Зміст глутамінової кислоти в камерній волозі

[ виправити ] текст може містити помилки, будь ласка перевіряйте перш ніж використовувати.

скачати

у хворих на первинну відкритовугільною глаукомою

Glutamic acid concentration in aqueous humor of open angle glaucoma patients

By many authors glutamate renders neurotoxic effect on retinal ganglion cells. It is possible that glutamic acid concentration increase in eye tissues with primary open angle glaucoma (POAG) plays an important role in optic nerve glaucoma atrophy pathogenesis.

Aqueous humor of 10 patients with POAG were taken during cataract extraction and examined. The quantities of glutamic acid were determined by chromatographic method.

Glutamic acid concentration in aqueous humor of control group was 28.6 ± 1.6 mkg / ml and in group with POAG - 84.9 ± 28.7 mkg / ml. The difference wasn't statistically reliable. Thus there is a tendency to glutamic acid concentration increase in eyes with POAG.



Р Результати дослідження останніх років суттєво вплинули на уявлення про патогенез глаукоматозной атрофії зорового нерва - глаукоматозной оптичної нейропатії.

Було встановлено, що характерним проявом глаукоматозной оптичної нейропатії є апоптоз - загибель гангліозних клітин сітківки. Quigley [6] вважає, що пошкоджений, можливо, внаслідок високого ВГД, аксон ганглиозной клітини сітківки не несе достатньої інформації, що призводить до активації механізмів природної загибелі клітини. Можливо, ці процеси активізуються недостатністю кровотоку в судинах ока при підвищеному ВГД. Було показано, що одночасно з цим є значне збільшення вмісту глутамінової кислоти (глутамату) у склоподібному тілі хворих первинної відкритокутової глаукомою (ПВКГ). Глутамат є основним нейромедіатором ЦНС і сітківки. У той же час підвищення концентрації глутамату вище фізіологічного рівня викликає в сітківці блокаду міжнейрональних передачі нервових імпульсів і поєднується з селективним апоптозом гангліозних клітин сітківки через нейротоксичної дії глутамату [5]. Brooks DE et al. [7] виявили в собачих очах з експериментально викликаної глаукомою підвищений вміст вітреальную глутамату, триптофану і низький вміст гліцину в порівнянні з контролем. На думку авторів, висока концентрація глутамату токсична для гангліїв сітківки і доводить ішемічний механізм порушень, що відбуваються в клітинах сітківки.

Сама по собі ідея про нейротоксичної дії глутамату на нервову тканину, зокрема, на гангліозних клітини сітківки, запозичена з неврологічної практики. Неврологи близько 20 років надають значення великим концентрацій даного трансмітера у розвитку такої патології, як хвороба Альцгеймера, розсіяний склероз, деменція, аміотрофічний бічний склероз та інші [4]. Підвищений вміст глутамату в склоподібному тілі хворих глаукомою, загибель гангліозних клітин сітківки під його впливом у дослідах на щурах дозволили EB Dreyer та співавт. [6] припустити, що даний механізм їх загибелі має місце і при ПВКГ. Однак причина внутрішньоклітинного випуску глутамату не повністю зрозуміла. EB Dreyer та співавт. [6] вважають, що, можливо, високу внутрішньоочний тиск призводить до виходу глутамату у внутрішньоклітинні простору, викликаючи загибель клітин, який токсичний для гангліозних клітин. Другий ймовірною причиною загибелі клітин, на думку авторів, є збій у ферментних системах, відповідальних за руйнування даного нейромедіатора після виходу його з синапсів. Труднощі підтвердження цих поглядів полягає в тому, що дуже важко перевірити дані факти на «живому» оці, однак безсумнівно, що великі концентрації гутамата токсичні для нервової тканини.

Враховуючи вищесказане, метою нашого дослідження стало виявлення глутамату у хворих ПВКГ.

Матеріали та методи дослідження

Дослідну групу склали 10 хворих ПВКГ (6 чоловіків, 4 жінки, середній вік - 74 роки), у яких забиралася камерна волога під час екстракапсулярній екстракції катаракти з антиглаукоматозні компонентом. 8 хворих були з розвинутою стадією ПВКГ, 2 з далекозашедшей. Контрольну групу склали хворі з старечої катарактою - 14 пацієнтів (11 чоловіків, 3 жінки, середній вік - 68 років). Основна і контрольна групи були порівнянні за віком і супутнім соматичним захворюванням.

В основу методу покладені описані Боде і Гирі методи кількісного визначення амінокислот у вигляді мідних похідних з нінгідрідіном після хроматографічного їх поділу на папері у нашій модифікації [1].

1. Підготовка проби для аналізу. Проби камерної рідини об'ємом 0,1-0,2 мл зважують на аналітичних вагах, упарюють насухо на водяній бані при 40 ° С у скляних мікрочашках, використовуючи плаваючий штатив. Сухий залишок розчиняють в 0,05 мл дистильованої води.

