Other Лабораторні методи діагностики

Мікроскопічна картина крові:

Еритроцит - без'ядерна клітина, окрашивающиеся кислими фарбами в рожевий колір і має форму кілька сплощеного кола з вдавлення в центрі. Діаметр в середньому близько 8 мікрон.

Лейкоцити різняться серед еритроцитів по їх більшій величині, за наявністю ядра і за характером забарвлення. Розрізняють лейкоцити: базофільні, еозинофільні, нейтрофільні, лімфоцити і моноцити.

Перші три види об'єднуються в групу гранулоцитів, тобто клітин у протоплазмі яких є зернистість.

Базофіли - клітини розміром 12 - l4 мікрон, з ядром невизначеної форми. Протоплазма містить численні великі зерна, окрашивающиеся у фіолетовий колір. Кількість клітин не перевищує 0,5-1%.

Еозинофіли - клітини розміром 12 - 15 ", мають сегментоване ядро ​​у вигляді двох грушовидних сегментів, з'єднаних між собою тонким містком. Найхарактернішою ознакою еозінофіла є зернистість протоплазми яскраво-червоного кольору. Кількість еозинофілів в нормі від 1 до 4%.

Нейтрофіли - круглі клітини, середня величина 9 - 12 мікрон.

Протоплазма злегка рожева з дрібною зернистістю червонувато-

фіолетового кольору. Ядро складається з 2-х, 4-х і більше сегментів, з'єднаних між собою тоненькими містками, забарвлюється основними фарбами в синьо-фіолетовий колір. Сегментоядерние нейтрофіли становлять від 50 до 68%. У менш зрілих клітинах ядро

витягнуте у вигляді палички, так звані палички-ядерні нейтрофіли 1-4%. Ще рідше, близько 1%, зустрічаються нейтрофіли з

круглим ядром - юні форми. Збільшення числа палички-ядерних, поява юних, аж до мієлоцитів, носить назву зсуву вліво, або регенеративного зсуву. Зрушенням в право називається зміна формули лейкоцитів у бік збільшення більш зрілих клітин.

Лімфоцити - клітки розміром 7 - 9 мікрон. Лімфоцити бувають малі, середні та шірокопротоплазменние. Ядро кругле або овальне, синьо-фіолетового кольору, іноді воно має з одного боку гостре поглиблення. Протоплазма блакитна, нерідко різняться яскраво-червоні зерна. Навколо ядра залишається безбарвний або більш блідий ободок. У нормі лімфоцити складають 25 - 38%.

Моноцити - найбільша клітина нормальної периферичної крові. Діаметр 12-20 мікрон з великим овальним ядром, ниркоподібної або підковоподібної форми. Забарвлення ядра світліше, ніж у нейтрофілів і лімфоцитів, протоплазма сіро-блакитного кольору з дрібною азурофільних зернистістю. Моноцити складають 6-8% всіх лейкоцитів крові.

Визначення тривалості кровотечі за Дуке

0борудованіе і реактиви:

1. Голка Франка або скарифікатор.

2. Фільтрувальний папір.

3. Секундомір.

Хід дослідження:

Голкою Франка роблять укол глибиною 3 мм в м'якоть пальця або мочку вуха. Мимовільно виступає кров знімається кожні 15-30 секунд фільтрувальним папером. Через 1-3 хвилини знята фільтрувальним папером крапля стає маленькою, потім папір зовсім не фарбується. Проміжок часу від моменту появи першої краплі крові до припинення фарбування фільтрувального паперу позначається як тривалість кровотечі.

Оцінка отриманих даних:

Нормальна тривалість кровотечі 2 - 4 хвилини.

Визначення часу згортання крові за способом Бюркера

Обладнання і реактиви:

1. Годинникова скло.

2. Чашка Петрі з вологою фільтрувальним папером на дні.

3. Тонка скляна паличка або голка.

4. Голка Франка або скарифікатор.

5. Дистильована вода.

