Поксвирусов збудники натуральної віспи

[ виправити ] текст може містити помилки, будь ласка перевіряйте перш ніж використовувати.


Нажми чтобы узнать.
скачати

Державні освітні установи
ВИЩОЇ ОСВІТИ
Читинської ДЕРЖАВНА МЕДИЧНА АКАДЕМІЯ
Кафедра мікробіології з вірусологією та імунологією
Контрольна робота
з мікробіології
тема: поксвирусов - збудники натуральної віспи.
Виконала: Курмазова І.В.
факультет ВСО, заочного
навчання, курс 2, група 151
Перевірив:
м. Чита - 2005 р .

Зміст
Введення ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... 3
1. Поксвирусов - збудник натуральної віспи ... .... ... ... ... ... ... ... .... ... ... ... .. 6
1.1 Морфологія ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ......... ... .. 6
1.2 Культивування. ... .... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ......... 6
1.3 Антигенна структура ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ............ 7
1.4 Резистентність ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ........... 7
2. Патогенність для тварин ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... 8
3. Патогенез захворювання у людини ... .. ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... 9
4. Імунітет ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... .. ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... .... ... 11
5. Лабораторна діагностика ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ..... 12
5.1 Прямі методи діагностики клінічного матеріалу ... ... ... ........ ... ... .. 14
5.2 Непрямі методи діагностики ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ........ ... ... ... ... ... .18
5.3 Серодиагностика ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ......... ... ... ... .19
6. Профілактика ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... .. ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... 22
Висновок ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ...... ... 23
Література ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ..... 24

Введення
Віруси (від лат. Virus - отрута), дрібні неклітинні частки, що складаються з нуклеїнової кислоти (ДНК або РНК) і білкової оболонки (капсида). Капсид (від лат. Сарsa - вмістилище, ящик), білкова оболонка вірусу, що оберігає його нуклеїнових кислот від зовнішніх впливів. Складається з окремих структурних ідентичних одиниць - капсомеров.
Форми можуть бути різними, як паличкоподібна, так і сферична. Розмір 15 - 350 нм і більше. Відкриті (віруси тютюнової мозаїки) Д. І. Івановського в 1892.
Віруси - внутрішньоклітинні паразити: розмножуючись тільки в живих клітинах, вони використовують їх ферментативний апарат і перемикають клітку на синтез зрілих вірусних часток - віріонів. Варіон, повністю сформована вірусна частка, що складається з нуклеїнової кислоти та білкової оболонки (капсида). Зберігає та переносить генетичний матеріал вірусу від однієї клітини до іншої.
Поширені віруси повсюдно і викликають хвороби не тільки рослин і тварин, а й людину. Різко відрізняючись від усіх інших форм життя, віруси, подібно іншим організмам, здатні до еволюції. Іноді їх виділяють в окреме царство живої природи. Віруси широко застосовуються в роботах з генної інженерії, канцерогенезу.
Віруси бактерій (бактеріофаги) - класичний об'єкт молекулярної біології. Бактеріофаги (від бактерії і грец. Phagos - пожирач) - віруси бактерій здатні вражати бактеріальну клітину, репродукуватися в ній і викликати її лізис. Класичний об'єкт досліджень в молекулярній генетиці. Використовуються для фагопрофілактика і фаготерапія інфекційних хвороб.
Бактерії (від грец. Bakterion - паличка), група мікроскопічних, переважно одноклітинних організмів. Відносяться до «доядерние» форм - прокариотам. В основу сучасної класифікації бактерій, за якою всі бактерії поділяють на еубактерій (грамнегативні бактерії і грампозитивні бактерії, мікоплазми) і архей, покладено будова їх клітинної стінки. За формою клітин бактерії можуть бути кулястими (коки), паличкоподібними (бацили, клостридії, псевдомонади), звитими (вібріони, спірили, спірохети); діаметр 0,1-10 мкм, довжина 1-20 мкм, а нитчастих багатоклітинних бактерій - 50 - 100 мкм. Деякі бактерії утворюють спори. Багато рухливі, мають джгутики. Харчуються, використовуючи різні органічні речовини (гетеротрофи) або створюючи органічні речовини клітин з неорганічних (автотрофи). Здатні рости як в присутності атмосферного кисню (аероби), так і при відсутності (анаероби). Беруть участь у кругообігу речовин у природі, формуванні структури і родючості грунтів, в освіті та руйнуванні корисних копалин; підтримують запаси вуглекислого газу в атмосфері. Використовуються в харчовій, мікробіологічній, хімічної та інших галузях промисловості. Патогенні (хвороботворні) бактерії - збудники хвороб рослин, тварин і людини. Вважають, що бактерії - перші організми, що з'явилися на Землі.
Розширення можливостей у лікуванні та профілактиці вірусних хвороб з використанням противірусних препаратів, імуномодуляторів та вакцин з різним механізмом дії потребує швидкої і точної лабораторної діагностики. Вузька специфічність деяких противірусних препаратів також вимагає швидкої і високоспецифічний діагностики інфікувати агента. З'явилася необхідність в кількісних методах визначення вірусів для моніторингу противірусної терапії. Крім встановлення етіології захворювання лабораторна діагностика має важливе значення в організації протиепідемічних заходів.
Рання діагностика перших випадків епідемічних інфекцій дозволяє своєчасно провести протиепідемічні заходи - карантин, госпіталізацію, вакцинацію та ін Реалізація програм з ліквідації інфекційних захворювань, наприклад, натуральної віспи, показала, що по мірі їх виконання зростає роль лабораторної діагностики. Суттєву роль відіграє лабораторна діагностика в службі крові та акушерській практиці, наприклад, виявлення донорів, інфікованих вірусом імунодефіциту людини (ВІЛ), вірусом гепатиту В (HBV), діагностика краснухи і цитомегаловірусної інфекції у вагітних.

