Тонкошарова хроматографія та її роль в контролі якості харчових продуктів

[ виправити ] текст може містити помилки, будь ласка перевіряйте перш ніж використовувати.


Нажми чтобы узнать.
скачати

Курсова робота

тонкошарова хроматографія

і її роль в контролі якості харчових продуктів

Зміст

Введення

Глава 1. Фізико-хімічні основи тонкошарової хроматографії

1.1 Класифікація хроматографічних методів аналізу

1.2 Основи методу ТШХ

1.3 Розподільча хроматографія на папері

1.4 Тонкошарова хроматографія

1.4.1 Сорбенти

1.4.2 Розчинники

Підбір рухомої фази (системи) проводиться за такими правилами:

1.4.3 Підготовка пластин

1.4.4 Техніка нанесення досліджуваних розчинів

1.4.4 хроматографирования

1.4.5 Висхідна тонкошарова хроматографія

1.4.6 Низхідна тонкошарова хроматографія

1.4.7 Горизонтальна тонкошарова хроматографія

1.4.8 Радіальна тонкошарова хроматографія

1.4.9 Сушка пластин

1.4.10 Ідентифікація розділених речовин

1.4.11 Фізичні методи

1.4.12 Значення Rf

1.4.13 Кольорові реакції

1.4.14 Порівняння зі свідком

1.4.15 Фізико-хімічні методи ідентифікації

1.4.16 Методи кількісного аналізу

1.4.17 Способи проведення ТСХ

Глава 2. Контроль якості харчових продуктів за допомогою методу ТШХ

2.1 Визначення ДДТ, ДДЕ, ДДД, альдрину, дільдріна, гептахлору, кельтана, метоксихлор, ефірсульфонат та інших отрутохімікатів у продуктах харчування хроматографією в тонкому шарі

2.2 Визначення о, о-діетил-8-(6-хлорбензоксазолініл-3-метил)-дітіофосфата (фозалон) в яблуках методом тонкошарової хроматографії

Глава 3. ТСХ - обладнання

3.1 Обладнання фірми НТЦ ЛЕНХРОМ для інструментальної ТСХ

3.1.1 Портативний набір для ТШХ

3.1.2 Базовий набір для ТШХ

3.1.3 Обладнання для проведення аналізів ВЕТСХ

3.1.4 Пластини багаторазового користування для високоефективної та аналітичної ТСХ

3.1.5 Контроль ефективності розділення

3.1.6 Хроматографічні камери

3.1.7 Постхроматографіческая деріватізація

3.1.8 Обладнання для нанесення зразків

3.1.9 Прилади й устаткування для високоефективної тонкошарової хроматографії

Література

Введення

Хроматографія, обов'язково включає процес розділення сумішей речовин в динамічному режимі, охоплює не тільки досить великий розділ аналітичної хімії, але і лежить в основі ряду технологічних процесів. У зв'язку з цим, хроматографія включає два основних напрямки: інформаційне та технологічне. Перше забезпечує інформацію про якісний і кількісний склад і фізико-хімічні властивості досліджуваних об'єктів, друге - отримання матеріальних продуктів.

Як спосіб аналізу хроматографія є частиною тієї групи методів, яка через складність досліджуваних об'єктів включає попереднє розділення вихідної складної суміші на відносно прості, наприклад, дистиляцією, зонної плавкою, екстракцією, дифузією або комбінацією цих методів. Серед них хроматографічні методи володіють найбільш ефективними розділовими можливостями за рахунок використання великої кількості типів міжмолекулярних взаємодій. Стадія поділу в хроматографічної колонці або шарі сорбенту забезпечує отримання відносно простих сумішей, аналізованих потім звичайними хімічними, фізико-хімічними або фізичним методами аналізу або спеціально створеними для хроматографії методами або прийомами.

Тонкошарова хроматографія (ТШХ, TLC) - один з найбільш використовуваних методів хроматографічного аналізу, але найменш популяризують.

Незважаючи на існуючі до недавнього часу істотні недоліки, вона широко використовується для якісного аналізу сумішей, в основному, за рахунок дешевизни і швидкості отримання результатів. [1]

Тонкошарова хроматографія має безліч можливостей і переваг, і може бути не лише якісним методом аналізу. І в той же час це - метод, що вимагає певних навичок і знання, без яких він не може існувати.

Глава 1. Фізико-хімічні основи тонкошарової хроматографії

1.1 Класифікація хроматографічних методів аналізу

Різноманітні варіанти хроматографії [1] укладаються у відносно просту схему класифікації залежно від використовуваної рухомої фази і характеру міжмолекулярних взаємодій. Оскільки характер взаємодій може бути дуже різним - від суто ситового ефекту до фізичної сорбції і далі до хемосорбції, то майже не існує об'єктів, для поділу яких не вдавалося б знайти відповідного сорбенту та систем розчинників. Області застосування основних варіантів хроматографії в залежності від молекулярної маси досліджуваних сполук показані на рис. 1.

В області молекулярного аналізу органічних сполук хроматографія переважає над іншими методами поділу, не замінюючи їх.

Класифікація варіантів хроматографії наведена в таблиці 1 і на рис. 2. Слід мати на увазі, що в аналітичній практиці переважає використання варіанту проявительного хроматографії, коли рухома фаза подається в хроматографічне пристрій безперервно, а колективна проба - періодично.

При всьому розмаїтті варіантів хроматографії практично завжди реалізується загальна схема процесу, представлена ​​на рис. 3. Рухома фаза (газ-носій або рідина) безупинно пропускається через шар гранульованого сорбенту, засипаного в колонку.

У цей потік дозуючим пристроєм вводиться імпульсно аналізована суміш, яка повинна бути газоподібним чи випаровуватися в дозаторі в разі газової хроматографії, чи розчинятися в рухливій фазі у випадку рідинної. Переміщаючись потоком рухомої фази по колонці, аналізована суміш розділяється на складові її компоненти: компоненти, сорбують гірше на даному сорбенті, рухаються швидше і вимиваються з колонки раніше, ніж сорбуючі краще.

Розташований після колонки детектор фіксує наявність в потоці компонентів; його сигнал, зазвичай пропорційний концентрації або кількості компонента, записується на самопишущим потенціометрі (реєстратора) у вигляді хроматограми - графіка залежності концентрації (кількості від часу). Хроматограмма при повному розділенні компонентів складається з системи колоколобразних кривих, називаних піками: кожен пік відноситься до одного чи декількох компонентів і відповідає зростанню, а потім зниження концентрації в потоці рухомої фази.


Рис. 1. Області застосування основних варіантів хроматографії в залежності від молекулярної маси досліджуваної речовини

Таблиця 1. Варіанти хроматографії по фазовим станам

Рухома

фаза

Нерухома

фаза

Назва варіанту



приватне

загальне

Газ

Адсорбент

Газоадсорбционная

Газова хроматографія


Рідина

Газорідинна


Рідина

Адсорбент

Рідинно-адсорбційна

Рідинна хроматографія


Рідина

Рідинно-адсорбційна


Газ або пар в сверхкритическом стані

Адсорбент

Флюідной-адсорбційна

Флюїдна хроматографія


Рідина

Флюідной-рідинна


Колоїдна

система

Складна композиція твердих і рідких компонентів


Поліфазних хроматографія

Крім розглянутої колоночной, є різні варіанти так званої планарной хроматографії, при яких шар сорбенту створюється не в колонці, а на плоскій поверхні, наприклад, як в тонкошарової або паперової хроматографії.

Область використання газової хроматографії - сполуки з молекулярною масою близько до 500, які складають ~ 5% від загального числа відомих сполук. З'єднання з великою молекулярною масою - сфера докладання рідинної хроматографії - складають 95% всіх відомих хімічних речовин. Разом з тим не слід забувати, що згадані 5% більше простих речовин - об'єктів газової хроматографії сьогодні та і в майбутньому, - складають 70 - 80% сполук, які використовує людина в сфері виробництва і побуту. Той метод хороший, який дозволяє вирішити ту чи іншу задачу з потрібною точністю і достовірністю, експресних і мінімальними витратами. [1]

Рис. 2. Варіанти хроматографії за характером взаємодій (а)

і за способом проведення (б)

Рис. 3. Схема реалізації хроматографічного процесу з метою аналізу сумішей

1.2 Основи методу ТШХ

Основою тонкошарової хроматографії є адсорбційний метод, хоча також зустрічається метод розподільної хроматографії. Адсорбційний метод заснований на відмінності ступеня сорбції-десорбції поділюваних компонентів на нерухомій фазі. Адсорбція здійснюється за рахунок ван-дер-ваальсовскіх сил, що є основою фізичної адсорбції, полімолекулярних (утворення декількох шарів адсорбата на поверхні адсорбенту) і хемосорбції (хімічної взаємодії адсорбенту та адсорбату).

Для ефективних процесів сорбції-десорбції необхідна велика площа, що висуває певні вимоги до адсорбенту. При великій поверхні поділу фаз відбувається швидке встановлення рівноваги між фазами компонентів суміші і ефективне розділення. Так фізичне вираження адсорбції-десорбції в спрощеному вигляді можна виразити рівнянням [2]

Г = (Г ~ / К) с.

де Г ~ - гранично можлива величина адсорбції, К - константа рівноваги;

с-концентрація абсорбата.

У більш строгих підходах до теорії адсорбції необхідно враховувати взаємодію між адсорбованими частинками, неоднорідність поверхні, тиск, температуру і т.д.

Але як видно з вищенаведеного рівняння адсорбція є лінійною функцією концентрації.

Ще одним видом використовуваному в методі тонкошарової хроматографії є розподільна рідинна хроматографія.

У розподільній хроматографії обидві фази - рухома і нерухома - рідини, не змішуються один з одним. Поділ речовин грунтується на відмінності в їх коефіцієнтах розподілу між цими фазами.

Вперше метод тонкошарової хроматографії заявив про себе як "Паперова тонкошарова хроматографія", яка грунтувалася на розподільчому методі поділу компонентів. [3]

1.3 Розподільча хроматографія на папері

У зв'язку з тим, що використовувана в цьому методі хроматографічна папір (спеціальні сорти фільтрувального паперу) містять в порах воду (20-22%), в якості іншої фази використовуються органічні розчинники. Використання хроматографії на папері має ряд істотних недоліків: залежність процесу поділу від складу і властивостей паперу, зміна змісту води в порах паперу при зміні умов зберігання, дуже низька швидкість хроматографирования (до декількох діб), низька відтворюваність результатів. Ці недоліки серйозно впливають на поширення хроматографії на папері як хроматографічного методу.