6. Секундомір

Хід дослідження:

На годинне скло наносять одну краплю прокипяченной дистильованої води. Голкою Франка роблять укол в м'якоть пальця, першу краплю знімають, а другу наносять на годинне скло, помішують тонкою скляною паличкою. Час взяття крові відзначають за секундоміром. Годинникова скло поміщають у чашку Петрі. Краще всього проводити дослідження при температурі 25'C. Кожні півхвилини тонкою скляною паличкою або голкою торкаються до краплі крові від центру до периферії до тих пір, поки за паличкою не потягнуться перший ниточки фібрину, після чого зазначають час появи їх.

Оцінка отриманих даних:

У здорових людей час згортання за методом Бюркера одно 5-6 хвилинах.

Ярославська Державна Медична Академія

Кафедра пропедевтики внутрішніх хвороб педіатричного факультету

Навчально-методичне посібник для студентів III курсу педіатричного факультету

Лабораторні методи діагностики

(Частина друга)

ДОСЛІДЖЕННЯ СЕЧІ

Ярославль, 1997

Мета: оволодіння студентами методикою лабораторного дослідження сечі і клінічної оцінкою отриманих даних.

Порядок дослідження

1. Забір матеріалу.

2. Дослідження фізичних властивостей.

3. Дослідження хімічних властивостей.

4. Мікроскопічне дослідження осаду.

5. Бактеріологічне дослідження.

Забір матеріалу

Лабораторне дослідження сечі має проводитись у всіх хворих незалежно від характеру їх захворювання. Для клінічного аналізу необхідно 100 - 200 мл першої ранкової сечі, яку збирають в чисту суху скляну посуд. Перед забором сечі необхідний туалет зовнішніх статевих органів або взяття сечі катетером. На посуд з сечею наклеюють етикетку із зазначенням прізвища та ініціалів хворого, номери палати та відділення, діагнозу і характеру дослідження (загальний аналіз, дослідження на цукор

і ацетон і т. д.). Кількісне визначення складових частин сечі (наприклад, цукру при цукровому діабеті) виробляють з добової кількості сечі. Сечу збирають за добу до одного посуду, вимірявши загальна кількість, направляють на дослідження 100 - 150 мл сечі.

Для бактеріологічного дослідження достатньо 10 мл сечі, зібраної в стерильну пробірку, стерильним катетером.

Для виявленні лейкоцитурії (метод Каковского - Аддиса) сечу збирають за 10 - 12 годин, тобто з 21 години до 9 годин. Зібрану сечу ретельно розмішують і вимірюють її кількість. На дослідження направляють кількість, вибраного за 12 хвилин, яке визначають за формулою:

Y

X =-----------------,

t * 5

де:

Х - кількість сечі за 12 хвилин,

Y - обсяг сечі, виміряної в мл,

t - час, за яке зібрана сеча, 1 / 5 години - 12 хвилин.

Проба по 3імніцкому. При звичайному питному режимі сечу збирають протягом доби за кожні 3 години, перша порція сечі о 6 годині ранку виливається. На кожну пляшку наклеюється етикетка із зазначенням прізвища, палати, номери порції і

проміжку часу, за який зібрана порція (6 ч. - 9 год, 9 год - 12 год, і т. д.). Усі 8 порцій направляють на дослідження.

Дослідження фізичних властивостей

Дослідження фізичних властивостей сечі включає в себе визначення кількості, кольору, прозорості, запаху і питомої ваги сечі. Кількість виділеної за добу сечі (діурез) у нормі становить в середньому 50 - 80% випитої рідини і коливається від

1000 до 2000 мл. Вимірювання проводять за допомогою мірного посуду по нижньому меніску (рівню рідини). Колір сечі в нормі коливається від світло-жовтого до насиченого жовтого і обумовлений що містяться в ній пігментами: урохрома А, урохрома Б, уроетріном, урорезіном та ін Визначають колір простим оглядом, після попереднього відстоювання в світлі, що проходить на білому тлі. 3апах свежевипущенной сечі здорової людини своєрідний, слабкий ароматичний, який, як вважають,

залежить від вмісту в ній мінімальних кількостей летких ефірних кислот. При тривалому стоянні, в результаті лужного бродіння, сеча набуває різкий неприємний аміачний запах. Запах гниючих яблук при наявності в сечі ацетонових тіл. Прийом деяких харчових продуктів і ліків надають сечі свій запах.

