Вплив антибіотиків на розвиток мікроорганізмів

Курсова робота
з дисципліни «Мікроорганізми і навколишнє середовище»
Тема: «Вплив антибіотиків на розвиток мікроорганізмів»
Зміст
Введення
Глава 1. Літературний огляд
1.1. Історія відкриття антибіотиків
1.2. Класифікація антибіотиків
1.3. Вплив антибіотиків на бактерії роду Bacillus
Глава 2. Об'єкти і методи досліджень
2.1. Об'єкти досліджень
2.2. Методи досліджень
2.2.1. Метод дифузії в агар з використанням жолобка (досвід О. Флемінга)
2.2.2. Метод титрів (серійних розведень) у щільних середовищах
Глава 3. Результати досліджень
Висновки
Список літератури
Додаток
Введення
Видатне відкриття А. Флемінгом пеніциліну призвело до того, що виникла наука про антибіотики, була створена потужна промисловість з їх виробництва, яка не має попередників. У результаті антибіотики придбали соціальне значення, вплинули на економіку. Але тільки 2-3% відкритих антибіотиків було використано в клініці, а також сільському господарстві та деяких галузях харчової промисловості.
Відзначаючи широкі можливості використання антибіотиків в лікувальних цілях, розробляючи методи, що дозволяють долати множинну лікарську стійкість у мікроорганізмів, не можна не враховувати дуже важливого чинника, який набуває все більшої актуальності: це вплив антибіотиків на навколишнє середовище. У результаті діяльності людини кількість антибіотиків у зовнішньому середовищі зростає.
Серед важливих питань, пов'язаних з проблемою «антибіотики та зовнішнє середовище», чимале значення набуло вплив антибіотиків на різні грунтові біоценози. Мікрофлора у різних населених пунктах, на території лікувальних установ, на підприємствах, що виробляють препарати, на тваринницьких фермах, мікрофлора стічних вод завдяки застосуванню антибіотиків змінилася. Без мікробів існування грунту неможливо, так як вони є необхідною ланкою у кругообігу всіх біогенних елементів, беруть участь у грунтоутворенні і підтримці грунтової родючості. Таким чином антропогенний вплив, що порушує грунтові біоценози, полягає в потраплянні і накопичення в грунті хімічних сполук, до яких відносяться і антибіотики.
Крім того, на мікрофлору грунту впливають не лише антибіотики, занесені в результаті діяльності людини, а й антибактеріальні речовини - продукти життєдіяльності мікроорганізмів-антагоністів (деякі бактерії і гриби). Придушуючи й знищуючи представників мікрофлори грунту, антагоністи мають велике значення в грунтоутворювального процесах.
Таким чином, з метою упорядкованості застосування антибіотиків і вивчається їх вплив на мікроорганізми.
. Метою даної роботи є вивчення впливу різних антибіотиків на типових представників мікрофлори грунту - бактерій роду Bacillus.
Рід Bacillus об'єднує рухливі паличкоподібні клітини, розміри яких коливаються в досить широких межах. Джгутики розташовані перитрихиально. Фарбування за Грамом різному: позитивно або позитивно тільки в молодій культурі. Облігатні або факультативні аероби. Бактерії роду Bacillus синтезують різні літичні ферменти, що розщеплюють полісахариди, білки, жири і інші макромолекули. Деякі види утворюють антибіотики, такі як бацитрацин, субтилизина. Більшість бацил - сапрофіти. Основне місце їх проживання - грунт. Є серед них і патогенні для тварин і людини форми, наприклад B. anthracis - збудник сибірської виразки, а також види, що викликають різні захворювання членистоногих. (М. В. Гусєв, Л. А. Мінєєва, 1992)
Завдання курсової роботи:
Визначити чутливість бактерій роду Bacillus до різних антибіотиків (пеніцилін, ампіцилін, стрептоміцин), тобто затримку росту культури в присутності антибіотика, що дифундує в середу.
Вивчити інтенсивність росту колоній даного мікроорганізму при різних концентраціях антибіотика, розчиненого у живильному середовищі.
Глава 1. Літературний огляд
1.1 Історія відкриття антибіотиків