Тому можна вважати закономірним поява хроматографії в тонкому шарі сорбенту - тонкошарової хроматографії. [3]

1.4 Тонкошарова хроматографія

У цьому методі хроматографирования речовин відбувається в тонкому шарі сорбенту, нанесеного на тверду плоску підкладку. Поділ в цьому методі в основному відбувається на основі сорбції-десорбції. Використання різних сорбентів, дозволило значно розширити та покращити цей метод.

На початку появи методу пластини доводилося виготовляти самостійно. Але на сьогоднішній день в основному використовуються пластини заводського виготовлення, які мають досить широкий асортимент як за розмірами і носіїв, так і по підкладок.

Сучасна хроматографічна пластинка являє собою основу з скла, алюмінію або полімеру (наприклад політерефталат). У зв'язку з тим, що скляна основа стає менш популярною (часто б'ється, не можна розділити платівку на кілька частин не пошкодивши шар сорбенту, важка по вазі), найбільшого поширення набули пластини, як основ яких використовують алюмінієву фольгу або полімери.

Для закріплення сорбенту застосовують гіпс, крохмаль, сіліказоль та інші, які утримують зерна сорбенту на підкладці. Товщина шару може бути різна (100 і більше мкм), але найважливіший критерій - шар повинен бути рівномірний по товщині в будь-якому місці хроматографічної пластинки. [3]

1.4.1 Сорбенти

Найбільш поширеним сорбентом є силікагель.

Силікагель - гідратований кремнієва кислота, що утворюється при дії мінеральних кислот на силікат натрію і сушкою утворився золю. Після розмелювання золю використовують фракцію певної зернистості (зазначену на платівці, зазвичай 5-20 мкм).

Силікагель є полярним сорбентом, у якого в якості активних центрів служить групи-ОН. Він легко сорбує на поверхні воду і утворює водневі зв'язки.

Окис алюмінію. Окис алюмінію є слабо основним адсорбентом і використовується в основному для розділення сполук слабоосновнимі і нейтрального характеру. Недоліком пластин на окису алюмінію є обов'язкова активація поверхні перед використанням в сушильній шафі при високій температурі (100-150 0 С) і низька, порівняно з силікагелем адсорбційна ємність шару.

Кизельгур - адсорбент, отриманий з природних мінералів: діатомових земель. Сорбент має гідрофільні властивості, але більш низькою адсорбційною ємністю шару в порівнянні з силікагелем. Кремнекіслий магній менш полярний ніж силікагель і звичайно використовується у випадках, коли більш полярні адсорбенти не дали ефективного поділу.

Целюлоза - тонкошарові пластини з нанесеною целюлозою дуже ефективні для розділення складних органічних молекул. Адсорбент являє собою в основному кульки целюлози діаметром до50 мкм, закріплені на носії крохмалем. Але, як і в паперовій хроматографії, підйом фронту розчинника відбувається дуже повільно.

У іонообмінних хроматографічних пластинках як адсорбенту використовують іонообмінні смоли, що містять четвертинний амоній або активні сульфогруп, що беруть участь в іонному обміні. Тонкошарова хроматографія з такого типу пластинками, проводиться з рухомими фазами містять сильні кислоти або лугу. Дані пластинки ефективні для поділу високомолекулярних і амфотерних сполук.

Перераховані вище сорбенти є найбільш поширеними, але крім цих існують безліч речовин, що використовуються як сорбенти. Це тальк, сульфат кальцію, крохмаль і т.д..

У той же час навіть вже зазначені сорбенти можуть бути модифіковані для додання їм нових сорбційних властивостей (просочення сорбентів реактивами, наприклад AgNO 3, створення пластин з зверненої фазою). Саме таке розмаїття можливих фаз при мінімальних витратах дозволяють використовувати ТШХ для хроматографирования величезного числа речовин. [4]

1.4.2 Розчинники

У тонкошарової хроматографії, як рухомої фази використовують або чисті речовини (етилацетат, бензол тощо), або суміші речовин (системи) у певному співвідношенні.

Підбір рухомої фази (системи) проводиться за такими правилами:

  • Вибирають таку систему, в якій колективні компоненти мають невелику розчинність (якщо розчинність речовини висока, то речовини будуть переміщатися з фронтом, при низькій розчинності - залишатися на старті). При розподільної хроматографії або при використанні звернених фаз, розчинність речовин повинна бути вище в рухливій фазі, ніж в нерухомою.

  • Склад системи повинен бути постійним і легко відтворюваним.

  • Розчинник або компоненти системи не повинні бути отруйними або дефіцитними.

  • Система повинна повністю поділяти речовини близького будови, причому відмінності в R f повинно бути не менше 0,05.

  • Система не повинна викликати хімічні зміни поділюваних компонентів.

  • У вибраній системі аналізовані речовини повинні мати різні значення R f і розподілятися по всій довжині хроматограми. Бажано, щоб значення R f лежало в межах 0,05-0,85.

  • При виборі системи також необхідно враховувати природу поділюваних речовин. Так, при хроматографирования речовин, що мають основні властивості система не повинна мати кислотними властивостями і навпаки.

Ці рекомендації дають попередню оцінку обраної системи. Останнє слово все одно залишається за експериментом. [3]

1.4.3 Підготовка пластин

При використанні набутих пластин, для хроматографирования їх необхідно попередньо підготувати. Це пов'язано з тим, що адсорбенти пластин при зберіганні сорбують не тільки вологу, але й інші речовини, що містяться в повітрі. При використанні непідготовлених пластин в процесі хроматографирования з'являється фронт "бруду", який може заважати визначенню речовин, що мають великі значення R f, а деякі речовини, наприклад вода, може змінювати склад рухомої фази, змінюючи тим самим одержувані значення R f.

Попередня підготовка пластин полягає в разгонке пластин чистим розчинником на всю висоту пластинки (метанол, бензол, діетиловий ефір), з наступною сушкою пластини в сушильній шафі при температурі 110-120 0С протягом 0,5-1 години. Таким способом можна підготувати відразу кілька пластин і при зберіганні їх в сухому герметичному місці, зберігають свої властивості кілька місяців. [3, 4]

1.4.4 Техніка нанесення досліджуваних розчинів

Як виявляється, нанесення досліджуваного речовини не така складна операція, але разом з тим, вона дуже впливає на отримувані результати хроматографирования.

Часто, дослідженню підлягають або рідкі аналізовані речовини, або розчини твердих речовин, без будь-якої попередньої пробопідготовки.

Тому необхідно завжди пам'ятати ряд моментів, серйозно впливають на результати поділу.

Найбільш важливим є концентрація наносяться речовин. У ТШХ прийнято наносити концентрації розчинів близько 1%. Але з іншого боку чутливість методу дозволяє визначати речовини з набагато меншими концентраціями.

Якщо в досліджуваній речовині невідома загальна концентрація компонентів, або відома концентрація, але такого типу речовини ще не хроматографіровалі, потрібно визначити яку кількість досліджуваного розчину достатньо для якісної хроматографії. Існують кілька прийомів, що дозволяють це визначити.

Для початку потрібно нанести кілька плям хроматографіруемих розчинів, рівні за розміром, але з різною кількістю (наприклад 1, 2, 5 мкл) і після хроматографування вивчити форму та розміри розділених плям.

Так при правильно підібраній концентрації форма розділених речовин така ж, як і форма нанесеною на лінії старту. Якщо розділені плями мають великі розміри, ніж пляма на старті, то нанесена концентрація занадто велика. Поява "хвостів", неправильна форма розділених плям на платівці теж може говорити про високу концентрацію, але може бути викликана неправильно підібраною хроматографічної системою, або хімічною взаємодією компонентів, що розділяються. Підбором кількості нанесеного речовини і системи розчинників можна домогтися повного поділу на одній платівці до десяти компонентів в досліджуваних речовинах. Зручно наносити зразки на спеціальному столику з трафаретами і підігрівом. Нанесення плям проводять на "лінії старту" 1-2 см від нижнього краю пластинки. Це необхідно для того, щоб при опусканні пластинки в систему не відбувалося розчинення в ній зразків, а все нанесене речовина піддалося хроматографирования.

Нанесення розчинів проводять або мікро шприца, або відградуйованих капілярами. Розмір спричинених плями не повинен перевищувати 4 мм. Це пов'язано з тим, що при більшому розмірі плями, відбувається зміна форми під дією фізичних сил, та й кордону розділених компонентів можуть перекриватися.

Нанесення на пластини досліджуваних речовин не повинні супроводжуватися руйнуванням сорбенту (що досить сильно впливає на якість розділення), тому крапля повинна наноситися торканням голки або капіляра про шар сорбенту, а не натисканням. На розмір утворюється плями впливає не тільки кількості наносимого розчину, а й від полярності розчинника і його температури кипіння. Так при нанесенні одного і того ж речовини в різних розчинниках, що утворилося пляма в якому в якості розчинника використовувався метанол буде більше, ніж пляма від розчину хлороформу. З іншого боку при підігріві підкладки випаровування розчинників буде інтенсивніше і розмір плями також зменшується.

Звичайно, простіше використовувати при нанесенні для підсушування плям фен, але тільки в тому випадку, коли є повна впевненість, що наносяться речовини не будуть окислюватися під дією гарячого повітря. Відстань між наносяться плямами має бути близько 2 см.

Іноді при хроматографирования на пластинках спостерігається крайовий ефект, в результаті чого плями розташовуються не на одній лінії а мають вигляд підкови, або по діагоналі. Для усунення цього ефекту кожну пляму можна "забезпечити" своєї доріжкою, відокремивши нанесений зразок від інших шляхом видалення лінії сорбенту. Це найкраще робити під лінійку гострим предметом (типу скальпеля) але обережно, щоб не видалити занадто багато сорбенту.

Після нанесення досліджуваних речовин на платівку, необхідно домогтися повного видалення розчинників, тому що навіть невеликий вміст розчинника в досліджуваній речовині може вплинути на розподіл і навіть змінити склад хроматографічної системи.

Видалення розчинників зазвичай проводять природною сушкою пластин 5-10 хв, або при нагріванні феном або в сушильній шафі. [3, 4]

1.4.4 хроматографирования

Тонкошарова хроматографія має кілька способів, пов'язаних, в основному, з видом руху розчинників.

  • Висхідна тонкошарова хроматографія

  • Низхідна тонкошарова хроматографія

  • Горизонтальна тонкошарова хроматографія

  • Радіальна тонкошарова хроматографія.

