ЗМІСТ
1. Збудник сибірської виразки
2. Морфологія.
3. Культивування
4. Біохімічні властивості.
5. Токсиноутворення
6. Антигенна структура
7. Стійкість.
8. Патогенність.
9. Патогенез.
10. Лабораторна діагностика.
- Бактеріоскопія.
- Посів на поживні середовища.
- Біологічна проба.
- Ідентифікація бацили антраксу.
- Проба бактеріофагом (лізабельность фагом).
- Імунофлюоресцентний тест.
- Серологічне дослідження.
11. Імунітет і засоби специфічної профілактики.
12. Список літератури
Патогенні Бацили Збудник сибірки
Збудник сибірської виразки - Bacilla anthracis (Cohn, 1872) - типовий представник патогенних бацил. Відноситься до сімейства Васillасеае і роду Bacilus. Цей мікроб часто називають бацилою антраксу.
Сибірська виразка (Anthrax) - зооантропонозам. До неї сприйнятливі тварини багатьох видів, особливо травоїдні, і людина. Інфекційний процес протікає переважно гостро з явищами септицемії або з утворенням різної величини карбункулів. Хвороба реєструють у вигляді спорадичних випадків, можливі ензоотіі і навіть епізоотії. Назва хвороби «сибірська виразка» запропонував в 1789 р. С. С. Андрієвський, який вивчав її на Уралі і в Сибіру.
Мікроскопічно бацила сибірської виразки виявлена Поллі-формальним лідером в 1849 р. Французькі дослідники давен і Рейс (1850), а в Росії професор Дерптського ветеринарного училища Брауелл (1857) відзначили також у крові хворих і загиблих від сибірської виразки овець наявність ниткоподібних нерухомих і неветвящихся тілець. Брауель одним з перших виявив бацили в крові людини, яка померла від сибірської виразки, і експериментально відтворив типове захворювання у тварин при зараженні їх кров'ю, яка містить мікроскопічно видимі палички. Проте значення цих паличок залишалося нез'ясованим до 1863 р., коли давен остаточно встановив роль цих утворень в якості патогенних збудників сибірської виразки.
Чисті культури бацили антраксу виділив у 1876 р. спочатку Р. Кох, а потім Л. Пастер; незалежно один від одного вони за допомогою цих культур відтворили хвороба у тварин.
У Росії першу культуру сибиреязвенного мікроба отримав В. К. Високович в 1882 р.
Дослідженнями Р. Коха в 1876 р. було доведено, що вегетативні клітини сибиреязвенного мікроба мають здатність формувати спори, в 1888 р. Серафіні виявив капсулу.
1. Збудник сибірської виразки
2. Морфологія.
3. Культивування
4. Біохімічні властивості.
5. Токсиноутворення
6. Антигенна структура
7. Стійкість.
8. Патогенність.
9. Патогенез.
10. Лабораторна діагностика.
- Бактеріоскопія.
- Посів на поживні середовища.
- Біологічна проба.
- Ідентифікація бацили антраксу.
- Проба бактеріофагом (лізабельность фагом).
- Імунофлюоресцентний тест.
- Серологічне дослідження.
11. Імунітет і засоби специфічної профілактики.
12. Список літератури
Патогенні Бацили Збудник сибірки
Збудник сибірської виразки - Bacilla anthracis (Cohn, 1872) - типовий представник патогенних бацил. Відноситься до сімейства Васillасеае і роду Bacilus. Цей мікроб часто називають бацилою антраксу.
Сибірська виразка (Anthrax) - зооантропонозам. До неї сприйнятливі тварини багатьох видів, особливо травоїдні, і людина. Інфекційний процес протікає переважно гостро з явищами септицемії або з утворенням різної величини карбункулів. Хвороба реєструють у вигляді спорадичних випадків, можливі ензоотіі і навіть епізоотії. Назва хвороби «сибірська виразка» запропонував в 1789 р. С. С. Андрієвський, який вивчав її на Уралі і в Сибіру.
Мікроскопічно бацила сибірської виразки виявлена Поллі-формальним лідером в 1849 р. Французькі дослідники давен і Рейс (1850), а в Росії професор Дерптського ветеринарного училища Брауелл (1857) відзначили також у крові хворих і загиблих від сибірської виразки овець наявність ниткоподібних нерухомих і неветвящихся тілець. Брауель одним з перших виявив бацили в крові людини, яка померла від сибірської виразки, і експериментально відтворив типове захворювання у тварин при зараженні їх кров'ю, яка містить мікроскопічно видимі палички. Проте значення цих паличок залишалося нез'ясованим до 1863 р., коли давен остаточно встановив роль цих утворень в якості патогенних збудників сибірської виразки.
Чисті культури бацили антраксу виділив у 1876 р. спочатку Р. Кох, а потім Л. Пастер; незалежно один від одного вони за допомогою цих культур відтворили хвороба у тварин.
У Росії першу культуру сибиреязвенного мікроба отримав В. К. Високович в 1882 р.
Дослідженнями Р. Коха в 1876 р. було доведено, що вегетативні клітини сибиреязвенного мікроба мають здатність формувати спори, в 1888 р. Серафіні виявив капсулу.
Морфологія.
Бацила антраксу досить велика (1 -1,3 * 3,0-10,0 мкм) паличка, нерухома, утворює капсулу та спору. Мікроб зустрічається у трьох формах: у вигляді вегетативних різної величини клітин (капсульних і бескапсульмих), у вигляді спор, укладених в добре виражений екзоспоріум, і у вигляді ізольованих суперечка. У пофарбованих препаратах з крові і тканин хворих або загиблих від сибірки тварин бактерії розташовуються поодиноко, попарно і у вигляді коротких ланцюжків (3-4 клітини); кінці паличок, звернених один до одного, прямі, різко обрубані, вільні - злегка закруглені. Іноді ланцюжка мають форму бамбукової тростини; в цьому випадку мікробні клітини як би обрубані, почасти втиснули в середину і в місцях зчленування симетрично потовщені. Такі морфологічні форми зустрічаються у бактерій, що утворили капсулу.
У мазках з культур, що дають типовий зростання на щільних і рідких поживних середовищах, палички розташовуються довгими ланцюжками. Бактерії з культур з атиповим дифузним ростом в рідких середовищах утворюють короткі ланцюжки.
