія), а головним чином - яєць гельмінтів (гельмінтоовоскопія).

Макроскопічні методи

Огляд випорожнень.
При огляді випорожнень в них можна виявити гельмінтів, їх сколекси, обривки стробіли, проглоттид, що виділяються самостійно або після дегельмінтизації. Цей метод особливо рекомендується для виявлення ентеробіозу, теніоз і теніарінхозе.
Випорожнення доставляють у лабораторію в чистій скляному посуді або в сірникових коробках. На кожній коробці має бути етикетка із зазначенням прізвища, імені, віку та місця проживання обстежуваного.
Невеликі порції випорожнень перемішують з водою в плоскій ванні або в чашці Петрі. Їх переглядають при хорошому освітленні на темному тлі, при необхідності користуючись лупою.
Пінцетом або піпеткою мають усі підозрілі освіти, переносять на предметне скло в краплю розведеного гліцерину або ізотонічного розчину хлориду натрію для подальшого вивчення.
При методі відстоювання всю досліджувану порцію випорожнень потрібно розмішати з водою і дати відстоятися в скляному циліндрі, потім обережно злити верхній шар рідини.
Так повторюють кілька разів. Після того, як рідина стане прозорою, її зливають, а осад переглядають у скляній ванні або чашці Петрі, як було зазначено вище.
Мікроскопічні методи.
Мікроскопія - основний метод дослідження випорожнень для виявлення яєць і личинок гельмінтів. Випорожнення для аналізу повинні бути доставлені не пізніше доби після їх виділення. При порушенні цього правила діагноз поставити важко або неможливо у зв'язку з руйнуванням яєць і личинок. Для підвищення достовірності дослідження аналізи потрібно повторювати кілька разів щодня або з проміжками в 1-3 дні.
Нативний мазок.
Невеликий шматочок випорожнень переносять паличкою на предметне скло в краплю 50% водного розчину гліцерину (для його отримання змішують рівну кількість дистильованої води і гліцерину) і розтирають до отримання рівномірного прозорого мазка. На одному склі готують два мазка.
При невеликій кількості яєць у випорожненнях їх не завжди вдається виявити, тому застосування тільки цього методу не є повноцінним і достовірним.
Товсті мазки з целофаном (метод Като).
Принцип методу: яйця гельмінтів виявляють в товстому мазку випорожнень, проясненій гліцерином і мальоване малахітової зеленню.
Попередньо гідрофільний целофан, товщиною 22 МХМ, нарізають пластинками з розміром сторін 20x40 мм і занурюють на добу в розчин наступного складу: 6 мл 3% водного розчину малахітової зелені, 500 мл гліцерину і 500 мл 6% водного розчину фенола.3-5 мл зазначеної суміші достатньо для обробки 100 платівок, які потім можна зберігати в цьому ж розчині в добре закритій посудині.
Хід дослідження.
100 мг випорожнень наносять на предметне скло, покривають обробленої, як описано вище, платівкою целофану і придавлюють гумовою пробкою так, щоб випорожнення не розтікалися з-під целофану.
Мікроскопування при малому або великому збільшенні необхідно проводити не пізніше, ніж через годину після приготування мазка, а в жарку погоду - через 30-40 хвилин. Висихання препарату і тривалий прояснююче дію гліцерину ускладнюють мікроскопування.
Метод Като дозволяє дослідити значний обсяг випорожнень і з більшою ефективністю, ніж при звичайному нативному мазку. Цим методом можна виявити яйця аскариди, власоглава, лентеца, трематод, теніїд.
Однак для виявлення яєць анкілостомід і карликового ціп'яка, особливо при малій інтенсивності інвазії, метод Като недостатньо ефективний.
Метод закручування по Шульману.2-3 г випорожнень розмішують скляною паличкою круговими рухами з трьох-п'ятикратним кількістю фізіологічного розчину, не торкаючись стінок посудини. Яйця і личинки гельмінтів скупчуються в центрі.