1.4.5 Висхідна тонкошарова хроматографія

Цей вид хроматографії найбільш поширений і заснований на тому, що фронт хроматографічної системи піднімається по платівці під дією капілярних сил, тобто фронт хроматографічної системи рухається знизу-вверх. Для цього методу використовується найбільш просте устаткування, так як в якості хроматографічної камери можна використовувати будь-яку ємність з плоским дном і щільно закривається кришкою, в яку вільно поміщається хроматографічна пластинка.

Метод висхідній тонкошарової хроматографії має ряд своїх недоліків. Наприклад, швидкість підняття фронту по платівці відбувається нерівномірно, тобто в нижній частині вона найвища, а в міру підняття фронту зменшується. Це пов'язано з тим, що у верхній частині камери насиченість парами розчинника менше, тому розчинник з хроматографічної пластинки випаровується інтенсивніше, отже зменшується його концентрація і швидкість руху сповільнюється. Для усунення цього недоліку по стінках хроматографічної камери прикріплюють смужки фільтрувального паперу, за яким піднімається хроматографічна система насичує парами камеру по всьому об'єму.

Деякі хроматографічні камери мають на дні поділ на дві ванни. Це удосконалення дозволяє не тільки зменшити витрату хроматографічної системи (для отримання необхідної висоти хроматогратографіческой системи потрібно менший обсяг) але і використовувати додаткову кювету для розчинника, що збільшує тиск насичених парів в камері.

Недоліком також можна вважати необхідність стежити за фронтом розчинника, так як можливо "втікання" лінії фронту розчинника до верхнього краю. У такому випадку визначити дійсне значення R f вже не представляється можливим. [3]

1.4.6 Низхідна тонкошарова хроматографія

Цей метод хроматографії заснований на тому, що фронт хроматографічної системи опускається по платівці в основному під дією сил тяжіння, тобто фронт рухомої фази рухається зверху вниз.

Для цього методу у верхній частині хроматографічної камери кріпиться кювету з хроматографічної системою з якої за допомогою гнота на хроматографічну пластинку надходить розчинник, який стікає і відбувається хроматографирования досліджуваного зразка.

До недоліків цього методу можна віднести ускладнення обладнання. Цей метод використовується в основному в паперовій хроматографії. [3]

1.4.7 Горизонтальна тонкошарова хроматографія

Цей метод найбільш складний в апаратурному оформленні але найбільш зручний. Так, в хроматографічної камері пластинка розміщується горизонтально і подача системи відбувається на один край пластинки за допомогою гнота. Фронт розчинника рухається в протилежний бік.

Є ще один прийом, що дозволяє гранично спростити камеру. Для цього хроматографічну пластинку на алюмінієвій основі злегка згинають і поміщають в камеру. У даному випадку система буде надходити з двох сторін одночасно. Для цієї мети підходять лише плити з алюмінієвою підкладкою, оскільки пластикова та скляна основа "непохитність", тобто не зберігає форму.

До переваг цього методу можна віднести те, що в горизонтальній кюветі насичення парами системи відбувається набагато швидше, швидкість руху фронту постійна. А при хроматографирования з двох сторін, фронт не "тікає". [3]

1.4.8 Радіальна тонкошарова хроматографія

Радіальна тонкошарова хроматографія полягає в тому, що в центр пластинки наноситься досліджувана речовина і туди ж подається система, яка рухається від центру до краю пластинки.

Тут наведені основні способи хроматографирования в тонкошарової хроматографії. Існує ще досить багато способів хроматографування, про які ми поговоримо в подальшому.

1.4.9 Сушка пластин

Після процесу поділу досліджуваних речовин, платівки сушать. Це теж важливий процес, тому що при наявності на платівці навіть слідів розчинника, можливо отримати неправильні результати хроматографирования.

Якщо хроматографічна система мала у своєму складі тільки легкокіпящіе компоненти, то достатньо природної сушки протягом 3-5 хвилин. Якщо ж до складу системи входять висококиплячі рідини (спирти, вода, органічні кислоти і т.д.), сушку пластин потрібно проводити не менше 10 хв або поміщати платівку в сушильну шафу. [3, 4]

1.4.10 Ідентифікація розділених речовин

Висушена платівка є хроматограмою досліджуваних речовин. Якщо речовини є пофарбованими, то ідентифікація починається з визначення кольору розділених речовин.

Але в більшості випадків колективні речовини безбарвні і просте візуальне порівняння неможливо.

Для тонкошарової хроматографії існує кілька видів якісного аналізу (ідентифікації) розділених речовин:

  • Візуальні методи і визначення R f розділених речовин.

  • Кольорові реакції.

  • Порівняння зі свідками.

  • Фізико-хімічні методи ідентифікації.

Розглянемо докладніше кожен вид якісного аналізу в тонкошарової хроматографії. [3, 4]

1.4.11 Фізичні методи

Візуальні методи використовуються в основному, для визначення місця розташування плям розділених речовин на хроматографічної платівці. Для цього пластинку розглядають як у видимому світлі, так і використовуючи ультрафіолетове світло (в основному світло з довжиною хвилі 366 і 254 нм). Це перший етап ідентифікації, на якому визначається якість підібраних умов та отриманих результатів хроматографирования.

Так, визначивши якість хроматографирования (відсутність "хвостів" поділюваних речовин або перекриття їх плям, правильну форму та розміри, відсутність злиття хроматографічних доріжок і т.д.) і визнання придатним проведеного поділу для подальшого дослідження, визначають R f виявлених плям. [3]

1.4.12 Значення R f

Одним з основних показників в ТШХ є показник R f. Цей параметр є аналогією часу утримування і залежить як від властивостей поділюваних речовин, складу рухомої фази і сорбенту, так і від фізичних параметрів. Визначення значення R f проводять як відношення відстані минулого речовиною до відстані, що пройшов фронтом розчинника

R f = L / L 0

Значення R f - величина безрозмірна і має значення від 0 до 1. Проте в літературі нерідко зустрічається такі показники як hR f, R f Ч100, які є тим же R f, але помноженими на 100, для того, щоб не оперувати десятковими значеннями.

На значення R f не впливає відстань пройдена фронтом розчинника, однак у багатьох методиках описується проходження фронту на відстань 10 см. Це використовується тільки для полегшення розрахунків R f.

На практиці, на початку визначають відстань минув фронтом розчинника: від лінії старту (а не від краю пластинки) до місця, де знаходився фронт в момент закінчення хроматографування. Потім визначають відстань від лінії старту до плями розділеного речовини. Отут і впливає розмір плями! Адже якщо пляма має круглу форму і невеликий розмір, то отримане R f має чітке значення. А якщо отримане пляма має великий розмір або неправильну форму, то при визначенні R f такого плями, помилка може досягти 0,1!

У разі розподільної хроматографії коефіцієнт розподілу речовини та її R f пов'язано співвідношенням:

де S п і S н - площі поперечних перерізів рухомою і нерухомою фази.

Як ми бачимо, коефіцієнт розподілу, при постійному відношенні Sп / Sн є величина пропорційно залежить від Rf, і може бути визначена через нього. [3]

1.4.13 Кольорові реакції

Кольорові реакції в тонкошарової хроматографії використовуються надзвичайно широко. Вони служать не тільки для визначення місця розташування розділених компонентів (обробка сірчаною кислотою, парами йоду), а й визначення як класу речовин, так і ідентифікації (за наявності індивідуальних реакцій). При збігу всіх якісних реакцій і збігу отриманих значень Rf речовини в трьох різних системах з літературними даними, речовина ідентифіковано. [3]

1.4.14 Порівняння зі свідком

При проведенні досліджень речовин з передбачуваним складом, застосовують метод хроматографирования зі свідком - відомим речовиною. Цей метод використовується коду важко витримати умови хроматографування, немає літературних даних Rf для даної системи або адсорбенту, використання градієнтного методу і т.д. Та й при проведенні кольорових реакцій можна порівняти не тільки кольору, а й відтінки досліджуваних речовин і свідків, що також важливо. [3]

З іншого боку цей метод потребує додаткових витрат на свідки.

1.4.15 Фізико-хімічні методи ідентифікації

Принадність тонкошарової хроматографії полягає в тому, що після хроматографування кожне розділене речовину можна надалі досліджувати іншими методами набагато простіше. І справа тут не в тому, що інші методи хроматографирования не можуть цього. Справа тут в складності виділення і матеріальних витратах на спеціальні пристосування, у яких тільки одна задача - виділити речовину.

У тонкошарової хроматографії є тільки одна складність - зняти шар сорбенту і вимити з нього речовину. Надалі можна його досліджувати з використанням ІК і УФ-спектрометрії, рентгено-структурними методами, ЯМР і т.д.

Тому, використовуючи тонкошарову хроматографію для розділення сумішей, можна не тільки досліджувати кожен компонент різними методами, але і напрацювати невелика кількість, в тому числі і для свідків. [4]

1.4.16 Методи кількісного аналізу

Кількісний аналіз у тонкошарової хроматографії має декілька видів, що характеризує кожний етап розвитку методу. І хоча деякі методи можна застосовувати тільки як напівкількісний, вони до цих пір застосовуються на практиці.

Метод візуального порівняння. Як говорилося вище, інтенсивність забарвлення плями і його розмір від кількості хроматографіруемого речовини. Тому візуальне кількісне визначення побудовано на кількох прийомах.

Метод розведення. Цей метод полягає в тому, що для кожної речовини визначають граничну концентрацію, при якій речовина не може бути визначено хроматографічним методом. При хроматографирования досліджуваної речовини поводять розбавлення до тих пір, поки воно перестає проявлятися на платівці. Зміст речовини С, певне таким методом знаходять за формулою:

C = an

де n - розведення, а - концентрація речовини, при якому воно не виявляється при хроматографирования.

Метод визначення площі плями. Якщо наносити однакові обсяги досліджуваних речовин і свідків, то утворені після хроматографування площі плям пропорційна логарифму концентрації речовини.

S = alnc + b

де а і b - емпіричні коефіцієнти, які визначаються експериментальним шляхом.

Якщо пляма розділеного речовини має різкі границі, то площа плями можна визначити ваговим методом (вирізати пляму і зважити), заміряється планіметрії. Цей метод дає помилку до 10-15%.

Однак він має ряд істотних недоліків. Перший і найсуттєвіший в тому, що таким чином можна визначати концентрацію пофарбованих речовин або мають флуоресценцію в УФ області (254, 366 нм). Цей недолік можна усунути додаванням в сорбент різних люмінофорів, то при цьому збільшується похибка визначення. Обробка пластин проявляють речовинами (реактивами) також може бути використана (наприклад використання фільтрувального паперу просоченої виявляють реагентом з наступним контактом з хроматографічної платівкою і подальшим визначенням на ній площі проявленого речовини), але похибка визначення також висока.

Необхідність більш достовірного результату кількісного визначення призвела до використання інструментальних методів.