Збудник сибірської виразки інтенсивно забарвлюється спиртоводного розчинами основних анілінових барвників. Мазки і відбитки з тканин загиблих тварин, а також мазки з крові дуже добре фарбуються метиленової синню Леффлера. Препарати з культур можна фарбувати 1-2 хв розведеним 1:10 фуксином Циля і метиленової синню. Дана бактерія (вегетативна форма) грампозитивні, але в молодих і старих культурах зустрічаються і грамнегативні клітини.
В організмі або при культивуванні на штучних поживних середовищах з великим вмістом нативного білка і СО 2 сібіреязвенная бацила утворює виражену капсулу.
Сібіреязвенная бацила при несприятливих умовах існування має здатність формувати спори. У кожній вегетативної клітці, або спорангії, утворюється тільки одна ендоспори, частіше розташована центрально, рідше - субтермінально. Спори бацили антраксу овальні, іноді округлі, сильно преломляющие світло освіти. Розміри зрілих суперечка коливаються в межах 1,2-1,5 мкм в довжину і 0,8-1,0 мкм у поперечнику, незрілі спори (проспорив) дещо менше. При температурі нижче 12 і вище 42 0 С, а також у живому організмі або нерозкритій трупі, в крові та сироватці тварин суперечки не утворюються.
Бацила антраксу досить велика (1 -1,3 * 3,0-10,0 мкм) паличка, нерухома, утворює капсулу та спору. Мікроб зустрічається у трьох формах: у вигляді вегетативних різної величини клітин (капсульних і бескапсульмих), у вигляді спор, укладених в добре виражений екзоспоріум, і у вигляді ізольованих суперечка. У пофарбованих препаратах з крові і тканин хворих або загиблих від сибірки тварин бактерії розташовуються поодиноко, попарно і у вигляді коротких ланцюжків (3-4 клітини); кінці паличок, звернених один до одного, прямі, різко обрубані, вільні - злегка закруглені. Іноді ланцюжка мають форму бамбукової тростини; в цьому випадку мікробні клітини як би обрубані, почасти втиснули в середину і в місцях зчленування симетрично потовщені. Такі морфологічні форми зустрічаються у бактерій, що утворили капсулу.
У мазках з культур, що дають типовий зростання на щільних і рідких поживних середовищах, палички розташовуються довгими ланцюжками. Бактерії з культур з атиповим дифузним ростом в рідких середовищах утворюють короткі ланцюжки.
Збудник сибірської виразки інтенсивно забарвлюється спиртоводного розчинами основних анілінових барвників. Мазки і відбитки з тканин загиблих тварин, а також мазки з крові дуже добре фарбуються метиленової синню Леффлера. Препарати з культур можна фарбувати 1-2 хв розведеним 1:10 фуксином Циля і метиленової синню. Дана бактерія (вегетативна форма) грампозитивні, але в молодих і старих культурах зустрічаються і грамнегативні клітини.
В організмі або при культивуванні на штучних поживних середовищах з великим вмістом нативного білка і СО 2 сібіреязвенная бацила утворює виражену капсулу.
Сібіреязвенная бацила при несприятливих умовах існування має здатність формувати спори. У кожній вегетативної клітці, або спорангії, утворюється тільки одна ендоспори, частіше розташована центрально, рідше - субтермінально. Спори бацили антраксу овальні, іноді округлі, сильно преломляющие світло освіти. Розміри зрілих суперечка коливаються в межах 1,2-1,5 мкм в довжину і 0,8-1,0 мкм у поперечнику, незрілі спори (проспорив) дещо менше. При температурі нижче 12 і вище 42 0 С, а також у живому організмі або нерозкритій трупі, в крові та сироватці тварин суперечки не утворюються.
Культивування.
Сибірковий мікроб за способом дихання відносять до факультативних анаеробів: він однаково добре розвивається в умовах підвищеної аерації, в тому числі і в атмосфері кисню, і в анаеробних умовах.
Бацила антраксу невимоглива до живильних середовищах і добре росте на універсальних середовищах (МПБ, МПА, МПЖ, картоплі, молоці). Крім того, її вирощують на різних рослинних субстратах: настоях соломи, сіна, екстрактах гороху, сої, вики, скибочках вареної картоплі, буряка, моркви і т. п.
Оптимальна температура росту на МПА 35-37 ° С, в бульйоні 32-33 ° С. При температурі нижче 12 і вище 45 ° С не зростає. Оптимум рН середовищ лежить в межах 7,2-7,6, проте значення рН від 6,7 до 8,5 не пригнічує ріст культур.
На поверхні МПА в аеробних умовах при температурі 37 ° С перші ознаки зростання можна помітити через 3 год з моменту посіву, 17-24-годинні культури складаються з сірувато-білуватих тонкозернистих колоній з сріблястим відтінком, схожих на сніжинки. Діаметр колоній не перевищує 3-5 мм. Від їх країв відходять завитки, кіски, які складаються з паралельно лежать довгих ниток. Властивість бацили утворювати на щільних живильних середовищах завитки з виходять за межі колонії нитками дало привід порівнювати колонії цього мікроба з міфічною головою Медузи, а також гривою лева. Такі колонії мають шорсткий рельєф, вони характерні для типових вірулентних штамів і позначаються як R-форма.
На сироватковому агарі і згорнутої кінській сироватці у присутності 10-50% вуглекислоти виявляються гладкі напівпрозорі колонії (S-форма), а також слизові (мукоїдне), що тягнуться за петлею колонії (М-форма), що складаються з капсульних паличок. Бескапсульние варіанти на вказаних середовищах утворюють шорсткуваті R-форми колоній. У МПБ та інших рідких середовищах сібіреязвенная бацила (R-форма) через 16-24 год на дні пробірки утворює пухкий білий осад, Надосадова рідина залишається прозорою, при струшуванні бульйон не мутніє, осад розбивається на дрібні пластівці. Ряд штамів росте у вигляді ніжних окремих пластівців, зважених у стовпчику бульйону, які через 48 год осідають на дно. Деякі штами на 3-4-е добу дають пухке пристеночное кільце по меніску бульйону, плівка на поверхні середовища не утворюється.