Прозорість (каламутність). Нормальна свежевипущенная сеча прозора. Мутність може бути викликана: солями, клітинними елементами, бактеріями.

Посуд, обладнання та реактиви:

- Циліндр на 10 - 15 мл.

- Хімічні пробірки.

- Пальник.

- 10% розчин оцтової кислоти, розчин лугу (NaОН).

Хід дослідження:

У циліндр ємністю 10 - 15 мл наливають сечу, відстоюють і через шар сечі читають друкований текст. Ступінь каламутності позначають таким чином: прозора

сеча - друкований текст читається легко; слабка ступінь каламутності - легко читається середній і великий друкарський текст; помірна - букви розрізняються нечітко; велика - букви невиразні. Причину помутніння визначають наступним чином. У пробірку наливають 2-3 мл сечі, нагрівають. Зникнення помутніння вказує на наявність уратів; посилення - на наявність фосфатів. Останні розчиняються після додавання 2-3 крапель 10% оцтової кислоти, Зникнення помутніння від додавання декількох крапель лугу говорить про присутність кристалів сечової кислоти. Питома вага залежить від кількості розчинених у сечі щільних речовин. У нормі питома вага сечі 1012 - 1025.

Посуд і устаткування:

- Циліндр ємністю в 50 - 100 мл,

- Урометр з поділками від 1000 до 1050 ...

Хід дослідження:

Сечу наливають у циліндр, уникаючи утворення піни. Якщо піна утворюється, то її слід видалити фільтрувальним папером. Обережно занурюють урометр в рідину; верхня частина урометра повинна бути сухою і урометр не повинен стосуватися стінок циліндра. Коли урометр перестав занурюватися, його злегка штовхають зверху, інакше він опускається менше, ніж слід. Після припинення коливань по нижньому меніску рідини за шкалою урометра відзначають питома вага. При малій кількості сечі, її слід розвести дистильованою водою (1 мл сечі +1 мл води - розведення в 2 рази, 1 мл сечі +2 мл води - в 3 рази і т.д.). Визначивши питому вагу, дві останні цифри питомої ваги множать на ступінь розведення. Необхідно при визначенні питомої ваги враховувати температуру навколишнього середовища, так як урометра вивірені при температурі 15'С. Вимірюючи питома вага, слід вносити поправку: на кожні 3 'вище 15' необхідно додати 0,001, і на кожні 3 'нижче 15' віднімати 0,001.

Реакція сечі в нормі при змішаній їжі кисла або слабокисла. Орієнтовний спосіб визначення реакції сечі за допомогою синьої і червоної лакмусовим папірців. У кислій сечі синя лакмусовий папір червоніє, в лужному - червона синіє; в нейтральній обидві папірці не змінюють свого кольору.

Дослідження хімічних властивостей:

Перш ніж приступити до хімічного дослідження, необхідно профільтрувати сечу.

Хімічне дослідження включає в себе визначення в сечі білка, цукру, ацетону і ацетоуксусной кислоти, жовчних пігментів і уробіліну.

Визначення білка:

Якісні реакції на білок засновані на його осадженні реактивами чи нагріванням. При наявності білка в сечі утворюється велика чи менша ступінь помутніння. Умови визначення білка: 1) - сеча повинна мати кислу реакцію. Лужну сечу підкисляють, додаючи 2 - 3 краплі оцтової кислоти. 2) - сеча повинна бути прозорою. Помутніння

усувається фільтруванням через паперовий фільтр. Якісну пробу слід проводити у двох пробірках, од на - контроль.

0ценка: У нормі білка в сечі не міститься.

Якісні проби

Проба з сульфосаліцилової кислотою

Реактиви:

- 20% розчин сульфосаліцилової кислоти.