Вчення про антибіотики - молода синтетична гілку сучасного природознавства. Вперше в 1940 році було отримано в кристалічному вигляді хіміотерапевтичний препарат мікробного походження - пеніцилін - антибіотик, який відкрив літочислення ери антибіотиків.
Багато вчених мріяли про створення таких препаратів, які можна було б використовувати при лікуванні різних захворювань людини, про препарати, здатних вбивати патогенних бактерій, не надаючи шкідливої дії на організм хворого.
возбудителя сифилиса. Пауль Ерліх (1854-1915) в результаті численних дослідів синтезував в 1912 році миш'яковистий препарат - сальварсан, що вбиває in vitro збудника сифілісу. У 30-х роках минулого сторіччя в результаті хімічного синтезу були отримані нові органічні сполуки - сульфаміди, серед яких червоний стрептоцид (пронтозил) був першим ефективним препаратом, які надали терапевтичну дію при важких стрептококових інфекціях.
У 1937 році в нашій країні був синтезований сульфідін - з'єднання, близьке до пронтозилу. Відкриття сульфамідних препаратів та застосування їх у медичній практиці склало відому епоху в хіміотерапії багатьох інфекційних захворювань, у тому числі сепсису, менінгіту, пневмонії, бешихи, гонореї і деяких інших.
. Луї Пастер і С. Джеберт в 1877 році повідомили, що аеробні бактерії пригнічують ріст Bacillus anthracis.
века В. А. Манассеин (1841-1901) и А. Г. Полотебнов (1838-1908) показали, что грибы из рода Penicillium способны задерживать в условиях in vivo развитие возбудителей ряда кожных заболеваний человека. У кінці XIX століття В. А. Манассеин (1841-1901) і А. Г. Полотебнов (1838-1908) показали, що гриби з роду Penicillium здатні затримувати в умовах in vivo розвиток збудників ряду шкірних захворювань людини.
І. І. Мечников (1845 - 1916) ще в 1894 році звернув увагу на можливість використання деяких сапрофітних бактерій у боротьбі з патогенними мікроорганізмами.
выделил кристаллическое соединение - микофеноловую кислоту, подавляющее рост бактерий сибирской язвы. У 1896 році Р. Гозіо з культурної рідини Penicillium brevicompactum виділив кристалічний з'єднання - микофеноловую кислоту, переважна зростання бактерій сибірської виразки.
, они назвали его пиоцианазой; препарат использовался в качестве лечебного фактора как местный антисептик. Емміріх і Лоу в 1899 році повідомили про антибіотичну речовину, що утворюється Pseudomonas pyocyanea, вони назвали його пиоцианазу; препарат використовувався як лікувальний чинник як місцевий антисептик.
. Black и U . Alsberg выделили из гриба рода Penicillium пеницилловую кислоту, обладающую антимикробными свойствами. У 1910-1913 роках O. Black і U. Alsberg виділили з гриба роду Penicillium пеніцилової кислоти, яка має антимікробні властивості.
У 1929 році А. Флемінгом був відкритий новий препарат пеніцилін, який тільки в 1940 році вдалося виділити в кристалічному вигляді.
З отриманням пеніциліну як препарату (1940 рік) виник новий напрям у науці - вчення про антибіотики, яка надзвичайно швидко розвивається в останні десятиліття.
У 70-х роках щорічно описувалося більше 300 нових антибіотиків. У 1937 році Вельш описав перший антибіотик стрептоміцетних походження актіміцетін, в 1939 році Красильниковим і Кореняко був отриманий міцетін і Дюбо - тиротрицину. Впослед число антибіотиків росло дуже швидкими темпами.
1.2 Класифікація антибіотиків
У залежності від природи антибіотика, його концентрації, часу дії, мікроструктури клітини організму і зовнішніх умов - температури рН та інших, антибіотичні речовини можуть виявляти цитостатичну (затримувати ріст мікробів), цітоцідное (вбивати клітини) або цитолітичну (розчиняти клітинну оболонку і в результаті цього призводити до загибелі клітини) дію.