У сироватці крові і рідких сироваткових середовищах (середа ГКІ) росте інтенсивно з утворенням рясного пластівчасті осаду, капсульні варіанти синтезують потужні капсули.
Вельми характерний ріст відзначають в стовпчику желатин при посіві уколом. У цьому середовищі на 2-5-е добу з'являється жовтувато-білий стрижень, від якого під прямим кутом радіально відходять ніжні бічні відростки - довші в міру наближення до поверхні середовища і значно коротшає в напрямку донизу. Така культура нагадує ялинку, перевернуту верхівкою вниз. Поступово верхній шар желатин починає розріджуватися, приймаючи спочатку форму воронки, потім мішечка. У молоці розмножується швидко, виробляє кислоту і через 2-4 дні згортає його з подальшою пептонізаціей згустку. На картоплі утворює рясний, сухий, сіро-білий наліт, який іноді набуває кремовий відтінок. Агарові і бульйонні культури деяких штамів інтенсивно забарвлюються в коричневий колір внаслідок окислення тирозину. Сібіреязвенная бацила також добре розмножується в 8-12-добових курячих ембріонах, викликаючи їх загибель в період 2-4 днів з моменту зараження.
Сибірковий мікроб за способом дихання відносять до факультативних анаеробів: він однаково добре розвивається в умовах підвищеної аерації, в тому числі і в атмосфері кисню, і в анаеробних умовах.
Бацила антраксу невимоглива до живильних середовищах і добре росте на універсальних середовищах (МПБ, МПА, МПЖ, картоплі, молоці). Крім того, її вирощують на різних рослинних субстратах: настоях соломи, сіна, екстрактах гороху, сої, вики, скибочках вареної картоплі, буряка, моркви і т. п.
Оптимальна температура росту на МПА 35-37 ° С, в бульйоні 32-33 ° С. При температурі нижче 12 і вище 45 ° С не зростає. Оптимум рН середовищ лежить в межах 7,2-7,6, проте значення рН від 6,7 до 8,5 не пригнічує ріст культур.
На поверхні МПА в аеробних умовах при температурі 37 ° С перші ознаки зростання можна помітити через 3 год з моменту посіву, 17-24-годинні культури складаються з сірувато-білуватих тонкозернистих колоній з сріблястим відтінком, схожих на сніжинки. Діаметр колоній не перевищує 3-5 мм. Від їх країв відходять завитки, кіски, які складаються з паралельно лежать довгих ниток. Властивість бацили утворювати на щільних живильних середовищах завитки з виходять за межі колонії нитками дало привід порівнювати колонії цього мікроба з міфічною головою Медузи, а також гривою лева. Такі колонії мають шорсткий рельєф, вони характерні для типових вірулентних штамів і позначаються як R-форма.
На сироватковому агарі і згорнутої кінській сироватці у присутності 10-50% вуглекислоти виявляються гладкі напівпрозорі колонії (S-форма), а також слизові (мукоїдне), що тягнуться за петлею колонії (М-форма), що складаються з капсульних паличок. Бескапсульние варіанти на вказаних середовищах утворюють шорсткуваті R-форми колоній. У МПБ та інших рідких середовищах сібіреязвенная бацила (R-форма) через 16-24 год на дні пробірки утворює пухкий білий осад, Надосадова рідина залишається прозорою, при струшуванні бульйон не мутніє, осад розбивається на дрібні пластівці. Ряд штамів росте у вигляді ніжних окремих пластівців, зважених у стовпчику бульйону, які через 48 год осідають на дно. Деякі штами на 3-4-е добу дають пухке пристеночное кільце по меніску бульйону, плівка на поверхні середовища не утворюється.
У сироватці крові і рідких сироваткових середовищах (середа ГКІ) росте інтенсивно з утворенням рясного пластівчасті осаду, капсульні варіанти синтезують потужні капсули.
Вельми характерний ріст відзначають в стовпчику желатин при посіві уколом. У цьому середовищі на 2-5-е добу з'являється жовтувато-білий стрижень, від якого під прямим кутом радіально відходять ніжні бічні відростки - довші в міру наближення до поверхні середовища і значно коротшає в напрямку донизу. Така культура нагадує ялинку, перевернуту верхівкою вниз. Поступово верхній шар желатин починає розріджуватися, приймаючи спочатку форму воронки, потім мішечка. У молоці розмножується швидко, виробляє кислоту і через 2-4 дні згортає його з подальшою пептонізаціей згустку. На картоплі утворює рясний, сухий, сіро-білий наліт, який іноді набуває кремовий відтінок. Агарові і бульйонні культури деяких штамів інтенсивно забарвлюються в коричневий колір внаслідок окислення тирозину. Сібіреязвенная бацила також добре розмножується в 8-12-добових курячих ембріонах, викликаючи їх загибель в період 2-4 днів з моменту зараження.
Біохімічні властивості.
У бацили антраксу виявлені ферменти: ліпаза, діастази, протеаза, желатіназа, дегідрази, цитохромоксидази, пероксидаза, каталаза та ін Деякі штами утворюють сірководень, особливо це властивість виражено в середовищах, багатих пептонами; ця бактерія виділяє аміак. Ферментує з утворенням кислоти без газу глюкозу, мальтозу, повільно сахарозу, трегалозу, фруктозу і декстрин. На середовищах з гліцерином і саліцин можливо слабке кислотоутворення. Арабінозу, рамнозу, галактозу, манозу, раффинозу, інулін, маніт, дульцит, сорбіт, інозит НЕ зброжує. Утилізує цитрати, утворює ацетілметілкарбінол і внаслідок цього дає позитивну реакцію Фогеса - Проскауера. Синтезує лецитиназу і повільно коагулює розчини жовтка курячого яйця. Редукує метиленовий синій і відновлює нітрати в нітрити. Виробляє желатіназу, а також протеазу і досить швидко гідролізується желатин і згорнуту сироватку.