Хід дослідження:

У пробірку наливають 4 - 5 мл сечі і додають 8 - 10 крапель реактиву. При наявності білка в сечі, в залежності від кількості його, може бути помутніння чи випадає сиплеся осад. Проба вважається однією з найбільш чутливих, позитивна при наявності білка в сечі в кількості - 0,015%.

Проба з оцтовою кислотою

Реактиви:

- 10% розчин оцтової кислоти.

Хід дослідження:

У пробірку наливають 8 - 10 мл сечі, нагрівають верхній шар сечі до кипіння і додають 8 - 10 крапель оцтової кислоти. При наявності білка в нагрітій частині сечі утворюється помутніння або пластівці згорнутого білка.

Кількісне визначення білка. (Спосіб Робертса - Стольнікова):

Принцип методу: Якщо при нашаровуванні сечі на азотну кислоту на межі двох рідин утворюється тонке біле кільце між 2-й і 3-й хвилинами, то в досліджуваної сечі міститься 0,033% o білка.

Реактиви:

- Концентрована азотна кислота,

Хід дослідження:

У пробірку наливають 1 - 3 мл азотної кислоти і обережно по стінці нашаровують така ж кількість сечі. Помічають час після нашарування. Якщо кільце на кордоні рідин (розглядати його слід на чорному фоні) утворюється відразу або раніше 2-х хвилин після нашарування, сечу необхідно розвести водою. Після чого роблять повторне визначення білка в розведеній сечі. Розведення виробляють до тих пір,

поки біле кільце при нашаровуванні на азотну кислоту розведеної сили не з'явиться між 2-й і 3-й хвилинами. Кількість білка обчислюють шляхом множення 0,033% o на ступінь розведення.

Визначення цукру (глюкози)

Якісна проба (проба Гайнеса)

Проба заснована на властивості глюкози відновлювати гідрат окису міді в гідрат закису міді (жовтий колір) чи закис міді (червоний колір).

Реактиви:

реактив Гайнеса (суміш розчинів сірчанокислої міді, їдкого натру і гліцерину).

Хід дослідження:

У пробірку наливають 3 - 4 мл розчину Гайнеса, додають 8 - 10 крапель сечі і нагрівають до кипіння. За наявності цукру колір сечі змінюється від коричнювато-зеленого до червоного, в залежності від кількості цукру.

0ценка: У нормі цукру в сечі немає.

Кількісне визначення цукру сечі

Поляриметричний метод:

Принцип методу полягає у використанні властивості глюкози обертати площину поляризації вправо. За кутку обертання поляризованого променя можна визначити кількість глюкози.

Хід визначення:

Сеча повинна бути прозорою, не містити білка, кислої реакції. Для цього сечу підкисляють слабкою оцтовою кислотою, кип'ятять, охолоджують і фільтрують. Трубку

поляриметра заповнюють профільтрованої сечею без бульбашок повітря, накривають шліфованим склом, загвинчують щільно, насухо витирають і поміщають в апарат.

Визначення виробляють через 2 - 3 хвилини після заповнення трубки, так як коливання частинок рідини заважає дослідженню. Оптично активний розчин глюкози, відхиляючи промінь, змінює інтенсивність світла в окулярі; відновити освітленість можна, повернувши аналізатор на певний кут. Кут відхилення виражається в градусах шкали приладу. Кут відхилення в 1 градус відповідає 1% глюкози при довжині трубки 18,94; якщо довжина 9,47 - отриманий результат помножити на 2.

Визначення ацетонових тіл (проба Ланге)

До ацетоновим тіл відносяться ацетон, ацетоноуксусная кислота і оксимасляная кислота. У сечі зустрічаються спільно, тому роздільне їх визначення клінічного значення не має. У нормі в сечі не містяться.

Реактиви:

- Суміш нітропрусідного натрію з сірчанокислим амонієм;

- Розчин аміаку.

Хід визначення:

У пробірку насипають трохи, так щоб було покрито дно нітропрусідной суміші, і доливають 5 мл сечі, збовтують і обережно нашаровують 2 мл аміаку. Фіолетово-червоне кільце, що з'явилося на межі двох рідин, свідчить про наявність у сечі ацетону.