1. Поксвирусов - збудник натуральної віспи
Поксвирусов (Poxviridae) - родина великих ДНК-вмісних вірусів, що викликають у людини, тварин (корів, овець, кіз, верблюдів, коней, свиней, кролів) і птахів захворювання з вираженим ураженням шкіри - пустульозного дерматиту, папулезного стоматиту, міксоми і конгіозного молюска людини, тобто натуральну віспу.
Вірус натуральної віспи - значний вірус, що відноситься до Orthopoxvirus. Незважаючи на те, що натуральна віспа відома людству з давніх часів і широко поширена в багатьох країнах світу, етіологія цієї хвороби була остаточно встановлена ​​тільки на початку двадцятого століття. У 1892 році Г. Гуарніері виявив в гістологічних зрізах рогівки кролика, зараженого віспяних матеріалом, внутрішньоклітинні включення величиною від 1-4 до 10 мкм, що мають кулясту або серповидну форму. У 1906 році Е. Ріллей, застосувавши спеціальний метод забарвлення, виявив у вмісті пухирців вірусні корпускули.
1.1 Морфологія
Вірус віспи відрізняється складністю будови, він має форму паралелепіпеда з закругленими кутами. Розмір його 200-250 нм. Він складається з нуклеотиду, покритого тришарової оболонкою. Від зовнішнього осміофільного шару відходять ворсинки. На протилежних сторонах вириона під оболонкою розташовані два бічних тіла, схожі на лінзи.
1.2 Культивування
Вірус натуральної віспи добре розвивається в курячих ембріонах, через 48-72 години після зараження. На хоріон - аллантоісной оболонці викликає утворення білих дрібних, щільних, різко відмежованих від оточуючої тканини точкових поразок. Вірус добре культивується на первинних і перещеплюваних клітинних культурах людини, мавпи, вівці і інших тварин, у яких виявляються через 24-72 години після зараження виражене цитопатична дію, виявляються округленням і збільшенням клітин з наступним їх відторгненням їх від скла.
1.3 Антигенна структура
У вірусу натуральної віспи не виявлено антигенних різновидів або варіантів, він має загальні антигени з вірусом вакцини. Розрізняють чотири антигени: розчинні L і S, нуклеопротєїдний (NP), антигени і Х-гемагллютіін. Вірус віспи має спільні антигени з еритроцитами людини групи А і АВ.
1.4 Резистентність
Збудник віспи стійкий до дії фенолу, висиханню, у висушених віспяних скоринках і в 50% гліцерині зберігається місяцями, легко переносять низьку температуру. Вірус чутливий до дії світла, при температурі 1000С гине моментально. При 600С протягом 1 години; 3% розчин хлораміну, фенолу, лізолу інактивує вірус через 30 хвилин, а 1% розчин хлорного вапна - через 1 годину; при дії перманганату калію гине через 70 хвилин.