У бацили антраксу виявлені ферменти: ліпаза, діастази, протеаза, желатіназа, дегідрази, цитохромоксидази, пероксидаза, каталаза та ін Деякі штами утворюють сірководень, особливо це властивість виражено в середовищах, багатих пептонами; ця бактерія виділяє аміак. Ферментує з утворенням кислоти без газу глюкозу, мальтозу, повільно сахарозу, трегалозу, фруктозу і декстрин. На середовищах з гліцерином і саліцин можливо слабке кислотоутворення. Арабінозу, рамнозу, галактозу, манозу, раффинозу, інулін, маніт, дульцит, сорбіт, інозит НЕ зброжує. Утилізує цитрати, утворює ацетілметілкарбінол і внаслідок цього дає позитивну реакцію Фогеса - Проскауера. Синтезує лецитиназу і повільно коагулює розчини жовтка курячого яйця. Редукує метиленовий синій і відновлює нітрати в нітрити. Виробляє желатіназу, а також протеазу і досить швидко гідролізується желатин і згорнуту сироватку.
Токсиноутворення.
Бацила антраксу утворює складний екзотоксин. Він складається з трьох компонентів (факторів), які позначаються: едематогенний фактор (EF), протективний антиген (РА) і летальний фактор (LF) або відповідно фактори I, II, III. Їх синтезують капсульні і бескапсульние варіанти мікроба. Едематогенний фактор викликає місцеву запальну реакцію - набряк і руйнування тканин.
У хімічному відношенні це ліпопротеїн. Протективний антиген - носій захисних властивостей, має виражену імуногенні дією. У чистому вигляді нетоксичний. Летальний чинник сам по собі нетоксичний, але в суміші з другим чинником (РА) викликає загибель щурів, білих мишей і морських свинок. Протективний антиген і летальний фактор - гетерогенні в молекулярному відношенні білки. Всі три компоненти токсину складають синергическую суміш, яка надає одночасно ерс-матогенное і летальну дії, кожен з них має виражену антигенної функцією і серологічно активний.
Інвазивні властивості мікроба обумовлені капсульної поліпептидом d-глутамінової кислоти і екзоферментів.
Бацила антраксу утворює складний екзотоксин. Він складається з трьох компонентів (факторів), які позначаються: едематогенний фактор (EF), протективний антиген (РА) і летальний фактор (LF) або відповідно фактори I, II, III. Їх синтезують капсульні і бескапсульние варіанти мікроба. Едематогенний фактор викликає місцеву запальну реакцію - набряк і руйнування тканин.
У хімічному відношенні це ліпопротеїн. Протективний антиген - носій захисних властивостей, має виражену імуногенні дією. У чистому вигляді нетоксичний. Летальний чинник сам по собі нетоксичний, але в суміші з другим чинником (РА) викликає загибель щурів, білих мишей і морських свинок. Протективний антиген і летальний фактор - гетерогенні в молекулярному відношенні білки. Всі три компоненти токсину складають синергическую суміш, яка надає одночасно ерс-матогенное і летальну дії, кожен з них має виражену антигенної функцією і серологічно активний.
Інвазивні властивості мікроба обумовлені капсульної поліпептидом d-глутамінової кислоти і екзоферментів.
Антигенна структура.
До складу антигенів бацили антраксу входять неіммуногенний соматичний полісахаридний комплекс і капсульний глутамінполіпептід. Полісахаридний антиген не створює імунітету у тварин і не визначає агресивних функцій бацили, його завжди виявляють як у вірулентних, так і авірулентний штамів. У зв'язку з тим що полісахарид тісно пов'язаний з тілом бактеріальної клітини, він отримав назву соматичного антигену. Сибірковий соматичний антиген дуже часто позначається літерою С, капсульний поліпептид - буквою Р. Капсульний антиген бацили антраксу представлений складним поліпептидом d-глутамінової кислоти і розглядається як группоспецифических речовина, так як він дає перехресні серологічні реакції з поліпептидом B.subtilis, B.cеrcus і B . megaterium. Активними антигенами також є всі три компоненти сибиреязвенного екзотоксину.
До складу антигенів бацили антраксу входять неіммуногенний соматичний полісахаридний комплекс і капсульний глутамінполіпептід. Полісахаридний антиген не створює імунітету у тварин і не визначає агресивних функцій бацили, його завжди виявляють як у вірулентних, так і авірулентний штамів. У зв'язку з тим що полісахарид тісно пов'язаний з тілом бактеріальної клітини, він отримав назву соматичного антигену. Сибірковий соматичний антиген дуже часто позначається літерою С, капсульний поліпептид - буквою Р. Капсульний антиген бацили антраксу представлений складним поліпептидом d-глутамінової кислоти і розглядається як группоспецифических речовина, так як він дає перехресні серологічні реакції з поліпептидом B.subtilis, B.cеrcus і B . megaterium. Активними антигенами також є всі три компоненти сибиреязвенного екзотоксину.
Стійкість.
Стійкість і тривалість виживання у вегетативних клітин і спор збудника сибірської виразки різні. Перші щодо лабільні, другі досить резистентні.
В нерозкритій трупі вегетативна форма мікроба в результаті дії протеолітичних ферментів руйнується вже протягом 2-3 діб, в заритих трупах може зберігатися до 4 днів, через 7 діб завершується лізис бактерій навіть у кістковому мозку. У шлунковому соку при температурі 38 0 С гине через 30 хв, у замороженому м'ясі при мінус 15 ° С залишається життєздатною 15 днів, в засоленому м'ясі - до 1,5 міс. Гнійна рідота, змішана з сібіреязвенной кров'ю, вбиває вегетативні клітини через 2-3 год, суперечки ж залишаються в ній вірулентними протягом місяців, в запаяних ампулах та бульйонні культурами можуть залишатися життєздатними і вірулентними до 63 років, в грунті - понад 50 років.
До впливу різних хімічних речовин вегетативні клітини малостійкі. Спирт, ефір, 2%-ний формалін, 5%-ний фенол, 5-10%-ний хлорамін, свіжий 5%-ний розчин хлорного вапна, перекис водню їх руйнують протягом 5 хв.
Для знищення спорової форми збудника потрібна більш тривала експозиція. Етиловий спирт у концентраціях від 25% до абсолютного вбиває суперечки протягом 50 днів і більше, 5%-ний фенол, 5-10%-ний розчин хлораміну знешкоджують суперечки через кілька годин і навіть діб, 2%-ний розчин формаліну - через 10 -15 хв, 3%-ний розчин перекису водню - через 1 год, 4%-ний розчин перманганату калію - через 15 хв, 10%-ний розчин гідроокису натрію - через 2'ч.