По спектру дії антибактеріальні антибіотики діляться на: вузького (діючі на грампозитивні або грамнегативні бактерії) і широкого (діючі на грампозитивні і грамнегативні бактерії) спектру дії, протитуберкульозні, протигрибкові, протипухлинні, протівоамебние антибіотики.
Класифікація антибіотиків за механізмом біологічної дії:
1. Антибіотики, інгібуючі синтез клітинної стінки (пеніциліни, бацитрацин та ін.)
2. Антибіотики, що порушують функції мембран (альбоміцін, грам-цідін та ін.)
3.Антібіотікі, вибірково пригнічують синтез РНК (новобиоцин, актиноміцин та ін); ДНК (новобиоцин, актідіон та ін.)
4. Антибіотики, що пригнічують синтез білка (тетрациклін, еритро-міцін, хлорамфенікол та ін.)
5. Антибіотики - інгібітори дихання (антіміціни та ін.)
6. Антибіотики - інгібітори окисного фосфорилювання (вали-номіцін, граміцидину та ін.)
7. Антибіотики, що володіють антіметаболітнимі властивостями.
1.3 Вплив антибіотиків на бактерії роду Bacillus
. У Таблиці 1 представлено вплив різних антибіотиків на грампозитивні бактерії, до яких і відносяться вивчаються в цій роботі бактерії роду Bacillus.
Цифрами в Таблиці 1 показано ступінь ефективності антибіотика: 0 - взагалі неефективні; 1 - ефективні відносно лише окремих представників; 2 - ефективні відносно декількох представників; 3 - ефективні відносно більшості форм.
Таблиця 1
Вплив антибіотиків на грампозитивні бактерії (Єгоров Н.С., 1986)
Тетрациклін
Хлортетрациклин
Еритроміцин
Карбоміцін
Фумагіллін
Ністамін
Тиротрицину
Поліміксини
Бацитрацин
Неоміцин
Пеніцилін
Хлорамфенікол
Стрептоміцин
3
3
3
3
0
0
3
0
3
2
3
2
2
воздействуют антибиотики различного спектра биологического действия. Взагалі, на грампозитивні бактерії і зокрема на бактерії роду Bacillus впливають антибіотики різного спектру біологічної дії. Так, антибіотики вузького спектру дії активні переважно щодо грампозитивних організмів. влияют такие группы антибиотиков как биосинтетические пенициллины (бензилпенициллин и его соли), полусинтетические пенициллины (пропициллин, оксациллин), макролиды (эритромицин, лейкомицин), а также альбомицин, новобиоцин, линкомицин и другие. На розвиток бактерій роду Bacillus впливають такі групи антибіотиків як біосинтетичні пеніциліни (бензилпеніцилін і його солі), напівсинтетичні пеніциліни (пропіціллін, оксацилін), макроліди (еритроміцин, лейкоміцин), а також альбоміцін, новобиоцин, лінкоміцин та інші.
Антибіотики групи пеніциліну інгібують синтез клітинної стінки бактерій, новобиоцин пригнічує синтез РНК і ДНК, еритроміцин - інгібітор синтезу білка в бактеріальній клітині.
могут образовывать фермент пенициллиназу (иногда и фермент амидазу), разрушающий пенициллин. Слід відзначити також те, що деякі штами бактерій роду Bacillus можуть утворювати фермент пеніциліназу (іноді і фермент амидазами), що руйнує пеніцилін. и Bacillus subtilis , что связано с образованием пенициллиназы. Поява стійкості до пеніциліну та його похідних спостерігається у різних штамів Bacillus cereus і Bacillus subtilis, що пов'язано з утворенням пеніцилінази.
Досить сильною антибіотичну активність по відношенню до грампозитивних бактерій мають антибіотики широкого спектру дії. активно влияют такие антибиотики, как тетрациклины, хлорамфеникол и неомицин (подавляют синтез белка в бактериальной клетке), грамицидин С (ингибитор окислительного фосфорилирования), а также ампициллин, стрептомицин. На ріст і розвиток бактерій роду Bacillus активно впливають такі антибіотики, як тетрацикліни, хлорамфенікол і неоміцин (пригнічують синтез білка в бактеріальній клітині), граміцидин С (інгібітор окисного фосфорилювання), а також ампіцилін, стрептоміцин.
антибиотиков группы пенициллина (бензилпенициллин и ампициллин) и стрептомицина. У цій роботі буде вивчатися вплив на бактерії роду Bacillus антибіотиків групи пеніциліну (бензилпеніцилін і ампіцилін) і стрептоміцину.