Після закінчення перемішування краплю на кінці палички швидко переносять на предметне скло, закривають її покривним склом і досліджують під мікроскопом. Цим методом добре виявляються личинки гельмінтів.
Методи збагачення.
Методи збагачення засновані на різниці питомої ваги яєць і застосовуваного сольового розчину, що дозволяє виявляти невелика їх кількість. Якщо питома вага яєць більше питомої ваги рідини, то яйця концентруються в осаді, який досліджують під мікроскопом.
Цей метод осадження (седиментації) застосовують для яєць трематод. При більшій питомій вазі розчину яйця спливають на поверхню рідини, і тоді досліджують плівку. Це методи спливання (флотації). Вони найбільш ефективні для виявлення яєць анкілостомід, власоглава і карликового ціп'яка.
Метод Фюллеборна заснований на Спливання яєць гельмінтів в насиченому розчині NaCl з високою відносною щільністю. Для цього розчиняють 400 г NaCl в 1 л води при кип'ятінні. Відносна щільність розчину 1,18-1,22. Розчин зберігають у закритій бутлі.
Для проведення аналізу в банку обсягом 30-50 мл поміщають 2-3 г випорожнень і при помішуванні паличкою доливають майже доверху насичений розчин хлориду натрію. Смужкою паперу швидко видаляють спливли великі частки.
Через 45-60 хв. відстоювання дротяною петлею знімають поверхневу плівку і переносять її на предметне скло в краплю 50% водного розчину гліцерину. Готують кілька препаратів. Додатково переглядають 2-4 препарату з осаду, набираючи його очної піпеткою на 2 предметних скла.
Необхідність дослідження осаду обумовлена ​​тим, що яйця трематод і теніїд спливають дуже погано і можуть залишитися в осаді. Добре спливають яйця нематод (за винятком незапліднених яєць аскарид), карликового ціп'яка і лентеца.
До переваг цього методу належить його дешевизна і доступність до недоліків - необхідність перегляду препаратів з поверхневої плівки і осаду, а також тривалість відстоювання.
Метод Калантарян.
Замість насиченого розчину кухонної солі використовують насичений розчин азотнокислого натрію (1 кг селітри заливають; літром дистильованої води і кип'ятять до повного розчинення). Питома вага розчину близько 1,4.
Переваги методу: швидко спливають і виявляються в поверхневій плівці яйця більшості гельмінтів, що виключає необхідність дослідження осаду. Не спливають онкосфери теніїд і яйця трематод, що слід враховувати при дослідженнях з метою діагностики зазначених гельмінтозів. Висока вартість нітрату натрію обмежує застосування даного методу.
Метод Красильникова.
Під дією поверхнево-активних речовин, що входять а склад миючих засобів (детергентів), яйця гельмінтів звільняються від випорожнень і концентруються в осаді.
Попередньо готують 1% розчин прального порошку "Лотос". Для цього висушують порошок у сушильній шафі при 100 ° С протягом 1-2 годин, потім 10 г порошку розчиняють в 1 л водопровідної води. За відсутності "Лотоса" можна використовувати і інші пральні порошки, але кожного з них треба брати стільки, скільки розчиниться без утворення осаду в 1 л водопровідної води.
У скляну посудину, ємністю 30-50 мл, наливають 20-30 мл розчину детергенту, туди ж поміщають невелику порцію випорожнень і добре перемішують.
Співвідношення випорожнень і розчину має бути приблизно 1: 20. Випорожнення повинні знаходитися в розчині не менше доби. За цей час на дні утворюється осад з 2-3-х шарів. Нижній шар складається з грубих важких частинок, в середньому шарі збираються яйця гельмінтів, верхній шар являє собою білувато-сірі пластівці.
Пастерівської або очної піпеткою набирають 2-3 краплі рідини з середнього шару і переносять на предметне скло. На одному склі готують 2 препарати, накривають покривним склом і мікроскопіруют.