2. Патогенність для тварин
До вірусу натуральної віспи чутливі мавпи; при введенні їм вірусу в шкіру або тестікули з'являється специфічні висипання на шкірі, розвивається архіт, а іноді генералізація процесу. У кроликів і морських свинок спостерігаються незначні місцеві поразки, а у новонароджених білих мишей при зараженні в мозок розвивається оспенний енцефаліт.

3. Патогенез захворювання у людини
Натуральна віспа - карантинне захворювання людини. Викликається поксвирусов. Характеризується лихоманкою і висипом, залишає рубці. Передається від хворої через повітря і предмети. У народі її називають «Вітряна віспа».
Джерело хвороби - хвора людина. Зараження віспою відбувається повітряно-краплинним і повітряно-пиловим шляхом, а також за допомогою контакту з матеріалом. Збудник передається при розмові, кашлі, чханні, через пилові частинки і предмети (одяг, білизна, посуд). За останні роки були зареєстровані випадки віспи у людей, інфікованих вірусом мавпячої віспи.
Патогенез натуральної віспи вивчений недостатньо. Відомо, що під час хвороби в крові знаходиться вірус, який має різко вираженими дерматотропнимі властивостями. Він також вражає слизові оболонки і інші тканини й органи. Поряд з вірусемія нерідко спостерігається і бактеріємія, викликана стрептококами і стафілококами.
Для натуральної віспи характерна лихоманка, висипання, освіта пустул і рубців на шкірі. Після продромального періоду і падіння температури з'являється справжня висипка на обличчі, тулубі та кінцівках, на початку вона має папульозний характер, потім перетворюється на везикулезную і пустулезную. Віспяні везикули багатокамерні з прозорим вмістом, що надає їм вигляду перлини з перламутровим блиском, оточеним червоним вузьким обідком. Віспяні пустули мають кратероподібної вдавлення на вершині.
У стадії нагноєння приєднується вторинна (стафілококова і стрептококова) інфекція. У більшості перехворілих на місці глибоких пустул утворюються рубці (горобини).
Летальність в залежності від тяжкості хвороби коливається в широких межах - від 0 до 100%, у середньому вона дорівнює 15-20%, при геморагічної формі - 100%. При легких формах і варіолоіде летальних результатів зазвичай не буває. У осіб з групою крові А і АВ натуральна віспа протікає важче, смертельні випадки і поствакцинальні ускладнення бувають частіше, постінфекційної і поствакцинальний імунітет слабкої напруги.
До числа легких форм натуральної віспи відноситься варіолоід. Варіолоід характеризується більш коротким і легким перебігом, відсутністю висипу або лихоманки.
Аластрім - самостійна, але подібна з натуральною віспою захворювання. Аластрім протікає як легка форма натуральної віспи. Характеризується меншою контагіозністю. Папульозно-бульбашкова висип утворюється в основному на обличчі та кінцівках, цикл її розвитку коротше, ніж при натуральній віспі. Віспяні бульбашки не мають кратероподібної вдавлення на вершині, при відпадіння кірочок рубці не залишаються. Летальність низька до 1%.

4. Імунітет
У більшості людей, що хворіли віспою, залишається міцний імунітет. Повторні захворювання вкрай рідкісні. У перехворілих і вакцинованих в крові можна виявити аглютиніни, Комплементзв'язуючі, віруснейтралізующіе антитіла, а також преціпітіни і лізину.