Широкий інтерес до пеніциліну як антибіотика з'явився тільки в 1940 році, коли препарат був отриманий Флорі і Чейном в хімічно чистому вигляді. ( Penicillium Після того як було встановлено, що пеніцилін володіє потужними лікувальними властивостями, почалися інтенсивні пошуки продуцентів цього антибіотика. Пеніцилін можуть утворювати багато видів Penicillium (Penicillium , P . brcvicompactum , P . nigricans , P . turbatum , P . steckii , P . corylophilum ), а также некоторые виды Aspergillus ( Aspergillus chrysogenum, P. brcvicompactum, P. nigricans, P. turbatum, P. steckii, P. corylophilum), а також деякі види Aspergillus (Aspergillus , Asp . flavipes , Asp . janus , Asp . nidulans flavus, Asp. flavipes, Asp. janus, Asp. nidulans та ін.) Є вказівки, що пеніцилін утворюється також термофільним організмом Malbranchia . pulchella.
Перші виділені з природних субстратів штами Penicillium як найбільш активні продуценти пеніциліну утворювали не більше 20 одиниць (12 мкг) антибіотика на 1 мл культуральної рідини. Навіть промислове виробництво цього найціннішого препарату було розпочато при активності культуральної рідини не вище 30 мкг! Мл або 50 од / мл. Наскільки низька ця активність, можна судити з того факту, що в даний час у промислових умовах отримують культуральні рідини з вмістом пеніциліну до 5000 од! мл, а окремі штами здатні синтезувати антибіотик в кількості 10-15 тис. од / мл (Єгоров Н. С., 1986).
Велике значення в даний час має так званий напівсинтетичний (біологічний + хімічний) спосіб отримання аналогів природного пеніциліну, що володіють рядом цінних властивостей. - d Цим способом і отриманий кислотоустойчивой і шірокоспектровий препарат - ампіцилін (a - d - Амінобензілпеніціллін), який як і всі відомі пеніциліни пригнічує синтез клітинної стінки бактерій.
Процес біосинтезу пеніциліну необхідно проводити при самому ретельному дотриманні стерильності всіх операцій - забруднення культур сторонньої мікрофлорою викликає різке зниження накопичення антибіотика. , Вас. mesentericus , Вас. megatherium , Вас. cereus , Ba ct . coll Відомо, що багато бактерій, що зазвичай зустрічаються в повітрі (Вас. subtilis, Вас. Mesentericus, Вас. Megatherium, Вас. Cereus, Ba ct. Coll тощо), здатні утворювати фермент пеніциліназу, що розщеплює пеніцилін. Особливо активними продуцентами пеніцилінази є Вас. Subtilis . Загрязнение культуры гриба одной из этих бактерий может привести к резкому падению количества антибиотика в культуральной жидкости. і Вас. cereus. Забруднення культури гриба однієї з цих бактерій може призвести до різкого падіння кількості антибіотика в культуральній рідині.
Питанню розгляду антибіотичної активності пеніциліну відносно ряду мікроорганізмів приділено достатньо багато уваги. Встановлено, що пеніцилін спричиняє антимікробну дію щодо деяких грампозитивних бактерій (стафілококів, стрептококів, диплококів і деяких ін) і практично неактивний відносно грамотріцательпих видів і дріжджів.
За характером дії па мікроорганізми пеніцилін є бактеріостатичну і за певних концентраціях бактеріоцідное антибіотиком. Різні типи пеніцилінів володіють різним ступенем біологічної активності.
Чутливі до пеніциліну мікроорганізми відносно легко і швидко набувають стійкості до антибіотика. Мікроорганізми, що придбали стійкість до одного з типів пеніциліну, як правило, резистентні і до інших типів пеніциліну. У деяких бактерії стійкість до пеніцилінів супроводжується здатністю утворювати пеніциліназу.
. griseus . Актиномицет, образующий стрептомицин, был впервые выделен в лаборатории микробиологии Ратжерского университета в 1943 г. Ваксман та його співробітники в 1944 р. відкрили чудовий антибіотичний препарат стрептоміцин, виділений з культури Act. Griseus. Актиномицет, утворює стрептоміцин, був вперше виділений в лабораторії мікробіології Ратжерского університету в 1943 р.