Метод Красильникова дозволяє виявити яйця всіх видів гельмінтів, що виділяються з випорожненнями.
Метод Горячева.
Метод Горячева (метод осадження) використовується для діагностики опісторхозу. Питома вага яєць опісторхи високий, тому вони не спливають у сольових розчинах. У циліндр діаметром 2-3 см наливають 70-100 мл насиченого розчину хлориду натрію.
Окремо ретельно розмішують 0,5 г випорожнень у 20-25 мл води і обережно фільтрують через лійку з двома шарами марлі в циліндр на сольовий розчин, уникаючи перемішування. Яйця опісторхів повільно осідають на дно циліндра.
Через 2-3 години верхній шар з калом відсмоктують піпеткою, а залишився сольовий розчин залишають стояти на 12-20 годин або центрифугують. Осад піпеткою переносять на предметне скло, покривають покривним склом і мікроскопіруют. Цей метод можна застосовувати і для діагностики інших трематодозів.
Метод липкої стрічки.
Метод липкої стрічки використовується для діагностики ентеробіозу. Шматочок липкою прозорою поліетиленовою стрічки довжиною 4-5 см липким шаром прикладають через анус до періанальна складкам, одразу ж знімають і приклеюють на предметне скло. Отримані таким чином препарати мікроскопіруют.
Переваги цього методу перед зішкрібком з періанальна складок полягає у швидкості і можливості досить довгого зберігання препаратів.
Діагностика тканинних гельмінтозів.
Для діагностики тканинних гельмінтозів (трихінельоз, цистицеркоз та інші) застосовуються іммунологічекіе методи дослідження: реакція кольцепреціпітапіі, зв'язування комплементу, флюоресцирующих антитіл, преципітації в агарі та інші, за допомогою яких виявляються в сироватці крові хворих відповідні антитіла. Для діагностики трихінельозу і філяріатозів застосовуються спеціальні методи досліджень.
Метод біопсії м'язів.
Метод біопсії м'язів для діагностики трихінельозу. Досліджують м'язи хворого і залишки м'яса тварин, що послужили причиною зараження людини. Для аналізу частіше беруть шматочок (кілька грамів) дельтоподібного або литкового м'яза в асептичних умовах.
М'яз подрібнюють ножицями і поміщають між двома товстими скельцями (компресор) злегка розчавлюють і переглядають на малому збільшенні мікроскопа. Усередині м'язових волокон виявляються спірально згорнуті личинки трихінел в округлих або лімонообразних капсулах.
Метод переварювання м'язів.
Метод переварювання м'язів для діагностики трихінельозу більш ефективним. Дрібно нарізані м'язи заливають штучним шлунковим соком (1% розчин пепсину в 0,7% розчині соляної кислоти) і поміщають у термостат при 37 ° С на 12-16 годин.
Обсяг шлункового соку повинен перевищувати наважку м'язів з 15-20 разів. Після перетравлення на предметне скло піпеткою переносять осад і мікроскопують його. В осаді виявляються вільні від капсул личинки трихінел.
Метод мазка крові і товстої краплі.
Даний метод застосовується для діагностики фіряріатозов. Більшість видів мікрофілярій локалізовані в крові, тому для їх виявлення застосовують дослідження крові - мазок або товсту краплю.
Кров беруть в асептичних умовах з пальця переважно вночі. Для приготування мазка краплю крові поміщають на предметне скло і краєм другого скла розмазують її по склу.
Мазок фіксують метиловим спиртом і фарбують за Романовським-Гімза. Для приготування товстої краплі беруть кілька крапель крові на предметне скло і кутом іншого скла круговими рухами розмазують її до отримання плями, діаметром близько 1,5 см.
Після висушування еритроцити гемолизируются дистильованою водою і фарбують за Романовським-Гімза. Міхрофілляріі виявляються у вигляді тонких звивистих ниток, пофарбованих у блакитний колір.
Таблиця 1
ВІДМІТНІ ОЗНАКИ ЯЄЦЬ ГЕЛЬМІНТІВ