5. Лабораторна діагностика
Для діагностики віспи застосовують вірусоскопіческіе, вірусологічні та серологічні методи дослідження.
Вірусоскопія полягає в виявлення тілець Пашина в мазках, приготовлених з вмісту везикул і пустул, забарвлених срібленням або оброблених люминесцирующими барвниками (прімуліном). При перегляді їх у люмінесцентному мікроскопі вірусні частки легко диференціюються за яскравістю і характер свічення.
Тельця Гуарніері виявляють в клітинах в клітинах рогівки кролика, зараженого досліджуваним матеріалом. Препарати обробляють за Романовським-Гізі, Манну, люмінесцентними барвниками.
Вірусологічні дослідження виробляються для виділення вірусу на хоріон-аллантоісной оболонки курячого ембріона і в культурах тканин, а також для ідентифікації за допомогою специфічних сироваток в реакціях зв'язування комплементу та реакції гальмування гемаглютинації, затримки гемадсорбції, імунофлюоресценції.
Для серологічної діагностики віспи застосовують реакції гальмування гемаглютинації, зв'язування комплементу, нейтралізації на курячих ембріонах і тканинних культурах.
Специфічний антиген можна виявить у везикулярной рідини і скоринках за допомогою реакції преципітації в гелі, а також реакції непрямої гемаглютинації з використанням баранячих еритроцитів, сенсибілізованих противооспенной антитілами.
У диференціації натуральної віспи від вітряної віспи геніралізованной вакцини аластріма враховуються характер висипань, черговість їх появ і зникнення, поліморфізм, особливості, властиві їх збудників при культивуванні культури клітин і культурних ембріонах, лабораторні дані.
Лікування специфічне не розроблено. Перші дні хвороби застосовують противооспенной імуноглобулін, отриманий із крові людей, спеціально ревакцинованих проти віспи, а також метисазон (марборан). При розвитку вторинної інфекції призначають антибіотики (пеніцилін, левомітецін, стрептоміцин, окситетрациклін).
У лабораторній діагностиці вірусних інфекцій є три основних підходи:
1) безпосереднє дослідження матеріалу на наявність вірусного антигену або нуклеїнових кислот;
2) ізоляція та ідентифікація вірусу з клінічного матеріалу;
3) серологічна діагностика, заснована на встановленні значного приросту вірусних антитіл протягом хвороби.
При будь-якому вибраному підході до вірусної діагностиці одним з найважливіших факторів є якість досліджуваного матеріалу. Так, наприклад, для прямого аналізу зразка або для ізоляції вірусу досліджуваний матеріал повинен бути отриманий на самому початку захворювання, коли збудник ще екскретується у відносно великих кількостях і не зв'язаний поки антитілами, а обсяг зразка повинен бути достатній для проведення прямого дослідження. Також важливим є вибір матеріалу відповідно до передбачуваного захворюванням, тобто того матеріалу, в якому виходячи з патогенезу інфекції ймовірність присутності вірусу найбільша.
Не останню роль в успішній діагностиці відіграє середовище, в яку береться матеріал, як він транспортується і як зберігається. Так, носоглоткових або ректальні мазки, вміст везикул поміщають в середу, що містить білок, що запобігає швидку втрату інфекційності вірусу (якщо планується його ізоляція), або у відповідний буфер (якщо планується робота з нуклеїновими кислотами).