). Перше повідомлення про виділення антибіотика було зроблено Шатц, Бугі і Ваксманом в січні 1944 р. Антибіотик отримав назву стрептоміцин (від родової назви актиноміцетів Streptomyces).
. globisporus Красильниковим культура актиномицета, утворює стрептоміцин, віднесена до Act. Globisporus . globisporus і названа Act. globisporus ; позднее он предложил назвать организм, образующий стрептомицин, Act . streptomycini . streptomycini, пізніше він запропонував назвати організм, який утворює стрептоміцин, Act. streptomycini.
. str ep tomycini , по и другие актиномицеты — Act . bikiniensis , Act . raneus , Act . humidus , Act . reticuli , Act . griseocarneus , Act . mashuensis . Однако основным продуцентом стрептомицина является Act . streptomycin . Стрептоміцин утворюють не тільки штами Act. Str ep tomycini, по і інші актиноміцети - Act. Bikiniensis, Act. Raneus, Act. Humidus, Act. Reticuli, Act. Griseocarneus, Act. Mashuensis. Однак основним продуцентом стрептоміцину є Act. Streptomycin.
За відношенню до стрептоміцину всі мікроорганізми умовно можна розділити на три групи (Шемякін, Хохлов та ін, 1961).
1. , Bordetella , Brucella , Klebsiella , Mycobacterium , Bacterium Дуже чутливі мікроорганізми, які придушуються в більшості випадків 10 мкг / мл. Сюди можна віднести організми, що належать до наступних пологів: Bacillus, Bordetella, Brucella, Klebsiella, Mycobacterium, Bacterium і деякі інші.
2. Помірно чутливі, для придушення яких in необходимо иметь концентрацию стрептомицина в пределах 10—100 мкг/мл. К этой группе могут быть отнесены многие бактерии из родов Aerobacter , Corynebacterium , Diplococcus , Proteus , Staphylococcus , Streptococcus , Vibrio . vitro необхідно мати концентрацію стрептоміцину в межах 10-100 мкг / мл. До цієї групи можуть бути віднесені багато бактерії з родів Aerobacter, Corynebacterium, Diplococcus, Proteus, Staphylococcus, Streptococcus, Vibrio.
3. , Clostridium , некоторые виды Proteus , многие виды грибов, дрожжей, риккетсии, вирусы. Стійкі форми мікробів, для придушення яких необхідна концентрація антибіотика, що перевищує 100 мкг / мл. Сюди відносяться пологи Bacteroides, Clostridium, деякі види Proteus, багато видів грибів, дріжджів, рикетсії, віруси.
Отже, різні організми по-різному реагують на присутність у середовищі стрептоміцину. Поряд з тим, що стрептоміцин пригнічує ріст багатьох видів мікроорганізмів, до нього досить легко з'являється стійкість, виникають резистентні до стрептоміцину форми бактерій.
За антибактериальному спектру стрептоміцин істотно відрізняється від пеніциліну - його біологічна дія проявляється не тільки у відношенні грампозитивних бактерій, а й у відношенні грамнегативних і кислотостійких мікробів. На відміну від пеніциліну стрептоміцин проявляє антибіотичну дію на бактерії не тільки у фазі їх логарифмічного росту, але і в фазі спокою. Різниця в біологічному дії пеніциліну і стрептоміцину складається також і в тому, що, як правило, стійкі до пеніциліну мікроби виявляються чутливими до стрептоміцину.
На відміну від пеніциліну, стрептоміцин поглинається клітинами мікробів в залежності від його концентрації в середовищі: чим вище концентрація антибіотика в середовищі, тим більше його поглинається клітиною.
Встановлено, що стрептоміцин надає глибоке і різноманітний вплив на обмін речовин чутливих до нього мікроорганізмів. Антимікробна дія цього препарату в основному полягає в тому, що він гальмує синтез білка в клітині бактерій.
Цьому процесу приділяється велика увага при вивченні механізму дії стрептоміцину.
весьма чувствительны к стрептомицину (Таблица 2), который подавляет рост данных микроорганизмов даже при концентрации 10 мкг/мл. Бактерії роду Bacillus вельми чутливі до стрептоміцину (Таблиця 2), який пригнічує ріст даних мікроорганізмів навіть при концентрації 10 мкг / мл.
Таблиця 2