Метод елюювання. Цей метод полягає в тому, що розділене речовина змивають з сорбенту розчинником і визначають його концентрацію вже іншими методами - фотометричними, полярографічним і т.д. Це досить точний метод, але тільки за умови кількісного виділення розділеного речовини. Через високу трудомісткості метод використовується досить рідко і неприйнятний при великій кількості досліджуваних зразків.

Фотографічний метод визначення полягає у фотографуванні пластинок з розділеним речовиною і подальшим визначенням ступеня почорніння, з використанням десінтометров.

Радіографічний метод аналогічний фотометричним, тільки з тією різницею, що визначається почорніння пластинки, викликане випромінюванням розділеного речовини. Цей метод використовується тільки при визначенні речовин з міченими атомами.

Фотодесінтометріческій метод може бути використаний без виділення речовини з платівки і заснований на визначенні не тільки площі плями, але і його інтенсивності.

Це найбільш точний метод визначення концентрації речовин, тому що дозволяє при використанні калібрувальних графіків, проводити досить точні кількісні визначення всіх розділених речовин (до 2-10%) безпосередньо на платівці за короткий проміжок часу.

Не дивно, що при розвитку тонкошарової хроматографії, застосування десінтометров збільшується, чутливість і, отже, точність визначення концентрації розділених речовин підвищується і наближається до точності високоефективної рідинної хроматографії. [Алесковскій В.Б., Бардін В.В., Булатов М.І. Фізико-хімічні методи аналізу. Практичне керівництво .- Л.: Хімія, 1988. - 376с.]

1.4.17 Способи проведення ТШХ

Підготовка проби є дуже відповідальною операцією в ТШХ. Розмивання в ТШХ в першу чергу пов'язано з якістю нанесення стартовою зони зразка.

Вибір розчинника і способи нанесення проби

До розчинника, з якого пробу наносять на шар сорбенту, висувають такі вимоги: повна розчинність в ньому всіх компонентів проби; відносна летючість (для швидкого видалення з пластини перед початком поділу); низьке значення R f (При використанні полярних розчинників, в яких R f поділюваних речовин близько до 1, проби хроматографують безпосередньо при нанесенні, що спотворює форму стартового плями і може впливати на R f, особливо при ТШХ в менш полярних елюента); хороша змочуваність шару (важливо для ОФТСХ).

Стартова зона повинна бути по можливості мінімальною, особливо для ВЕТСХ. Занадто висока концентрація речовини в стартовому плямі може уповільнити розчинення проби при елюювання.

Для нанесення проб використовують скляні платино-іридієві капіляри, мікропіпетки, шприци, а також спеціальні дозуючі пристрої, наприклад, платино-іридієві капіляри з максимальним об'ємом дозування 22 нл на 1 м довжини. При відборі однієї і тієї ж проби капіляром відтворюваність введення проби становить ± 0,7% від її обсягу.

При нанесенні в'язких проб можна нагрівати пластини або підсушувати їх феном для безперервного випаровування розчинника. Використання двофазних пластин з предадсорбціонним шаром знімає багато проблем. На кордоні двох сорбентів зона стискається у вигляді вузької смуги незалежно від якості нанесення стартового плями (рис. 2).

Рис. 2. ТШХ суміші барвників на двофазних пластинах з предадсорбціонним шаром.

Рис. 3. Послідовність операцій при нанесенні зразка контактним способом

Пробу можна сконцентрувати в вузьку стартову зону при зануренні пластини в розчинник, для якого значення R f всіх компонентів близькі до 1, і пропусканням його трохи вище зони нанесення проби, після чого елюювання припиняють, а пластину швидко висушують. Подібну операцію повторюють кілька разів. Для в'язких і розбавлених проб ефективний спосіб контактного нанесення. На рис. 3 показана послідовність операцій нанесення проби за цим методом:

а) над отвором в металевій пластині поміщають змочену перфторкосіном етиленпропіленовий плівку, яка не змочується ніякими розчинниками;

б) за допомогою вакуумування плівка щільно притискається до пластини і злегка втягується в отвір, утворюючи поглиблення;

в) у поглиблення вносять пробу, яка залишається там у вигляді кулястої краплі, так як не змочує плівку;

г) розчинник випаровують, підсушуючи зверху феном, поки кулька не зменшиться до потрібного розміру;

д) пластину поміщають шаром вниз на плівку над пробою і, замінюючи вакуум легким тиском, переносять на неї пробу.

Цей метод дозволяє нанести на пластину одночасно декілька зразків без їх попереднього розчинення і концентрувати розбавлені проби.

Істотним є сталість відстані лінії нанесення проб від нижнього краю пластини і лінії занурення пластини в елюент.

Способи проведення ТШХ

Лінійна, круг і антікруговая ТШХ. У колоночной рідинної хроматографії можливе тільки лінійне рух елюента. У ТШХ завдяки відкритому шару сорбенту можна здійснити три типи елюювання: лінійне, круговий та антікруговое (рис. 4). Крім того, в ТШХ можна реалізувати додатково різні методики, що дозволяють значно збільшувати пікову ємність.

Найбільш широко використовують лінійний розвиток хроматограм. Проби наносять на стартову лінію паралельно одній із сторін пластини. Пластину поміщають вертикально в хромато-графічну камеру, на дно якої налитий елюент, і проводять висхідну ТШХ. У лінійному ТШХ зі збільшенням R f, речовини розмивання збільшується. Лінійне розвиток хроматограм можна здійснити і при горизонтальному положенні пластини

Рис. 4. Типи елюювання в ТШХ: а - лінійне; б - лінійне (горизонтальне); в - круговий; г - антікруговое з подачею на неї елюента з однієї або з обох сторін.

Для висхідній лінійної ТСХ в якості хроматографічної камери можна використовувати будь-яку посудину прямокутної або циліндричної форми. Однак у таких камерах важко отримати відтворювані результати, оскільки у міру підняття елюента по пластині відбуваються фронтальне поділ елюента в шарі сорбенту (ТШХ полізональная), адсорбція і капілярна конденсація компонентів елюента з парової фази на суху частину пластини та інші процеси. У подібних камерах, можна проводити ТСХ з насиченням (стінки камери покривають фільтрувальним папером, змоченою елюентом) або без насичення.

Для зменшення впливу парової фази в лінійній ТШХ використовують «сендвіч»-пластини. З трьох сторін двох пластин знімають вузький шар сорбенту і, проклавши між ними прокладку (товщина 0,5-2 мм), щільно скріплюють такий «сендвіч»-затиском і опускають в камеру з елюентом. ТШХ проводять, таким чином, одночасно на двох пластинах, розташованих шаром один до одного. В якості другої пластини можна використовувати, скляну підкладку без шару адсорбенту.

У кругової ТШХ проби наносять на деякій відстані від центру пластини по колу, а елюент подають до центру (рис. 4, б). Оптимальний дозвіл досягається кругової хроматографією при К '= 100 (R f = 0,009), тобто добре розділяються речовини з низькими значеннями R f.

У антікруговой ТШХ проби наносять по колу по периферії пластини і елюент подають в напрямку до центру пластини (рис. 4, г). При цьому хроматографічні зони стискаються у міру руху по пластині. У антікруговой ТШХ одночасно можна аналізувати найбільшу кількість проб. Це найбільш швидкий метод ТШХ. Антікруговая ТШХ дає гарні результати при поділі речовин з високими значеннями R f. Для реалізації кругової і антікруговой ТШХ фірма «Камаг» випускає спеціальні так звані U-камери. Застосування U-камер дозволяє підвищити відтворюваність результатів ТШХ за рахунок елімінування впливу парової фази і можливості проведення ТСХ в атмосфері інертного газу. Крім того, є можливість наносити пробу в потік елюента. Кругову і антікруговую ТШХ можна реалізувати і простішим способом при використанні, наприклад, чашки Петрі для кругової ТШХ і 2 чашок Петрі, вставлених одна в іншу для антікруговой ТШХ. Для збільшення пікової ємності в ТШХ використовують методи проточною, багаторазовою, градієнтної і двовимірної ТШХ. [1]

Глава 2. Контроль якості харчових продуктів за допомогою методу ТШХ

2.1 Визначення ддт, ДДЕ, ддд, альдрину, дільдріна, гептахлору, кельтана, метоксихлор, ефірсульфонат та інших отрутохімікатів у продуктах харчування хроматографією в тонкому шарі

Принцип методу. Метод заснований на витягу препаратів з проби органічними розчинниками (н-гексан, петролейний ефір, діетиловий ефір, хлороформ), очищення екстракту і наступному хроматографирования в тонкому шарі оксиду алюмінію або силікагелю. Рухомим розчинником служить стандартний гексан або гексан в суміші з ацетоном. Місця локалізації препаратів виявляють після обприскування платівок розчином аміакати срібла в ацетоні або 2%-ним розчином дифениламина з подальшим ультрафіолетовим опроміненням. Кількісне визначення проводиться шляхом візуального порівняння або вимірювання площ плям проб і стандартних розчинів. [5]

Мінімально Детектируемая кількість при прояві азотнокислим сріблом 0,5 мкг, при прояві дифеніламіном 10 мкг. Чутливість визначення у воді і вини 0,002 мг / л, яблуках і капусті 0,02, в інших овочах і фруктах 0,01, зерні 0,05, сіні 0,05, рибі, м'ясі, внутрішніх органах, жирі 0,02, молоці , сирі 0,01, грунті 0,01 мг / кг. Повнота визначення 90 ± 5%.

Реактиви і розчини: Гексан «х. ч. », петролейний ефір (t кип. 40-70 е С), діетиловий ефір для наркозу, хлороформ х. ч., бензол х. ч., ацетон х. ч., натрій сірчанокислий безводний х. ч., насичений розчин безводного сірчанокислого натрію в сірчаній кислоті щільністю 1,84 г / см 3 (100 г безводного сірчанокислого натрію розчиняють в 1л сірчаної кислоти), окис алюмінію для хроматографії або силікагель КСК, просіяні через сито 100 меш., кальцій сірчанокислий ( CaSO 4 × 2 H 2 O) «ч. д. а. »- просушують в сушильній шафі 6 годин при 150-160 ° С і зберігають а банці з притертою пробкою, спирт етиловий.

Виявляє реактив № 1. 0,5 г азотнокислого срібла розчиняють в 5 мл дистильованої води, додають 7 мл аміаку щільністю 0,9 г / см 3 та доводять об'єм розчину до 100 мл ацетоном. Готують у день вживання. На пластинку 9 '12 см витрачається 8-10 мл розчину.