5.1 Прямі методи діагностики клінічного матеріалу
Прямі методи - це методи, які дозволяють виявити вірус, вірусний антиген або вірусну нуклеїнових кислот (НК) безпосередньо в клінічному матеріалі, тобто є найбільш швидкими (2-24 год). Однак через низку особливостей збудників прямі методи мають свої обмеження (можливість отримання хибнопозитивних і помилково негативні результати). Тому вони часто вимагають підтвердження непрямими методами.
Електронна мікроскопія (ЕМ). За допомогою цього методу можна виявити власне вірус. Для успішного визначення вірусу його концентрація в пробі повинна бути приблизно 1.106 частинок в 1 мл. Але оскільки концентрація збудника, як правило, у матеріалі від хворих незначна, то пошук вірусу утруднений і вимагає попереднього його осадження за допомогою високошвидкісного центрифугування з подальшим негативним контрастуванням. Крім того, ЕМ не дозволяє типировать віруси, так як у багатьох з них немає морфологічних відмінностей всередині сімейства. Наприклад, віруси простого герпесу, цитомегалії або оперізувального герпесу морфологічно практично не відрізняються.
Одним з варіантів ЕМ, використовуваним в діагностичних цілях, є імунна електронна мікроскопія (ІЕМ), при якій застосовуються специфічні антитіла до вірусів. У результаті взаємодії антитіл з вірусами утворюються комплекси, які після негативного контрастування легше виявляються.
ІЕМ кілька більш чутлива, ніж ЕМ, і використовується в тих випадках, коли вірус не вдається культивувати in vitro, наприклад при пошуку збудників вірусних гепатитів.
Реакція імунофлюоресценції (РІФ). Метод заснований на використанні антитіл, пов'язаних з барвником, наприклад флюоресцеінізотіоціанатом. РІФ широко застосовується для виявлення вірусних антигенів у матеріалі хворих і для швидкої діагностики.
У практиці застосовуються два варіанти РІФ: прямий і непрямий. У першому випадку застосовуються мічені барвником антитіла до вірусів, які наносяться на інфіковані клітини (мазок, культура клітин). Таким чином, реакція протікає одноетапне. Незручністю методу є необхідність мати великий набір кон'югованих специфічних сироваток до багатьох вірусів.
При непрямому варіанті РІФ на досліджуваний матеріал наноситься специфічна сироватка, антитіла якої зв'язуються з вірусним антигеном, що знаходяться в матеріалі, а потім нашаровується антивидові сироватка до гамма-глобулінів тварини, у якому готувалася специфічна імунна сироватка, наприклад антікролічья, антілошадіная і т. п. Перевага непрямого варіанта РІФ полягає в потреби лише одного виду мічених антитіл.
Метод РІФ широко застосовується для швидкої розшифровки етіології гострих респіраторних вірусних інфекцій при аналізі мазків-відбитків зі слизової оболонки верхніх дихальних шляхів. Успішне застосування РІФ для прямої детекції вірусу в клінічному матеріалі можливе лише у разі вмісту в ньому досить великого числа інфікованих клітин і незначною контамінації мікроорганізмами, які можуть давати неспецифічне світіння.
Імуноферментний аналіз (ІФА). Імуноферментні методи визначення вірусних антигенів в принципі подібні з РІФ, але грунтуються на мічених антитіл ферментами, а не барвниками. Найбільш широко використовується пероксидаза хрону і лужна фосфатаза, застосовують також а-галактозидазу і по-лактамази. Мічені антитіла зв'язуються з антигеном, і такий комплекс виявляється при додаванні субстрату для ферменту, з яким кон'юговані антитіла. Кінцевий продукт реакції може бути у вигляді нерозчинного осадка, і тоді облік проводиться за допомогою звичайного світлового мікроскопа, або у вигляді розчинного продукту, який зазвичай забарвлений (або може флюоресціровать або люминесцировать) і реєструється інструментально.
Оскільки за допомогою ІФА можна вимірювати розчинні антигени, то не потрібно наявності інтактних клітин у зразку, і таким чином можуть використовуватися різні види клінічного матеріалу.
Інша важлива перевага методу ІФА - можливість кількісного визначення антигенів, що дозволяє застосовувати його для оцінки клінічного перебігу хвороби та ефективності хіміотерапії. ІФА, як і РІФ, може застосовуватися як у прямому, так і в непрямому варіанті.
Твердофазний ІФА, що дає розчинна окрашений продукт реакції, знайшов найбільше поширення. ІФА може бути використаний як для визначення антигену (тоді на тверду фазу - дно лунки полистироловом планшета - наносяться антитіла), так і для визначення антитіл (тоді на тверду фазу наносяться антигени).
Радіоімунний аналіз (РІА). Метод заснований на мітці антитіл радіоізотопами, що забезпечувало високу чутливість у визначенні вірусного антигену. Широке поширення метод одержав у 80-ті роки, особливо для визначення маркерів HBV та інших некультівіруемих вірусів. До недоліків методу відноситься необхідність працювати з радіоактивними речовинами і використання дорогого обладнання (гамма-лічильників).
Молекулярні методи. Спочатку класичним методом виявлення вірусного геному вважався високоспецифічний метод гібридизації НК, але в даний час все ширше використовується виділення геномів вірусу за допомогою полімеразної ланцюгової реакції (ПЛР).
Молекулярна гібридизація нуклеїнових кислот. Метод заснований на гібридизації комплементарних ниток ДНК або РНК з утворенням двунітевих структур та на виявленні їх за допомогою мітки. Для цієї мети використовуються спеціальні ДНК - або РНК-зонди, мічені ізотопом (32Р) або біотин, які виявляють комплементарні нитки ДНК або РНК. Існують кілька варіантів методу:
- Точкова гібридизація - виділену і денатуровану НК наносять на фільтри і потім додають мічений зонд; індикація результатів
- Авторадіографія при використанні 32Р чи забарвлення - при авидин-біотин;
- Блот-гібридизація - метод виділення фрагментів НК, нарізаних рестрикційний ендонуклеаза з сумарної ДНК і перенесених на нітроцелюлозні фільтри і тестовані міченими зондами; використовується як підтверджуючий тест при ВІЛ інфекції;
- Гібридизація in situ - дозволяє визначати НК в інфікованих клітинах.
ПЛР заснована на принципі природної реплікації ДНК. Суть методу полягає в багаторазовому повторенні циклів синтезу (ампліфікації) вірусоспецифічні послідовності ДНК за допомогою термостабільної Taq ДНК-полімерази і двох специфічних запалів - так званих праймерів.
Кожен цикл складається з трьох стадій з різним температурним режимом. У кожному циклі подвоюється число копій синтезованого ділянки. Знову синтезовані фрагменти ДНК служать в якості матриці для синтезу нових ниток в наступному циклі ампліфікації, що дозволяє за 25-35 циклів напрацювати достатню кількість копій вибраної ділянки ДНК для її визначення, як правило, за допомогою електрофорезу в агарозному гелі.