по отношению к бактериям рода Bacillus (Егоров Н.С.,1986) Антибіотична активність стрептоміцину in vitro по відношенню до бактерій роду Bacillus (Єгоров Н.С., 1986)

Мікроорганізми	Концентрація стрептоміцину (мкг / мл), що викликає придушення
	найбільш чутливих штамів	найбільш стійких штамів	більшість штамів
Bacillus anthracis	0.250	10	5
Bacillus cereus	0.830	2	1
Bacillus megatherium	0.250	4	2
Bacillus subtilis	0.056	128	25

являются представителями грамположительных бактерий, то на их развитие и рост оказывают влияние большинство антибиотиков, влияющих на эту группу микроорганизмов. Тому що бактерії роду Bacillus є представниками грампозитивних бактерій, то на їх розвиток і зростання впливають більшість антибіотиків, що впливають на цю групу мікроорганізмів.

Глава 2. Об'єкти і методи досліджень

2.1 Об'єкти досліджень

из коллекции кафедры «Прикладная биология и микробиология». В якості об'єктів досліджень взяли штами бактерій роду Bacillus з колекції кафедри «Прикладна біологія та мікробіологія». , как Bacillus cereus , Bacillus subtilis и Bacillus mesentericus . Зокрема, в даній курсовій роботі вивчаємо вплив різних антибіотиків на таких представників роду Bacillus, як Bacillus cereus, Bacillus subtilis і Bacillus mesentericus. Для досліджень взяли тільки чисті культури мікроорганізмів, вирощені на МПА.

У ході досліджень застосовували такі антибіотики: бензилпеніциліну натрієва сіль (1000000 одиниць), стрептоміцину сульфат (1 г), ампіцилін (0,5 г).

2.2 Методи досліджень

Для визначення чутливості мікроорганізмів до антибіотиків використовували методи дифузії в агар з використанням жолобка, метод титрів (серійних розведень) у щільних середовищах. (І. С. Дзержинська, 2005)

2.2.1 Метод дифузії в агар з використанням жолобка (досвід О. Флемінга)

Обладнання: 3 чашки Петрі з ПА, стерильні пінцети і скальпелі, розчин антибіотика, суспензії культур досліджуваних бактерій, бактеріологічна петля, спиртівка, лінійка.

Хід роботи:

1.Приготувати розчини антибіотиків.

1.1. 1000000 одиниць солі бензилпеніциліну (порошок) розчинили в 10 мл стерильної дистильованої води. Отримали концентрацію антибіотика 100000 од. на 1 мл води.

1.2. 0.5 г ампіциліну розчинили в 3 мл стерильної дистильованої води. Концентрація антибіотика - 0.66 г на 1 мл води.

1.3. 1 г стрептоміцину розчинили в 6 мл стерильної дистильованої води. Концентрація антибіотика - 0.66 г на 1 мл води.

2. . cereus , B . subtilis и B . mesentericus внесли в пробирки с 9 мл стерильной воды. Приготували суспензії культур мікроорганізмів: по одній петлі культур B. Cereus, B. Subtilis і B. Mesentericus внесли в пробірки з 9 мл стерильної води.

3. У чашках Петрі із застиглим поживним агаром стерильним скальпелем зробили по одному жолобку вздовж всієї чашки (ширина жолобка 0.5 см, глибина агарового шару 1 см). Жолобки заповнили розчинами антибіотиків (у кожному жолобки по 0.6 мл відповідного антибіотика).

4.У кожну чашку Петрі з антибіотиком посіяли по три культури бактерій у вигляді смужок, перпендикулярних до жолобку. Вирощували при кімнатній температурі дві доби.

5.Ізмерілі діаметр зони відсутності росту мікроорганізмів.

2.2.2 Метод титрів (серійних розведень) у щільних середовищах

– В. cereus . Мета: вивчити вплив різних концентрацій пеніциліну і стрептоміцину на зростання представника роду Bacillus - В. cereus.

, пробирки с 10 мл воды для разведений, стерильные пипетки на 1 мл, пробирки с 4 мл питательного агара, бактериологическая петля, спиртовка. Обладнання: стрептоміцин і сіль бензилпеніциліну, суспензія культури В. cereus, пробірки з 10 мл води для розведень, стерильні піпетки на 1 мл, пробірки з 4 мл живильного агару, бактеріологічна петля, спиртівка.

Хід роботи:

1. Приготування серійних розведень антибіотиків.

1.1. Розчинили по 1000000 одиниць стрептоміцину і солі бензилпеніциліну (1 г і 0.5 г порошку відповідно) в пробірках з 10 мл води. Концентрація антибіотиків - 100000 од / мл.

1.2. З попереднього розведення взяли стерильною піпеткою по 1 мл розчину кожного антибіотика і внесли в пробірки з 10 мл стерильної води.

Концентрація антибіотиків - 10000 од. / мл.

1.3.По наведеною схемою (пункт 1.2.) Приготували розведення антибіотиків з концентраціями - 1000 од. / мл, 100ед./мл і 10 од. / мл.