2. Отримання одновимірних хроматограм камерної рідини очі. 20 мкл отриманих розчинів порціями по 5 мкл за допомогою автоматичної піпетки наносять на хроматографічну папір марки «швидка» розміром 2 x 27 см. хроматографування проводять низхідним методом два рази в одному напрямку спочатку в суміші розчинників I, потім два рази в суміші II. Суміш I: н-бутиловий спирт, крижана оцтова кислота, дистильована вода (4: 1: 5). Суміш II: н-бутиловий спирт, крижана оцтова кислота, дистильована вода (40: 15: 5). Після кожного пропускання розчинника папір висушують на повітрі і знову розміщують у хроматографічну камеру. Час проходження розчинника в одному напрямку 7 годин. Висушену хроматограму занурюють на кілька секунд у 0,5% розчин нингидрина в ацетоні, просушують протягом декількох хвилин на повітрі і підігрівають 10 хвилин в сушильній шафі при 50 ° С для розвитку забарвлення. Плями амінокислот стають більш чіткими через добу, тому визначення кількісного вмісту амінокислот слід проводити на наступний день.

3. Кількісне визначення глутамінової кислоти в камерній рідини очі. Фіолетові плями, відповідні глутамінової кислоти, вирізають, розрізають на дрібні шматочки і поміщають в мікропробірки, що містять 0,25 мл спиртового розчину сульфату міді. Фіолетове забарвлення переходить в оранжево-червону в результаті утворення мідного похідного амінокислот з нінгідрином. Екстракцію продовжують протягом однієї години при кімнатній температурі. Інтенсивність забарвлення вимірюють на фотоелектроколориметри Humalyzer 2000 при довжині хвилі 505 нм в мікрокювет проти контрольної проби на папір. Розрахунки за змістом амінокислоти проводять за калібрувальним графіком, отриманого зі стандартними розчинами глутамінової кислоти.

4. Побудова калібрувального графіка. Готують розчини глутамінової кислоти 0,001 М, 0,00075 М, 0,0005 М, 0,000375 М, 0,00025 М. На папір наносять по 20 мкл розчинів. Розрахунок роблять за формулою:

А = (З x 5 x 10-2) / V

А - концентрація глутамінової кислоти в камерній волозі (мкг / мл); C - зміст глутамінової кислоти, знайденої по калібрувальним графіком (мкг / мл), V - об'єм проб (мл).

Результати дослідження та обговорення

Зміст глутамату камерної вологи в контрольній групі склало 28,6 ± 1,6 мкг / мл, при ПВКГ - 84,9 ± 28,7 мкг / мл (різниця статистично недостовірна, p> 0,05).

Хоча нами і не отримано статистично достовірних відмінностей у змісті глутамату у хворих ПВКГ та вікової катарактою, проте є явна тенденція до більш високої концентрації даного нейромедіатора в камерній волозі хворих ПВКГ. У 5 з 10 хворих ПВКГ зміст глутамату в камерній волозі було значно вище, ніж у контрольній групі і коливалося в межах від 37,6 мкг / мл до 260,3 мкг / мл.

У хворих старечої катарактою найвища концентрація глутамінової кислоти склала всього 33 мкг / мл.

Участь деяких нейромедіаторів у регуляції офтальмотонуса показано в роботах А.В. Мягкова [2,3], що довів вплив опіоїдних пептидів на підвищення ВГД, впливаючи електричними коливаннями і хімічними подразниками на мигдалеподібний комплекс. У результаті отриманих даних можна не погодитися з гіпотезою посилення апоптозу гангліозних клітин сітківки при ПВКГ внаслідок накопичення в них глутамінової кислоти. Однак ця гіпотеза вимагає подальшого вивчення.

Проведені дослідження вперше дозволили виявити глутаминовую кислоту в камерній волозі у хворих ПВКГ. Зміст глутамату у хворих ПВКГ вище, ніж у контрольній групі.

Література:

1. Медичні лабораторні технології і діагностика: Медичні лабораторні технології. Довідник в 2 томах / За ред. А.М. Карпіщенко / / Мікрометодом визначення вільних амінокислот у сироватці крові за допомогою хроматографії на папері. Т.2. - С-Петербург, «Інтермедіка», 1999. - С. 106-109

2. Мягков О. В. Вплив пунктурні впливів на офтальмогіпертензію, викликану електричної та хімічної стимуляцією мигдалеподібного комплексу: Авореф. дисс. на соіск. учений. степ. канд. мед. наук. - Казань, 1997 - 21 с.

3. Мягков О.В. Участь опіоїдних пептидів в центральній регуляції внутрішньоочного тиску та гідродинаміки ока / / Тез. Доповідей 7с'езда офтальмологів Росії. - М., 2000 .- С.175-176.

4. Пляхін І.В. Біохімічні основи пролонгіруемой клітинної смерті. / / Міжрегіональний збірник наук. Праць / Біохімія на рубежі XXI століття. - 2000 .- Рязань. - С.173-177.


Додати в блог або на сайт

Цей текст може містити помилки.

Медицина | Доповідь
17.4кб. | скачати


Схожі роботи:
Виробництво глутамінової кислоти
Витяг кремнефтористоводородной кислоти при процесі виробництва фосфорної кислоти
Нуклеїнові кислоти
Нуклеїнові кислоти
Синтез нітробензойною кислоти
Виробництво азотної кислоти 2
Виробництво сірчаної кислоти 2
Виробництво сірчаної кислоти
Білки і нуклеїнові кислоти
© Усі права захищені
написати до нас