Виявляє реактив № 2. 2%-й розчин дифениламина в ацетоні. 5%-ний водний розчин оксалату калію ч. д. а.Насищенний водний розчин натрію хлористого. Силікагель АСК Воскресенського хімкомбінату (Московська обл.). Стандартні розчини пестицидів (100-200 мкг / мл). 10-20 мг ДДТ х. ч. або ін пестициду розчиняють в 100 мл гексану, зберігають у холодильнику в щільно закритій склянці. Пластинки для хроматографії. Ретельно промиту содою, хромовою сумішшю, дистильованою водою, висушену скляну пластинку 9 '12 або 13' 18 см протирають етиловим спиртом або ефіром і покривають сорбційної масою. Масу готують так: 50 г просіяного через сито 100 меш окису алюмінію змішують у фарфоровій ступці з 5 г сірчанокислого кальцію, додають 75 мл дистильованої води і перемішують у ступці або колбі до утворення однорідної маси. 10 г сорбційної маси рівномірно розподіляють по всій поверхні пластинки 9 '12 см шляхом її похитування. Сушать пластинки при кімнатній температурі 18-20 год і зберігають в ексикаторі.

Сорбційну масу можна приготувати з силікагелю (35 г силікагелю, 2 г гіпсу і 90 мл дистильованої води). Силікагель попередньо очищають від домішок, - заливають на 18-20 ч. розведеною соляною кислотою (1: 1), кислоту зливають, промивають силікагель водою і кип'ятять 2-3 год з розведеною азотною кислотою (1: 1), промивають проточною водопровідною, потім дистильованої содою до нейтральної реакції промивних вод, сушать в сушильній шафі 4-6 год при температурі 130 ° С. Силікагель дроблять і просівають через сито 100 меш, зберігають у склянці з притертою пробкою.

Ділильні воронки на 100, 250 і 500 мл.

Мірні колби на 100 мл.

Колби з притертими пробками на 250 і 500 мл.

Прилад для відгонки розчинників.

Колби круглодонні на 50 і 100 мл.

Пульверизатори скляні для обприскування платівок (рис. 1).

Камера для хроматографування. Скляний посуд з притертою кришкою. Можна використовувати ексикатор.

Камера для обприскування.

Мікропіпетки для нанесення стандартних розчинів.

Піпетки або шприци для нанесення проб.

Лазні водяні.

Ртутно-кварцова лампа.

Хроматографічні колонки 18 '390 мм.

Хід аналізу

Харчові продукти та корми. Для аналізу із середньої проби відбирають: овочі, фрукти, гриби, зерно, сир - 500 г, сир-100, м'ясо, риба - 250, масло вершкове, вершки - 200, трава - 200, сухі гриби, сіно - 50 г, вино , вода, молоко - 500 мл. Масло розтоплюють, овочі, фрукти і т.п. подрібнюють і ретельно перемішують.

Вода, вино. Проби відбирають тільки в скляний посуд. 200-300 мл проби в колбі з притертою пробкою екстрагують протягом 15 хв на приладі для струшування н-гексаном або петролейним ефіром трьома порціями по 30 мл або діетиловим ефіром трьома порціями по 40-50 мл. Екстракцію можна проводити в ділильних воронках, енергійно струшуючи рідина 3 рази по 3-5 хв.

В об'єднані екстракти насипають близько 10 г безводного сірчанокислого натрію або об'єднані екстракти фільтрують через лійку з сірчанокислим натрієм. Екстракти переносять в прилад для відгонки розчинників, відганяють розчинник до невеликого обсягу (0,1-0,2 мл).

Овочі, фрукти. 10г подрібненої проби тричі екстрагують протягом 15 хв на апараті для струшування н-гексаном або петролейним ефіром трьома порціями по 30 мл. Об'єднані екстракти сушать безводним сірчанокислим натрієм, переносять в прилад для відгонки розчинників, відганяють розчинник до невеликого обсягу.

Зерно, гриби. 10 г зерна, 50 г сирих або 10 г сухих грибів дрібно подрібнюють і екстрагують па приладі для струшування н-гексаном або петролейним ефіром порціями по 30 мл. Об'єднані екстракти переносять в ділильну воронку, додають 10 мл насиченого розчину безводного сірчанокислого натрію в сірчаній кислоті і обережно струшують кілька разів. Відокремлюють органічний шар і повторюють обробку до тих пір, поки кислота не стане безбарвною. Сушать екстракт над безводним сірчанокислим натрієм, відганяють розчинник до невеликого обсягу.

Яблука, капуста, трава, сіно. 10 г проби яблук, 10 - 20 г капусти, 10-20 г трави або 5-10 г сіна подрібнюють, заливають 100 мл ацетону. Струшують 2-3 хв, додають 20 мл крижаної дистильованої води і охолоджують на льоду 30 хв. Екстракт зливають і фільтрують холодним, екстракцію повторюють. З об'єднаних водно-ацетонових екстрактів відганяють ацетон, а з водного шару екстрагують препарат н-гексаном або петролейним ефіром трьома порціями по 10 мл протягом 10 хв. Гексанової екстракти очищають сірчаною кислотою, насиченою безводним сірчанокислим натрієм. Сушать безводним сірчанокислим натрієм. Відганяють розчинник до невеликого обсягу і наносять на пластинку. Якщо очищення неповна, екстракт випаровують насухо, залишок промивають холодним ацетоном 3 рази порціями по 0,2 мл і відразу наносять на пластинку.

Риба, м'ясо. М'ясо пропускають через м'ясорубку. Рибу очищають від луски, внутрішніх органів і пропускають через м'ясорубку. 25 г проби заливають 40 мл н-гексану або петролейного ефіру, збовтують 2 хв, розбивають утворилися грудочки і залишають на 30 хв. Екстракцію повторюють двічі. Об'єднані екстракти переносять в ділильну воронку, додають 10 мл насиченого розчину сірчанокислого натрію в сірчаній кислоті і обережно струшують кілька разів. Відокремлюють органічний шар. Обробку повторюють до тих пір, поки кислота не стане безбарвною. Сушать екстракти безводним сірчанокислим натрієм, розчинник випаровують до 0,1 мл.

Внутрішні органи, тваринний жир. 25 г подрібненої проби поміщають в колбу і заливають концентрованої сірчаної кислотою, насиченою безводним сірчанокислим натрієм (проба повинна повністю знаходитися в кислоті). Вміст колби перемішують скляною паличкою, додають 40 мл н-гексану, безперервно струшують 2 хв, періодично струшують протягом 30 хв. Екстракт декантирують, екстракцію повторюють. Злиті в ділильну воронку екстракти обережно струшують з концентрованою сірчаною кислотою, насиченою сірчанокислим натрієм. Операцію повторюють кілька разів до отримання безбарвного розчину сірчаної кислоти. Відокремлюють гексановий шар, сушать безводним сірчанокислим натрієм і випаровують.

Рослинні масла. 10 мл олії наливають в ділильну воронку, додають 20 мл ацетону, струшують і доливають 10 мл етилового спирту. Виділилося масло зливають. До ацетоно-спиртовому екстракту додають 100 мл 2%-ного водного розчину сірчанокислого натрію. З суміші екстрагуються препарат 2 рази н-гексаном порціями по 30 мл, щоразу струшуючи 5 хв. До об'єднаним гексанової екстрактам додають 20 мл насиченого розчину безводного сірчанокислого натрію в сірчаній кислоті і обережно струшують кілька разів. Відокремлюють органічний шар і повторюють обробку до тих пір, поки кислота не знебарвиться. Сушать екстракт і випаровують розчинник до 0,1-0,2 мл.

Молоко, вершки. До 50 мл молока або вершків 20г додають концентровану сірчану кислоту (30-40 мл) до повного почорніння проби. Охолоджений до 10-15 ° С розчин переносять в ділильну воронку і екстрагують н-гексаном 2 рази порціями по 25 мл. Для повного вилучення воронку струшують 2 хв, потім залишають її на кілька хвилин до повного поділу шарів. Якщо утворюється емульсія, додають 1-2 мл етилового спирту. До об'єднаним екстрактам в ділильної воронки додають 10 мл концентрованої сірчаної кислоти, насиченої сірчанокислим натрієм, і обережно струшують кілька разів. Очищення повторюють до отримання безбарвної кислоти.

Сир, сир. 50 г сиру або 10 г подрібненого на терці сиру заливають 40 мл н-гексану або петролейного ефіру, безперервно струшують 2-3 хв і періодично струшують протягом 30 хв. Екстракцію повторюють. Об'єднані екстракти в ділильної воронки очищають сірчаною кислотою, як зазначено вище.

Вершкове масло. 20 г вершкового масла розтоплюють на водяній бані круглодонной колбі, додають 50 мл ацетону, ретельно перемішують до розчинення жиру, додають 10 мл крижаної дистильованої води і охолоджують па льоду до затвердіння жиру (приблизно 30 хв). Зливають ацетонових екстракт процедуру повторюють 3 рази. З об'єднаних екстрактів в круглодонной колбі ацетон відганяють на водяній бані. Пестициди екстрагують з залишився водного екстракту гексаном трьома порціями по 10 мл протягом 5 хв. Об'єднані гексанової екстракти в ділильної воронки обробляють сірчаної кислотою з сірчанокислим натрієм. Очищений екстракт сушать і упарюють. Другий спосіб підготовки проб молока і молочних продуктів. Молоко (кефір, кисле молоко, кумис та інші суцільномолочні продукти). 25 мл продукту поміщають в ділильну воронку на 300 мл, доливають по 5 мл розчину оксалату калію і насиченого розчину NaCl, перемішують, доливають 100 мл ацетону, струшують 2 хв. Доливають 100 мл хлороформу і струшують 2 хв. Воронку залишають до повного поділу шарів. Верхню фазу відкидають, а нижню виливають у круглодонну колбу з шліфів і випаровують розчинник насухо. Залишок змивають 30 мл гексану.

Згущене молоко. 10-20%-і вершки. До 10 г продукту додають 10 мл насиченого розчину NaCI і виливають в ділильну воронку місткістю 150 мл. До суміші доливають 40 мл ацетону, струшують 2 хв, доливають 60 мл хлороформу, струшують 2-3 хв і залишають до поділу фаз. Далі надходять, як при визначенні пестицидів у молоці.

Згущені молочні продукти. 10 г продукту поміщають в стаканчик, заливають 10 мл води з температурою 45-50 ° С, перемішують і переносять в ділильну воронку ємністю 150 мл, додають 5 мл розчину оксалату калію. Вміст воронки перемішують, доливають 80 мл ацетону і струшують 2-3 хв, додають 100 мл хлороформу і струшують 5-7 хв. Після поділу фаз нижню фазу зливають в круглодонну колбу, розчинники відганяють, а залишок розчиняють в 30 мл петролейного ефіру.