2. Внесли стерильною піпеткою по 1 мл кожного розведення (10000 од. / мл, 1000 од. / мл, 100 од. / мл, 10ед./мл) у пробірки, що містять по 4 мл розплавленої та охолодженої агаризованому середовища, скосили пробірки до застигання агару .

3. . cereus . На поверхню щільного середовища петлею засіяли завись культури B. Cereus. Посіви вирощували 18-20 годин.

4. Відзначили різну інтенсивність росту мікроорганізмів при різних концентраціях антибіотика.

Глава 3. Результати досліджень

: Bacillus subtilis , Bacillus mesentericus , Bacillus cereus . В ході курсової роботи вивчили вплив таких антибіотиків, як стрептоміцин, пеніцилін, ампіцилін, на грампозитивні бактерії роду Bacillus: Bacillus subtilis, Bacillus mesentericus, Bacillus cereus.

образовал выпуклые колонии белого цвета с расползающимися краями, блестящие, слизистые; Bacillus subtilis – мутно-белые, слизистые, выпуклые колонии с расползающимися краями; Bacillus mesentericus – прозрачно-серые, плоские, блестящие, слизистые колонии с расползающимися краями. Bacillus cereus утворив опуклі колонії білого кольору з розповзаються краями, блискучі, слизові; Bacillus subtilis - мутно-білі, слизові, опуклі колонії з розповзаються краями; Bacillus mesentericus - прозоро-сірі, плоскі, блискучі, слизисті колонії з розповзаються краями.

У результаті досліджень методом дифузії в агар з використанням жолобка отримали наступні результати:

1. У чашці Петрі з бензилпенициллином спостерігали затримку росту колоній мікроорганізмів, тобто відстань від краю жолобка до початку росту колоній. составила 2 см, Bacillus mesentericus – 1.5 см, Bacillus cereus - 1 см. Результаты приведены на Рисунке 1 (Приложение 1). Затримка росту культури, Bacillus subtilis склала 2 см, Bacillus mesentericus - 1.5 см, Bacillus cereus - 1 см. Результати наведені на рисунку 1 (Додаток 1).

2. – 3.8 см, Bacillus mesentericus – 2.5 см, Bacillus cereus – 3.3 см. Результаты приведены на Рисунке 2 (Приложение 2). Затримка росту за дії ампіциліну склала: у Bacillus subtilis - 3.8 см, Bacillus mesentericus - 2.5 см, Bacillus cereus - 3.3 см. Результати наведені на рисунку 2 (Додаток 2).

3. – 2.2 см, Bacillus mesentericus – 2 см, Bacillus cereus – 2.5 см. У чашці Петрі з стрептоміцином затримка росту у Bacillus subtilis - 2.2 см, Bacillus mesentericus - 2 см, Bacillus cereus - 2.5 см.

(метод титров в плотных средах) получили следующие результаты: При вивченні впливу різних концентрацій бензилпеніциліну і стрептоміцину на культуру Bacillus cereus (метод титрів у щільних середовищах) отримали наступні результати:

1.В пробірках з різною концентрацією стрептоміцину в живильному середовищі спостерігали неоднакову інтенсивність росту колоній. Відсутністю росту мікроорганізмів характеризується пробірка з додаванням антибіотика концентрацією 10000 од. / мл. Найбільший розвиток колоній спостерігали при концентраціях стрептоміцину 10 од. / мл і 100 од. / мл (колонії рівні, поширені по всій поверхні живильного середовища). При концентрації антибіотика 1000 од. / мл, розчиненої у 4 мл живильного агару, мікроорганізми розвиваються окремими скупченнями, колонії нерівні, дрібні, поширені по живильному середовищі нерівномірно.

2. . У всіх пробірках з різною концентрацією бензілбеніцілліна у живильному середовищі спостерігали розвиток колоній культури Bacillus cereus. Інтенсивність росту колоній збільшується зі зменшенням концентрації антибіотика. Найменша розвиток і поширення мікроорганізмів спостерігали в пробірці з концентрацією 10000 од. / мл, найбільше - при концентрації 10 од. / мл, розчиненої в 4 мл середовища.