Вегетативні клітини також малостійкі і до температурних факторів. При нагріванні до 50-55 ° С гинуть протягом 1 год, при 60 0 С - через 15 хв, при 75 ° С - через 1 хв, при кип'ятінні - миттєво. Вони чутливі до висушування, проте при повільному висушуванні настає спорообразование і мікроб не гине. Низькі ж температури їх консервують. Так, при мінус 10 0 С бактерії зберігаються 24 дні, при мінус 24 ° С - 12 днів.
Вплив прямого сонячного світла знешкоджує бактерії через кілька годин.
На суперечки висушування взагалі згубно не діє. Сухий жар при температурі 120-140 0 С вбиває суперечки тільки через 2-3 год, при 150 0 С - через 1 год, поточний пар при 100 0 С - через 12-15 хв, автоклавування при 110 ° С - за 5-10 хв, кип'ятіння - через 1 год
Збудник сибірської виразки проявляє високу чутливість до пеніциліну, хлортетрациклин і левоміцетину, а також до литическому дії лізоциму. Бактеріостатичний ефект протягом 24 год має свежевидоенное молоко корів.
Стійкість і тривалість виживання у вегетативних клітин і спор збудника сибірської виразки різні. Перші щодо лабільні, другі досить резистентні.
В нерозкритій трупі вегетативна форма мікроба в результаті дії протеолітичних ферментів руйнується вже протягом 2-3 діб, в заритих трупах може зберігатися до 4 днів, через 7 діб завершується лізис бактерій навіть у кістковому мозку. У шлунковому соку при температурі 38 0 С гине через 30 хв, у замороженому м'ясі при мінус 15 ° С залишається життєздатною 15 днів, в засоленому м'ясі - до 1,5 міс. Гнійна рідота, змішана з сібіреязвенной кров'ю, вбиває вегетативні клітини через 2-3 год, суперечки ж залишаються в ній вірулентними протягом місяців, в запаяних ампулах та бульйонні культурами можуть залишатися життєздатними і вірулентними до 63 років, в грунті - понад 50 років.
До впливу різних хімічних речовин вегетативні клітини малостійкі. Спирт, ефір, 2%-ний формалін, 5%-ний фенол, 5-10%-ний хлорамін, свіжий 5%-ний розчин хлорного вапна, перекис водню їх руйнують протягом 5 хв.
Для знищення спорової форми збудника потрібна більш тривала експозиція. Етиловий спирт у концентраціях від 25% до абсолютного вбиває суперечки протягом 50 днів і більше, 5%-ний фенол, 5-10%-ний розчин хлораміну знешкоджують суперечки через кілька годин і навіть діб, 2%-ний розчин формаліну - через 10 -15 хв, 3%-ний розчин перекису водню - через 1 год, 4%-ний розчин перманганату калію - через 15 хв, 10%-ний розчин гідроокису натрію - через 2'ч.
Вегетативні клітини також малостійкі і до температурних факторів. При нагріванні до 50-55 ° С гинуть протягом 1 год, при 60 0 С - через 15 хв, при 75 ° С - через 1 хв, при кип'ятінні - миттєво. Вони чутливі до висушування, проте при повільному висушуванні настає спорообразование і мікроб не гине. Низькі ж температури їх консервують. Так, при мінус 10 0 С бактерії зберігаються 24 дні, при мінус 24 ° С - 12 днів.
Вплив прямого сонячного світла знешкоджує бактерії через кілька годин.
На суперечки висушування взагалі згубно не діє. Сухий жар при температурі 120-140 0 С вбиває суперечки тільки через 2-3 год, при 150 0 С - через 1 год, поточний пар при 100 0 С - через 12-15 хв, автоклавування при 110 ° С - за 5-10 хв, кип'ятіння - через 1 год
Збудник сибірської виразки проявляє високу чутливість до пеніциліну, хлортетрациклин і левоміцетину, а також до литическому дії лізоциму. Бактеріостатичний ефект протягом 24 год має свежевидоенное молоко корів.
Патогенність.
До збудника сибірської виразки сприйнятливі всі види ссавців. У природних умовах частіше хворіють вівці, велика рогата худоба і коні, можуть заражатися осли імули. Надзвичайно сприйнятливі кози, буйволи, верблюди і північні олені. Свині менш чутливі. Серед диких тварин сприйнятливі всі травоїдні. Відомі випадки захворювання собак, вовків, лисиць, песців, серед птахів - качок і страусів.
До збудника сибірської виразки сприйнятливі всі види ссавців. У природних умовах частіше хворіють вівці, велика рогата худоба і коні, можуть заражатися осли імули. Надзвичайно сприйнятливі кози, буйволи, верблюди і північні олені. Свині менш чутливі. Серед диких тварин сприйнятливі всі травоїдні. Відомі випадки захворювання собак, вовків, лисиць, песців, серед птахів - качок і страусів.
Патогенез.
Бацила антраксу володіє вираженою інвазивної-стю і легко проникає через подряпини шкіри або слизових оболонок. Зараження тварин відбувається переважно аліментарно. Через ушкоджену слизову травного тракту мікроб проникає в лімфатичну систему, а потім в кров, де фагоцитируется і розноситься по всьому організму, фіксуючи в елементах лімфоїдної-макрофагальної системи, після чого знову мігрує в кров, зумовлюючи септицемію.
Розмножуючись в організмі, бацила антраксу синтезує капсульний поліпептид і виділяє екзотоксин. Капсульні речовина інгібує опсонізація, в той час як екзотоксин руйнує фагоцити, вражає центральну нервову систему, викликає набряк, виникає гіперглікемію і підвищується активність лужної фосфатази.
В термінальній фазі процесу в крові знижується вміст кисню до рівня, несумісного з життям. Різко порушується метаболізм, розвивається вторинний шок і настає загибель тварин.
Збудник сибірської виразки з організму може виділятися з бронхіальною слизом, слиною, молоком, сечею і екскрементами.