Метод високоспеціфічен і дуже чутливий. Він дозволяє виявити кілька копій вірусної ДНК в досліджуваному матеріалі. В останні роки ПЛР знаходить все більш широке застосування для діагностики та моніторингу вірусних інфекцій (віруси гепатитів, герпесу, цитомегалії, папіломи та ін.)
Розроблено варіант кількісної ПЛР, що дозволяє визначати кількість копій ампліфікованої сайту ДНК. Методика проведення складна, дорога і поки недостатньо уніфікована для рутинного застосування.
Цитологічні методи в даний час мають обмежене діагностичне значення, але при ряді інфекцій як і раніше повинні застосовуватися. Досліджуються матеріали аутопсії, біопсії, мазки, які після відповідної обробки фарбуються і аналізуються під мікроскопом. При цитомегаловірусної інфекції, наприклад, в зрізах тканини або в сечі виявляються характерні гігантські клітини-"совиний очей", при сказі - включення в цитоплазмі клітин (тільця Бабеша-Негрі). У деяких випадках, наприклад при диференціальній діагностиці хронічних гепатитів, має значення оцінка стану тканини печінки.
5.2 Непрямі методи діагностики
Виділення вірусів - один з найстаріших і трудомістких методів діагностики. Однак і сьогодні виділення вірусу з наступною ідентифікацією за допомогою одного із сучасних методів (ІФА з моноклональними антитілами або ПЛР) є найбільш достовірним методом діагностики - так званий "золотий стандарт".
Для успішного виділення вірусів клінічний матеріал повинен бути взятий у відповідності з патогенезом можливого захворювання і в найбільш ранні терміни.
Як правило, беруться:
- При респіраторних інфекціях - носоглотковий змив;
- При ентеровірусних інфекціях - змив і фекалії (рео-, ентеровіруси);
- При ураженнях шкіри і слизових оболонок - зіскрібки, вміст бульбашок (герпес, вітряна віспа);
- При екзантемних інфекціях - змиви (кір, краснуха);
- При арбовірусних інфекціях - кров, спинномозкова рідина.
Для виділення вірусів використовують культури клітин, лабораторних тварин, ембріони курей. Процес тривалий, іноді вимагає проведення декількох пасажів, перш ніж вірус буде виявлений і ідентифікований за допомогою одного або кількох методів - в реакції нейтралізації (РН), РІФ, ІФА або ПЛР.
В даний час у більшості випадків виділення вірусів замінено виявленням вірусоспецифічні антигенів в інфікованих клітинних культурах за допомогою зазначених методів. Для цих цілей широко застосовуються моноклональні антитіла, особливо до ранніх білків збудника в РІФ або ІФА. Такий підхід дозволяє отримати відповідь вже через 24-72 годин після інфікування клітин культури тканин.
5.3 Серодиагностика
Серологічна діагностика, заснована на реакції антиген - антитіло, може бути використана для визначення, як тих, так і інших, і грає роль у визначенні етіології вірусної інфекції навіть при негативних результатах виділення вірусу.
Успіх серологічної діагностики залежить від специфічності реакції та дотримання часових умов взяття крові, необхідних для синтезу організмом антитіл.
У більшості випадків використовують парні сироватки крові, взяті з інтервалом в 2-3 тижні. Позитивною реакція вважається, принаймні, при 4-кратному наростанні титру антитіл. Відомо, що більшість специфічних антитіл відносяться до класів IgG і IgM, які синтезуються в різний час інфекційного процесу. При цьому IgM антитіла належать до ранніх, і тести, що використовуються для їх визначення, застосовуються для ранньої діагностики (досить дослідити одну сироватку). Антитіла класу IgG синтезуються пізніше і тривало зберігаються.
Для типування вірусів застосовується РН, при группоспецифических діагностиці, наприклад аденовірусної інфекції, використовують реакцію зв'язування комплементу (РСК). Найбільш вживаними є реакція гальмування гемаглютинації (РГГА), РСК, РІФ, реакції пасивної і зворотної пасивної гемаглютинації (РПГА, РОПГА), різні варіанти ІФА, практично повсюдно замінив рівний йому по чутливості РІА.
РГГА використовується для діагностики захворювань, викликаних гемагглютінірующімі вірусами. Вона заснована на зв'язуванні антитілами сироватки хворого доданого стандартного вірусу. Індикатором реакції є еритроцити, агглютинирующие вірусом (формування характерного "парасольки") при відсутності специфічних антитіл і осідають на дно неагглютінірованнимі при їх наявності.
РСК є однією з традиційних серологічних реакцій і використовується для діагностики багатьох вірусних інфекцій. У реакції беруть участь дві системи: антитіла сироватки хворого + стандартний вірус і еритроцити барана + антитіла до них, а також відтитровані комплемент. За відповідності антитіл і вірусу цей комплекс пов'язує комплемент і лізису баранячих еритроцитів не відбувається (позитивна реакція). При негативній РСК комплемент сприяє лізису еритроцитів. Недоліком методу є його недостатньо висока чутливість і труднощі стандартизації реагентів.
Для обліку значимості РСК також, як і РГГА, необхідно титрування парних сироваток, тобто взятих на початку захворювання і в період реконвалесценції.
РПГА - аглютинація сенсибілізованих вірусними антигенами еритроцитів (або полістиролових кульок) у присутності антитіл. На еритроцитах можуть бути сорбовані будь-які віруси, незалежно від наявності або відсутності у них гемагглютінірующей активності. У зв'язку з наявністю неспецифічних реакцій сироватки досліджуються в розведенні 1:10 і більше.
РНГА - аглютинація еритроцитів, сенсибілізованих специфічними антитілами в присутності вірусних антигенів. Найбільшого поширення РОПГА отримала при виявленні HBs-антигену як у хворих, так і у донорів крові.
ІФ метод так само, як ІФА, застосовується для визначення антитіл в сироватці. Все більшого значення і поширення набуває ІФА для діагностичних цілей. На тверду фазу (дно лунок полістиролових планшет або полістиролові кульки) сорбується вірусний антиген. При додаванні відповідних антитіл, що знаходяться в сироватці, відбувається їх зв'язування з сорбованих антигенами. Наявність шуканих антитіл виявляється за допомогою анти-антитіл (наприклад, людських), кон'югованих з ферментом (пероксидазою). Додавання субстрату і реакція субстрат - фермент дають забарвлення. ІФА може бути використана і для визначення антигенів. У цьому випадку на тверду фазу сорбуються антитіла.
Моноклональні антитіла. Великий прогрес у діагностиці вірусних інфекцій досягнутий в останнє десятиліття, коли з розвитком генно-інженерних досліджень була розроблена система отримання моноклональних антитіл. Тим самим були різко підвищені специфічність і чутливість діагностичних методів визначення вірусних антигенів. Вузька специфічність моноклонов, що представляють невелику частку вірусних білків, які можуть не бути присутнім у клінічному матеріалі, успішно долається використанням декількох моноклональних антитіл до різних вірусних детерминантам.