Висновки

1. к различным антибиотикам (пенициллин, ампициллин, стрептомицин), установили, что данные микроорганизмы наиболее чувствительны к ампициллину и стрептомицину, чувствительность к бензилпенициллину минимальна. Вивчивши чутливість бактерій роду Bacillus до різних антибіотиків (пеніцилін, ампіцилін, стрептоміцин), встановили, що дані мікроорганізми найбільш чутливі до ампіциліну та стрептоміцину, чутливість до бензилпеніциліну мінімальна. (например, Bacillus subtilis и Bacillus cereus ) образовывать фермент пенициллиназу, разрушающий пенициллин. Таку стійкість до пеніциліну можна пояснити можливістю деяких представників роду Bacillus (наприклад, Bacillus subtilis і Bacillus cereus) утворювати фермент пеніциліназу, що руйнує пеніцилін.

. Bacillus mesentericus проявляет наибольшую устойчивость к стрептомицину и ампициллину, по сравнению с другими видами. Що стосується індивідуальної чутливості, то найменш стійким до даних антибіотиків виявилася культура Bacillus subtilis. Bacillus mesentericus проявляє найбільшу стійкість до стрептоміцину і ампіциліну, в порівнянні з іншими видами. . До пеніциліну самим стійким є Bacillus cereus.

2. , установили, что данный штамм устойчив даже к значительной концентрации бензилпенициллина (10000 ед./мл). У результаті вивчення впливу різних концентрацій антибіотика, доданого в живильне середовище, на культуру Bacillus cereus, встановили, що даний штам стійкий навіть до значної концентрації бензилпеніциліну (10000 од. / мл). к пенициллину, которая связана с образованием пенициллиназы. Отриманий результат доводить можливість появи резистентності бактерій роду Bacillus до пеніциліну, яка пов'язана з утворенням пеніцилінази.

является по отношению к стрептомицину. Більш чутливим Bacillus cereus є по відношенню до стрептоміцину. Антибіотик концентрацією 10000 од. / мл, розчинений у 4 мл живильного середовища повністю пригнічує ріст культури, при концентрації 1000 од. / мл відбувається пригнічення росту, розвиток мінімальне.

, чем пенициллин. Таким чином, стрептоміцин надає більший вплив на бактерії роду Bacillus, ніж пеніцилін. Це пояснюється широким спектром дії стрептоміцину і тим, що багато чутливі до пеніциліну мікроорганізми відносно легко і швидко набувають стійкості до антибіотика.

Список літератури

1. Бріан Л. Бактеріальна резистентність і чутливість до хіміопрепаратів / Переклад з англ. А. Я. Івлєвої. - Москва: Медицина, 1984 .- 270 с.

2. Воробйов А. А., Кривошеїн Ю. С., Биков О. С. Основи мікробіології, вірусології та імунології. Москва: Майстерність, 2001 .- 224 с.

3. Гусєв М. В., Мінєєва Л. А. Мікробіологія (третє видання). Москва: Видавництво Московського університету, 1992 .- с.

4. Єгоров Н.С. Основи вчення про антибіотики (5-е видання, перероблене і доповнене). Москва: Видавництво Московського університету, 1994 .- 512 с.

5. Єрмольєва З. В. Стрептоміцин. Москва, Медгиз, 1956 .- 59 с.

6. Гаузе Г. Ф. Лекції з антибіотиків (видання 2-е, перероблене і доповнене). Москва, 1953 .- 251 с.

7. Кашкін П. М., Елін Н. П. Антибіотики. Ленінград: Медицина, Ленінградське відділення, 1970 .- 375 с.

8. Покровський В. Н. Антибіотики та бактерії. Москва: Знання, 1990. 64 с.

9. Сазикін Ю. О. Біохімічні основи дії антибіотиків на мікробну клітину. Москва: Наука, 1965 .- 267 с.

10. Шемякін Хохлов 1961

11. Дзержинська І. С. Методи виділення, дослідження і визначення антибіотичної активності мікроорганізмів, що володіють антагоністичними властивостями: Методичні вказівки до практичних робіт з дисципліни Антибіотики для студентів спеціальності 012400 «Мікробіологія» / АГТУ .- Астрахань, 2005 .- 76 с.

Додаток 1

Малюнок 1. Чутливість мікроорганізмів (Bacillus , Bacillus subtilis, Bacillus , Bacillus mesentericus, Bacillus – на рисунке слева направо) к бензилпенициллину. cereus - на малюнку зліва направо) до бензилпеніциліну.

Додаток 2

Малюнок 2. Чутливість мікроорганізмів (Bacillus , Bacillus subtilis, Bacillus , Bacillus mesentericus, Bacillus – на рисунке слева направо) к ампициллину. cereus - на малюнку зліва направо) до ампіциліну.