Визначення білірубіну (проба Розіна)

Якісна реакція заснована на перетворенні білірубіну під впливом окислювачів (йоду) в білівердін зеленого кольору.

Реактиви:

- Розчин Люголя або 1% спиртовий розчин йоду.

Хід визначення:

На 3 - 4 мл сечі обережно нашаровують 1 - 2 мл 1% спиртового розчину йоду або розчину Люголя. При наявності жовчних пігментів (білірубіну) на кордоні рідин з'являється зелене кільце.

0ценка: У нормі білірубін в сечі не міститься.

Визначення уробіліну (проба Флоренс)

Реактиви:

- Концентрована сірчана кислота;

- Ефір;

- Концентрована соляна кислота.

Хід визначення:

До 10 мл сечі додають 3 - 4 краплі концентрованої сірчаної кислоти, змішують, доливають 2 - 3 мл ефіру, пробірку закривають гумовою пробкою і обережно

змішують, не збовтуючи. В іншу пробірку наливають 2 мл концентрованої соляної кислоти. Піпеткою відсмоктують з першої пробірки ефірний шар і нашаровують його на соляну кислоту. На кордоні рідин при наявності уробіліну утворюється червоно-фіолетове кільце різної інтенсивності.

Мікроскопічне дослідження

Приготування препарату:

У центрифужну пробірку наливають 10 - 15 мл сечі і центрифугують при 1000 - 1500 об / хв. 10 хвилин. Після центрифугування пробірку швидко перекидають для видалення надосадової рідини, потім переводять у вихідне положення, щоб осад залишився на дні. Пастерівської піпеткою осад розмішують, невелику краплю осаду поміщають на предметне скло і накривають покривним. Мікроскопія проводиться спочатку під малим, а потім під великим збільшенням.

Елементи сечового осаду

Розрізняють організований (еритроцити, лейкоцити, епітеліальні клітини, циліндри) і неорганізований осад (солі).

Організований осад:

Еритроцити можуть бути незмінені у вигляді дисків жовтувато-зеленуватого кольору, що містять гемоглобін, і змінені (вилужені), вільні від гемоглобіну, безбарвні, мають вигляд одноконтурних або двоконтурних кілець. У нормі містяться

поодинокі еритроцити у препараті. Лейкоцити виявляються в сечі у вигляді невеликих зернистих клітин правильної округлої форми сірого кольору. Лейкоцити в сечі представлені нейтрофілами і містяться в невеликій кількості в нормальній сечі до 2000000 на добу). Видозмінені лейкоцити, так звані клітини Штернгеймера-Мальбина. Для виявлення їх після центрифугування до осаду додають 1 - 2 краплі фарби, запропонованої Штернгеймера і Мальбина, розмішують, краплю беруть на предметне скло, покривають покривним і мікроскопіруют. Клітини Штернгеймера-Мальбина в 2-3 рази більше за звичайні лейкоцитів, блідо-сині з блідо-синім або блідо-фіолетовим ядром, в цитоплазмі помітно рух гранул.

Клітини епітелію:

Плоский епітелій - великі (в 3 - 4 рази більше лейкоцитів), широкі полігональні клітини з одним ядром і дрібнозернистою цитоплазмою. Зустрічаються групами і шарами. Наявність цих клітин у сечі не має особливого діагностичного значення.

Клітини круглого епітелію - досить великі, правильної округлої або овальної форми з гомогенної або дрібнозернистої протоплазмою і невеликим ядром. У нормальній сечі - поодинокі.

Нирковий епітелій - невеликі круглі або кубічні клітини з великою пузиріковідним ядром і злегка зернистої протоплазмою. У нормальній сечі не виявляються.

Циліндри - білкові або клітинні освіти канальцевого походження, мають циліндричну форму. У нормальній сечі може бути невелика кількість тільки гіалінових циліндрів (2000 за добу).

Гіалінові циліндри - зліпки білка, ніжні, бліді, майже прозорі освіти, прямі і покручені, кінці їх закруглені або неправильно обламані.

Зернисті циліндри - короткі широкі - складаються із зерен різної величини, мають темний, часто жовто-коричневий колір.