Бацила антраксу володіє вираженою інвазивної-стю і легко проникає через подряпини шкіри або слизових оболонок. Зараження тварин відбувається переважно аліментарно. Через ушкоджену слизову травного тракту мікроб проникає в лімфатичну систему, а потім в кров, де фагоцитируется і розноситься по всьому організму, фіксуючи в елементах лімфоїдної-макрофагальної системи, після чого знову мігрує в кров, зумовлюючи септицемію.
Розмножуючись в організмі, бацила антраксу синтезує капсульний поліпептид і виділяє екзотоксин. Капсульні речовина інгібує опсонізація, в той час як екзотоксин руйнує фагоцити, вражає центральну нервову систему, викликає набряк, виникає гіперглікемію і підвищується активність лужної фосфатази.
В термінальній фазі процесу в крові знижується вміст кисню до рівня, несумісного з життям. Різко порушується метаболізм, розвивається вторинний шок і настає загибель тварин.
Збудник сибірської виразки з організму може виділятися з бронхіальною слизом, слиною, молоком, сечею і екскрементами.
Лабораторна діагностика.
Для лабораторного дослідження на сибірську виразку найчастіше направляють вухо полеглого тварини. Можна взяти кров з надрізу судини і нанести товсту краплю на предметне скло. При вимушеному забої або підозрі на сибірську виразку під час розтину обережно відбирають шматочки селезінки, печінки, змінені лімфовузли. Від трупів свиней беруть шматочки набряклих тканин в області глотки і заглоткові лімфовузли. Матеріал повинен бути свіжим: в розклалися тканинах бацила антраксу лізується. Досліджують також проби грунту, фуражу, води, вовни і шкіряно-хутряної сировини; об'єктами для серологічного дослідження по реакції преципітації служать проби шкіряно-хутряної сировини та розклалися тканини.
Дослідження проводять за схемою: мікроскопія мазків, виділення і вивчення властивостей чистої культури, биопроба на лабораторних тваринах, при необхідності серологічні дослідження - реакція преципітації і імунофлюоресцентний аналіз.
Для лабораторного дослідження на сибірську виразку найчастіше направляють вухо полеглого тварини. Можна взяти кров з надрізу судини і нанести товсту краплю на предметне скло. При вимушеному забої або підозрі на сибірську виразку під час розтину обережно відбирають шматочки селезінки, печінки, змінені лімфовузли. Від трупів свиней беруть шматочки набряклих тканин в області глотки і заглоткові лімфовузли. Матеріал повинен бути свіжим: в розклалися тканинах бацила антраксу лізується. Досліджують також проби грунту, фуражу, води, вовни і шкіряно-хутряної сировини; об'єктами для серологічного дослідження по реакції преципітації служать проби шкіряно-хутряної сировини та розклалися тканини.
Дослідження проводять за схемою: мікроскопія мазків, виділення і вивчення властивостей чистої культури, биопроба на лабораторних тваринах, при необхідності серологічні дослідження - реакція преципітації і імунофлюоресцентний аналіз.
Бактеріоскопія.
З патологічного матеріалу для мікроскопії готують мазки, частина фарбують за Грамом і обов'язково на капсули по Міхчну, Ребігеру, Ольта та ін Важливою діагностичною ознакою є виявлення типових за морфології капсульних паличок.
Посів на поживні середовища. Вихідний матеріал засівають у МПБ і на МПА (рН 7,2-7,6), інкубують посіви при температурі 37 ° С протягом 18-24 год, при відсутності росту їх витримують в термостаті ще 2 діб. Культури проглядають, визначають їх типовість, готують препарати, мікроскопіруют. У мазках з культур виявляють бескапсульние палички та суперечки.
Біологічна проба. Здійснюється на білих мишах, морських свинках, кроликах, одночасно з посівом матеріалу на живильні середовища. Білих мишей заражають підшкірно в задню частину спини (по 0,1-0,2 мл), морських свинок і кроликів - під шкіру в область живота (по 0,5-1,0 мл). Миші гинуть через 1-2 діб, морські свинки і кролики - через 2 - 4 діб. Полеглих тварин розкривають, роблять мазки і посіви з крові серця, селезінки, печінки та інфільтрату на місці ін'єкції досліджуваного матеріалу.
Ідентифікація бацили антраксу. У природі існує ряд видів аеробних спорових сібірсязвенноподобних сапрофітів. До них відносять: B.cereus, B.megaterium, B.mycoides і B.subtilis. Так як вони з морфології та культуральними ознаками багато в чому схожі з бацилою антраксу, то часто при лабораторних дослідженнях виникає необхідність вирішити питання: виділена культура збудника сибірської виразки або подібного йому сапрофіти?
Ідентифікацію і диференціацію культури проводять на підставі головних і додаткових ознак. До перших відносяться патогенність, капсулообразованіс, тест "перлинного намиста", лізабельность фагом, імунофлюоресцентний тест. Додатковими є нерухомість, відсутність гемолізу, лецитиназну активність, освіта фосфатази.
Бацила антраксу патогенна для лабораторних тварин, сібіреязвенноподобние сапрофіти не викликають їх загибель, за винятком B.cereus, яка може вбити білих мишей при внутрішньоочеревинному зараженні. Масивну з чіткими контурами капсулу в організмі утворює тільки збудник сибірської виразки.
Тест "Жемчугова намиста" (запропонували в 1953 р. Існссн і Клеемейер) заснований на придушенні пеніциліном синтезу клітинної стінки бацили антраксу та освіті сферопластов. Випробувану тригодинну бульйонну культуру висівають на МПА в чашки Петрі: у першій чашці міститься 0,5, у другій - 0,05 ОД пеніциліну на 1 мл середовища, третя - контрольна. Посіви інкубують 3 год при температурі 37 0 С. На агарі з пеніциліном бацила антраксу росте у вигляді ланцюжків, що складаються з кулястих форм, що нагадують намисто з перлів. Сібірсязвснноподобние сапрофіти на агарі з пеніциліном цього феномену не дають.
З патологічного матеріалу для мікроскопії готують мазки, частина фарбують за Грамом і обов'язково на капсули по Міхчну, Ребігеру, Ольта та ін Важливою діагностичною ознакою є виявлення типових за морфології капсульних паличок.