6. Профілактика
Віспа відома більше 10 тисяч років. За оцінками, за цей час вона забрала близько 500 мільйонів людських життів. У якості профілактичних заходів боротьби з віспою з кінця 18 століття застосовували вакцинацію. Декрет про обов'язкове оспопрививании в Росії був прийнятий в 1919 році, і з 1936 року на території СРСР не реєструвалося спалахів хвороби, були лише випадки завезення хвороби із-за кордону. У 1960-1970-х роках зусиллями провідних світових держав була проведена імунізація всього населення Землі і в 1980 році оголошено про перемогу над віспою. Після цього вакцинація була припинена, і до початку 21 століття вже 60 відсотків населення Землі не мають щеплення від віспи.

Висновок
Кількість методів, використовуваних для діагностики вірусних інфекцій, безперервно зростає. Одні відходять у минуле і мають в основному історичне значення, інші удосконалюються. Безсумнівно, що технічний прогрес у визначенні антитіл, білкового аналізу та генодіагностікі поряд з розширенням наших знань вірусів і патогенезу вірусних інфекцій приведуть до появи нових високоспецифічних та високочутливих методів, зручних для клінічного застосування.
В даний час випускається велика кількість комерційних сертифікованих тест-систем, в тому числі і вітчизняних, для діагностики найбільш поширених і соціально значущих вірусних інфекцій. Державний реєстр містить більше 600 діагностичних препаратів. Однак далеко не для всіх груп вірусів є діагностичні тест-системи. Наприклад, з великої групи ентеровірусів (більше 80 членів) тільки для визначення вірусів поліомієліту є тест-системи, в той же час для діагностики ВІЛ-інфекції випускається більше 15 різних наборів.