Фляки циліндри - дуже товсті, короткі з жовтуватим кольором воску, добре контуріровани.

Епітеліальні циліндри мають чіткі контури, складаються з клітин ниркового епітелію.

Еритроцитарні циліндри - жовтого кольору, складаються з маси еритроцитів. Ціліндроіди схожі на гіалінові циліндри, але не мають поздовжньої смугастість, контури їх неправильні, кінці роздвоюються.

Крім того, в осаді можуть бути: сперматозоїди, бактерії, дріжджові та інші грибки.

Неорганізований осад:

У кислій сечі зустрічаються:

Сечова кислота - кристали різноманітної форми (ромбічної, шестигранною, у вигляді діжок, брусків тощо), забарвлені в червоно-бурий або жовтувато-бурий колір. Мікроскопічні кристали в осаді сечі мають вигляд золотистого піску.

Урати - аморфні сечокислі солі - дрібні жовтуваті, часто склеєні групами зернятка. Мікроскопічно урати мають вигляд щільного цегляно-рожевого осаду.

Оксалати - безбарвні кристали у формі поштових конвертів - октаедрів.

Сірчанокисла вапно - тонкі, безбарвні голки або розетки. У лужному і нейтрального сечі зустрічаються:

Фосфати - аморфні маси солей сіруватого кольору (дрібнозернисті). Мікроскопічно - осад білого кольору.

Трипельфосфатов - безбарвні яскраві кристали у вигляді гробових кришок або довгих призм.

Сечокислий амоній - жовті непрозорі кулі з шипами на поверхні.

Функціональні проби нирок і кількісний метод визначення формених елементів

Проба за Зимницьким

У кожній з 8-ми отриманих порцій заміряють кількість сечі за допомогою мірного циліндра в визначають питому вагу за раніше розібраної методикою. У нормі кількість сечі за суттю - 1000 - 1500 мл, кількість сечі в кожній порції 70 - 250 мл; денний діурез - 2 частини, нічний - 1 частина; коливання питомої ваги - 1012 - 1025.

Проба по Каковскому - Аддіс

Принцип дослідження полягає у визначенні числа формених елементів (еритроцитів, лейкоцитів, циліндрів) у добовій кількості сечі за допомогою

лічильної камери.

Посуд і устаткування:

Рахункова камера.

Градуйована центрифужна пробірка.

Мірна обіцянки.

Мікроскоп.

Хід дослідженні:

Кількість сечі, що відповідає об'єму, виділеного за 1 / 5 години (за 12 хвилин), наливають у пробірку і центрифугують центрифужну при 2000 об / хв. протягом 5 хвилин. Піпеткою відсмоктують надосадову рідину, залишаючи 0,5 мл осаду. Осад змішують і піпеткою заповнюють лічильну камеру Горяєва. Вважають окремо лейкоцити, еритроцити, циліндри. Досліджуваний осад можна змішати з 1-2 краплями фарби

Штернгеймера в Мальбина для виявлення наявності в сечі клітин Штернгеймера - Мальбина. Підрахунок клітин виробляється під великим збільшенням в 100 будь-яких великих квадратах. Отримане кількість клітин 1 ММЗ множать на 60 000, дізнаються кількість

формених елементів, виділених з сечею за добу. Для нормальній сечі кількість еритроцитів до 1 млн.; лейкоцитів до 2 млн., циліндрів до 2000.

Бактеріоскопічне дослідження

Бактеріоскопічне дослідження проводять, головним о6 разом, з метою виявлення мікобактерій туберкульозу.

Хід дослідження:

Ранкову порцію сечі, зібрану в стерильний посуд, відстоюють. Утворений осад збирають піпеткою в центрифужну пробірку і центрифугують. З осаду

готують мазки, добре висушують, фіксують над полум'ям і забарвлюють за Цілем Нільсену (див. розділ <Дослідження мокроти>) і потім мікроскопіруют.

Мікобактерії туберкульозу, що мають вигляд паличок, пофарбовані в червоний колір і чітко виділяються на синьому тлі препарату.