Сухі молочні продукти. 3 г сухих молочних продуктів (2 г сухих вершків) висипають у склянку, доливають 15 мл дистильованої води з температурою 40-45 ° С, розмішують і переносять в ділильну воронку місткістю 300 мл, доливають по 5 мл розчину оксалату калію і насиченого розчину кухонної солі . Вміст воронки перемішують, додають 80 мл ацетону і струшують 3-5 хв, доливають 100 мл хлороформу, струшують 5 хв і залишають на 3-5 хв (до поділу фаз). Нижню фазу зливають в колбу, розчинники відганяють, а залишок змивають 30 мл н-гексану.

Масло, молочний жир. 2 г продукту висипають у склянку, підігрівають до 40 ° С і розчиняють в 30 мл н-гексану.

Сметана, 30-40%-і вершки. 5 г продукту відважують в стаканчик, додають 10 мл насиченого розчину кухонної солі і переносять в ділильну воронку місткістю 150 мл. Стаканчик обмивають 40 мл ацетону, змиви переносять в ділильну воронку, яку струшують 1-2 хв, додають 70 мл хлороформу і струшують 2-3 хв. Воронку залишають на 3-5 хв (до поділу фаз), нижню фазу злипаються в колбу для відгонки розчинників, розчинники відганяють, а залишок змивають 30 мл л-гексану.

Сир, сир. 10 г сиру або подрібненого на тертці сиру розтирають з 10 мл насиченого розчину кухонної солі і переносять в ділильну воронку на 250-300 мл. Додають 80 мл ацетону, струшують 2 хв, додають 100 мл хлороформу і знову струшують. Нижню фазу використовують для аналізу після відгонки розчинників, розчинивши залишок у 30 мл н-гексану.

Очищення екстракту від молочного жиру. У нижню частину хроматографічної колонки поміщають скловату, потім насипають в колонку 70 мл силікагелю АСК і ущільнюють його постукуванням. Колонку промивають 50 мл гексану, а пройшов через неї розчинник відкидають. На підготовлену таким чином колонку наносять 30 мл отриманого з молока або молочних продуктів екстракту. Після вбирання екстракту в сорбент пестицид елюіруют 110мл суміші бензолу з гексаном (3:8) порціями по 25-30 мл. Елюатів збирають в круглодонну колбу з шліфів місткістю 250-300 мл. Через 10 хв після вбирання останньої порції розчинника сорбент віджимають за допомогою гумової груші. Після очищення розчинники відганяють під вакуумом.

Хроматографирования. На хроматографічну пластинку на відстані 1,5 см від її краю шприцом або піпеткою наносять досліджувану пробу в одну точку так, щоб діаметр плями не перевищував 1 см.

Залишок екстракту в колбочці змивають трьома невеликими порціями (по 0,2 мл) діетилового ефіру, які наносять у центр першого плями. Праворуч і ліворуч від проби на відстані 2 см наносять стандартні розчини, які містять 1,5 і 10 мкг досліджуваних препаратів. Для нанесення 1 мкг стандартний розчин слід розбавляти в 10 разів.

Платівку з нанесеними розчинами поміщають в камеру для хроматографування, на дно якої за 30 хв до початку хроматографирования наливають рухливий розчинник н-гексан, а для препаратів, у яких R f в гексані нижче 0,3 - суміш гексану з ацетоном (6:1) . Край пластинки з нанесеними розчинами може бути занурений в рухливий розчинник не більше ніж на 0,5 см.

Після того як фронт розчинника підніметься на 10 см, платівку виймають з камери і залишають на кілька хвилин для випаровування розчинника. Далі платівку зрошують виявляють реактивом і піддають УФ-опромінення 10-15 хв (лампа ПРК-4). Пластинки слід розташовувати на відстані 20 см від джерела світла.

При наявності хлорорганічних пестицидів на платівці з'являються плями сіро-чорного кольору. Кількісне визначення здійснюють порівнянням розмірів плям проби і стандартного розчину (візуально або вимірюють площі). Між кількістю препарату в пробі, що не перевищує 20 мкг, і площею його плями на платівці існує пряма пропорційність. При більшому вмісті препарату слід використовувати пропорційну частину досліджуваного екстракту.

Розрахунок кількості препарату в пробі обчислюють за формулою:

X = A / P або

де X - вміст препарату в пробі, мг / кг або мг / л, А - кількість препарату, знайдене шляхом візуального порівняння зі стандартним розчином, мкг; Р - маса або об'єм досліджуваної проби, г або мл; А 1 - вміст препарату в стандартному розчині, мкг; S 1 - площа плями стандартного розчину, мм 2; S - площа плями проби, мм 2.

Величина R f залежить від адсорбенту, розміру його часток, кількості та природи сполучного матеріалу, товщини шару, природи рухомого розчинника, ступеня насичення камери для хроматографирования парами рухомого розчинника, відстані пройденого розчинником, температури, кількості та природи коекстрактівних речовин.

Для ДДТ R f для оксиду алюмінію складає 0,61-0,71 (в залежності від ізомеру) і 0,50-0,54 на силікагелі.

На шарі оксиду алюмінію виявляються три плями, які відповідають 4,4 '-ДДТ (основне пляма), 2,4'-ДДТ та 4,4 '-ДДД (слабке пляма). Пляма ДДД проявляється, якщо вміст ДДТ в аналізованій пробі перевищує 20 мкг. Зміст ізомерів ДДТ підсумовують. На хроматограмах проб харчових продуктів, що містять залишкові кількості ДДТ, крім згаданих трьох плям, виявляється четверте пляма, відповідне продукту розкладання ДДТ - ДДЕ.

На шарі силікагелю технічний препарат ДДТ дає одну пляму, відповідне сумі ізомерів. Якщо кількість ДДТ в пробі перевищує 20 мкг, на хроматограмі з'являється слабке пляма, відповідне ДДД. [5]

2.2 Визначення о, о-діетил-8-(6-хлорбензоксазолініл-3-метил)-дітіофосфата (фозалон) в яблуках методом тонкошарової хроматографії

Фозалон застосовується для боротьби з шкідниками саду. [6]

У літературі описана ідентифікація фозалон та визначення його в рослинах колориметричним і біологічним методами [7].

Однак ці методи дуже громіздкі, тому що вимагають складної очищення рослинних екстрактів. Нами був розроблений простий якісний і кількісний метод визначення залишкових кількостей фозалон в яблуках із застосуванням тонкошарової хроматографії. Вихідною речовиною служив чистий препарат фозалон. Досліди проводили з яблуками сорту Ренет Симиренка.

Після випробування ряду екстрагентів для вилучення фозалон з яблук був обраний хлороформ. Для ідентифікації фозалон застосували метод тонкошарової хроматографії.

При підборі рухомої фази був вивчений ряд органічних розчинників і їхніх сумішей. Найкращою для ідентифікації фозалон є суміш гексану з ацетоном у співвідношенні 4:1.

Для прояву фозалон на хроматографічних пластинках був випробуваний ряд реактивів, рекомендованих для прояву фосфорорганічних пестицидів [8 - 11].

Найкращі результати дали 0,2%-ний розчин хлористого паладію [L. Fishbein, J. Fowkes, P. Jones. J. Chromatogr., 23, 47 b (1966).] Або суміш 0,05%-ного розчину бром- фенолового синього в ацетоні з 1%-ним водним розчином AgN О 3 у співвідношенні 1:1, з подальшим відбілюванням хроматограм 2,5%-ним розчином лимонної кислоти [Л. М. Фукельман. Збірник праць ВІЗР, вип. 20, ч. 4, 61 (1964).]. Ці проявники дозволяють виявляти до 1 мкг фозалон.

Рис. 5. Тонкошарова хроматограмма фозалона1 з екстракту яблук на силікагелі КСК. а - місце нанесення екстракту; б - точка нанесення стандарту; в - місце відкладення фозалон

Рис. 6. Двомірна тонкошарова хроматограмма фозалон з екстракту яблук на силікагелі КСК. а - б - місце нанесення екстракту з вмістом фозалон 50 мкг; в, г, д - точки нанесення стандартних розчинів фозалон, відповідно 25, 50 і 75 мкг.

Запропонована методика визначення фозалон в яблуках полягає в наступному. 100 г яблук подрібнюють, наносять піпеткою певну кількість фозалон. Екстрагують хлороформом при струшуванні на Шутелах-апараті 1,5 години. Хлороформний екстракт відокремлюють від рослинної маси фільтруванням. Рослинну масу на фільтрі промивають тричі хлороформом (по 20 мл). Фільтрат і промивні порції хлороформу збирають у колбу для відгону розчинника. Хлороформ відгонять під вакуумом до обсягу 5-10 мл. Переносять його кількісно в стаканчик, упарюють до 0,5 мл і наносять на пластинку смужкою шириною 1 см довжиною 5 см на відстані 1,5 см від нижнього краю пластинки.

Для хроматографирования використовують скляні пластинки розміром 9 X 15 см, на які наносять тонкий шар силікагелю марки КСК (40 меш), закріплений гіпсом.

Хроматографирования проводять в системі гексан - ацетон (4:1).

Пластинки проявляють зазначеними вище проявниками. Причому в разі застосування хлористого паладію плями фозалон забарвлюються в жовтий колір на білому фоні, а домішки -. в коричневий. Забарвлення не зникає протягом тривалого проміжку часу. При застосуванні другого проявника плями фозалон забарвлюються в синій колір на жовтому фоні, а домішки зовсім не забарвлюються. Слід зазначити, що в цьому випадку плями фозалон через 10-15 хв. бліднуть. R f фозалон дорівнює 0,5 (рис. 5).

Чутливість методу 0,1 мг / кг.

Цей варіант методу дозволяє якісно визначати зміст фозалон в рослинній пробі.

Для кількісного визначення фозалон в пробі ми використовували двомірну хроматографію на пластинках розміром 15 '20 см.

Екстракцію і отгонку проводять так само, як і в попередньому випадку. Екстракт без очищення наносять на пластинку смужкою довжиною 5 см і шириною 1 см на відстані 1,5 см від нижнього краю (нижня сторона платівки 15 см) і 2 см від лівого краю пластинки.

Хроматографирования проводять в рухомому розчиннику гексан - ацетон (4: 1). Дають розчинника просунутися на 12-15 см, потім пластинку висушують на повітрі протягом 20 хв. Далі повертають її на 90 е так, щоб лівий край пластинки служив підставою. З лівого боку пластинки наносять стандарти з різним вмістом фозалон і хроматографують в тому ж рухомому розчиннику. З метою отримання добре сформованих плям проводять повторне хроматографирования в тому ж напрямку, але із застосуванням іншого рухомого розчинника - хлороформу.