Назва гельмінта
Відмінні ознаки яєць
1
2
3
1
Фасциол
Трематоди
Розміри близько 153x80 мкм. Форма яйцеподібна, правильна. Оболонка жовтувато-коричнева, гладка. На верхньому полюсі є кришечка. Це найбільше яйце гельмінтів людини.
2
Опісторхи
Розміри 26-30x10-15 мкм. Яйце овальної форми, кілька розширене у нижнього полюса. На верхньому полюсі є кришечка. Оболонка жовтого кольору.
3
Парагон
Розміри 80-118x48-60 мкм. Форма овальна. На верхньому полюсі добре виражена кришечка. Оболонка золотисто-коричнева, товста, гладка.
4
Шистосоми
урогенітальна
Розміри 120-190x50-73 мкм. Форма веретеноподібна, без кришечки. Гострий шип на одному полюсі розташований уздовж поздовжньої осі яйця. Оболонка тонка, прозора.
5
Шистосоми Менсона
Розміри 112-169x60-70 мкм. Форма овально-витягнута. Гострий великий шип розташований на бічній поверхні яйця, злегка заломлений. Оболонка товста, жовта.
6
Шистосоми японська
Розміри 75-90x53-74 мкм. Форма овальна. На бічній поверхні ближче до одного з полюсів розташований невеликий тупий шип. Оболонка блідо-жовта.
7
Теніїд (свинячий і бичачий цестоди)
Цестоди
Розміри 30-40x20-30 мкм. Форма округла, рідше злегка овальна. Оболонка товста, двоконтурна, поперечно-покреслена, прозора. Всередині розташована онкосфера.
8
Карликовий ціп'як
Розміри 40x50 мкм. Форма округла або овальна. Оболонка подвійна, прозора. Між оболонками є извивающиеся нитки. Усередині помітна лімонообразная онкосфера.
9
Лентец широкий
Розміри 68-71x40-45 мкм. Форма широкоовальна. Оболонка сірого або жовтуватого кольору, гладка. На одному полюсі є кришечка, на іншому - горбик.
, 0
Аскарида
Нематоди
а) Запліднені яйця. Розміри 50-70x40-50 мкм. Форма овальна, рідше округла. Оболонка товста, багатошарова, горбиста, темно-жовта. Всередині знаходиться зародкова клітина округлої форми. Між нею і полюсами є вільний простір.
б) Незапліднені яйця. Розміри 50-80x40-50 мкм.
Форма близька до овальної. Оболонка товста, багатошарова, дрібнобугристі з окремими виступаючими більшими буграми темно-жовта. Від полюса до полюса яйце заповнено жовткових клітинами.
11
Власоглав
Розміри 50-55x23-32 мкм. Форма лімонообразная (боченкообразная). Оболонка товста, гладка, жовто-коричнева. На полюсах є пробкообразние структури.
12
Остриця
Розміри 50-60x26-30 мкм. Форма овально-витягнута, асиметрична (одна сторона опукла інша більш плоска). Оболонка тонка, гладка, прозора, безбарвна.
13
Анкилов-МЗС
Розміри 54-70x36-40 мкм. Форма овальна з притупленими полюсами. Оболонка тонка, прозора, безбарвна.

Література

1. Петровський А.В. Паразитологія, Мн.: Светач, 2007 р. 354 с.
2. Аскерко О.Ч. Основи паразитології Мн.: БДМУ, 2008 р. 140 с.
3. Селявка А.А. Загальна паразитологія Мн.: Знання, 2007 р. 250 с.
Додати в блог або на сайт

Цей текст може містити помилки.

Медицина | Реферат
44.5кб. | скачати


Схожі роботи:
Агранулоцитоз Етіологія Лабораторна діагностика
Лабораторна діагностика венеричних хвороб
Лабораторна інструментальна і апаратна діагностика раку підшлункової залози
Лабораторна діагностика хронічних гепатитів цирозів ускладнення цирозів
Лабораторна робота з ВМС і ТКС
Клініко лабораторна оцінка та об рунтування застосування нового силіконового підкладочного матеріалу
Клініко лабораторна характеристика дітей з спадковою алергічною схильністю корекція порушень
Клініка діагностика і лікування відкритих артеріальних проток Класифікація клініка та діагностика
Діагностика двигуна
© Усі права захищені
написати до нас