Посів на поживні середовища. Вихідний матеріал засівають у МПБ і на МПА (рН 7,2-7,6), інкубують посіви при температурі 37 ° С протягом 18-24 год, при відсутності росту їх витримують в термостаті ще 2 діб. Культури проглядають, визначають їх типовість, готують препарати, мікроскопіруют. У мазках з культур виявляють бескапсульние палички та суперечки.
Біологічна проба. Здійснюється на білих мишах, морських свинках, кроликах, одночасно з посівом матеріалу на живильні середовища. Білих мишей заражають підшкірно в задню частину спини (по 0,1-0,2 мл), морських свинок і кроликів - під шкіру в область живота (по 0,5-1,0 мл). Миші гинуть через 1-2 діб, морські свинки і кролики - через 2 - 4 діб. Полеглих тварин розкривають, роблять мазки і посіви з крові серця, селезінки, печінки та інфільтрату на місці ін'єкції досліджуваного матеріалу.
Ідентифікація бацили антраксу. У природі існує ряд видів аеробних спорових сібірсязвенноподобних сапрофітів. До них відносять: B.cereus, B.megaterium, B.mycoides і B.subtilis. Так як вони з морфології та культуральними ознаками багато в чому схожі з бацилою антраксу, то часто при лабораторних дослідженнях виникає необхідність вирішити питання: виділена культура збудника сибірської виразки або подібного йому сапрофіти?
Ідентифікацію і диференціацію культури проводять на підставі головних і додаткових ознак. До перших відносяться патогенність, капсулообразованіс, тест "перлинного намиста", лізабельность фагом, імунофлюоресцентний тест. Додатковими є нерухомість, відсутність гемолізу, лецитиназну активність, освіта фосфатази.
Бацила антраксу патогенна для лабораторних тварин, сібіреязвенноподобние сапрофіти не викликають їх загибель, за винятком B.cereus, яка може вбити білих мишей при внутрішньоочеревинному зараженні. Масивну з чіткими контурами капсулу в організмі утворює тільки збудник сибірської виразки.
Тест "Жемчугова намиста" (запропонували в 1953 р. Існссн і Клеемейер) заснований на придушенні пеніциліном синтезу клітинної стінки бацили антраксу та освіті сферопластов. Випробувану тригодинну бульйонну культуру висівають на МПА в чашки Петрі: у першій чашці міститься 0,5, у другій - 0,05 ОД пеніциліну на 1 мл середовища, третя - контрольна. Посіви інкубують 3 год при температурі 37 0 С. На агарі з пеніциліном бацила антраксу росте у вигляді ланцюжків, що складаються з кулястих форм, що нагадують намисто з перлів. Сібірсязвснноподобние сапрофіти на агарі з пеніциліном цього феномену не дають.
Проба бактеріофагом (лізабельность фагом).
Сибірковий фаг, взаємодіючи з гомологічною культурою, викликає її лізис. Ця реакція високоспецифічний, і її застосовують для ідентифікації бацили антраксу, а також диференціації її від ложносібіреязвенних бацил. В якості індикаторних у нас в країні випускають два штами фагів: «К» ВІЕВ і «Гамма» МВА. Розроблено пробіркових метод, мікрометод і реакція наростання титру фага.
Сибірковий фаг, взаємодіючи з гомологічною культурою, викликає її лізис. Ця реакція високоспецифічний, і її застосовують для ідентифікації бацили антраксу, а також диференціації її від ложносібіреязвенних бацил. В якості індикаторних у нас в країні випускають два штами фагів: «К» ВІЕВ і «Гамма» МВА. Розроблено пробіркових метод, мікрометод і реакція наростання титру фага.
Імунофлюоресцентний тест.
Ідентифікація збудника сибірської виразки за допомогою флуоресцентних антитіл - орієнтовний метод і вимагає додаткового вивчення вірулентності, капсулообразованія, фагочувствітельності.
Рухливість встановлюється мікроскопічно або шляхом посіву культури уколом у стовпчик 0,3%-ного агару. Нерухомі культури ростуть тільки по ходу уколу, рухливі - дають дифузний ріст.
Збудник сибірської виразки нерухомий, багато спороутворюючі аеробні сапрофіти рухливі.
Гемолітична активність не може бути надійним критерієм диференціації бацили антраксу, як правило, ця бактерія не гемолизируются еритроцити барана або ж лізує їх дуже повільно, але ця ознака у різних штамів варіабельний.
Лецитиназну активність у збудника сибірської виразки низька: цей мікроб або дуже повільно згортає, або взагалі не згортає жовток курячого яйця. B.cereus інтенсивно синтезує лецитиназу і викликає згортання жовтка через 6-10 ч. Не утворює бацила антраксу і фосфатазу, в той час як сапрофітні спорові аероби його продукують.
Ідентифікація збудника сибірської виразки за допомогою флуоресцентних антитіл - орієнтовний метод і вимагає додаткового вивчення вірулентності, капсулообразованія, фагочувствітельності.
Рухливість встановлюється мікроскопічно або шляхом посіву культури уколом у стовпчик 0,3%-ного агару. Нерухомі культури ростуть тільки по ходу уколу, рухливі - дають дифузний ріст.
Збудник сибірської виразки нерухомий, багато спороутворюючі аеробні сапрофіти рухливі.
Гемолітична активність не може бути надійним критерієм диференціації бацили антраксу, як правило, ця бактерія не гемолизируются еритроцити барана або ж лізує їх дуже повільно, але ця ознака у різних штамів варіабельний.
Лецитиназну активність у збудника сибірської виразки низька: цей мікроб або дуже повільно згортає, або взагалі не згортає жовток курячого яйця. B.cereus інтенсивно синтезує лецитиназу і викликає згортання жовтка через 6-10 ч. Не утворює бацила антраксу і фосфатазу, в той час як сапрофітні спорові аероби його продукують.
Серологічне дослідження.
Для виявлення сибіркових антигенів застосовують реакцію преципітації за Асколі. Цю реакцію використовують для дослідження на сибірську виразку шкіряної та хутряної сировини, загнив патологічного матеріалу, в якому відбувається лізис бацили антраксу, а також для дослідження свіжого патологічного матеріалу і серологічної ідентифікації виділених культур. Реакція преципітації за Асколі - достовірний і широко застосовуваний в практиці тест серологічної діагностики сибірської виразки. Як серологічного тесту, головним чином для вивчення антигенного спектру бацили антраксу, застосовують реакцію дифузійної преципітації (РДП).