Після прояви пластинок тими ж реактивами, що і в попередньому випадку, отримували плями з R f = 0,82 (рис. 6). Кількісне визначення фозалон проводять порівнянням плями аналізованої проби з плямами стандартів.

Запропонованим методом було проведено визначення залишків фозалон в яблуках (див. таблицю).

Визначення фозалон в 100 г яблук

Внесено фозалон, мкг

Знайдено фозалон, мкг

Помилка

Внесено фозалон, мкг

Знайдено фозалон, мкг

Помилка



мкг

%



мкг

%

25

20

5

- 20

75

70

5

- 6,7

50

45

5

-10

100

85

15

- 15

50

40

10

- 20





Глава 3. ТСХ - обладнання

3.1 Обладнання фірми НТЦ ЛЕНХРОМ для інструментальної ТСХ

Обладнання фірми НТЦ ЛЕНХРОМ дозволяє провести всі робочі етапи сучасної тонкошарової хроматографії:

  • дозування і нанесення проб

  • проведення процесу хроматографії

  • УФ-виявлення

  • детектування (фарбування) хроматограм

  • відеозапис зображень пластинок

  • кількісна обробка хроматограм

Об'єкти дослідження та області застосування планарной хроматографії

  1. Готові лікарські форми

    • справжність діючих речовин

    • точність дозування

    • наявність шкідливих домішок і добавок

  2. Фармакологія

    • фармакокінетичні дослідження

    • вивчення метаболізму діючих речовин

  3. Біохімія і медицина

    • визначення вмісту найважливіших біологічно активних сполук у рідинах і тканинах організму

    • зміна вмісту цих речовин при патології

    • судмедекспертиза

    • допінг-контроль

  4. Охорона навколишнього середовища

    • аналіз пестицидів в питній і стічних водах, опадах, продуктах харчування

    • аналіз токсичних речовин (наприклад, афлатоксинов) в продуктах харчування

3.1.1 Портативний набір для ТШХ

Портативний набір для ТШХ Комплект призначений для якісного та напівкількісного аналізів багатокомпонентних сумішей органічних і неорганічних речовин і може знайти застосування у всіх областях науки і техніки, де для аналізу використовується метод тонкошарової хроматографії. Комплект дозволяє:

  • проводити аналіз сумішей методом ТШХ, заснованому на поділі аналізованих речовин за рахунок різної швидкості переміщення їх по тонкому шару сорбенту, нанесеного на плоску підкладку (скляну, полімерну або алюмінієву);

  • наносити точну кількість аналізованих речовин на хроматографічні пластини;

  • аналізувати одночасно велику кількість проб;

  • виявляти і переглядати хроматограми в ультрафіолетовому світлі;

  • фарбувати хроматограми;

  • видаляти органічні розчинники з хроматограм висушуючою пристроєм з підігрівом.

Комплект включає:

  • Ультрафіолетовий освітлювач УФО-254

  • Хроматографічну камеру для пластин розміром 130-130-56 см

  • Пластини для ТШХ (10х10), одна упаковка - 50 шт

  • Пульверизатор для в'язких і агресивних рідин

  • Пульверизатор для маловязких і неагресивних рідин

  • Фен

Торрірованние скляні капіляри V = 1 ml

3.1.2 Базовий набір для ТШХ

Базовий набір для ТШХ (розширений)

  • УФ-кабінет 254/365 (ультрафіолетова лампа) - 1 шт.

  • Спрей-камера корозійностійка (камера для фарбування хроматограм методом обприскування) - 1 шт.

  • Столик з підігрівом для нанесення зразків на пластини - 1 шт.

  • Камера хроматографічна (для пластин 15x15 см) - 2 шт.

  • Камера хроматографічна (для пластин 10x10 см) - 2 шт.

  • Сушильну шафу ШБУ - 1 шт.

  • Пульверизатор для агресивних рідин - 1 шт.

  • Пульверизатор для маловязких рідин з гумовою "грушею" - 1 шт.

  • Мікро шприца V = 1 мкл - 1 шт.

  • Мікро шприца V = 10 мкл - 1 шт.

  • Скляні капіляри V = 1 мкл -100 шт.

  • Мікрокап (власник капілярів) - 1 шт.

  • Пластини на скляній підкладці АТСХ (10x10 см) - 20 шт.

  • Пластини "Сорбфіл" ПТСХ-П-А 10x10 см - 50 шт.

  • Пластини "Сорбфіл" ПТСХ-П-А-УФ 10x10 см - 50 шт.

  • Пластини "Сорбфіл" ПТСХ-АФ-А 10x10 см - 50 шт.

  • Пластини "Сорбфіл" ПТСХ-АФ-А-УФ 10x10 см - 50 шт.

3.1.3 Обладнання для проведення аналізів ВЕТСХ

Якісний аналіз: Набір для ВЕТСХ CAMAG, включаючи УФ-кабінет

Набір для ВЕТСХ доповнено горизонтальної ВЕТСХ камерою і новим аплікатором CAMAG Nanomat 4, диспенсером капілярів з утримувачем для одноразових капілярів об'ємом 0.5б1б2б та 5 мкл. При використанні горизонтальної камери кількість одночасно аналізованих проб подвоюється, а витрата розчинників значно скорочується. На відміну від звичайних, ВЕТСХ пластини мають краще дозвіл. Призначений для якісного і кількісного аналізів (при використанні систем денситометрії).

Система для документування і відеоденсітометріі

Новітня система для якісного та кількісного аналізу в ТШХ при детектуванні у видимій області спектра, включаючи режим флуоресценції. Спеціально розроблена для масових аналізів рослинної сировини на справжність або для скринінгу зразків на присутність "ключових" компонентів. Повне документування оцифрованих зображень зі зберіганням у базах даних еталонних зображень, наприклад, для порівняння з робочими аналізами.

Кількісний аналіз: Напівавтоматичний аплікатор CAMAG Linomat 4 для нанесення "смуг" способом розпилення.

Ліномат 4 розпорошує розчин проби у формі вузької смуги на поверхню пластини (ТШХ або ВЕТСХ). Такий спосіб нанесення дає можливість дозування великого об'єму зразка в порівнянні з контактним методом, а також гарантує максимально можливий дозвіл для вибраної хроматографічної системи для будь-якого варіанту: якісного, кількісного або препаративного поділу.

Техніка нанесення, використовувана в приладі CAMAG Linomat 4, стала синонімом якості в кількісній інструментальної хроматографії.

Спектроденсітометр CAMAG Scanner 3

Спектроденсітометр третього покоління з програмним управлінням від ПЕОМ. Унікальні характеристики оптико-механічної частини гарантують високий дозвіл (до 25 мкм) і швидкість сканування. Можливість роботи в режимі відображення (УФ і флуоресценція) і пропускання (УФ і флуоресценція). Розвинуте програмне забезпечення з готовими методами кількісного аналізу, включаючи статистичні розрахунки і методи калібрування. Сертифікований по ISO та ГОСТ.

Програма-менеджер для планарной хроматографії - winCATS

Новітнє програмне забезпечення для документування усіх стадій хроматографії від пробопідготовки, нанесення, елюювання, деріватізаціі до детектування. З використанням процедур управління приладами EquiLink програма стає операційної оболонкою для управління всіма приладами, збору даних та обробки результатів відповідно до GLP / GMP.

Новий інформаційні технології перетворили ТСХ в інструментальний метод, що доповнює ВЕРХ в сучасній лабораторії.

3.1.4 Пластини багаторазового користування для високоефективної та аналітичної ТСХ

В ІТТ АН СРСР розроблена технологія виробництва пластин для тонкошарової хроматографії на скляній, полімерної підкладці і підкладці з алюмінієвої фольги. В даний час за цією технологією випускаються пластини для ТШХ на скляній підкладці розміром 20x20 см і полімерної підкладці розміром 10x10 см в кількості 50000 і 500000 штук на рік, відповідно, в двох модифікаціях: АТСХ (пластини для аналітичної ТШХ) і ВЕТСХ (пластини для високоефективної ТШХ). Як сорбент використовується фракціонований силікагель КСКГ (СРСР) з діаметром пор 110-130 А і розміром фракцій 5-17 мкм (АТСХ) і 8-12 мкм (ВЕТСХ). Товщина шару сорбенту 110-130 мкм. Можуть випускатися пластини з товщиною шару до 200 мкм. Випускаються також пластини цих модифікацій з люмінофором з порушенням 254 нм.

Особливості ТШХ-пластин, що випускаються за технологією ІТТ, пов'язані з використанням в якості сполучного золю кремнієвої кислоти, який після нагрівання перетворюється на силікагель. Таким чином, розроблені ТШХ-пластини не мають сполучного і складаються з двох компонентів: шару силікагелю і підкладки. Якщо застосовувати скляну підкладку, то такі ТШХ-пластини є хімічно міцними. Їх хімічна стійкість визначається хімічною стійкістю силікагелю. В результаті ТШХ-пластини ІТТ можуть багаторазово оброблятися агресивними реагентами, наприклад, гарячої хромовою сумішшю, що знімає обмеження у використанні корелюють реагентів для модифікації і детектування пластин і дозволяє проводити багаторазову (до 10 раз) регенерацію пластин за допомогою хромової суміші. Механічна міцність шару сорбенту може регулюватися, забезпечуючи, з одного боку, транспортування і багаторазовість обробки пластин і, з іншого боку, можливість екстракції шару адсорбенту з розділами речовинами для їх подальшої еволюції.

За ефективністю АТСХ-і ВЕТСХ-пластини ІТТ відповідають ДС-і HPTLC-пластин фірми "Merck" (ФРН).

Пластини широко випробувані в аналізі похідних амінокислот, пестицидів, ліпідів, антибіотиків, а також інших класів органічних і неорганічних сполук і високополімерів.

Пластини на скляній підкладці:

АТСХ, 20x20 см

АТСХ, 10x20 см

АТСХ, 10x10 см

АТСХ, 5x10 см

Вартість: 0,62-2,25 $ за 1 шт.

Пластини на алюмінієвій підкладці:

ПТСХ-АФ, 10x10

ПТСХ-АФ-УФ, 10x10

ПТСХ-АФ, 10x15

ПТСХ-АФ-УФ, 10x15

Вартість: 0,55-0,95 $ за 1 шт.