Література
1. Павлов І.Ю., Вахненко Д.В., Москвичов Д.В. Біологія. Посібник-репетитор для вступників у вузи. - Мінськ: Інтерпрессервіс. - Ростов н \ Д: Фенікс, 2002 р.
2. Хомченко Г.П. Посібник з хімії для вступників до вузів. - 4-е вид., Испр. і доп. - М.: ТОВ «Видавництво Нова Хвиля»: Видавець Умеренков, 2002 р.
3. К.П. Пяткін, Ю.С. Кривошеїн. Мікробіологія. М.: «Медицина», 1980 р.
4. Анішуліна А.В. Медична мікробіологія. Навчальний посібник. - Ростов-на-Дону: Фенікс, 2003 р.
5. Аванян А.А. Атлас анатомії бактерій, патогенних для людини і тварин. М.: «Медицина», 1972 р.
Додати в блог або на сайт

Цей текст може містити помилки.

Медицина | Контрольна робота
62.8кб. | скачати


Схожі роботи:
Товарознавчо характеристика натуральної кави
Математичні начала натуральної філософії
Напівфабрикати з січеної натуральної і котлетної маси
Збудники ГРВІ
Товарознавча характеристика і експертиза натуральної розчинної кави реалізованого в торговельній роздрібної
Мікробна корозія і її збудники
Збудники хвороб у худоби
Збудники бактеріальних інфекцій людини
Бацили-збудники сибірської виразки
© Усі права захищені
написати до нас
Рейтинг@Mail.ru