Для виявлення свіжих випадків і ретроспективної діагностики сибірської виразки у людини запропоновано алерген антраксином (Е. Н. Шляхов, 1961). Їм виявляють і специфічну поствакцинальної сенсибілізацію у сільськогосподарських тварин. Кращі результати отримані у великої рогатої худоби та овець.
Для виявлення сибіркових антигенів застосовують реакцію преципітації за Асколі. Цю реакцію використовують для дослідження на сибірську виразку шкіряної та хутряної сировини, загнив патологічного матеріалу, в якому відбувається лізис бацили антраксу, а також для дослідження свіжого патологічного матеріалу і серологічної ідентифікації виділених культур. Реакція преципітації за Асколі - достовірний і широко застосовуваний в практиці тест серологічної діагностики сибірської виразки. Як серологічного тесту, головним чином для вивчення антигенного спектру бацили антраксу, застосовують реакцію дифузійної преципітації (РДП).
Для виявлення свіжих випадків і ретроспективної діагностики сибірської виразки у людини запропоновано алерген антраксином (Е. Н. Шляхов, 1961). Їм виявляють і специфічну поствакцинальної сенсибілізацію у сільськогосподарських тварин. Кращі результати отримані у великої рогатої худоби та овець.
Імунітет і засоби специфічної профілактики.
Соматичний полісахарид і капсульний поліпептид глутамінової кислоти бацили антраксу не здатні зумовити синтез захисних антитіл. Цю функцію у бацили антраксу виконує протективний антиген: будучи одним з факторів патогенності, він обумовлює формування імунітету до цієї інфекції за типом антитоксического.
В даний час захисні антитіла виявлені за допомогою РЗК, РДП і непрямого варіанта методу флуоресцентних антитіл у сироватках тварин, вакцинованих сибіркових протектііним антигеном або живими споровими вакцинами.
Переболевание тваринного сибірку або ж його вакцинація супроводжується розвитком гіперчутливості уповільненого типу. Алергенної активністю володіють фракції бацили антраксу з переважним вмістом білка.
У результаті природного зараження і переболевания сибірської виразки у тварин виникає тривалий імунітет.
Активний захист тварин від сибірської виразки шляхом вакцинації - надійний засіб профілактики даного захворювання. З цією метою застосовують живі спорові сібіреязвенние вакцини.
М. М. Гінсбург в 1940 р. селекціонувати з культури вірулентного штаму «Червона Нива» на згорнутої нормальної сироватці коні вакцинний бескапсульний отекообразующій мутант СТІ-1. З 1942 р. вакцину, приготовану з цього варіанту, стали використовувати для профілактики сибірки тварин, вона швидко зарекомендувала себе як високоіммунний препарат і отримала назву вакцини СТІ. В даний час цю вакцину в споровій формі застосовують для вакцинації тварин проти сибірської виразки. Імунітет настає через 10 днів і триває не менше 12 міс.
Запропоновано нову вакцина проти сибірки з штаму № 55, яка випускається в рідкому і ліофілізованому вигляді з бескапсульного авірулентний штаму № 55 в спорової формі. Вакцину вводять одноразово підшкірно, починаючи з 3-місячного віку тварин. Імунітет настає через 10 днів і зберігається не менше 1 року.
Для лікування і пасивної профілактики застосовують протисибіркових сироватку і глобулін. Імунітет настає через кілька годин і зберігається до 14 днів.
Соматичний полісахарид і капсульний поліпептид глутамінової кислоти бацили антраксу не здатні зумовити синтез захисних антитіл. Цю функцію у бацили антраксу виконує протективний антиген: будучи одним з факторів патогенності, він обумовлює формування імунітету до цієї інфекції за типом антитоксического.
В даний час захисні антитіла виявлені за допомогою РЗК, РДП і непрямого варіанта методу флуоресцентних антитіл у сироватках тварин, вакцинованих сибіркових протектііним антигеном або живими споровими вакцинами.
Переболевание тваринного сибірку або ж його вакцинація супроводжується розвитком гіперчутливості уповільненого типу. Алергенної активністю володіють фракції бацили антраксу з переважним вмістом білка.
У результаті природного зараження і переболевания сибірської виразки у тварин виникає тривалий імунітет.
Активний захист тварин від сибірської виразки шляхом вакцинації - надійний засіб профілактики даного захворювання. З цією метою застосовують живі спорові сібіреязвенние вакцини.
М. М. Гінсбург в 1940 р. селекціонувати з культури вірулентного штаму «Червона Нива» на згорнутої нормальної сироватці коні вакцинний бескапсульний отекообразующій мутант СТІ-1. З 1942 р. вакцину, приготовану з цього варіанту, стали використовувати для профілактики сибірки тварин, вона швидко зарекомендувала себе як високоіммунний препарат і отримала назву вакцини СТІ. В даний час цю вакцину в споровій формі застосовують для вакцинації тварин проти сибірської виразки. Імунітет настає через 10 днів і триває не менше 12 міс.
Запропоновано нову вакцина проти сибірки з штаму № 55, яка випускається в рідкому і ліофілізованому вигляді з бескапсульного авірулентний штаму № 55 в спорової формі. Вакцину вводять одноразово підшкірно, починаючи з 3-місячного віку тварин. Імунітет настає через 10 днів і зберігається не менше 1 року.
Для лікування і пасивної профілактики застосовують протисибіркових сироватку і глобулін. Імунітет настає через кілька годин і зберігається до 14 днів.
СПИСОК ЛІТЕРАТУРИ:
1. Н.А. Радчук Ветеринарна мікробіологія та імунологія. М: Агропромиздат, 1991.
2. Я.В. Коляков. Ветеринарна мікробіологія. М: Колос. 1965.
3. Н.Р. Асонов Мікробіологія. М: Агропромиздат, 1989.
1. Н.А. Радчук Ветеринарна мікробіологія та імунологія. М: Агропромиздат, 1991.
2. Я.В. Коляков. Ветеринарна мікробіологія. М: Колос. 1965.
3. Н.Р. Асонов Мікробіологія. М: Агропромиздат, 1989.