Пластини на полімерній підкладці:

ПТСХ-А, 10x10

ПТСХ-А-УФ, 10x10

ПТСХ-А, 10x15

ПТСХ-А-УФ, 10x15

ПТСХ-В, 10x10

ПТСХ-В-УФ, 10x10

Вартість: 0,5-0,9 $ за 1 шт.


Двовимірна ВЕТСХ суміші ДНС-амінокислот на пластині 6x6 (4 хроматограми 3x3 см)




ВЕТСХ ФТГ-амінокислот

АТСХ технічного зразка ДДТ

Визначення бромистого метилу зерні послефумігаціі (АТСХ)

ВЕТСХ ліпідів сиру

Оцінений

змісту

родинних

домішок в

антибіотики акларубіціне



3.1.5 Контроль ефективності розділення

Для ідентифікації тонкошарових хроматограм потрібно ультрафіолетове освітлення двох типів:

- Довгохвильове, з довжиною хвилі 365 нм - під яким розділені речовини на пластинах флюоресцируют яскравими плямами, часто різного кольору, на темному тлі. Чутливість детектування в такому світлі збільшується із зростанням інтенсивності опромінення;

- Короткохвильове, з довжиною хвилі 254 нм - під яким речовини, адсорбіруя світло, стають видимими. Ці речовини виглядають як темні плями на яскравому зеленому тлі пластини.

УФ-кабінети фірми НТЦ "Ленхром" розроблені спеціально для лабораторій ТШХ. Однак, вони можуть використовуватися і для вирішення інших завдань: перевірки достовірності документів, і грошових знаків, в мінералогії, археології, криміналістиці та ін Лампи поміщені в захисний кожух, не пропускає видиме світло, що дозволяє досліджувати хроматограми в незатінених приміщеннях, зберігаючи при цьому високу чутливість.

Випускаються УФ-кабінети двох типів: УФ-кабінет254/365, УФО-254.

3.1.6 Хроматографічні камери

Камера з плоским дном і притертою кришкою - класична ємність для хроматграфіі, що дозволяє проводити процедуру хроматографії в умовах часткового або повного насичення атмосфери камери парами розчинника. Завдяки оптимальним розмірам, відбувається низьке споживання розчинників в процесі роботи. Розмір камер призначений для пластин різних стандартних розмірів: 10х10, 15х15 і 20х20 см.

Камера для прояву в парах йоду

Камера для фарбування - плоска скляна камера призначена для фарбування хроматографічних пластинок розчинами реагентів в легколетучих розчинниках методом занурення. Камера дозволяє рівномірно по площі пофарбувати поверхню пластини. Камера споживає малу кількість детектуючого реагенту. Камери призначені для пластин розміром 10х10 і 15х15 см.

3.1.7 Постхроматографіческая деріватізація

Пульверизатор для агресивних рідин

Завдяки конструктивним особливостям, пульверизатор безпечний при роботі з агресивними (н-р, концентровані кислоти і луги) рідинами. Пульверизатор може працювати як з використанням гумової груші (малов'язкі рідини), так і з використанням стисненого повітря, що дозволяє розпилювати в'язкі рідини.

Пульверизатор для маловязких жідкостейПульверізатор працює з використанням гумової груші. Пульверизатор використовують для розпилення маловязких і неагресивних рідин, тобто водних і спиртових розчинів.

Спрей-камера

Стійка до агресивних середовищ спрей-камера призначена для фарбування хроматограм методом зрошення (обприскування) різними детектуючим реагентами. Камера гарантує безпеку процесу розпилення шкідливих речовин для організму людини. Камера, за бажанням, може бути укомплектована гнучкою трубою для з'єднання з витяжною вентиляцією.

3.1.8 Обладнання для нанесення зразків

Торрірованние скляні капіляри

Асортимент капілярів: 1, 2, 3, 5, 10, 20 мкл. Використання тримача капілярів "Мікрокап" дозволяє досягати високої точності дозування вручну.

100 штук капілярів комплектується 1 шт. "Мікрокап".

Шприцевий дозатор "MULTISTEP-50" в комплекті з мікро шприца V = 1 мкл (Аналог РВ-600 фірми Hamilton)

Шприцевий дозатор "MULTISTEP-50" призначений для багаторазового дозування мікрокількостей рідини за допомогою мікро шприца. "MULTISTEP-50" забезпечує п'ятдесятикратному повторення дози (50 кроків). Для мікро шприца з робочим об'ємом 1 мкл кожен крок дозатора "MULTISTEP-50" відміряє 0,02 мкл рідини. Дозатор "MULTISTEP-50" істотно полегшує роботи, пов'язані з багаторазовим повтором мікродоз.

Столик для нанесення зразків на пластини (з підігрівом)

Використання для нанесення проб на пластини столика з підігрівом дає можливість отримання плям стартових зон мінімального розміру (2-3 мм), що необхідно для більш ефективного поділу багатокомпонентних сумішей при хроматографії.

3.1 .9 Прилади й устаткування для високоефективної тонкошарової хроматографії

СИСТЕМА ДЛЯ Тонкошарові Хроматографії з Денситометрія "ДенСкан"

Призначення і область застосування

Системи для тонкошарової хроматографії та електрофорезу з денситометром "ДенСкан" призначені для якісного та кількісного аналізу складу проб речовин і матеріалів у видимій області спектра й ультрафіолетовому світлі при довжинах хвиль 254 і 365 нм. Область застосування - дослідження в хімії, біохімії, біології, медицині, фармакології, аналітичному контролі чистих речовин, об'єктів навколишнього середовища та ін

Технічні дані

  • Денситометр забезпечує розрахунок параметрів і кількісну оцінку хроматограм у видимій і ультрафіолетовій області спектра ( max = 254 нм,  max = 365 нм)

  • Розмір оброблюваних пластин, не більше 15 х 15

  • Час введення зображення, з не більше 5

  • Час обміру хроматограми, хв 5

  • Відношення сигнал / шум: видима область не менш 5/1УФ, 254 нм не менш 5/1УФ, 365 нм не менш 5 / 1

  • Відносне СКО за площею плям,% видима область не більш 5УФ, 254 нм не більш 5УФ, 365 нм не більше 5

  • Розмах значень R f: видима область не більше 0,02 УФ, 254 нм не більше 0,02 УФ, 365 нм не більш 0.02

  • Маса освітлювальної камери, кг не більше 12 кг

  • Габаритні розміри освітлювальної камери, мм не більше довжина. 420 ширина 420 висота 700

  • Напруга харчування, В 220 ± 22/33

  • Частота змінного струму, Гц 50 ± 1

  • Середнє напрацювання на відмову денситометра, год не менше 5000

  1. Склад денситометра

  2. Денситометр "ДенСкан" складається з камери освітлювальної, чорно-білої або кольорової відеокамери або сканера, блоку введення зображення, системи обробки даних. Камера освітлювальна виконана у вигляді блокової конструкції, що включає наступні основні вузли: - джерела світла: лампи денного світла. Лампи УФ діапазону, довжина хвилі 254 нм лампи УФ діапазону, довжина хвилі 365 нм-набір коригувальних світлофільтрів-детектор - чорно-біла малогабаритна відеокамера OS-45D або аналогічна з чутливістю не гірше 0,02 люкс, з ручним фокусуванням і ручним регулюванням діафрагми або кольоровий сканер з роздільною здатністю від 200 dpi і вище з інтерфейсом, відповідним TWAIN стандарту-інсталяційний столик для пластин; - канал зв'язку з блоком введення ізображеніяСістема обробки даних з використанням персонального комп'ютера і програмного забезпечення "Dens". Мінімальні вимоги до комп'ютера: - Операційна система - Microsoft Windows 95, Windows 98, Windows NT (версія 4.0 або вище) - Процесор - Pentium 100 MHz-Оперативна пам'ять (RAM) - 8 Мбайт, рекомендується 16 Мбайт-Кольоровий монітор - з діагоналлю не менше 14 дюймів-Місце на жорсткому диску - 10 Мбайт-Маніпулятор - "миша" Блок введення зображення видеобластер AverMedia (і програмне забезпечення до нього) використовується для отримання зображення хроматограми на моніторі комп'ютера. Можливе використання аналогічних систем. [12]

Література

1. Аналітична хроматографія / Под ред. В.І. Сакодинского та ін М.: Хімія, 1993, с. 19 - 21.

2. Кнорре Д.Г., Крилова Л.Ф., Музикантів В.С. Фізична хімія. - М.: Вища. шк., 1990. - 416с.

3. Алесковскій В.Б., Бардін В.В., Булатов М.І. Фізико-хімічні методи аналізу. Практичне керівництво .- Л.: Хімія, 1988. - 376 с.

4. Ольшанова К.М. Практикум з хроматографічного аналізу. М., Вища. школа, 1970. -312с.

5. Визначення ддт, ДДЕ, ддд, альдрину, дільдріна, гептахлору, кельтана, метоксихлор, ефірсульфонат та інших отрутохімікатів у продуктах харчування хроматографією в тонкому шарі / Методи визначення мікрокількостей пестицидів в продуктах харчування, кормах та зовнішньому середовищі. М.: Колос, 1977. с. 9 - 17

6. Е.С. Кудлатий, Б.М. Тверська, Ф.І. Полонська. Визначення о, о-діетил-8-(6-хлорбензоксазолініл-3-метил)-дітіофосфата (фозалон) в яблуках методом тонкошарової хроматографії / Методи аналізу пестицидів / / Проблеми аналітичної хімії. Том II / М., «Наука», 1972. С. 70 - 73.

7. W. Mc Kinley, SJ Grahem. J. Assoc. Offic. Agric. Chemists, 43, 89 (I960).

8. L. Fishbein, J. Fowkes, P. Jones. J. Chromatogr., 23, 47b (1966).

9. Р. Nangniot, G. Dardenne. Bull. Inst. Agr. St. Res., 31, 120 (1963).

10. AR Kittleson. Analyt. Chem., 24, 1173 (1952).

11. Л. М. Фукельман. Збірник праць ВІЗР, вип. 20, ч. 4, 61 (1964).

12. Http: / / lenchrom. Spb. Ru / chromatography / thinlayer _004. Shtml

60


Додати в блог або на сайт

Цей текст може містити помилки.

Хімія | Курсова
221.2кб. | скачати


Схожі роботи:
Ознаки якості і не якості харчових продуктів і міри їх попередження
Контроль якості та безпечності харчових продуктів
Системи бальної оцінки якості харчових продуктів
Тонкошарова хроматографія в хімічному аналізі природних вод
Забруднювачі харчових продуктів
Ідентифікація харчових продуктів 2
Обробка харчових продуктів
Ідентифікація харчових продуктів
Теплова обробка харчових продуктів
© Усі права захищені
написати до нас
Рейтинг@Mail.ru